1.一种用于检测高致病性h7n9禽流感病毒的rt-lamp引物,包括一对外引物f3、b3,一对内引物fip、bip,其核苷酸序列如下所示:
f3:5’-acttgccatttcagaacataga-3’(seqidno:1);
b3:5’-ctatcaacttaaattgttggttggt-3’(seqidno:2);
fip:5’-gcctctcgcagtccgtt-tcttctgctggcaacagg-3’(seqidno:3);
bip:5’-gcctaattgatggttggtatggtt-attgccgattgagtgctt-3’(seqidno:4)。
2.一种用于检测高致病性h7n9禽流感病毒的试剂盒,其特征在于:含有权利要求1所述的rt-lamp引物。
3.一种检测高致病性h7n9禽流感病毒的rt-lamp方法,其特征在于:包括以下步骤:
1)从样品中提取病毒核酸;
2)以步骤1)中提取的核酸为模板,用权利要求1所述的引物对f3、b3、fip和bip进行rt-lamp反应获得扩增产物;
3)对扩增产物进行分析,确定样品中是否含有高致病性h7n9病毒。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于:步骤2)中rt-lamp反应体系为:
其中,内引物浓度为0.4μm~1.6μm,外引物浓度为0.05μm~0.2μm。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于:内引物浓度为1.2μm,外引物浓度为0.1μm。
6.根据权利要求3所述的方法,其特征在于:rt-lamp反应温度为58℃~65℃。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于:rt-lamp反应温度为60℃~64℃;优选地,荧光pcr反应温度为60℃。
8.根据权利要求3所述的方法,其特征在于:rt-lamp反应时间为50min~60min;优选地,荧光pcr反应时间为60min。
9.根据权利要求3~8任一项所述的方法,其特征在于:步骤3)中对扩增产物进行分析是指对扩增曲线进行分析,当阴阳性对照均成立时,无“s”型扩增曲线的样品判定为阴性,有“s”型扩增曲线的样品判定为阳性。
10.根据权利要求3~8任一项所述的方法,其特征在于:步骤3)中对扩增产物进行分析是指在扩增产物中加入显色液,呈橙色判定为阴性,呈绿色判定为阳性。