用于检测高致病性H7N9禽流感病毒的RT-LAMP引物及方法与流程

文档序号:19376151发布日期:2019-12-10 23:53阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于检测高致病性h7n9禽流感病毒的rt-lamp引物,包括一对外引物f3、b3,一对内引物fip、bip,其核苷酸序列如下所示:

f3:5’-acttgccatttcagaacataga-3’(seqidno:1);

b3:5’-ctatcaacttaaattgttggttggt-3’(seqidno:2);

fip:5’-gcctctcgcagtccgtt-tcttctgctggcaacagg-3’(seqidno:3);

bip:5’-gcctaattgatggttggtatggtt-attgccgattgagtgctt-3’(seqidno:4)。

2.一种用于检测高致病性h7n9禽流感病毒的试剂盒,其特征在于:含有权利要求1所述的rt-lamp引物。

3.一种检测高致病性h7n9禽流感病毒的rt-lamp方法,其特征在于:包括以下步骤:

1)从样品中提取病毒核酸;

2)以步骤1)中提取的核酸为模板,用权利要求1所述的引物对f3、b3、fip和bip进行rt-lamp反应获得扩增产物;

3)对扩增产物进行分析,确定样品中是否含有高致病性h7n9病毒。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于:步骤2)中rt-lamp反应体系为:

其中,内引物浓度为0.4μm~1.6μm,外引物浓度为0.05μm~0.2μm。

5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于:内引物浓度为1.2μm,外引物浓度为0.1μm。

6.根据权利要求3所述的方法,其特征在于:rt-lamp反应温度为58℃~65℃。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于:rt-lamp反应温度为60℃~64℃;优选地,荧光pcr反应温度为60℃。

8.根据权利要求3所述的方法,其特征在于:rt-lamp反应时间为50min~60min;优选地,荧光pcr反应时间为60min。

9.根据权利要求3~8任一项所述的方法,其特征在于:步骤3)中对扩增产物进行分析是指对扩增曲线进行分析,当阴阳性对照均成立时,无“s”型扩增曲线的样品判定为阴性,有“s”型扩增曲线的样品判定为阳性。

10.根据权利要求3~8任一项所述的方法,其特征在于:步骤3)中对扩增产物进行分析是指在扩增产物中加入显色液,呈橙色判定为阴性,呈绿色判定为阳性。


技术总结
本发明公开了一种用于检测高致病性H7N9禽流感病毒(HP‑H7N9)的RT‑LAMP引物及方法。本发明建立的HP‑H7N9 RT‑LAMP检测方法,可特异性检测HP‑H7N9,而与低致病性H7N9流感病毒(LP‑H7N9)、H7N3流感病毒、H3N2流感病毒、H5N1禽流感病毒、H5亚型禽流感病毒(Re‑6疫苗株)、H5亚型禽流感病毒(Re‑8疫苗株)、H7亚型禽流感病毒(Re‑1疫苗株)、H9亚型禽流感病毒、甲型H1N1流感病毒(H1N1)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、新城疫病毒(NDV)等不发生交叉反应;可检测到最低浓度为5.94×104copies/μL的阳性质粒;耗时仅为1.5~2h;检测成本较低;是HP‑H7N9快速检测的良好方法。

技术研发人员:杨素;黄海超;陈轩;赵福振;沙才华;邵建宏
受保护的技术使用者:拱北海关技术中心
技术研发日:2019.09.02
技术公布日:2019.12.10
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