多碘代芳香酸类化合物及其在抗腺病毒7型中的应用的制作方法

本发明抗涉及抗病毒药物技术领域，具体是指一种多碘代芳香酸类化合物及其在抗腺病毒7型中的应用。

背景技术：

腺病毒(adenovirus,adv)为一群分布广泛的dna病毒。体腺病毒已知有52种，分别命名为advl～adv52，分两个属，共约100余血清型。人腺病毒约1/3的已知血清型与人类疾病相关。腺病毒可侵犯呼吸道、眼结膜、胃肠道及泌尿道等多种组织器官，以呼吸道感染为主，重者可致小儿肺炎，并可累积全身各系统。腺病毒感染所致的腺病毒性肺炎为小儿肺炎中最严重类型之一。与呼吸道疾病相关的腺病毒型别主要有adv7、adv3和adv4，其中adv7可引起严重的或致死性的婴幼儿下呼吸道感染，并容易引起暴发流行。目前临床上针对该病毒导致的感染，尚无有效的预防疫苗和治疗药物，主要采取对症治疗。

碘代羧酸是一类具有生物活性的有机化合物。例如对碘苯甲酸是肉桂酸-4-羟化酶(cinnamate4-hydroxylase)的有效抑制剂,肉桂酸-4-羟化酶是类苯基丙烷途径合成木质素构筑单元的关键酶(dorienvandewouwer,et.al.plantphysiology,2016,172,198-220)；间碘苯甲酸的金属盐对酿酒酵母、异常汉逊氏酵母、大肠杆菌和枯草芽胞杆菌均表现出较好的抑制活性(p.koczon,et.al.j.agric.foodchem.2001,49,2982-2986)。如2,3,5-三碘苯甲酸(tiba)是一种优良的植物生长调节剂(颜季琼,et.al.植物生理通讯,1958,3,27-30)。3,5-双(乙酰氨基)-2,4,6-三碘苯甲酸，又称为泛影酸(diatrizoicacid)，是一种重要的照影剂，配制成泛影钠、泛影葡胺注射液,可用于泌尿系、心血管、脑血管及周围血管的造影(icharles,et.al.1986,us4567034)。然而含碘羧酸的抗病毒活性，包括对于adv7病毒的抑制活性到目前却未见报道。

技术实现要素：

本发明的目的是针对上述现状，旨在提供一种多碘代芳香酸类化合物及其在抗腺病毒7型中的应用。本发明方案中多碘代芳香酸类化合物包括3-氨基-4-碘苯甲酸(l4)、3,4-二碘苯甲酸(l5)、3,5-二碘水杨酸(l6)，2,3,5-三碘苯甲酸(l7)作为adv7病毒筛选化合物。

本发明的方案中对多碘代羧酸包括3-氨基-4-碘苯甲酸(l4)、3,4-二碘苯甲酸(l5)、3,5-二碘水杨酸(l6)，2,3,5-三碘苯甲酸(l7)对于adv7病毒的抑制活性进行了评估。

为实现上述目的，本发明的方案如下：

第一方面，本发明提供一种多碘代芳香酸类化合物，其特征在于：包括如下：

l4：3-氨基-4-碘苯甲酸，

l5：3,4-二碘苯甲酸，

l6：3,5-二碘水杨酸，和

l7：2,3,5-三碘苯甲酸；

所述化合物l4—l7的化学结构式如下：

第二方面，本发明提供一种上述的多碘代芳香酸类化合物在抗腺病毒7型中的应用，其特征在于：所述多碘代羧酸的化合物l4—l7中任一均具有抗adv-7病毒活性。

作为优选方案，所述化合物l4浓度为200μg/ml时，对于adv7的抑制率达到了57.2％；所述化合物l5浓度为50μg/ml时，对于adv7的抑制率达到了78.0％；所述化合物l7浓度为100μg/ml时，对于adv7的抑制率为56.0％。

进一步地，所述化合物l4—l7中任一种作为adv7病毒抑制剂，添加药剂学可接受的辅料和载体后，用于制备抗adv7病毒的制剂。

更进一步地，所述制剂为颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂、注射剂或分散剂中任一种。

本发明目的的实现方式为，含多碘代羧酸(l4～l7)通过标准的病毒活性测试方法来对其进行活性测试。

本发明通过大量的生物学实验，发现含多碘代羧酸l4、l5、l6、l7具有抗adv7病毒的活性。具体表现为可以抑制adv7病毒引起的细胞病变效应，增强感染细胞的存活率，抑制adv7病毒在细胞内的复制增殖，降低子代病毒产量。由此表明这系列化合物有潜力制备抗adv7感染的特异治疗药物，具有大的临床应用前景。

相较于现有技术，本发明具有以下优点和有益效果：

1、多碘代羧酸的抗病毒活性未见报道，对其抗adv7病毒活性的开发具有一定的导向作用。

2、从结构相似的化合物中寻找抗adv7药物，易于通过构效关系研究寻找到其作用靶点，为进一步药物开发提供一定的借鉴意义。

附图说明

图1是多碘代羧酸l4、l5、l6、l7对于adv7作用的hela细胞存活率的影响。

图2是多碘代羧酸l4、l5、l7对于adv7引起的hela细胞cpe的抑制效应。

图3是多碘代羧酸l4、l5、l7对于adv7子代病毒产量的抑制作用。

具体实施方式

本发明所用的多碘代羧酸(l4～l7)购自试剂公司。

本发明多碘代羧酸(l4～l7)作为抗adv7病毒的应用，化合物多碘代羧酸l4、l5、l7抑制adv7在宿主细胞hela产生的细胞病变效应(cpe)，增强细胞存活率。强烈抑制adv7病毒在细胞内的复制增殖，降低子代病毒产量。这些研究表明这些化合物有潜力发展成为有效治疗adv7感染的药物。

【实施例1】多碘代芳香酸类化合物l4～l7抗adv7活性研究实验

实验情况如下：

1、试验内容：

化合物抗adv7活性分析：本发明将结合细胞病变效应分析和mtt测定细胞存活率检测方法，对多碘代羧酸抗adv7活性进行评估。

2、试验方法：

2.1.1化合物对于宿主hela细胞的毒性

将hela细胞铺板96孔板，在37℃，5％co2培养箱培养长满单层后，弃去细胞培养液，分别加含不同浓度测试化合物的细胞维持液继续培养，48h后显微镜目测并分别记录其细胞毒性，mtt法测定细胞存活率。spss11.5软件计算药物对于细胞的半数中毒浓度(mediancyctoxicconcentration，cc50)。细胞存活率＝(药物组平均od492值/细胞对照组平均od492值)×100％。

2.1.2化合物对于adv7的抑制活性

将hela细胞铺板96孔板，在37℃，5％co2培养箱培养长满单层后，弃去培养液，100tcid50的adv7病毒液感染细胞1.5h，加入不同浓度的测试化合物(利巴韦林作为阳性对照药物)孵育细胞。待继续培养约48h，病毒对照孔出现90％左右的cpe病变时，显微镜下观察细胞病变效应(cpe)。cpe的观察记录方法：无细胞病变记做-，25％以下细胞病变记做+，25％-50％细胞病变记做++，50％-75％细胞病变记做+++，75％以上细胞病变记为++++。

cpe观察完毕后，利用mtt方法检测药物对adv7的抑制率。具体步骤为：每孔加入mtt50μl(5mg·ml^-1)，孵育3-4h后去掉上清液，加入等体积的dmso溶解沉淀。用酶标仪在492nm处读取所对应的吸光度(od492值)。利用如下公式计算药物对adv7的抑制率。用spss11.5软件计算药物的半数有效浓度(concentrationfor50％ofmaximaleffect，ec50)。

2.1.3药物的治疗指数(ti)

ti＝cc50/ec50。治疗指数越高，说明抗病毒潜力越大。

3、实验结果

表1多碘代羧酸细胞毒性及抗adv7活性

化合物细胞毒性及抗adv7活性测试结果如表1所示。浓度依赖的化合物对于adv7作用的hela细胞存活率的影响如图1所示。本发明检测到多碘代羧酸l4、l5、l7对于adv7有一定的抑制活性，200μg/mll4处理对adv7引起的hela细胞病变效应，抑制率达57.2％；50μg/mll5处理对adv7引起的hela细胞病变效应，抑制率达78.0％；100μg/mll7处理对adv7引起的hela细胞病变效应，抑制率达56.0％

【实施例2】多碘代芳香酸类化合物l4、l5、l7对adv7子代病毒产量的抑制作用试验

本实施例对多碘代羧酸(l4～l7)进行了抗adv7活性的深入研究，实施了化合物l4、l5、l7对于adv7子代病毒产量的抑制作用试验，试验情况如下：

1、试验内容

检测在adv7感染hela细胞后，化合物l4、l5、l7对于adv7子代病毒产量的抑制作用。

2、试验方法

对数生长期的hela细胞铺板24孔板，长满单层后100tcid50adv7感染细胞，37℃孵育1.5h后移去病毒液，pbs洗涤三次，加入200μg/mll4、50μg/mll5、100μg/mll7的细胞维持液。48h后收集细胞和上清培养液，-20℃和37℃三次冻融裂解后，tcid50方法测定adv7病毒滴度。

3、试验结果

如图3所示，化合物l4、l5、l7处理的hela细胞相对于病毒对照组，其病毒滴度都有明显下降，相对于病毒对照分别下降5.2log、5.9log、4.9log。

综上所述，化合物l4、l5、l7具有较强的抑制adv7活性，可以抑制adv7病毒引起的hela细胞死亡，大幅降低子代病毒产量，有潜力制备一种临床上有效对抗adv7感染的药物。