1.t7rna聚合酶变体,其在seqidno:1的氨基酸序列或与seqidno:1具有至少70%同一性的氨基酸序列中包含至少三个氨基酸取代,其中所述至少三个氨基酸取代在选自下组的位置处:i320、i396、f546、s684和g788。
2.权利要求1的t7rna聚合酶变体,其中所述变体在由seqidno:1鉴定的氨基酸序列中包含i320l取代。
3.权利要求1的t7rna聚合酶变体,其中所述变体在由seqidno:1鉴定的氨基酸序列中包含i396l取代。
4.权利要求1的t7rna聚合酶变体,其中所述变体在由seqidno:1鉴定的氨基酸序列中包含f546w取代。
5.权利要求1的t7rna聚合酶变体,其中所述变体在由seqidno:1鉴定的氨基酸序列中包含s684a取代。
6.权利要求1的t7rna聚合酶变体,其中所述变体在由seqidno:1鉴定的氨基酸序列中包含g788a取代。
7.权利要求1的t7rna聚合酶变体,其中所述变体包含取代i320l、i396l、f546w、s684a和g788a。
8.权利要求7的t7rna聚合酶变体,其中所述变体包含由seqidno:2鉴定的氨基酸序列。
9.权利要求1的t7rna聚合酶变体,其包含取代i320l、i396l和g788a。
10.权利要求9的t7rna聚合酶变体,其包含由seqidno:3鉴定的氨基酸序列。
11.权利要求1的t7rna聚合酶变体,其包含取代i396l、s684a和g788a。
12.权利要求11的t7rna聚合酶变体,其包含由seqidno:4鉴定的氨基酸序列。
13.权利要求1的t7rna聚合酶变体,其包含取代i320l、s684a和g788a。
14.权利要求13的t7rna聚合酶变体,其包含由seqidno:5鉴定的氨基酸序列。
15.用于生成核糖核酸(rna)的方法,所述方法包括:
将权利要求1-14中任一项的t7rna聚合酶变体与核苷三磷酸和编码目标rna的脱氧核糖核酸(dna)模板组合;和
生成所述目标rna。
16.权利要求15的方法,其中生成步骤在37℃或更高的温度下进行。
17.权利要求15或16的方法,其中生成步骤包括使用来自表达所述t7rna聚合酶变体的细胞的细胞裂解物或来自表达所述t7rna聚合酶变体的细胞的酶制剂。
18.权利要求15-17中任一项的方法,其中所述dna模板是环状dna模板。
19.权利要求15-17中任一项的方法,其中所述dna模板是线性dna模板。
20.权利要求15-19中任一项的方法,其中在37℃或更高的温度下,生成的目标rna的量大于使用野生型t7rna聚合酶生成的所述目标rna的量。
21.权利要求17至20中任一项的方法,其中所述目标rna是dsrna、ssrna、sirna、mirna、pirna、mrna或shrna。
22.试剂盒,其包含:
(i)权利要求1-14中任一项的t7rna聚合酶变体;和
(ii)反应缓冲剂。
23.权利要求22的试剂盒,其中所述试剂盒进一步包含一种或多种核糖核苷三磷酸。