松萝烟酰胺化合物及其制备方法与应用与流程

本发明属于药物化学
技术领域：
，涉及松萝烟酰胺化合物及其制备方法与应用，该化合物结构为n-[1-(6-乙酰基-7,9-二羟基-8,9-二甲基-1,3-二氧代-3,9b-二氢-1h-二苯呋喃-2-乙基)-乙基]-异烟酰胺(英文结构名称：n-[1-(6-acetyl-7,9-dihydroxy-8,9-dimethyl-1,3-dioxo-3,9b-dihydro-1h-dibenzofuran-2-yliden)-ethyl]-isonicoyinamide)，分子式为c24h20n2o7，分子量为448。
背景技术：
：恶性肿瘤是严重威胁人类健康和生命安全的一个重大疾病，目前已成为人类的主要死因，严重威胁人类健康和生命安全。世界卫生组织国际癌症研究所在globocan发布的数据显示，2008年全球新发癌症病例为1266.1万例，死亡756.4万例。2012年全球新增癌症病例数1410万例，死亡820万例，有3260万人带瘤生存。2015年全球新发癌症病例为1750万例，死亡870万例。2008、2012、2015年相比，癌症发病人数和死亡例数呈递增趋势。预计2025年全球癌症新发病例数将达到1900万例，2035年将达到2400万例。资料表明，随着人口老龄化、环境污染加重及生活模式的改变，恶性肿瘤的发病率还在快速上升。癌症在世界上目前仍是一种难治之症。癌症的化学药物治疗作为全身性治疗措施，在癌症的治疗中占有极重要的地位，也是今后彻底解决癌症治疗问题的希望。临床上目前使用的癌症化疗药物，大多药物存在毒副作用大、疗效不确定、选择性差、靶向性不强以及癌细胞耐药等许多问题，使癌症化学药物治疗在临床上的应用和效果受到很大限制。因此，开发疗效明确、低毒安全、具有选择性和/或靶向性抗癌作用的化疗药物，是抗癌新药研究的一个重要方向和迫切任务。我们前期研究发现，松萝胺(c18h17no6)具有很强的体外、体内抗癌活性，在癌症的化学治疗药物开发方面具有重要应用前景。松萝胺能否进行结构修饰改造形成具有抗癌活性的新化合物，对于抗癌新药研发具有重要价值。技术实现要素：本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种松萝烟酰胺抗癌活性化合物及其制备方法与应用。该化合物结构为n-[1-(6-乙酰基-7,9-二羟基-8,9-二甲基-1,3-二氧-3,9b-二氢-1h-二苯呋喃-2-乙基)-乙基]-异烟酰胺，其化学合成方法原料易得，合成步骤简单快速，产品易于纯化、得率较高，成本低廉。该化合物抗肿瘤作用药效强，毒性低，作用机制清楚，可用于制备抗肿瘤化学治疗药物以及制备辅助抗肿瘤的保健品。为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种松萝烟酰胺化合物，所述的松萝烟酰胺化合物的结构式如式(i)所示，中文名为：松萝烟酰胺。中文结构式为：n-[1-(6-乙酰基-7,9-二羟基-8,9-二甲基-1,3-二氧-3,9b-二氢-1h-二苯呋喃-2-乙基)-乙基]-异烟酰胺。英文名为：usenicoyinamide。英文结构式名为：n-[1-(6-acetyl-7,9-dihydroxy-8,9-dimethyl-1,3-dioxo-3,9b-dihydro-1h-dibenzofuran-2-yliden)-ethyl-isonicoyinamide。淡黄色固体粉末，分子式为c24h20n2o7，分子量为448。一种松萝烟酰胺化合物的制备方法，包括如下步骤：按照下列反应式，以松萝胺(c18h17no6)与烟酸(c6h5no2)为反应底物，在有机溶剂介质中，在n,n’-二异丙基碳二酰亚胺(n,n’-diisopropylcarbodiimide,dic)(cas:693-13-0)脱水剂和4-二甲氨基吡啶(4-dimethylaminopyridine,dmap)(cas:1122-58-3)催化剂作用下，室温下进行酰化合成反应，制得如式(i)所示的松萝烟酰胺化合物。松萝胺与异烟酸在同等条件下反应不能形成松萝烟酰胺，与抗坏血酸、苯甲酸、邻甲基苯甲酸、3-苯丙酸、肉桂酸等有机酸在同等条件下不能进行酰化反应或反应产物不具有显著性抗癌活性。进一步，优选的是，所述的有机溶剂为二氯甲烷。进一步，优选的是，松萝胺与烟酸的摩尔比为1:1-2；所用有机溶剂的体积与松萝胺的摩尔比例为5000ml:1-2mol。进一步，优选的是，具体步骤如下：将松萝胺加入到有机溶剂中，充分振摇并室温下超声10min，之后依次加入烟酸、dic、dmap，振摇搅拌后室温静置反应48-96小时，之后加入0.5％-1％水(体积比)中和未反应的dic(搅拌30min)，过滤后蒸干溶剂，之后，将得到的产物进行纯化，制得如式(i)所示的松萝烟酰胺化合物。进一步，优选的是，所述的将得到的产物进行纯化的具体步骤是：将反应液过滤后的滤液蒸干，将所得到的蒸干物采用有机溶剂反复洗涤进行纯化。纯化的具体步骤是：将反应液过滤后，蒸干滤液中的有机溶剂，加入纯化用有机溶剂，充分搅拌后静置沉淀，将上清弃去，反复多次，然后再过滤，用纯化用有机溶剂冲淋滤渣，tlc(展开剂v(三氯甲烷)：v(丙酮)＝20:1)跟踪检测在254nm紫外灯下观察有无其他杂质，并硫酸显色进一步观察有无杂点，当无杂质点，纯化完成。进一步，优选的是，所述的洗涤纯化采用的纯化用有机溶剂是乙醇或甲醇。本发明另外提供上述松萝烟酰胺化合物在制备抗肿瘤药物或辅助抗肿瘤保健品中的应用。进一步，优选的是，所述的药物剂型为注射液、片剂、胶囊、软胶囊、口服液、颗粒剂或冲剂。药物中，松萝烟酰胺化合物有效量可以占药物重量的0.1-100％，优选为0.5-95％，更优选为10-90％。所述的辅助抗肿瘤保健品的剂型为：片剂、口服液、胶囊、软胶囊、颗粒剂或冲剂。进一步，优选的是，所述的肿瘤为以下人类肿瘤中的任一种：胃癌、结直肠癌、食管癌、肺癌、肝癌、鼻咽癌、神经胶质瘤、乳腺癌、膀胱癌、宫颈癌、皮肤癌、肾癌、胆管癌、胰腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、白血病、、淋巴瘤、肉瘤、前列腺癌。本发明所述的dmap为4-二甲氨基吡啶(4-dimethylaminopyridine)，dic为n,n’-二异丙基碳二酰亚胺(n,n’-diisopropylcarbodiimide)。本发明与现有技术相比，其有益效果为：本发明的式(i)结构化合物n-[1-(6-乙酰基-7,9-二羟基-8,9-二甲基-1,3-二氧-3,9b-二氢-1h-二苯呋喃-2-乙基)-乙基]-异烟酰胺(英文结构名称：n-[1-(6-acetyl-7,9-dihydroxy-8,9-dimethyl-1,3-dioxo-3,9b-dihydro-1h-dibenzofuran-2-yliden)-ethyl]-isonicoyinamide)为新结构化合物，可以通过化学反应进行人工合成。其化学合成方法原料易得，合成步骤简单快速，产品易于纯化、得率高。本发明化合物用于制备抗肿瘤化学治疗药物以及制备辅助抗肿瘤的保健品品。松萝烟酰胺体外能显著性杀灭和/或抑制人类多种肿瘤细胞，如胃癌细胞sgc-7901、结肠癌细胞hct-116、食管癌细胞caes-17、鼻咽癌细胞cne2、神经胶质瘤细胞u-251、宣威肺癌细胞xwlc-05、非小细胞肺癌细胞a-549、肺癌spc-a1、肺癌nci-h460、肺癌nci-h157、乳腺癌细胞mcf-7和mda-mb-231、膀胱癌细胞t-24、宫颈癌细胞hela、白血病细胞k-562、淋巴瘤l-428和bjab、肝癌细胞qgy-7703和hepg2、胆管癌细胞qbc-939、前列腺癌细胞pc-3、肾癌细胞achn、卵巢癌skov-3、子宫内膜癌rl-952、胰腺癌panc-1、黑色素瘤a-375等。本发明松萝烟酰胺化合物的体外抗肿瘤作用优于临床常用抗肿瘤药物如顺铂、5-氟尿嘧啶等。本发明松萝烟酰胺化合物能显著性促进肿瘤细胞凋亡，影响肿瘤细胞生长周期分布，降低肿瘤细胞的迁移侵袭能力。本发明松萝烟酰胺化合物的小鼠经口急性毒性试验中，在最大灌胃剂量15g/kg时未发现对动物有明显毒性，急性毒性分级为无毒类。本发明松萝烟酰胺化合物在0.625、1.25和2.5g/kg剂量下短期重复给药30天，对小鼠生存、体重增长、脏器发育、肝肾组织、血液生化和血常规指标均无显著性不良影响；本发明松萝烟酰胺化合物在试验剂量下未显示遗传毒性。松萝胺为已知化合物，几乎不溶于水。本发明的松萝烟酰胺为新结构化合物；其化学极性大于松萝胺；在含水甲醇和含水乙醇中的溶解度大于松萝胺；在制备纳米脂质体药物时，脂质体的载药量显著性大于松萝胺。附图说明图1为松萝烟酰胺化合物的质谱图；图2为松萝烟酰胺化合物的核磁氢谱图；图3为松萝烟酰胺化合物的核磁碳谱图和dept谱图；图4为松萝烟酰胺化合物对部分人类肿瘤细胞株体外抗肿瘤作用的剂量-效应关系曲线图(横坐标为化合物的剂量)；图5为松萝烟酰胺化合物体外抗肿瘤作用的时间-效应、剂量-效应关系曲线图(横坐标为化合物的剂量)；图6为松萝烟酰胺化合物对癌细胞凋亡的影响；图7为松萝烟酰胺化合物对癌细胞周期分布的影响；图8为松萝烟酰胺化合物对癌细胞侵袭迁移的影响；图9为短期重复剂量给药试验各时间点雄性小鼠体重变化；图10为短期重复剂量给药试验各时间点雌性小鼠体重变化；图11为短期重复剂量给药试验结束时各组小鼠的脏器系数。具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用材料或设备未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。除非另有说明，本文中所用的术语具有如下含义：本申请中所述的“化学合成”系指本发明松萝烟酰胺化合物可以采用其它化学底物作为原料，以化学反应形式进行人工合成生产。本申请中所述的“药物剂型”系指本发明松萝烟酰胺化合物以不同的“药物可接受的载体”制成不同的药物制剂。本申请中所述的“药物组合物”系指本发明松萝烟酰胺化合物，与通常被本领域所接受的将生物活性化合物输送至诸如人类等哺乳动物的介质共同使用所形成的制剂。这样的介质包括所有药物可接受的载体。本申请中所述的“药物可接受的载体”意指包括但不限于已经被美国食品与药品管理局(fda)认可的、可用于人类或动物的任何佐剂、赋形剂、助流剂、甜味剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、香味增强剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、稳定剂、等渗压剂、崩解剂、溶剂或乳化剂等对组成药物组合物无副作用的各种形式的载体。术语“治疗”意为将本发明松萝烟酰胺化合物或制剂进行给药以预防、改善或消除疾病或与所述疾病相关的一个或多个症状，且包括：(i)预防疾病或疾病状态在哺乳动物中出现，特别是当这类哺乳动物易患有该疾病状态，但尚未被诊断为已患有该疾病状态时；(ii)抑制疾病或疾病状态，即遏制其发展；(iii)缓解疾病或疾病状态，即使该疾病或疾病状态消退。“辅助抗肿瘤保健品”是指在肿瘤病人的治疗过程中，用于肿瘤病人的辅助治疗，可能对肿瘤病人的治疗具有增敏、增效作用，但不以治疗为目的保健品。实施例1本发明松萝烟酰胺化合物：n-[1-(6-乙酰基-7,9-二羟基-8,9-二甲基-1,3-二氧-3,9b-二氢-1h-二苯呋喃-2-乙基)-乙基]-异烟酰胺(英文结构名称：n-[1-(6-acetyl-7,9-dihydroxy-8,9-dimethyl-1,3-dioxo-3,9b-dihydro-1h-dibenzofuran-2-yliden)-ethyl]-isonicoyinamide)的化学合成及结构鉴定。采用松萝胺(c18h17no6)与烟酸(c6h5no2)为底物，在脱水剂dic和催化剂dmap的作用下，在有机溶剂介质中进行化学合成反应。采用正交试验结果显示，以二氯甲烷溶剂为介质，松萝胺：烟酸＝1:1.5(摩尔比)，松萝胺：dmap＝1:0.2(摩尔比)，松萝胺：dic＝1:0.1(摩尔比)，室温反应，反应时间96小时为最佳，产品得率大、杂质少、易纯化。在其它有机溶剂介质中的产品得率低或不能形成松萝烟酰胺，或形成许多杂质副产物。松萝胺与异烟酸在同等条件下反应不能形成松萝烟酰胺，与其它有机酸不能进行酰化反应，或不能形成具有抗癌活性的产物。松萝胺与烟酸的摩尔比优选为1:1-2；有机溶剂(ml)与松萝胺(摩尔)的用量优选比例为5000ml:1-2mol；松萝胺：dmap＝1:0.1-0.2(摩尔比)，松萝胺：dic＝1:0.1-0.2(摩尔比)，在室温下反应，反应时间优选为48-96小时。具体合成步骤如下：1.化学合成与纯化取34.3g纯度为99.8％的松萝胺于1000ml的反应瓶中，加入500ml二氯甲烷，充分振摇混匀后室温下超声10min，然后加入18.5g分析纯烟酸(摩尔比为1:1.5)、1.3gdic、1.2gdmap，搅拌约5分钟，室温静置反应96小时。将反应液以滤纸过滤，滤渣再以100ml分析纯二氯甲烷滴加淋洗。将滤液合并，以旋转蒸发仪挥干溶剂，即得到本发明松萝烟酰胺化合物产物。将产物以少量甲醇(或乙醇)混悬、静置沉淀，移去上清液，对沉淀反复进行多次洗涤、过滤纯化。产品得率大于30％，纯度大于99.8％。2.结构鉴定化合物松萝烟酰胺的质谱图(如图1所示)；化合物松萝烟酰胺的核磁氢谱图(如图2所示)；化合物松萝烟酰胺的核磁碳谱图和dept谱图(如图3所示)。esi(+)ms:449(m+h)+,471(m+na)+，487(m+k)+，919(2m+na)+。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ12.12(s,1h),11.97(s,1h),9.40(s,1h),8.90(d,j＝4.3hz,1h),8.56(d,j＝8.0hz,1h),7.59(dd,j＝7.9,5.1hz,1h),7.06(d,j＝15.1hz,1h),5.78(s,1h),2.60(s,3h),2.46(s,3h),2.09(s,4h),1.73(s,4h)。13cnmr(126mhz,cdcl3)δ197.96(c),194.17(c),190.20(c),175.41(c),173.64(c),163.91(c),156.25(c),155.31(c),152.59(ch),150.33(ch),148.83(c),139.13(ch),126.10(c),124.16(ch),116.42(c),113.15(c),108.65(c),102.79(ch),101.57(c),56.89(c),32.61(ch3),31.69(ch3),26.07(ch3),8.83(ch3)。实施例2：一种松萝烟酰胺化合物，所述的松萝烟酰胺的结构式如式(i)所示，所述的松萝烟酰胺化合物的制备方法，包括如下步骤：将松萝胺加入到有机溶剂中，充分振摇后室温下超声10min，依次加入烟酸、dic及dmap搅拌后室温静置反应48小时，然后加入蒸馏水搅拌30min使其充分中和未反应的dic，将反应产物纯化，制得如式(i)所示的松萝烟酰胺化合物。反应式如下：其中，松萝胺与烟酸的摩尔比为1:1；所用有机溶剂的体积与松萝胺的比例为5000ml:1.5mol；松萝胺与dmap的摩尔比为1:0.15。将反应液过滤后的滤液蒸干，将所得到的蒸干物采用乙醇反复洗涤进行纯化。实施例3：一种松萝烟酰胺化合物，所述的松萝烟酰胺的结构式如式(i)所示，所述的松萝烟酰胺化合物的制备方法，包括如下步骤：将松萝胺加入到有机溶剂中，充分振摇后室温下超声10min，依次加入烟酸、dic及dmap搅拌后室温静置反应60小时，然后加入蒸馏水搅拌30min使其充分中和未反应的dic，将反应产物纯化，制得如式(i)所示的松萝烟酰胺化合物。反应式如下：其中，松萝胺与烟酸的摩尔比为1:2；所用有机溶剂的体积与松萝胺的比例为5000ml:2mol；松萝胺与dmap的摩尔比为1:0.2。将反应液过滤后的滤液蒸干，将所得到的蒸干物采用甲醇反复洗涤进行纯化。实施例4：下面通过部分具体实验例证来说明本发明的式(i)化合物松萝烟酰胺具有显著性、细胞靶向性抗肿瘤作用。1.本发明松萝烟酰胺化合物体外抑制和杀灭人类癌细胞作用：体外抗肿瘤试验方法：本发明松萝烟酰胺化合物以分析纯dmso溶解，配制浓度为0、0.625、1.25、2.5、5.0、10.0mmol/l。采用常规体外肿瘤细胞培养试验方法，收集培养的对数生长期人类癌细胞，以dmem/f12完全培养液混悬后接种于96孔板，每孔加入200μl细胞悬液(癌细胞密度为每孔5-6×103个细胞，乳腺癌mcf-7的细胞密度为每孔1×104个细胞)，每浓度、每测定时间点做8个平行复孔。接种细胞后的培养板放37℃、5％co2培养箱培养，24小时后采用mtt法测定1个96孔板的od值作为加药的0小时值；吸去其余培养板的培养液，然后按设计分别加入含有相应浓度的本发明松萝烟酰胺化合物的培养液200μl(每ml培养液加入配制的本发明松萝烟酰胺化合物溶液1μl，松萝烟酰胺的最终试验浓度为0.625、1.25、2.5、5.0、10.0μmol/l)。同时设dmso溶剂对照和抗癌药物阳性对照(顺铂，pbs溶解，使用浓度2μg/ml)，每浓度及对照组做3组平行。细胞在加药后放37℃、5％co2培养箱继续培养，于加药后24h、48h、72h，分别取一组细胞，采用mtt法测定每孔的od值，绘制不同时间、不同剂量下细胞生长曲线，测定本发明松萝烟酰胺化合物体外抗癌作用的时间-效应和每个时间点的剂量-效应关系，采用spss软件计算半数抑制浓度(ic50)，统计分析显著性差异。也可以只测定药物作用72小时后的剂量-效应关系，或采用筛选试验在显微镜下粗略观察72h的作用结果。mtt法按下式计算癌细胞的生长抑制率：抑制率(％)＝(溶剂对照组校正od值-本发明松萝烟酰胺化合物组的校正od值)/溶剂对照组校正od值×100校正od值＝实验组实际测量的od值-无细胞空白对照组的od值结果：松萝烟酰胺对人类癌细胞株如人胃癌细胞sgc-7901、肝癌hepg2、人神经胶质瘤细胞u-251、人结肠癌细胞hct-116、鼻咽癌细胞cne2、肺癌细胞spc-a1、非小细胞肺癌细胞a-549、宣威肺癌细胞xwlc-05等均具有显著性体外抗癌作用，体外抗肿瘤作用具有明显的剂量-效应和/或时间-效应关系。在体外抗癌活性筛选试验中，式(i)化合物处理癌细胞72小时后，在显微镜下见对人宫颈癌细胞hela、人白血病细胞k-562、淋巴瘤细胞l-428和bjab、肺癌nci-h460和nci-h157、肝癌细胞qgy-7703、食管癌细胞caes-17、乳腺癌细胞mcf-7和mda-mb-231、膀胱癌细胞t-24、人胆管癌细胞qbc-939、人前列腺癌细胞pc-3、人肾癌细胞achn、人卵巢癌细胞skov-3、子宫内膜癌rl-952、人胰腺癌panc-1、黑色素瘤细胞a-375等也具有非常明显体外抑制或杀灭作用。本发明松萝烟酰胺化合物对部分癌细胞的体外抗癌剂量-效应关系见图4、对胃癌sgc-7901体外抗癌的时间-效应与剂量-效应关系结果见图5。2.细胞靶向性抗癌作用体外抗癌试验结果表明，本发明松萝烟酰胺化合物对不同癌细胞株的抑制率存在明显差异，大多数人类癌细胞对本发明的松萝烟酰胺化合物很敏感，本发明松萝烟酰胺化合物的体外抗癌作用具有细胞靶向性。不同癌细胞的ic50(半数抑制浓度)差异较大，72小时，本发明松萝烟酰胺化合物对sgc-7901、hepg2、cne2、hct-116、u-251、spc-a1、a-549、xwlc-05的ic50(半数抑制浓度)分别为1.736、1.775、1.934、1.680、2.146、0.723、1.509μmol/l。本发明松萝烟酰胺化合物具有细胞靶向性抗癌作用。3.松萝烟酰胺抗癌作用优于临床常用抗癌药物在同等试验条件下，本发明松萝烟酰胺化合物对同种癌细胞株的抑制作用显著性强于顺铂和5-氟尿嘧啶。本发明松萝烟酰胺化合物对所检测的癌细胞株的ic50值均显著性低于临床抗癌药物顺铂和5-氟尿嘧啶，结果见表1。表1.本发明松萝烟酰胺化合物与顺铂、5-氟尿嘧啶对不同癌细胞株的ic50比较(μg/ml)癌细胞株松萝烟酰胺顺铂5-氟尿嘧啶a-5491.316.7336.89xwlc-051.174.55>80hepg21.773.2427.98cne23.634.15>80hct-1164.285.51----u-2514.44---->80注：“----”表示未进行实验检测，无数据。实施例5：下面通过部分具体实验例证来说明式(i)所示化合物松萝烟酰胺的抗癌作用机制。1.对癌细胞生长周期的影响细胞培养实验方法同前述体外抗癌试验方法。胃癌细胞sgc-7901经式(i)所示松萝烟酰胺化合物处理(剂量为0、1.25、2.5、5.0μmol)48h后，采用流式细胞仪(facs)检测细胞凋亡情况。各组的凋亡率(q2+q4)分别为6.79％、8.06％、23.62％和37.00％，药物处理组的癌细胞凋亡率显著性增加并且具有浓度-效应关系，结果见图6。胃癌细胞sgc-7901经式(i)所示松萝烟酰胺化合物处理(剂量为0、2.5、5.0、10.0μmol)48h后，采用流式细胞仪(facs)检测细胞分布周期。各组细胞的周期分布见表2、图7。结果：式(i)所示松萝烟酰胺化合物能明显影响癌细胞的分化和周期，阻滞细胞于s期，减少g1期细胞，具有浓度-效应关系。表2各组sgc7901不同细胞周期百分率(n＝3).注：*表示与溶剂对照比较，p<0.05；**表示与溶剂对照比较，p<0.01。2.对sgc7901细胞迁移和侵袭的影响溶剂对照组比较，2.5、5、10μmol/l松萝烟酰胺能够显著降低sgc-7901胃癌细胞的侵袭迁移能力。溶剂对照组划痕变窄，sgc-7901细胞向划痕内部迁移至划痕区中部，而2.5、5、10μmol/l组加药组划痕间隙明显宽于对照组。结果见图8。实施例6：下面通过部分具体实验例证来说明式(i)所示化合物松萝烟酰胺的毒理学安全性。1.急性毒性试验急性毒性试验中，以寇氏法进行实验。昆明种小鼠采用经口灌胃给药。本发明松萝烟酰胺化合物以0.5％羧甲基纤维素钠溶液溶解成混悬状(质量百分浓度)，24小时内给药4次，每次间隔6小时。给药后密切观察动物的毒性反应。最高剂量组给药总剂量达到15g/kg时，动物24小时内未见任何明显毒性反应和死亡。继续饲养观察14天，动物进食和饮水正常，体重增长正常，各组未见动物死亡。实验结束后将动物处死解剖，肉眼观察未见任何明显的脏器异常。急性毒性试验结果表明，本发明松萝烟酰胺化合物经口灌胃的最大灌胃剂量15g/kg时，动物未见任何毒性反应，按照急性毒性分级，本发明松萝烟酰胺化合物经口急性毒性试验属无毒类。2.短期重复剂量给药试验在30天短期重复给药试验中，本发明松萝烟酰胺化合物以质量百分浓度为0.5％羧甲基纤维素钠溶液溶解成混悬状，采用经口灌胃给药；每次给药剂量分别为0.625、1.25和2.5g/kg。每天灌胃给药1次，共给药30次(对照组灌胃等量的质量百分浓度为0.5％羧甲基纤维素钠溶液)。试验期间观察动物有无明显毒性反应，定期测量动物的体重和饲料消耗量；试验结束时，测量体重后，取血进行血常规和血液生化指标检测，解剖观察脏器情况，并剥离肝脏、肾脏、脾脏、睾丸称重，计算各脏器系数。抽取高剂量组和阴性对照组动物的肝脏和肾脏进行病理切片检查。结果：给药期间无任何动物死亡，未见动物有明显异常毒性表现，血液检验未发现对动物的造血系统、肝功能、肾功能产生显著性不良影响，不影响动物的血糖血脂水平。给药过程中，本发明松萝烟酰胺化合物组小鼠进食与饮水正常。与阴性对照组比较，本发明松萝烟酰胺化合物对动物体重增长和主要脏器发育无显著性影响(见图9、图10、图11)，肝脏、肾脏组织切片未见明显的异常病理改变。实施例7：下面通过部分具体实验例证来说明式(i)所示化合物松萝烟酰胺的溶解性。表5.松萝烟酰胺与松萝胺在不同溶液中的溶解度比较(mg/ml)注：n(松萝烟酰胺)，m(松萝胺)可见松萝烟酰胺在分析纯甲醇和无水乙醇中的溶解性显著性低于松萝胺；但在含水的酒精中的溶解度显著性高于松萝胺，说明经过结构改造后，产物松萝烟酰胺在水中的溶解度比松萝胺增加。tlc的结果也表明，结构改造后产物松萝烟酰胺的极性大于松萝胺。实施例8式(i)所示化合物松萝烟酰胺0.5g、大豆磷脂4.0g、胆固醇0.8g，以30ml乙酸乙酯溶解后，采用旋转蒸发仪蒸干有机溶剂，使上述物质在旋转瓶上形成薄膜。采用吹风机吹去瓶内残余的有机溶剂气体，然后加入50ml生理盐水充分洗膜，普通超声30分钟后，在冰浴上采用超声破碎仪超声5分钟/次，共3次。先采用1000nm滤头粗滤，可制成纳米口服液；然后以450nm滤头过滤后再以220nm的无菌滤头过滤于无菌瓶中，可制成纳米注射液。纳米口服液中松萝烟酰胺的载药量可以达到6-8mg/ml；纳米注射液中松萝烟酰胺的载药量可以达到3-6mg/ml。实施例9式(i)所示化合物松萝烟酰胺，以少量dmso溶解后，加入蓖麻油聚氧乙烯醚(cremophorel)，或以药物允许的其它助溶剂溶解，再加入生理盐水精滤，灌封灭菌制成清亮注射液。dmso：蓖麻油聚氧乙烯醚：生理盐水的体积比为10:10:80，松萝烟酰胺化合物终浓度为1-5mg/ml。实施例10式(i)所示松萝烟酰胺化合物，按制剂需要的比例及剂量要求加入赋形剂，制粒压片制成片剂。实施例11式(i)所示松萝烟酰胺化合物，按照给药剂量要求，可直接包装成各种规格的胶囊。实施例12式(i)所示松萝烟酰胺化合物能部分溶解于食用植物油，可以采用食用植物油脂为溶剂，按照溶解度和给药剂量要求溶解过滤成清亮液体后制成软胶囊。实施例13式(i)所示松萝烟酰胺化合物，按常规口服液制法制成口服液。实施例14式(i)所示松萝烟酰胺化合物，按制剂需要的比例加入赋形剂，制成颗粒剂或冲剂。实施例15式(i)所示松萝烟酰胺化合物，按产品需要的比例加入食品或其它载体，制成保健品或其它功能性用品。实施例16式(i)所示松萝烟酰胺化合物，按治疗需要，与其它抗肿瘤药物按比例混合制成各种制剂，或在临床使用时临时联合应用，形成联合抗肿瘤药物组合物。以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。当前第1页1 2 3