寨卡病毒囊膜蛋白的鼠源单克隆抗体的制作方法

本发明涉及生物技术领域，具体地指一种寨卡病毒囊膜蛋白的鼠源单克隆抗体。

背景技术：

寨卡病毒(zikv)是一种黄病毒科病毒，感染该病毒后可导致新生儿的小头畸形并影响婴幼儿的神经发育，成年人感染后可能发生格林巴利综合征(gbs)导致神经损伤。目前尚无获批的疫苗和特效药物，这里我们利用自己构建的寨卡病毒囊膜蛋白免疫小鼠，获得了具备较强中和活性的鼠源单克隆抗体，将来可以运用于寨卡病毒的防治。

技术实现要素：

本发明的目的在于填补现有技术的空白，提供一种特异性好的寨卡病毒囊膜蛋白的鼠源单克隆抗体。

为实现上述目的，本发明提供了一种针对寨卡病毒囊膜蛋白的鼠源单克隆抗体，其轻链序列如seqno.1所示，其重链序列如seqno.3所示。

上述针对寨卡病毒囊膜蛋白的鼠源单克隆抗体对应的碱基序列，其轻链序列如seqno.4所示，其重链序列如seqno.5所示。

本技术：
的发明人在中国专利申请201811613477.1的研究基础上，利用其构建噬菌体文库的方法进行筛选并进一步基因改造，获得了效果较好的鼠源单克隆抗体。

本发明的有益效果：通过筛选和基因改造后，所获抗体的特异性好、中和活性强、抗聚集性增强，适用于寨卡病毒的防治。

附图说明

图1-1为tango软件预测b0氨基酸序列的易聚集区。

图1-2为tango软件预测突变后b8氨基酸序列的易聚集区。

图1-3为b0和b8的重链突变区域比较图。

图2为sds-page检测b8抗体。

图3为elisa分析b8抗体与寨卡病毒囊膜蛋白的结合图。

图4为b8抗体对寨卡病毒的中和活性图。

具体实施方式

以下结合附图和具体实施例对本发明作进一步的详细描述。以下实施例是在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

实施例1：b8抗体序列的获得

基于已构建的免疫小鼠fab噬菌体展示文库，(该文库的获得方法来自中国专利申请201811613477.1公开的黄病毒科病毒囊膜蛋白的融合蛋白及其制备方法与应用，利用其中的融合蛋白作为免疫原免疫小鼠后获得其cdna，利用其作为噬菌体展示文库的构建材料)，我们进行了三轮的筛选，并通过单克隆phageelisa，将其中的阳性克隆送测序，得到了b0候选克隆的碱基序列，并经氨基酸翻译软件(https://web.expasy.org/translate/)，得到了其氨基酸序列，轻链氨基酸序列如seqno.1所示，其重链氨基酸序列如seqno.2所示。。

实施例2：利用tango软件对获得的b0氨基酸序列进行优化

利用tango软件(http://tango.crg.es/)对b0候选克隆的氨基酸序列进行易聚集区预测，发现其中存在较强的易聚集区域，如图1-1，因此对该区域进行点突变，得到b8抗体，其轻链氨基酸序列如seqno.1所示，其重链氨基酸序列如seqno.3所示，对应碱基序列，轻链如seqno.4所示，重链如seqno.5所示。突变后的氨基酸序列经tango软件重新预测，发现该易聚集区被明显改善，如图1-2，1-3。

实施例3：293f细胞表达b8抗体并sds-page检测

将突变后的碱基序列克隆到双启动载体pvitro2-neo-mcs(invivogen)上，利用pei转染293f细胞后进行蛋白的表达，经过5-7天的表达，将293f细胞的培养上清经proteina(ge)纯化，将纯化后的蛋白经过浓换液后，得到溶于pbs缓冲液的b8抗体。经sds-page电泳检测，发现其呈现轻链和重链两条带，如图2所示。

实施例4：elisa分析b8抗体与寨卡病毒囊膜蛋白的结合

包被寨卡病毒囊膜蛋白在elisa板上，将b8抗体经梯度稀释后作为一抗，hrp标记的goat-anti-mouseigg(abcam)作为二抗，显色后，通过信号强度变化计算ec50，约在100nm，如图3所示。

实施例5：b8抗体的寨卡病毒中和实验。

将b8抗体进行梯度稀释后分别与100pfu的寨卡病毒在37℃共同孵育1h，然后将该混合物加入到提前一天铺有vero细胞的24孔板中，37℃孵育1h，弃掉病毒混合液，加入上层覆盖物(dmdm配制的2％羟甲基纤维素，含有2％血清)继续培养2-3天。形成明显病毒噬斑后，弃掉上层覆盖物，并加入3.7％的甲醛溶液进行固定，后加入1％浓度的结晶紫对噬斑进行染色，根据不同抗体浓度下病毒噬斑减少的情况，计算出ic50值，约为50nm，如图4所示。

1.一种寨卡病毒囊膜蛋白的鼠源单克隆抗体，其特征在于，其轻链序列如seqno.1所示，其重链序列如seqno.3所示。

2.权利要求1所述寨卡病毒囊膜蛋白的鼠源单克隆抗体对应的碱基序列，其轻链序列如seqno.4所示，其重链序列如seqno.5所示。