用于治疗动物急性腹泻和肠道感染的组合物和方法与流程

交叉引用

本发明请求享有2018年10月3日提交的序列号为no.62/740,769共同未决的美国临时申请的权益，其通过引用的方式全部结合于此。

本发明提供了用于治疗包括狗和猫在内的动物的腹泻和肠道感染的组合物和方法。所述治疗包括一种可提供对病原体的被动免疫的食物物质。

背景技术：

抗体，无论是天然存在的还是其合成类似物，都是动物体内已知的治疗剂。抗体以抗体上的抗原结合位点与抗原的一部分(抗原决定簇或表位)结合。抗体具有高度的特异性，能够靶向应用于特定的病原体。然而，这种高特异性会导致过度有限的结合属性，其中功能相同的试剂或抗原(例如，能引起相同的疾病或症状)与免疫试剂或免疫治疗剂的反应不同。另一方面，交叉反应是抗原和针对相似但不同的抗原产生的抗体之间的反应。受控的交叉反应性可以建设性地用于拓宽抗体的结合范围，从而能够针对特定目标以外的病原体提供广谱保护。

在哺乳动物物种中，对病原体的免疫力通过胎盘或初乳提供的母体抗体从母体转移给后代。母亲只能转移那些由于自然暴露或接种疫苗而由身体产生的抗体。然而，母体的抗体转移水平受到最近暴露于特定病原体的影响。如果母体初乳中含有的针对某些病原体的抗体数量不足，新生儿对这些疾病的免疫力就会不足。

初乳已在哺乳动物中自然进化，特别是将其成分以非常浓缩的小体积形式进入/通过胃肠道传递给新生儿。众所周知，初乳含有包括iga、igg和igm在内的抗体。初乳的其他成分包括乳铁蛋白、溶菌酶、乳过氧化物酶、补体和富含脯氨酸的多肽(prp)。初乳中的其他成分已被证明可以保护和支持胃肠道中的抗体活性。

初乳中的抗体和辅因子可以为受体提供被动免疫。正常情况下，抗体和辅因子由母体传递给新生儿，并提供对病原体的第一步保护。初乳中的生长因子也刺激肠道的发育和修复。初乳中的其他成分有助于在母体抗体通过消化系统时对其进行保护，并保证在肠道中的抗体活性。这在牛类中是一个特别重要的功能，因为牛类的胃肠道比许多其他哺乳动物都要大。

初乳是天然设计在胃肠环境中用作保护性/反应性基质。它有助于调节肠道环境，使其对外来病原体具有抵抗力。例如，初乳含有乳铁蛋白，一种可阻止细菌和病毒获得复制所需铁的蛋白。初乳还可选择性地使某些益生菌活化，从而反过来帮助机体抵御感染。初乳是两种主要生长因子，即转化生长因子(tgf)α和β的来源，以及胰岛素-生长因子1和2的来源。这些因子促进组织修复和发育。初乳也是肝细胞生长因子(hgf，也称为“分散因子”)的来源，其可刺激肠壁细胞的生长和扩张。

通过禽类(例如鸡)免疫产生的特异性抗体早有记录。当用适当的抗原免疫后，母鸡会产生igy抗体，这种抗体会浓缩在蛋黄中，供小鸡在出生后的头几周使用。以将卵黄中的igy抗体转移到发育中的小鸡这种形式，代替哺乳动物以初乳的形式将抗体传递给新生儿。

来自禽蛋的igy抗体已被证明对存在于哺乳动物胃肠道中的病原体有效。遗憾的是，口服抗体的治疗效果因其通过胃并暴露于胃酸和消化酶而降低。

已经尝试通过单独使用牛初乳或禽类抗体来递送治疗性抗体以治疗人类胃肠道感染。这些尝试产生了不良的或不一致的临床结果。然而，使用牛初乳作为保护性/反应性基质的禽类产生的抗体的组合已被证明是治疗人类腹泻和肠道感染的可靠有效的方法。

犬科和猫科的成员与人类和牛类有许多共同的特征。特别是，它们利用母体被动免疫来保护新生儿，它们易患感染性腹泻和其他肠道疾病并且缺乏对常见腹泻感染的有效治疗方法。对狗或猫腹泻的护理标准是禁食或清淡的饮食和一个疗程的抗生素，即使病原体是病毒。

对于某些感染来说，腹泻可能是致命的。例如，犬细小病毒是一种高度传染性的危及生命的病毒性疾病。这种病毒攻击狗体内快速分裂的细胞，最严重的是影响肠道。细小病毒还攻击白细胞，当幼小动物被感染时，病毒会损害心肌，导致终身心脏问题。细小病毒是一种广泛的犬感染病毒，攻击幼小和未接种疫苗的狗。

目前没有药物或治疗方法可以杀死细小病毒。包含积极的支持性护理治疗可以控制症状。感染细小病毒的狗需要在兽医医院接受强化治疗，在那里他们接受抗生素(对细小病毒没有效果)、控制呕吐的药物、静脉注射液和其他支持疗法，这需要相当大的费用，平均住院时间约为5～7天。即使有医疗支持，犬细小病毒的死亡率也在20％～50％之间，这取决于姑息治疗的水平。

美国目前有9000万只狗和8000万只猫，每只平均每年腹泻2～3次。美国2.2亿次兽医就诊中，约有20％与犬类或猫科动物腹泻有关。目前还没有“一线”治疗方法可以及时缓解腹泻后遗症，并以微不足道的成本中和潜在的感染。

技术实现要素：

我们公开了一种组合物及其用于治疗动物中病原体诱导的腹泻的方法，所述动物包括但不限于犬科或猫科动物。所述组合物包括与保护性蛋白基质混合的靶向禽源抗体，为有需要的动物引入有效的被动免疫。靶向抗体嵌入所述保护性蛋白质基质中，以便与特定病原体、毒素或与疾病状态相关的其他靶标反应，同时被保护免受胃肠环境的破坏。所述抗体是igy抗体的混合物，并包括对多种抗原(来源于与致泄性疾病相关的多个表位)具有特异性的抗体。这些表位可能是生物体、毒素或生物体和毒素的混合物，每一种都可引发动物产生腹泻。

所述保护性蛋白质基质可以来自非超免疫动物来源。在一些实施方式中，所述基质包括来自非超免疫动物的初乳。所述非超免疫动物可以是反刍动物，例如泌乳母牛。在其他一些实施方式中，所述蛋白质源可以来源于从非超免疫动物获得的另一种体液或组织。在一些实施方式中，所述保护性蛋白质基质可占组合物重量的20％或更多。

可以通过给禽类(例如一只鸡)接种在引起腹泻的生物体中发现的抗原或这些生物体产生的毒素来产生所述抗体。禽类产下的蛋含有可与生物体或毒素相互作用的igy抗体。抗体的交叉反应性用于产生抗体混合物，所述抗体粘附在不同生物体或毒素中发现的抗原簇上，所有这些抗原簇都会引发动物腹泻。交叉反应性抗体可以通过给禽类接种抗原来产生，这些抗原是可引起腹泻的生物体或毒素群所共有的。因此，本发明所公开的治疗剂中的抗体可用于治疗或预防由范围广泛的生物体引起的腹泻，包括动物中的腹泻，其中引起疾病的生物体类型是已知的，但该类动物中的特定生物体不是已知的。

可引起腹泻的生物体(由所述生物体产生的抗原用于产生包含于组合物中的抗体)的示例包括：梭菌属的一种、耶尔森氏菌属的一种、短螺旋菌属的一种、弯曲杆菌属的一种、大肠杆菌、幽门螺杆菌、沙门氏菌属的一种、钩端螺旋体属的一种、埃氏普罗威登斯菌、副结核杆菌、胞内劳森氏菌、牛病毒性腹泻病毒、传染性牛鼻气管炎病毒、冠状病毒、轮状病毒、细小病毒、副粘病毒、肝炎病毒、猫白血病病毒、猫免疫缺陷病毒、猫泛白细胞减少症病毒、星状病毒、传染性胃肠炎、非洲猪瘟病毒(基因型i-xxiii)、贾第虫、球虫、溶组织内阿米巴、隐孢子虫、蛔虫、鞭虫、螺旋体、酵母菌和霉菌。

附图说明

为了容易理解本发明的优点，将通过参考附图中示出的特定实施例来对以上简要描述的本发明进行更具体的描述。应当理解的是，该附图仅描绘了本发明的典型实施例，因此不应认为是对本发明范围的限制，将通过使用附图以附加的特征和细节来描述和解释本发明。

图1是生产本公开所述组合物的方法的示意图。

图2是生产本公开所述组合物的方法的流程图。

图3是使用本公开所述组合物对受试者进行治疗的方法的流程图。

具体实施方式

定义:

除非本文另有规定，否则以下术语和短语具有以下含义。本公开可以使用本公开中没有明确定义的其他术语和短语。对于本领域普通技术人员来说，这些其他术语和短语将具有它们在本公开的上下文中所拥有的含义。在某些情况下，术语或短语可以用单数或复数来定义。在这种情况下，应当理解的是，任何单数形式的术语都可以包括其复数形式，反之亦然，除非有相反的明确指示。

如本文所使用的，单数形式“一个(a/an)”和“所述”包括复数指代物，除非上下文另有明确规定。例如，“取代基”包括单个取代基以及两个或多个取代基等。

如此处所使用的，“例如”、“比如”、“诸如”或“包括”意在引入进一步阐明更一般主题的示例。除非另外明确指出，否则提供这样的示例仅仅是为了帮助理解本公开中示出的实施方式，并且不意味着以任何方式进行限制。这些短语也不表示对所公开的实施方式的任何种类的偏好。

如本文所用，“生物体”意指可以具有单个细胞或多个细胞的形式，并且其可包括细菌、病毒和寄生虫。

如本文所用，“病原体”是指在宿主中引起疾病或不良反应的生物体，包括细菌、病毒和寄生虫。

虽然本发明可以有多种不同形式的实施方式，在附图中示出了将在此详细描述的具体实施方式，应该理解的是，本公开被认为是本发明原理的范例，并不旨在将本发明限制于所示的实施方式。

我们公开了一种用于预防或治疗动物(包括狗或猫)中病原体诱导的腹泻的治疗组合物。本公开还公开了生产治疗组合物的方法和对动物(包括狗或猫)进行治疗以预防或治疗病原体引起的腹泻的方法。

对于许多动物胃肠病原体来说，显然需要更为低成本和有效的治疗方法，口服抗体是这一需求的候选药物。除了已证实的功效之外，口服抗体通常是非免疫原性的，因此不会在接受组合物的动物中产生不良的免疫反应。它们通常耐受性良好，没有不良副作用的报道，并且与类似的摄入食品相比没有不同的反应。值得注意的是，一些含有口服抗体的产品已经获得了美国食品药品监督管理局的gras(一般认为安全)认证。

所公开的包含igy抗体的组合物可以来源于鸡或其他禽类(产蛋鸡)所产的蛋。这些母鸡已经针对一种或多种可引起狗、猫或其他动物腹泻的病原体进行了免疫。在用鸡来生产蛋的示例中，鸡可以是藏香鸡(gallusgallusdomesticus)亚种的任何家禽。示例包括但不限于以下家鸡品种：罗德岛红鸡、来亨鸡、澳洲黑鸡、罗曼蛋鸡、苏塞克斯(sussex)鸡、goldencomet鸡、马朗(marans)鸡、普利茅斯洛克鸡、巴讷费尔德(barnevelder)鸡、奥平顿鸡、ameraucana鸡、labres鸡和hamburg鸡。这些例子是众所周知的高产蛋的鸡品种。然而，其他品种的鸡和其他禽类也在本公开的范围内。在一些实施方式中，所述鸡可以包括符合由相关政府当局(例如，美国农业部(usda))颁布的动物食用安全和加工法规的品种。

在收集蛋之前，可以用包含至少一种抗原的疫苗对母鸡进行免疫，所述抗原引发针对一种或多种引起腹泻的病原体的抗体的产生。所述疫苗可以通过本领域已知的任何方法进行生产。疫苗的示例包括减毒活疫苗、修饰活疫苗、化学修饰疫苗、灭活疫苗、类毒素疫苗、dna疫苗、亚单位疫苗、重组疫苗、多糖疫苗和结合疫苗。疫苗可以针对病毒、细菌病原体、寄生虫、酵母菌或霉菌。疫苗也可以针对由病原体产生的粘附素或毒素。在一些实施方式中，所述疫苗可以包括一种或多种增强疫苗免疫原性的佐剂。

在一些实施方式中，可以用包含活的野生型病原体的疫苗对母鸡进行免疫。疫苗通常是使用毒性较低(通过修饰或杀死)的病原体制造的，不太可能导致接受疫苗的生物体出现临床疾病。然而，可引发动物产生腹泻的病原体可能不会在禽类中引起任何疾病，尽管禽类可能会产生针对它的抗体。因此，只要母鸡保持健康，仍然能够产生针对疫苗成分的抗体，这些疫苗成分可与受感染的狗、猫或其他动物体内的病原体结合。在疫苗中使用活的野生型病原体的一个优点是，它们比其减毒的对应物具有更高的免疫原性，从而可产生更强大的抗体。因此，这些野生型疫苗可能不需要佐剂。

可对母鸡进行免疫的引起腹泻的病原体包括：产气荚膜梭状芽孢杆菌和其他梭菌属物种、弯曲杆菌、大肠杆菌(包括产肠毒素的(etec))、幽门螺杆菌、沙门氏菌属的物种，包括沙门氏菌，鼠伤寒沙门氏菌和猪霍乱沙门氏菌、钩端螺旋体属的物种、埃氏普罗威登斯菌、耶尔森氏菌属的物种，包括假结核耶尔森氏菌和小肠结肠炎耶尔森氏菌、副结核杆菌、短螺旋体，包括非典型短螺旋体、猪痢疾短螺旋体、胞内劳森氏菌、牛病毒性腹泻(bvd)病毒、传染性牛鼻气管炎(ibr)病毒、冠状病毒、轮状病毒、细小病毒、副粘病毒、肝炎病毒、猫白血病病毒、猫免疫缺陷病毒、猫泛白细胞减少症病毒、星状病毒、传染性胃肠炎(tge)病毒、非洲猪瘟病毒(基因型i-xxiii)、寄生虫(例如贾第虫、球虫、溶组织内阿米巴、隐孢子虫属物种，包括隐孢子虫，蛔虫，鞭虫、嗜水气单胞菌、螺旋体(包括滴虫)、酵母菌、霉菌和其他可引发腹泻的病原体。

在一些实施方式中，每只母鸡可以用单一的引起腹泻的病原体进行免疫。在这个例子中，可以用不同的单个引起腹泻的抗原对多只母鸡进行免疫，并且可以将每只母鸡生产的蛋进行组合以产生包含针对不同抗原的igy抗体的产品。在其他一些实施方式中，可以用两种或多种引起腹泻的病原体对单只母鸡进行免疫，最终得到针对存在于相同鸡蛋中不同抗原的igy抗体。

针对母鸡可以接种的疫苗的病原体组的选择方法的一个示例是基于已知的腹泻中的多个病原生物体。这些病原生物体可以被组合成结构相关的毒素和腹泻引起的亚单位或生物体的共同簇，从而产生一系列广谱的中和抗体。当与临床有效滴度的制剂混合时，这些抗体可用作广谱非生物体依赖性治疗对毒素介导的腹泻进行干预。

通过使用这种选择用于接种疫苗的病原体的方法，可能并不需要知道在接受该组合物的动物中引起腹泻的确切病原体是什么。此外，当作为预防性使用时，动物可以免受许多引起腹泻的微生物的影响。例如，在母鸡中产生的抗体可以对相关靶抗原多簇使用受控形式的交叉反应。在相关的靶抗原簇中存在一定程度的结构相似性，而不考虑作为抗原来源的生物体或毒素。通过产生针对这些相关簇共有的抗原的抗体，创建了广谱治疗干预，用于在已知或怀疑这种病原体但不是确切或特定病原体的情况下，或在多种(混合)病原体活跃的情况下。

此外，所公开的发明提供了一种途径，用于对具有新特征组合的未分化病原体菌株进行有效和立即的反应，其中一些特征已经存在于其他微生物中。例如，病原体特征的新组合是由随机突变、包含来自其他微生物的dna或抗生素介导的选择性进化产生的。这些活动产生了新的高毒性病原体菌株，对现有的药物治疗反应有限。这些改变的菌株通常导致数月或数年的高发病率/死亡率，直到开发出疫苗或其他治疗方法。一个示例是非洲猪瘟病毒，其有23个基因型变种。本文所述的制备疫苗的策略可以解决非洲猪瘟病毒的所有当前和未来变异。

这种方法利用了抗体的特异性和交叉反应性。在该实施方式中，抗体被设计为结合几个密切相关的存在于结构相关的抗原簇中的表位。这些抗原可能在其他方面有显著差异，并可能来源于不同的来源、生物或物种，但具有导致包括猫和狗在内的动物产生腹泻的共同作用。

在这种情况下，接种剂或免疫原被选择到目标抗原簇的共同/保留的组分/区域，而忽略相关抗原簇的单个成员的可变或区别组分或区域。该方法包括疫苗的制备，所述疫苗将被施用给禽类，并且所述疫苗包含一种合适的免疫原，所述免疫原具有引发抗体产生的特性，所述抗体对该表位的期望实例具有交叉反应性，但对其他表位不具有反应性。

这个实施方式的一个示例包括对结构相关毒素簇有特异性反应的抗毒素抗体的产生。这些抗体的示例会产生效果，而与产生毒素的物种无关。例如，针对结构相关毒素产生的抗体可以是中和抗体，能够中和或灭活目标毒素的生物活性。

如本文所公开的，这种广谱中和抗体可用于干预某些类型的腹泻，其中介导症状的毒素是毒素簇中的一种，而不需要知道哪种生物体是致病的。此外，如果本发明所述的治疗剂含有临床有效剂量的多种抗体，则该制剂可用于干预活性毒素对混合物中任何抗体产生反应的情况。

这种方法可以扩展到包括任何数量的毒素簇，并包括针对其他毒素样反应(例如病毒毒素样现象)介质的广谱中和抗体，以产生广泛适用的腹泻干预。使用这些抗体制备本文公开的治疗剂，可以在不知道感染原因的情况下，或者在存在多种感染原因的情况下，控制或预防症状和病理。

用疫苗免疫母鸡的方案可以根据本领域已知的在鸡中开始抗体生产的方案。在一个示例中，母鸡可以间隔至少两周接受两次或更多次疫苗接种。在一些实施方式中，接种可以在母鸡18周龄或更大时开始。可以在第一次接种疫苗后6个月给母鸡注射加强疫苗。

在一些实施方式中，所述疫苗通过皮下注射施用给母鸡。在其他一些实施方式中，所述疫苗通过肌内、口服、静脉内、口腔、鼻腔或皮肤途径给药。

在免疫过程之后，可以从母鸡处收集全壳蛋。这些鸡蛋的蛋黄含有浓缩的igy，其可与一种或多种蛋鸡接种疫苗所针对的病原体结合。在其他的实施方式中，所述鸡蛋的蛋黄可以从蛋清中分离出来。

根据本领域已知的过程，可以由鸡蛋(全壳或分离的蛋黄)来生产脱水的蛋粉。在一个实施方式中，鸡蛋可以使用适合于液体鸡蛋的商业脱水机进行盘式干燥。在一些实施方式中，所述商业脱水机应当满足由相关监管机构(例如，美国农业部)颁布的食品加工标准。干燥温度至少为138°f，但不超过150°f，这足以在15小时内对鸡蛋进行巴氏杀菌并干燥成粉末。然后脱水鸡蛋产品可以被研磨以产生适合混合的粉末。

在另一个实施方式中，鸡蛋被喷雾干燥。在这个实施方式中，液体鸡蛋可以在喷雾干燥之前，按照相关的监管指南，使用专用的食品质量处理设备在140°f下进行巴氏杀菌。然后可以将干燥的蛋制品研磨成适合混合的粉末。

此外，其他干燥过程，冻干、巴氏杀菌和保存方法也可以用来处理鸡蛋。此外，鸡蛋中的抗体可以用本领域已知的各种方法浓缩、分离或纯化。如本文所公开的那样产生的抗体可以被纯化、处理或保留在蛋材料中用于制造所公开的治疗剂。

蛋粉制剂可以被包埋在保护性蛋白质基质(例如初乳)中，用于口服给药。在一些实施方式中，所述初乳可以是牛初乳。在一些实施方式中，所述初乳可以从非超免疫反刍动物中收集。在一些实施方式中，所述非超免疫反刍动物可以是非超免疫牛。在一些实施方式中，所述初乳可以包括全初乳。可以使用本领域已知的技术将初乳脱水并研磨成粉末。本文描述的使蛋制品脱水的方法也可用于制备初乳粉。

初乳为抗体制剂提供了额外的保护和有效属性。抗体的任何组合可用于初乳基质中，包括但不限于抗病原体、抗毒素和抗粘附素抗体的组合。

除了初乳，其他蛋白质源可以用作保护性基质，并与蛋粉制剂混合。虽然初乳包括来自泌乳动物的抗体，但其在该组合物中的目的是作为载体并保护来自蛋粉制剂的igy抗体。用于制备保护性蛋白质基质的其他蛋白质源的例子包括血清白蛋白，例如牛血清白蛋白。脱水蛋白也可以用作蛋白质基质。虽然在鸡蛋中发现的液体蛋白具有大约10％的蛋白质，但是通过将蛋白脱水以产生添加到蛋粉制剂中的粉末，可以产生更浓缩的蛋白质混合物。源自其他动物组织的蛋白粉，例如肌肉、明胶或非超免疫动物的胶原蛋白，也可以被脱水并用于产生粉状蛋白质基质。酵母、乳清或全脂牛奶是蛋白质来源的额外例子，它们可以被脱水以制备粉状蛋白质基质。

一旦制备了包括抗体的干鸡蛋材料和干初乳，可以将两者混合以产生用于治疗动物腹泻的粉末状物质。保护性蛋白粉可以以鸡蛋和蛋白质混合物重量的20％～80％的比例提供。粉末鸡蛋混合物可以以鸡蛋和蛋白质混合物重量的80％～20％的比例提供。在一些实施方式中，混合物包含55％重量的蛋白粉和约45％重量的蛋粉制剂。在一些实施方式中，混合物包含大约45％重量的蛋白粉和大约55％重量的蛋粉制剂。在一些实施方式中，混合物包含大约50％重量的蛋白粉和大约50％重量的蛋粉制剂。

图1和2描述了蛋粉和保护性蛋白粉混合物制备的实施方式。在图1中，鸡110正在接种疫苗105，所述疫苗包括与引起腹泻的病原体或毒素相关的多种抗原。然后鸡110产下包含抗体的蛋120，抗体125包含在蛋120内。尽管为了清楚起见仅描述了抗体125，但是多种抗体存在于蛋120中。使用本文描述的技术将蛋120转化成干蛋粉。在该实施方式中，保护性蛋白质基质由非超免疫牛初乳制备。泌乳牛150是非超免疫动物，从其收集初乳160。使用本文所述的技术将初乳160转化成干初乳粉170。干蛋粉130和干初乳粉170以本文公开的比例结合，以制备得到腹泻治疗剂180。

图2是描述图1所示过程的流程图。在步骤210中，给母鸡接种一种或多种引起腹泻的病原体或毒素的疫苗。经过足够长的时间产生对疫苗有反应的抗体后，母鸡产下在步骤220收集的鸡蛋。所述鸡蛋含有针对疫苗中抗原表位的抗体。在步骤230中，由鸡蛋制备干蛋粉。在这个实施方式中，初乳被用作保护性蛋白质基质。在步骤240中，收集来自非超免疫奶牛的初乳。具体来说，奶牛没有接种疫苗来抵抗引起腹泻的病原体或毒素。对奶牛进行挤奶以收集初乳，并且使用本文所述的技术将初乳制备成干粉(步骤250)。在步骤260中，将来自步骤230的干蛋粉与来自步骤250的干初乳粉以本文公开的比例混合，以生产得到治疗组合物。

鸡蛋和初乳(或其他基质蛋白)混合物可以以粉末形式提供。或者，可以将鸡蛋和初乳混合物加工成片剂、咀嚼片、糖浆、酏剂或水悬浮液。本领域已知的可以口服给动物的任何剂型都在本公开的范围内。其他添加剂，包括防腐剂或调味剂，可以包含在最终的混合物中。

一种或多种电解质、维生素和一种或多种益生菌培养物也可以包含在治疗剂中，以进一步支持腹泻的治疗。益生菌是通常在肠道中发现的微生物。可能是细菌，也可能是酵母。当以适当的量存在时，益生菌有助于消化，抑制病原生物的生长，并合成营养物质。它们也可能支持宿主的免疫系统或具有抗炎活性。事实上，不同的益生菌菌株给宿主带来不同的益处。至少出于这个原因，益生菌补充剂通常以多种菌株的混合物形式提供。混合物可以包括多种细菌菌株、多种酵母菌株，或多种细菌和酵母菌株的组合。在益生菌缺乏或数量减少的情况下，病原微生物可能在肠道中繁殖，造成机会性感染。严重腹泻是正常肠道益生菌减少为病原微生物的繁殖创造了环境的一个示例。

口服益生菌补充剂在治疗狗的胃肠疾病方面显示出不一致的功效。部分原因被认为是，像本文讨论的抗体一样，益生菌不能在上胃肠道的酸性环境中存活。因此，在本公开的疗法中，初乳或其他蛋白质基质对抗体的保护也可以保护益生菌微生物。因此，相对于单独提供益生菌培养物，在本公开的疗法的每剂中减少菌落形成单位的数量也可以提供期望的功效。此外，在本公开的疗法中，所述益生菌可以增加抗体的治疗效果。

在一些实施方式中，可作为益生菌的微生物菌株包括下列一种或多种：屎肠球菌(包括但不限于菌株sf68)、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌、vsl#3、鼠李糖乳杆菌(包括但不限于菌株gg(lgg))、动物双歧杆菌(包括但不限于菌株ahc7)。据报道，后者对于对抗肠道艰难梭菌感染特别有效。本领域已知的其他菌株也可以包括在本公开的疗法中。

除了益生菌，一些实施方式可以包括为益生菌微生物提供营养的益生元。蛋白质基质可以作为益生元。其他益生元还可以包括低聚果糖(fos)、甜菜浆、生大蒜、蒲公英叶、小麦糊精、菊苣、发酵蔬菜和本领域已知的其他益生元。

治疗剂可以以一定的剂量提供给猫、狗或其他动物，该剂量取决于动物的体重、疾病的严重程度以及治疗剂是用于预防还是用于治疗现有疾病。在一个示例中，单次剂量可以包括3～10g鸡蛋粉末和蛋白质基质混合物，不包括可能存在于最终产品中的其他添加剂。在一些实施方式中，单一剂量可以包含大约5g的粉末状鸡蛋和蛋白质基质混合物，不包括可能存在于最终产品中的其他添加剂。所述治疗剂可以通过将干燥产品喷洒到动物可以摄取的食物上来施用。干燥形式的治疗剂可以与水或其他可摄取的液体混合，并混合或倾倒在动物可以摄取的食物上。干燥形式的治疗剂可以与水或其他可摄取的液体混合，并使用注射器给药到动物的口中，或者提供给动物饮用，或者通过鼻胃管直接给药到动物的胃中。总之，将产品施用到待治疗动物的胃肠道中的任何方法都在本公开的范围内。

图3总结了一个实施方式，其中用本公开的组合物治疗患有腹泻的动物。在步骤310中，使用者将5g本文所述的粉末状治疗剂悬浮在2盎司水中。将悬浮的治疗剂口服给药于患有由病原体或毒素引起的腹泻的动物(步骤320)。然后观察动物腹泻、呕吐或其他胃肠症状的改善情况(步骤330)。

虽然下面的实施方式说明了本公开的组合物及其在狗中应用的方法的实施方式，但是在猫、牛、马、猪、绵羊、山羊、骆驼、兔子、豚鼠、龙猫和其他动物中使用该组合物也在本公开的范围内。在一些实施方式中，动物可以是非新生动物。

在一个示例中，来自牛物种的犊牛经常遭受由一种或多种感染性病原体引起的腹泻。犊牛腹泻对犊牛生产者来说是一个巨大的损失。可能导致犊牛腹泻的传染性病原体包括大肠杆菌、沙门氏菌、产气荚膜梭菌、轮状病毒、冠状病毒、牛病毒性腹泻(bvd)病毒、牛传染性鼻气管炎(ibr)病毒、隐孢子虫、球虫、酵母菌和霉菌。

同样，马物种的幼年后代经常遭受病原体引起的腹泻。这些病原体包括产气荚膜梭状芽孢杆菌、艰难梭菌、沙门氏菌、大肠杆菌、隐孢子虫、轮状病毒、冠状病毒和嗜水气单胞菌。

猪也容易因病原体引起腹泻。可能引起猪腹泻的病原体的例子包括：非典型短螺旋体，猪痢疾短螺旋体、胞内劳森氏菌、沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、假结核耶尔森菌、大肠杆菌产气荚膜梭状芽孢杆菌、隐孢子虫、贾第虫、传染性胃肠炎(tge)病毒、非洲猪瘟病毒(基因型i-xxiii)和鞭虫。

众所周知，绵羊和山羊会因病原体引起的腹泻而患病。这些病原体包括球虫、耶尔森氏菌属物种(包括假结核耶尔森氏菌和小肠结肠炎耶尔森氏菌)、沙门氏菌属物种、大肠杆菌、隐孢子虫属物种、产气荚膜梭菌、副结核杆菌、轮状病毒和冠状病毒。蠕虫也是绵羊和山羊腹泻的常见原因。

本公开的组合物和使用方法可以应用于上述讨论的牲畜物种和患有腹泻的其他物种。在一些实施方式中，动物可以是非新生动物。所述组合物可包括粘附在引起腹泻的生物体上的抗体，如本文所述，该生物体在这些物种中引起腹泻。如本文所公开的，这些抗体可以在禽蛋中培养。

除了治疗或预防腹泻之外，所公开的发明步骤可用于生产治疗或预防其他胃肠疾病和症状的组合物，所述其他胃肠疾病和症状包括结肠炎、便秘、腹胀、胃炎、胃肠溃疡、出血性胃炎、炎症性肠病和吸收不良。这些抗体不是针对引起腹泻的生物体和毒素，而是要粘附于可导致所列胃肠道疾病或症状之一的生物体和毒素上。

在一些受试者中，胃肠不适可能是受试者胃肠生物群落失衡导致的。条件性微生物可能会以其他微生物物种为代价主导胃肠道生物群落。这可能是各种胃肠道损伤导致的，包括不适当的饮食、抗生素和病原体摄入。粘附于条件性微生物的抗体可以如本文所公开的那样产生，并与保护性蛋白质基质混合。混合物可以口服，抗体可以粘附并破坏条件性微生物。当以适当的滴度给药时，该组合物可以恢复受试者胃肠生物群落的平衡。

产生交叉反应性抗体的策略也可用于产生治疗胃肠道外感染的组合物。如本文所公开的，可以用交叉反应性抗体混合物来治疗外部感染或那些可通过微创手术进入的身体孔口和组织内的感染。这些感染可能发生在身体的某些部位，包括耳朵、喉咙、皮肤和膀胱。保护性蛋白质基质可以与抗体混合，以保护抗体免受待治疗环境的影响。抗体的交叉反应性消除了识别感染生物的精确种类的需要。

这种疗法赋予了病人被动免疫能力。治疗的性质使得相关的风险因素与食用来自收获抗体的来源的食物的风险因素相当(例如，风险因素类似于吃一个鸡蛋和一杯牛奶)。这是一种有效的治疗方法，比目前可用的替代药物毒性更小。

使用天然食品基产品的一个重要限制是，其制剂仅限于由自然过程自行生成的剂型。本发明的组合物及其使用方法允许选择性添加特异性抗体和一般免疫因子(制剂)，所述一般免疫因子(制剂)显著高于自然界中通常可以达到的生理水平。本发明还允许以对目标疾病、病原体或毒素产生更大特异性的方式对各种因素进行加权。

应当理解的是，这里描述的本发明的实施方式仅仅是对本发明原理的应用的说明。这里对所示实施方式的细节的引用并不旨在限制权利要求的范围，权利要求本身列举了那些被认为是本发明所必需的特征。以下的实施例旨在说明而非对本发明进行限制。

实施例：

以下实施例包括如下制备的公开的治疗剂。鸡(罗德岛红鸡)是根据商业蛋鸡的标准进行饲养、喂养和护理的。它们从刚开始孵化的小鸡开始饲养，并在孵化后的前10～15周喂食含20％或更多蛋白质的高蛋白食物。饲料包括每天2.5～5.0g钙。之后，给母鸡喂食蛋白质含量低于20％的食物。总的来说，鸡饲料中蛋白质的含量在每天14～22g之间。同时还提供了充足的水。

用四种市售动物疫苗通过皮下注射给母鸡接种疫苗。第一个是zoetis(新泽西州帕西波尼)公司生产的“scourguard4kc”。该疫苗旨在预防由牛轮状病毒(血清型g6和g10)、牛冠状病毒、具有k99菌毛粘附因子的产肠毒素大肠杆菌菌株和c型产气荚膜梭菌引起的腹泻。该疫苗由灭活牛轮状病毒(血清型g6和g10)和在已建立的细胞系中繁殖的冠状病毒，k99大肠杆菌和产气荚膜梭菌c型类毒素的液体制剂制备得到，并包含佐剂以增强免疫反应。第二种疫苗是由elanco公司(印第安纳州格林菲尔德市)提供的产气荚膜梭菌a型类毒素，包括a型产气荚膜杆菌、肠毒素和佐剂。这种疫苗旨在预防由产气荚膜梭菌的α毒素(a型)引起的疾病。第三种疫苗是coloradoserum公司(科罗拉多州丹佛市)提供的胎儿空肠弯曲杆菌疫苗。该疫苗是胎儿弯曲杆菌和空肠弯曲杆菌灭活培养物(杀死的细菌)的水悬浮液。它含有氢氧化铝作为助剂和硫柳汞作为防腐剂。第四种疫苗是neotech公司(田纳西州德累斯顿市)提供的尼奥帕(neopar)疫苗。这种疫苗是一种改良的活病毒疫苗，每剂含有高抗原质量的高免疫原性犬细小病毒株，并含有庆大霉素和两性霉素b作为防腐剂。因此，这些母鸡接种了针对下述引起腹泻的微生物的疫苗：产气荚膜杆菌、轮状病毒、沙门氏菌、大肠杆菌、弯曲杆菌和细小病毒。

接种疫苗后，从母鸡处收集鸡蛋。通过如本文所述的对全壳蛋进行干燥脱水并研磨以制备得到蛋粉。

蛋粉样品被送到iso/iec17025:2005认可的商业检测机构，以评估微生物和重金属含量。实验室报告如表1所示。由表中结果表明，蛋粉是安全的可摄入产品。

usp＝微生物限度预备试验；aoac＝官方农业化学家协会

cfu＝菌落形成单位；icp-ms＝电感耦合等离子体质谱；ftir＝傅里叶变换红外光谱

蛋粉以50:50的重量比与市售的牛初乳粉混合，牛初乳粉来自非超免疫牛。所得混合物在室温下储存，直到用水重新配制，如下所述使用。每剂由5g混合物和一种香草精调味而成。

实施例1.6周龄犬中细小病毒的治疗

犬细小病毒是一种高度传染性的可危及生命的病毒性疾病。这种病毒攻击狗体内快速分裂的细胞，最严重的是影响肠道。细小病毒还攻击白细胞，当幼小动物被感染时，病毒会损害心肌，导致终身的心脏问题。

目前没有药物或治疗方法可以杀死细小病毒。包含积极的支持性护理治疗可以控制症状。感染细小病毒的狗需要在兽医医院接受强化治疗，在那里他们接受抗生素(对细小病毒没有效果)、控制呕吐的药物、静脉注射液和其他支持疗法，这需要相当大的费用，平均住院时间约为5～7天，需要花费数千美元。即使有医疗支持，犬细小病毒的死亡率也在20％～50％之间。如果不治疗的话，死亡率高达90％。

一只六周大的小狗严重腹泻，被送往兽医医院进行诊断和治疗。主治兽医通过elisa粪便检测法诊断该狗患有细小病毒。

在宠物主人的允许下，除了标准的护理治疗外，主治兽医还进行了抗体治疗，包括含有细小病毒抗体的超免疫蛋粉(如本文所述在接种过的鸡中饲养)与全初乳粉混合。该制剂与少量水混合，并口服给药于病患，受试者由所有者带回家。第二天早上，兽医在医院对受试者进行了复查。小狗没有症状，体温正常，大便坚实，没有身体不适的迹象。elisa粪便检测法证实不存在细小病毒感染。抗体/初乳制剂有效地给予了病患被动免疫，并在治疗后24小时内根除细小病毒感染和后遗症。

实施例2.10只犬的研究组中细小病毒的治疗

目标：

本研究的目的是评估所公开的治疗方法对美国的狗的耐受性和有效性效果。

方法：

这项研究是一项针对1个月至5岁之间的犬类病患的开放性多中心研究。试验病患的选择和招募由监管兽医或健康提供者进行。其他临床或动物收容所人员在必要时协助目标护理和后勤工作。登记时获得宠物主人的知情同意。

研究小组：

根据主治兽医的报告，所有参与试验的受试者均出现“中度”至“重度”腹泻症状。通过进行实验室诊断试验，确认细小病毒是犬腹泻的病原体或病因。

研究组由10只细小病毒阳性受试者组成，所有10只受试者均完成研究。在24小时内观察所有研究对象并收集数据。

无阴性对照组接受标准的抗生素和脱水护理方案治疗。在第二天观察受试者状态之前，所有受试者都停止了抗生素和主动水合治疗。

所述治疗如本文所公开，包括由如本文所述免疫的母鸡所产的蛋产生的高度免疫的蛋粉和由牛初乳产生的全初乳粉。提供初乳的动物没有接种细小病毒疫苗。治疗剂被包装在含有5g粉末的单剂量小袋中。所述治疗是口服给药的，通过将一个小袋的内容物重新悬浮在大约2盎司的标准饮用水中。试验受试者被要求在准备完成后立即一口气喝完全部悬浮液。给药后，受试者在现场观察10分钟。

对每个受试者测量的报告参数包括粪便频率、粪便浓度和医生报告的健康状况。这三个标准被发现对主治兽医和受试者的主人在评估受试者的状态和状况的改善方面都是最重要的。

结果：

受试者根据护理状态标准进行评估：严重的血性腹泻、昏睡、厌食、发烧、呕吐、和严重的体重下降。

所有受试者都被评定为中度至重度疾病，包括无精打采和最低反应等状态。

在首次施用所公开的疗法的12小时内，观察到所有受试者的显著改善。大便次数和稠度恢复正常。呕吐和血便消除。恢复正常活动，且未观察到不良副作用。

相比之下，护理标准下的受试者(不包括在本研究中)通常在24小时后病情严重，48小时后病情加重。

一只健康状况下降的受试者在接受了几天的标准护理治疗后，接受了所公开的治疗。虽然腹泻相关症状消退，但受试者随后死于最初细小病毒感染引起的全身衰竭。

结论：

本项研究提供了证据，表明所公开的治疗方法在治疗犬急性细小病毒腹泻方面非常有效，并且显著降低了疾病的持续时间和严重程度。它在急性细小病毒腹泻的饮食管理中也是有效的，大大减少了疾病的持续时间和严重程度。这种治疗是一种安全的、非抗生素的饮食干预，受试者对此耐受性良好。

虽然上面已经示出和描述了具体实施例，但是应当理解的是，本发明的公开不限于所公开的精确配置、步骤和组件。借助于本公开，可以对所公开的方法和系统的布置、操作和细节进行对本领域技术人员显而易见的各种修改、改变和变化。

无需进一步阐述，相信本领域技术人员可以使用前面的描述来最大程度地利用本公开。本文公开的实施方式和实施例应被解释为仅仅是说明性和示例性的，而不是以任何方式限制本公开的范围。对于本领域技术人员来说，显而易见的是，在不脱离本文公开的基本原理的情况下，可以对上述实施例的细节进行改变。