稳定性得到提高的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段的制作方法

本发明在韩国保健福祉部的支持下由项目号hi17c1693完成，上述项目的研究管理专门机构为韩国保健产业振兴院、研究事业名为“疾病克服技术研发”、研究项目名为“利用抗(anti)-met抗体的肾脏疾病生物药品的非临床研发及机制研究”、主管机构为首尔特别市波拉梅医院、研究时间为2017年04月10日～2019年12月31日。本专利申请要求于2018年11月14日提交且申请号为第10-2018-0140196号的韩国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。
背景技术：
：在细胞表面表达的c-肝细胞生长因子受体(met，mesenchymal-epithelialtransitionfactor)为被肝细胞生长因子受体原癌基因(proto-oncogene)编码的受体酪氨酸激酶。结构上，c-肝细胞生长因子受体为由细胞外α亚基(extracellularalphasubunit，50kda)和跨膜β亚基(transmembranebetasubunit，140kda)组成的通过双硫键结合的二聚体。c-肝细胞生长因子受体包含用于配体结合的胞外域、跨膜部分以及参与包内域内的酪氨酸残基的磷酸化的酪氨酸激酶催化剂基序(deanetal.,nature,4:318(6044):385,1985；parketal.,pnas,84(18):6379,1976；maggioraetal.,j.cellphysiol.,173:183,1997)。若c-肝细胞生长因子受体与作为配体的肝细胞生长因子(hgf，hepatocytegrowthfactor)相结合，则c-肝细胞生长因子受体的细胞质酪氨酸残基被二聚化且自磷酸化(autophosphorylate)，之后，与介导下级信号转导途径的各种蛋白质相互作用。c-肝细胞生长因子受体的活化导致诱导细胞生长、分散(scattering)及游动性(motility)、侵袭(invasion)、防止细胞凋亡、分支形态发生(branchingmorphogenesis)及血管生成(angiogenesis)的增加等各种生物学反应。在病理学条件下，c-肝细胞生长因子受体的不适当的活化，可向癌细胞增加增殖、存货及侵袭/转移能力。当考虑受到c-肝细胞生长因子受体活性影响的各种生物功能、生理功能时，c-肝细胞生长因子受体蛋白成为多用途的治疗靶。本发明人已研发了与c-肝细胞生长因子受体蛋白结合来使其活化且在各种障碍或疾病中具有预防和/或治疗效果的c-肝细胞生长因子受体免疫球蛋白(wo2016/021864a1；wo2017/135791a1)。但是，本发明人所研发的作为基于igg1的抗c-肝细胞生长因子受体抗体的1e4(wo2016/021864a1；wo2017/135791a1)对于c-肝细胞生长因子受体具有高亲和力(affinity)，但是没在生产过程中，示出结构不稳定性。由此，本发明人努力研发在维持以往的抗体的亲和力及生物活性(biopotency)的同时具有结构稳定性的抗体，从而，完成了本发明。在本说明书全文中，参照多篇论文及专利文献并引用其。所引用的论文及专利文献(wo2016/021864a1；wo2017/135791a1)的公开内容通过引用结合在本说明书中，从而更明确地说明本发明所属
技术领域：
的水平及本发明的内容。现有技术文献非专利文献非专利文献1：perry,l.c.a.,jones,t.d.&baker,m.p.,2008.newapproachestopredictionofimmuneresponsestotherapeuticproteinsduringpreclinicaldevelopment.drugsinr&d,9(6),pp.385-96非专利文献2：bryson,c.j.,jones,t.d.&baker,m.p.,2010.predictionofimmunogenicityoftherapeuticproteins:validityofcomputationtools.biodrugs:clinicalimmunotherapeutics,biopharmaceuticalsandgenetherapy,24(1),pp.1-8技术实现要素：技术问题本发明人努力研发了在维持抗c-肝细胞生长因子受体抗体1e4的亲和力及生物活性的同时结构稳定性得到提高的抗体。抗体的结构稳定性在医药的商业研发过程中的重要考虑因素。若抗体的结构稳定性不优秀，则具有如下的问题，即，不利于质量管理，功效降低，副作用增加。为了维持对于以往的抗c-肝细胞生长因子受体抗体1e4的c-肝细胞生长因子受体的亲和力，本发明人执行了将互补决定区(complementaritydeterminingregions，cdrs)移植到更稳定的骨架区的互补决定区移植(cdrgrafting)。结果，发现了相比于以往，抗体的结构稳定性得到提高的抗体或抗原结合片段的序列，并完成了本发明。因此，本发明的目的在于，提供示出得到改善的稳定性的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段。本发明的再一目的在于，提供对示出得到改善的稳定性的上述抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段进行编码的核酸分子。本发明的另一目的在于，提供包含上述核酸分子的重组载体。本发明的还有一目的在于，提供由上述重组载体转化的宿主细胞。本发明的又一目的在于，提供用于治疗缺血性疾病、脑卒中、肾脏损害或疾病、视网膜新生血管形成障碍(retinalneovascularizationdisorder)、神经障碍或疾病或者伤口的药剂学组合物。本发明的又一目的在于，提供缺血性疾病、脑卒中、肾脏损害或疾病、视网膜新生血管形成障碍、神经障碍或疾病或者伤口的治疗方法。可通过下述发明的详细说明、发明要求保护范围及附图更加明确本发明的其他目的及优点。技术方案本发明人努力改善作为已研发的抗c-肝细胞生长因子受体抗体的1e4(参照wo2016/021864a1；wo2017/135791a1)的结构稳定性。本发明人通过1e4抗体的互补决定区移植制备了对于抗原示出高亲和力、低免疫原性、高稳定性及生物活性的1e4抗体的变异体。在本说明书中，术语“抗体(antibody)”为对于c-肝细胞生长因子受体的特异抗体，不仅包括完整的抗体形态，还包括抗体分子的抗原结合片段。完整的抗体为具有2个全长轻链及2个全长重链的结构，各个轻链通过双硫键与重链连接。重链恒定区具有γ、μ、α、δ及ε类型，作为子类具有γ1、γ2、γ3、γ4、α1及α2。轻链恒定区具有κ及λ类型(cellularandmolecularimmunology,wonsiewicz,m.j.,ed.,chapter45,pp.41-50,w.b.saundersco.philadelphia,pa(1991)；nisonoff,a.,introductiontomolecularimmunology,2nded.,chapter4,pp.45-65,sinauerassociates,inc.,sunderland,ma(1984))。在本说明书中，术语“抗原结合片段”是指具有抗原结合功能的片段，包含如fab、f(ab')、f(ab')2、化学连接的f(ab')2及fv等。在抗体片段中，fab为具有轻链及重链的可变区和轻链的恒定区以及重链的第一个恒定区(ch1)的结构，具有一个抗原结合位点。fab'与fab的差异在于，fab'在重链ch1的c-末端具有包含一个以上的半胱氨酸残基的铰链区域(hingeregion)。f(ab')2抗体使通过fab'的铰链区域的半胱氨酸残基形成双硫键来生成。fv为仅具有重链可变区及轻链可变区的最小抗体片段，生成fv片段的重组技术公开在pct国际公开专利申请wo88/10649、wo88/106630、wo88/07085、wo88/07086及wo88/09344。在双链fv(two-chainfv)中，重链可变区与轻链可变区通过非共价键连接，在单链fv(single-chainfv)中，通常通过肽连接子，重链可变区和单链可变区通过共价键连接或在c-末端直接连接，由此，如双链fv，可实现如二聚体的结构。这种抗体片段可利用蛋白水解酶获取(例如，若利用木瓜蛋白酶限制性切割整个抗体，则可获取fab，若利用胃蛋白酶切割，则可获取f(ab')2片段)或者可通过基因重组技术制备。在本发明中，优选地，抗体为scfv形态或完整的抗体形态。并且，重链恒定区可选自γ、μ、α、δ或ε中的一种亚型。优选地，恒定区为γ1(igg1)、γ3(igg3)及γ4(igg4)，最优选为γ1(igg1)亚型。轻链恒定区可以为κ型或λ型，优选为κ型。因此，本发明的优选的抗体为具有κ轻链和γ1重链的scfv形态或igg1形态。在本说明书中，术语“重链”是指足以向抗原赋予特异性的具有可变区序列的包含氨基酸序列的可变域，即，vh及3个恒定区结构域，即，ch1、ch2及ch3的全长重链及其片段。并且，在本说明书中，术语“轻链”是指足以向抗原赋予特异性的具有可变区序列的包含氨基酸序列的可变域vl(vk)及恒定区结构域cl(ck)的全长轻链及其片段。在本说明书中，术语“互补决定区(cdr，complementaritydeterminingregion)”是指免疫球蛋白重链及轻链的高变区(hypervariableregion)的氨基酸序列(kabatetal.,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,4thed.,u.s.departmentofhealthandhumanservices,nationalinstitutesofhealth(1987))。重链(重链互补决定区1(cdrh1)、重链互补决定区2(cdrh2)及重链互补决定区3(cdrh3))及轻链(轻链互补决定区1(cdrl1)、轻链互补决定区2(cdrl2)及轻链互补决定区3(cdrl3))分别包括3个互补决定区。互补决定区提供在抗体与抗原或抗原表位(epitope)结合的过程中关键的接触残基。本发明的抗体包括单克隆抗体、多特异性抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合体抗体、单链fvs(scfv)、单链抗体、fab片段、f(ab')片段、双硫键fvs(sdfv)及抗独特型(抗-id)抗体以及上述抗体的抗原表位-结合片段等，但并不限定于此。在本说明书中，术语“骨架区(framework)”或“fr”示出除高变区(hypervariableregion，hvr)残基之外的可变结构域残基。可变结构域的骨架区通常由4个骨架区结构域，即，骨架区1、骨架区2、骨架区3及骨架区4构成。因此，高变区及骨架区序列通常在vh(或vl/vk)示出如下的顺序：(a)重链骨架区1(frh1，frameworkregion1ofheavychain)-重链互补决定区1(cdrh1，complementaritydeterminingregion1ofheavychain)-重链骨架区2(frh2)-重链互补决定区2-重链骨架区3(frh3)-重链互补决定区3-重链骨架区4(frh4)；以及(b)轻链骨架区1(frl1，frameworkregion1oflightchain)-轻链互补决定区1(cdrl1，complementaritydeterminingregion1oflightchain)-轻链骨架区2(frl2)-轻链互补决定区2-轻链骨架区3(frl3)-轻链互补决定区3-轻链骨架区4(frl4)。术语“可变区(variableregion)”或“可变结构域(variabledomain)”是指与将抗体与抗原结合相关的抗体重链或轻链的结构域。天然(native)抗体的重链及轻链的可变结构域(分别为vh及vl)通常具有相似的结构，各个结构域包括4个守恒的骨架区(frameworkregions，fr)及3个高变区。(kindtetal.,kubyimmunology,第六版，w.h.freemanandco.,page91(2007))。单一vh或vl结构域足以赋予抗原-结合特异性。并且，与特定抗原结合的抗体分别可通过与抗原结合并使用vh或vl结构域来从筛选互补的vl或vh结构域的文库的抗体分离。在本说明书中，术语“特异性结合”或与之相同的是指抗体或其抗原结合片段、或如scfv的其他结构物在生理条件下形成较稳定的抗原和复合物。特异性结合能够以至少约1×10-6m以下的平衡解离常数(例如，小于其的kd示出更坚固的结合)特性化。确定2个分子是否特异性结合的方法在本领域周知，例如，包括平行透析、表面等离子体共振等。但是，与人c-肝细胞生长因子受体特异性结合的所分离的抗体可示出对于如其他种(species)的c-肝细胞生长因子受体分子的其他抗原的交叉反应性。在本说明书中，术语“亲和力(affinity)”是指分子(例如，抗体)的单一结合位点与其结合伴侣(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非明确表示，则如在本申请中使用，“结合亲和力(bindingaffinity)”表示反映结合对(例如，抗体及抗原)的成员之间的1∶1相互作用的内因性(intrinsic)结合亲和力。通常，可通过解离常数(kd)表示分子y与其伴侣y的亲和力。可通过包括在本申请中记述的方案在内的本领域公知的常规方法测定亲和力。并且，在本说明书中，术语“人抗体(humanantibody)”具有与人或人细胞生成的抗体、或利用人抗体谱(repertoires)或其他人抗体编码序列的衍生自非人源的的抗体的氨基酸序列相应的氨基酸序列。人抗体的这种定义排除包含与非人抗原结合残基的人源化(humanized)抗体。在本说明书中，术语“嵌合(chimeric)”抗体是指重链和/或轻链的一部分衍生自特定源(source)或种(species)且重链和/或轻链的剩余部分衍生自不同的源或种的抗体。本发明人在以往的专利wo2016/021864a1及wo2017/135791a1中公开的作为基于igg1的抗c-肝细胞生长因子受体抗体的1e4中，为了在维持抗c-肝细胞生长因子受体抗体的特性的同时提高结构稳定性，利用了将以往的抗体的互补决定区移植在比以往的抗体的骨架区更稳定的骨架区的互补决定区移植方法。“互补决定区移植”是为了解决如下的问题而研发的方法，即，当将小鼠单克隆抗体用于人类患者时，诱发免疫反应而中和(neutralization)，是将非-人抗体(non-humanantibody)人源化(humanization)的最代表性方法。互补决定区移植为将动物抗体的互补决定区位点移植到人抗体的骨架(framework)。为了筛选最优的骨架区，本发明人应用了上述互补决定区移植方法。结果，确认人抗体的重链可变区及轻链可变区位点的氨基酸序列与抗c-肝细胞生长因子受体抗体1e4的重链可变区(vh)及轻链可变区(vk)的序列同源性(sequencehomology)，其中，筛选具有高序列同源性的候选序列，由此，制备了本发明的稳定性得到改善的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或抗原结合片段的变异体。根据本发明的一实施方式，本发明提供抗c-肝细胞生长因子受体抗体或抗原结合片段，其包含：(a)免疫球蛋白重链可变域，包含重链骨架区1-重链互补决定区1-重链骨架区2-重链互补决定区2-重链骨架区3-重链互补决定区3-重链骨架区4的结构；以及(b)免疫球蛋白轻链可变域，包含轻链骨架区1-轻链互补决定区1-轻链骨架区2-轻链互补决定区2-轻链骨架区3-轻链互补决定区3-轻链骨架区4的结构，上述重链互补决定区1、重链互补决定区2及重链互补决定区3分别由seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3的氨基酸序列组成，上述轻链互补决定区1、轻链互补决定区2及轻链互补决定区3由seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6的氨基酸序列组成。在本发明的一实例中，在组成本发明的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段的上述(a)的重链可变域中，重链骨架区1由下述i)的氨基酸序列组成。i)x1vqlvqsgaevkkpgx16sx18x19x20scx23x24sgx27x28fx30在上述序列中，各自独立地，x1为q或e；x16为e或s；x18为l或v；x19为r或k；x20为i或v；x23为q或k；x24为g或a；x27为y；x28为s；以及x30为p。在本说明书中使用的“xn”及“xm”为了在所定义的上述序列i)至序列viii)中表示n位及m位的氨基酸而使用，其中，n及m为表示从上述序列的n-末端计算的上述序列中的氨基酸位置的整数。例如，x3及x7分别表示距序列的n-末端的第3位及第7位的氨基酸。在本发明一实施方式的实例的情况下，序列i)内的xn分别选自所定义的可取代的氨基酸残基的组中。只要是普通技术人员就可知，xn可选自作为可取代的残基罗列的氨基酸残基中的一个，这种选择独立于xm的氨基酸的选择来执行，其中n和m不同。因此，xn位中的所罗列的可能的残基中的任何一个可与在其他各种位置中罗列的可能的残基中的其他独立组合。在本发明的具体实例中，上述i)的序列包含选自以下的特定氨基酸残基。-x1为q；x16为e；x18为l；x19为r；x20为i；x23为q；x24为g；x27为y；x28为s；以及x30为p。在本发明的再一具体实例中，上述i)的序列包含选自以下的特定氨基酸残基。-x1为e，x19为k，x23为k，以及x30；-x16为s，x18为v，x19为k，x20为v；或者-x16为s，x18为v，x19为k，x20为v，x23为k，x24为a。在本发明的再一实例中，在组成本发明的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段的上述(a)的重链可变域中，重链骨架区2由下述ii)的氨基酸序列组成。ii)wvrqx40pgx43glewmg在上述序列中，各自独立地，x40为m或a；以及x43为k或q。在本发明的具体实例中，上述ii)的序列包含选自以下的特定氨基酸残基。-x40为m；以及x43为k。在本发明的另一具体实例中，上述ii)的序列包含选自以下的特定氨基酸残基。-x40为a，x43为q。在本发明的另一实例中，在组成本发明的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段的上述(a)的重链可变域中，重链骨架区3由下述iii)的氨基酸序列组成。iii)x67vtix71adx74sx76stayx81x82x83sslx87x88x89dtax93yycar在上述序列中，各自独立地，x67为h、q或r；x71为s或t；x74为s或k；x76为s、i或t；x81为l或m；x82为q或e；x83为w或l；x87为k或r；x88为a或s；x89为s或e；以及x93为m或v。在本发明的具体实例中，上述iii)的序列包含选自以下的特定氨基酸残基。-x67为h；x71为s；x74为s；x76为s；x81为l；x82为q；x83为w；x87为k；x88为a；x89为s；以及x93为m。在本发明的还有一具体实例中，上述iii)的序列包含选自以下的特定氨基酸残基。-x67为q，x74为k，x76为i；-x67为r，x71为t，x76为t；-x67为r，x71为t，x76为t，x81为m，x82为e，x83为l，x87为r，x88为s，x89为e；-x67为r，x71为t，x76为t，x81为m，x82为e，x83为l，x87为r，x88为s，x89为e，x93为v；或者-x67为r，x71为t，x74为k，x76为t，x81为m，x82为e，x83为l，x87为r，x88为s，x89为e，x93为v。在本发明的还有一实例中，在组成本发明的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段的上述(a)的重链可变域中，重链骨架区4由下述iv)的氨基酸序列组成。iv)wgqgtlvtvss在本发明的又一实例中，在组成本发明的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段的上述(b)的轻链可变域中，上述(b)的轻链骨架区1由下述v)的氨基酸序列组成。v)x1ix3x4tqspx9x10lsx13sx15gx17rx19tx21x22c在上述序列中，各自独立地，x1为d或e；x3为q或v；x4为m或l；x9为s或g；x10为f、s或t；x13为a或l；x15为v或p；x17为d或e；x19为v或a；x21为i或l；以及x22为t或s。在本发明的具体实例中，上述v)的序列包含选自以下的特定氨基酸残基。-x1为d；x3为q；x4为m；x9为s；x10为f；x13为a；x15为v；x17为d；x19为v；x21为i；以及x22为t。在本发明的又一具体实例中，上述v)的序列包含选自以下的特定氨基酸残基。-x10为s；-x9为g，x13为l，x15为p，x17为e，x19为a，x21为l，x22为s；-x1为e，x9为g，x10为t，x13为l，x15为p，x17为e，x19为a，x21为l，x22为s；或者-x1为e，x3为v，x4为l，x9为g，x10为t，x13为l，x15为p，x17为e，x19为a，x21为l，x22为s。在本发明的又一实例中，在组成本发明的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段的上述(b)的轻链可变域中，上述(b)的轻链骨架区2由下述vi)的氨基酸序列组成。vi)wyqqkpgx42apx45lliyx42为t、k或q；以及x45为k或r。在本发明的具体实例中，上述vi)的序列包含选自以下的特定氨基酸残基。-x42为t；以及x45为k。在本发明的又一具体实例中，上述vi)的序列包含选自以下的特定氨基酸残基。-x42为k；或者-x42为q，x45为r。在本发明的又一实例中，在组成本发明的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段的上述(b)的轻链可变域中，轻链骨架区3由下述vii)的氨基酸序列组成。vii)gx58px60rfsgsgsgtdftltisx77lx79pedx83atyycx58为v或i；x60为s或d；x77为s或r；x79为q或e；以及x83为s或f。在本发明的特定实例中，上述vii)的序列包含选自以下的特定氨基酸残基。-x58为v；x60为s；x77为s；x79为q；以及x83为s。在本发明的再一特定实例中，上述vii)的序列包含选自以下的特定氨基酸残基。-x83为f；-x60为d，x77为r，x79为e，x83为f；或者-x58为i，x60为d，x77为r，x79为e，x83为f。在本发明的又一实例中，在组成本发明的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段的上述(b)的轻链可变域中，轻链骨架区4由下述viii)的氨基酸序列组成。viii)fgggtkveik在本发明的特定实例中，本发明的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或抗原结合片段包含下述氨基酸序列。-选自seqidno:11至seqidno:16及seqidno:34至seqidno:39中的一个氨基酸序列；以及-选自seqidno:17至seqidno:21及seqidno:41至seqidno:45中的一个氨基酸序列。根据本发明的再一实施方式，本发明提供包含以下的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段。(a)免疫球蛋白重链可变域，包含seqidno:1的重链互补决定区1seqidno:2的重链互补决定区2以及seqidno:3的重链互补决定区3；(b)免疫球蛋白重链恒定区结构域，包含seqidno:7的重链恒定结构域1；(c)免疫球蛋白轻链可变域，包含seqidno:4的轻链互补决定区1、seqidno:5的轻链互补决定区2、seqidno:6的轻链互补决定区3；以及(d)免疫球蛋白轻链恒定区结构域，包含seqidno:8的ck(kappa恒定结构域，kappa-constantdomain)，其中，上述seqidno:7的ch1的第97位氨基酸残基及seqidno:8的ck的第2位氨基酸残基中的至少一个分别被精氨酸(arginine)、苏氨酸(threonine)取代变异。在本发明的一实例中，抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段所包含的上述seqidno:7的ch1的第97位氨基酸残基被精氨酸取代变异，上述seqidno:8的ck的第2位氨基酸残基被苏氨酸取代变异。上述seqidno:7的ch1的第97位氨基酸残基被精氨酸取代变异的与seqidno:9的ch1相同，上述seqidno:8的ck的第2位氨基酸残基被苏氨酸取代变异的与seqidno:10的ck相同。上述氨基酸残基的取代变异是为了通过与人生殖细胞类的序列相同的序列制备以往的抗c-肝细胞生长因子受体抗体1e4的恒定区(constantregion)。作为以往的抗c-肝细胞生长因子受体抗体1e4所包含的恒定区序列的seqidno:7的ch1及seqidno:8的ck包含未在通常的人群(humanpopulation)中发现的序列。在本发明的再一实例中，本发明的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段所包含的上述(a)的免疫球蛋白重链可变域包含seqidno:11至seqidno:16中的一个氨基酸序列。上述seqidno:11的氨基酸序列为以往的抗c-肝细胞生长因子受体抗体1e4的重链可变区(vh或vh0)，seqidno:12的氨基酸序列为从为了进行本发明的抗c-肝细胞生长因子受体抗体的互补决定区移植而筛选的作为人重链可变区的候选序列的ighv5-51*01衍生的候选序列(vh2)，seqidno:13至seqidno:16的氨基酸序列为从作为人重链可变区的候选序列的ighv1-69*02衍生的候选序列(vh3、vh4、vh5、vh6)。在本发明的具体实例中，本发明的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段所包含的上述(a)的免疫球蛋白重链可变域包含seqidno:11及seqidno:14至seqidno:16中的一个氨基酸序列，更具体地，包含seqidno:14至seqidno:16中的一个氨基酸序列。在本发明的另一实例中，本发明的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段所包含的上述(c)的免疫球蛋白轻链可变域包含seqidno:17至seqidno:21中的一个氨基酸序列。上述seqidno:17的氨基酸序列为以往的抗c-肝细胞生长因子受体抗体1e4的轻链可变区(vk或vk0)，seqidno:18的氨基酸序列为从为了进行本发明的抗c-肝细胞生长因子受体抗体的互补决定区移植而筛选的作为人轻链可变区的候选序列的igkv1-39*01衍生的候选序列(vk2)，seqidno:19至seqidno:21的氨基酸序列为从作为人轻链可变区的候选序列的igkv3-20*01衍生的候选序列(vk3、vk4、vk5)。在本发明的具体实例中，本发明的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段所包含的上述(c)的免疫球蛋白轻链可变域包含seqidno:17或seqidno:18的氨基酸序列。在本发明的还有一实例中，本发明的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段所包含的上述(a)的免疫球蛋白重链可变域包含seqidno:14至seqidno:16中的一个氨基酸序列，上述(c)的免疫球蛋白轻链可变域包含seqidno:17或seqidno:18的氨基酸序列。在本发明的又一实例中，本发明的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段所包含的上述(a)的免疫球蛋白重链可变域包含seqidno:14的氨基酸序列，上述(c)的免疫球蛋白轻链可变域包含seqidno:18的氨基酸序列。根据本发明的一实例，优选地，本发明的抗c-肝细胞生长因子受体抗体为完整的抗体形态。完整的抗体形态包含选自γ、μ、α、δ或ε中的一个亚型的重链恒定区和选自κ或λ中的一个亚型的轻链恒定区，优选地，为包含γ1重链恒定区和κ轻链恒定区的igg1形态，但并不限定于此。根据本发明的再一实例，本发明的抗c-肝细胞生长因子受体抗体的抗原结合片段为fab、fab'、f(ab')2、fv、scfv或化学连接的f(ab')2，优选为scfv形态，但并不限定于此。根据本发明的另一实施方式，本发明提供对如上所述的本发明的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段进行编码的核酸分子。在本说明书中，术语“核酸分子”具有包括脱氧核糖核酸(dna)(基因组脱氧核糖核酸(gdna)及互补脱氧核糖核酸(csna))以及核糖核酸(rna)分子的含义，作为核酸分子中的基本结构单位的核苷酸不仅包天然核苷酸，还包含修饰糖或碱基位点的类似物(analogue)(scheit,nucleotideanalogs,johnwiley,newyork(1980)；uhlman及peyman,chemicalreviews,90:543-584(1990))。需解释的是，若考虑如上所述的生物学等效活性的变异，则对构成上述抗体或其抗原结合片段的氨基酸序列进行编码的本发明的核酸分子还包含与其实质同一性(substantialidentity)的序列。如上所述的实质同一性的含义如下，即，进行校准，使如上所述的本发明地序列和任意其他序列最大限度地相应，并在利用本领域通常利用的算法分析所校准的序列的情况下，指示出至少60％以上的同源性的序列，更具体地，指示出70％以上的同源性的序列，更加具体地，指示出80％以上的同源性的序列，进而具体地，指示出90％以上的同源性的序列，最具体地，指示出95％以上的同源性的序列。用于序列比较的校准(alignment)方法在本领域公知。与校准有关的各种方法及算法公开在smithandwaterman,adv.appl.math.2:482(1981)；needlemanandwunsch,j.mol.bio.48:443(1970)；pearsonandlipman,methodsinmol.biol.24:307-31(1988)；higginsandsharp,gene73:237-44(1988)；higginsandsharp,cabios5:151-3(1989)；corpetetal.,nuc.acidsres.16:10881-90(1988)；huangetal.,comp.appl.biosci.8:155-65(1992)andpearsonetal.,meth.mol.biol.24:307-31(1994)，但并不限定于此。在本发明的具体实例中，本发明的核酸分子包含seqidno:22至seqidno:32或seqidno:46至seqidno:58的碱基序列、其片段或它们的组合。根据本发明的还有一实施方式，本发明提供包含如上所述的本发明的核酸分子的重组载体。在本说明书中，术语“载体”为用于在宿主细胞表达目的基因的单元，包括质粒载体；粘粒载体；以及如噬菌体载体、腺病毒载体、逆转录病毒载体及腺伴随病毒载体的病毒载体等。根据本发明的优选实例，在本发明的载体中，对轻链可变区进行编码的核酸分子及对重链可变区进行编码的核酸分子与启动子可操作地结合(operativelylinked)。在本说明书中，术语“可操作地结合”是指核酸表达调节序列(例：启动子、信号序列或转录调节因子结合位置的阵列)与其他核酸序列之间的功能性结合，由此，上述调节序列调节上述其他核酸序列的转录和/或翻译。本发明的重组载体系统可通过在本领域公知的各种方法构建，与之有关的具体方法公开在sambrooketal.,molecularcloning,alaboratorymanual,coldspringharborlaboratorypress(2001)，该文献通过引用结合在本说明书中。本发明的载体可构建为典型地用于克隆的载体或用于表达的载体。并且，本发明的载体可将原核细胞或真核细胞作为宿主来构建。例如，在本发明的载体为表达载体且将真核细胞作为宿主的情况下，可利用源自哺乳动物细胞的基因组的启动子(例：金属硫蛋白启动子、β-肌动蛋白启动子、人血红蛋白启动子及人肌肌酸启动子)或源自哺乳动物病毒的启动子(例：腺病毒晚期启动子、牛痘病毒7.5k启动子、sv40启动子、巨细胞病毒启动子、单纯性疱疹病毒(hsv)的tk启动子、小鼠乳腺瘤病毒(mmtv)启动子、人类免疫缺陷病毒(hiv)的长末端重复(ltr)启动子、莫洛尼病毒的启动子、eb病毒(ebv)的启动子及劳斯肉瘤病毒(rsv)的启动子)，通常，具有多腺苷酸化序列作为转录终止序列。本发明的载体还可与其他序列融合，来容易纯化通过本发明的载体表达的抗体。所融合的序列为如谷胱甘肽s-转移酶(pharmacia，usa)、麦芽糖结合蛋白(neb，usa)、flag(ibi，usa)及六聚组氨酸(6xhis)(hexahistidine；quiagen，usa)等。并且，通过本发明的载体表达的蛋白质为抗体，因此，即使没有用于纯化的追加序列，所表达的抗体也可利用蛋白a柱等容易纯化。另一方面，本发明的表达载体包含在本领域通常利用的抗生素抗性基因作为选择标记，例如，对于氨苄青霉素、庆大霉素、羧苄青霉素、氯霉素、链霉素、卡那霉素、遗传霉素、新霉素及四环素的抗性基因。根据本发明的又一实施方式，本发明提供由上述重组载体转化的宿主细胞。可稳定且连续克隆及表达本发明的载体的宿主细胞还可利用本领域公知的任意宿主细胞，例如，上述载体的适合的真核细胞宿主细胞包括猴肾细胞7(cos7：monkeykidneycells)、nso细胞、sp2/0、中国仓鼠卵巢(cho：chinesehamsterovary)细胞、w138、幼仓鼠肾(bhk：babyhamsterkidney)细胞、mdck、骨髓瘤细胞株、hut78细胞及hek-293细胞，但并不限定于此。在本说明书中，术语“转化”、“转导”或“转染”指外源性核酸向宿主细胞内转移或导入的过程。“转化”、“转导”或“转染”细胞为利用外源性核酸转化、转导或转染的细胞，上述细胞包括该细胞及其的通过传代培养产生的后代细胞。根据本发明的又一实施方式，本发明提供药剂学组合物，用于治疗缺血性疾病、脑卒中、肾脏损害或疾病、视网膜新生血管形成障碍、神经障碍或疾病或者伤口，上述药剂学组合物包含：(a)如上所述的本发明地抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段的药剂学有效量；以及(b)药剂学上接受的载体。根据本发明的一实例，上述肾脏损害或疾病为纤维化状态(fibroticcondition)。根据本发明的一实例，上述肾损伤或肾疾病可选自由肾纤维化(renalfibrosis)、慢性肾纤维化(chronickidneyfibrosis)、糖尿病相关的慢性肾病(chronicnephropathyassociatedwithdiabetes)、狼疮(lupus)、肾脏硬皮病(sclerodermaofthekidney)、肾小球肾炎(glomerularnephritis)、局灶节段性肾小球硬化(focalsegmentalglomerularsclerosis)、人慢性肾病相关的iga肾脏疾病纤维化(iganephropathyrenalfibrosisassociatedwithhumanchronickidneydisease，ckd)、慢性进行性肾病(chronicprogressivenephropathy，cpn)、肾小管间质纤维化(tubulointerstitialfibrosis)、输尿管梗阻(ureteralobstruction)、慢性尿毒症(chronicuremia)、慢性间质性肾炎(chronicinterstitialnephritis)、放射性肾病(radiationnephropathy)、肾小球硬化(glomerulosclerosis)、进行性肾小球肾病(progressiveglomerulonephrosis，pgn)、内皮/血栓性微血管病损伤(endothelial/thromboticmicroangiopathyinjury)、人类免疫缺陷病毒-相关肾病(hiv-associatednephropath)以及与毒素、刺激剂(irritant)及化学治疗剂有关的接触引起的纤维化组成的组中。根据本发明的一实例，上述视网膜新生血管形成障碍可以为选自由黄斑变性(maculardegeneration)、组织胞浆菌病(histoplasmosis)、病理性近视(pathologicalmyopia)、眼底血管样条纹(angioidstreaks)、前部缺血性视神经病变(anteriorischemicopticneuropathy)、细菌性心内膜炎(bacterialendocarditis)、贝斯特氏病(best'sdisease)、鸟枪弹丸样视网膜脉络膜病变(birdshotretinochoroidopathy)、脉络膜血管瘤(choroidalhemangioma)、脉络膜痣(choroidalnevi)、脉络膜无灌注(choroidalnonperfusion)、脉络膜骨瘤(choroidalosteomas)、脉络膜破裂(choroidalrupture)、无脉络膜症(choroideremia)、慢性视网膜脱离(chronicretinaldetachment)、视网膜缺损(colobomaoftheretina)、玻璃疣(drusen)、内源性念珠菌眼内炎(endogenouscandidaendophthalmitis)、视网膜色素上皮的乳头外错构瘤(extrapapillaryhamartomasoftheretinalpigmentedepithelium)、黄斑眼底(fundusflavimaculatus)、特发性黄斑孔(idiopathicmacularhole)、恶性黑色素瘤(malignantmelanoma)、膜性增殖性肾小球肾炎(membranoproliferativeglomerulonephritis，typeii)、眼内金属异物(metallicintraocularforeignbody)、牵牛花间盘综合征(morningglorydiscsyndrome)、多发性一过性白点综合征(multipleevanescentwhite-dotsyndrome，mewds)、锯齿状口的新血管形成(neovascularizationatoraserrata)、手术显微镜烧伤(operatingmicroscopeburn)、视神经头窝(opticnerveheadpits)、光凝(photocoagulation)、内在脉络膜病(punctuateinnerchoroidopathy)、风疹(rubella)、肉状瘤病(sarcoidosis)、蛇形或地域性脉络膜炎(serpiginousorgeographicchoroiditis)、视网膜下液引流(subretinalfluiddrainage)、倾斜的椎间盘综合征(tilteddiscsyndrome)、弓形体视网膜脉络膜炎(taxoplasmaretinochoroiditis)、肺结核(tuberculosis)、vogt-小柳原田综合征(vogt-koyanagi-haradasyndrome)、糖尿病视网膜病变(diabeticretinopathy)、非糖尿病视网膜病变(non-diabeticretinopathy)、分支静脉阻塞(branchveinocclusion)、视网膜中央静脉阻塞(centralretinalveinocclusion)、早产儿视网膜病变(retinopathyinprematureinfants)、虹膜新生血管(rubeosisiridis)、新生血管性青光眼(neovascularglaucoma)、睑周围毛细血管扩张(perifovealtelangiectasis)、镰状红细胞性视网膜病变(sicklecellretinopathy)、伊莱氏病(eale'sdisease)、视网膜血管炎(retinalvasculitis)、冯·希佩尔·利诺病(vonhippellinaudisease)、放射性视网膜病(radiationretinopathy)、视网膜冷冻伤(retinalcryoinjury)、视网膜色素变性(retinitispigmentosa)、视网膜脉络膜缺损(retinochoroidalcoloboma)、单纯疱疹性角膜炎引起的角膜新生血管(cornealneovascularizationduetoherpessimplexkeratitis)、角膜溃疡(cornealulcers)、角膜移植(keratoplasty)、翼状胬肉(pterigyia)及创伤(trauma)组成的组中的原因引起的。根据本发明的一实例，上述视网膜新生血管形成障碍为脉络膜新生血管(choroidalneovascularization)。根据本发明的一实例，上述神经障碍或神经疾病可选自由外伤性脑损伤(traumaticbraininjury)、脑卒中(stroke)、脑动脉瘤(cerebralaneurism)、脊髓损伤(spinalcordinjury)、帕金森病(parkinson'sdisease)、肌萎缩性侧索硬化症(amyotrophiclateralsclerosis)、阿尔茨海默病(alzheimer'sdisease)、慢性大脑皮质萎缩(diffusecerebralcorticalatrophy)、路易体痴呆(lewy-bodydementia)、皮克病(pickdisease)、中脑肢体皮层痴呆(mesolimbocorticaldementia)、丘退化症(thalamicdegeneration)、亨廷顿舞蹈症(huntingtonchorea)、皮质-纹状体-脊髓变性(cortical-striatal-spinaldegeneration)、皮质基底神经节变性(cortical-basalganglionicdegeneration)、脑小脑变性(cerebrocerebellardegeneration)、家族性痴呆伴痉挛性轻瘫(familialdementiawithspasticparaparesis)、聚葡聚糖身体疾病(polyglucosanbodydisease)、自主神经功能衰竭(shy-dragersyndrome)、橄榄核桥脑小脑萎缩症(olivopontocerebellaratrophy)、进行性核上性麻痹(progressivesupranuclearpalsy)、畸形性肌张力障碍(dystoniamusculorumdeformans)、蛋白球色素退变综合征(hallervorden-spatzdisease)、麦杰综合征(meigesyndrome)、族性震颤(familialtremors)、多发性抽动(gillesdelatourettesyndrome)、神经棘红细胞舞蹈病(acanthocyticchorea)、弗里德赖希共济失调(friedreichataxia)、霍姆斯家族性皮质性小脑萎缩(holmesfamilialcorticalcerebellaratrophy)、gerstmann-straussler-scheinker综合征(gerstmann-straussler-scheinkerdisease)、进行性脊髓性肌萎缩(progressivespinalmuscularatrophy)、进行性巴尔巴麻痹(progressivebalbarpalsy)、原发性侧索硬化(primarylateralsclerosis)、遗传性肌肉萎缩(hereditarymuscularatrophy)、痉挛性截瘫(spasticparaplegia)、腓骨肌萎缩症(peronealmuscularatrophy)、肥厚性间质性多发性神经病(hypertrophicinterstitialpolyneuropathy)、多神经炎型遗传性共济失调(heredopathiaatacticapolyneuritiformis)、视神经病(opticneuropathy)、眼肌麻痹(ophthalmoplegia)及视网膜或视神经损伤(retinaoropticnervedamage)组成的组中。根据本发明的一实例，上述伤口为机械性、化学性、细菌性或热量引起的伤口。根据本发明的一实例，上述伤口可选自由切口(incision)、裂伤(laceration)、擦伤(abrasion)、穿刺伤(puncturewound)、贯通伤(penetrationwound)及枪伤(gunshotwound)组成的组中。根据本发明的一实例，上述伤口为皮肤伤口。本发明的药剂学组合物所包含的药剂学上接受的载体通常用于制备制剂，可包含乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸镁及矿物油等，但并不限定于此。除上述成分之外，本发明的药剂学组合物还可包含润滑剂、湿润剂、甜味剂、调味剂、乳化剂、悬浮剂、保存剂等。适合的药剂学上接受的载体及制剂详细记载在《雷明登氏药学全书(remington'spharmaceuticalsciences)(19thed.,1995)》。本发明的药剂学组合物可口服给药或非口服给药，例如，可通过静脉内注射、皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、局部给药、鼻内给药、肺内给药及直肠内给药等。根据本发明的一实例，上述给药为静脉(intravenous)给药、玻璃体内(intravitreal)给药、鞘内(intrathecal)给药、非口服(parenteral)给药、皮下(subcutaneous)给药、头皮(transdermal)给药或通过注射(infusion)的给药。本发明的药剂学组合物的适合剂量根据如制剂化方法、给药方式、患者的年龄、体重、性别、病理情况、饮食、给药时间、给药途径、排泄速度及反应灵敏性的因素不同，通常，熟练的医生容易确定及处方对于所期望的治疗或预防有效的剂量。根据本发明的优选实例，本发明的药剂学组合物的1天剂量为0.0001mg/kg～100mg/kg。在本说明书中，术语“药剂学有效量”是指足以治疗如上所述的缺血性疾病、脑卒中、肾脏损害或疾病、视网膜新生血管形成障碍、神经障碍或疾病或者伤口的量。本发明的药剂学组合物可通过如下的方式制备，即，根据本发明所属
技术领域：
的普通技术人员容易实施的方法利用药剂学上接受的载体和/或赋形剂制剂化，由此，以单位容量形态制备或向多容量容器内添加来制备。在此情况下，剂型可以为油或水性介质中的溶液、悬浮液或乳化液形态或者提取剂、散剂、栓剂、粉末剂、颗粒剂、片剂或胶囊剂形态，还可包括分散剂或稳定化剂。本发明的药剂学组合物利用如上所述的本发明的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段作为有效成分，因此，为了避免反复记载而使说明书过于复杂，将省略两者之间的共同内容的记载。根据本发明的又一实施方式，本发明提供缺血性疾病、脑卒中、肾脏损害或疾病、视网膜新生血管形成障碍、神经障碍或疾病或者伤口的治疗方法，包括向对象体(subject)给药药剂学组合物的步骤，上述药剂学组合物包含抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段作为有效成分。在本发明中使用的术语“给药”或“对……给药”是指向需要上述组合物的对象体(个体)直接给药本发明的组合物的治疗有效量，由此，在对象体的体内形成相同量。组合物的“治疗有效量”是指足以向所要给药组合物的对象体提供治疗或预防效果的组合物的含量，由此，为包括“预防有效量”的含义。在本说明书中使用的术语“对象体”无限制地包括人、小鼠、大鼠、豚鼠、狗、猫、马、牛、猪、猴、黑猩猩、狒狒或猕猴。具体地，本发明的对象体为人。在本发明的上述治疗方法的情况下，为包括给药作为本发明的一实施方式的药剂学组合物的步骤的方法，因此，为了避免本说明书记载过于复杂，将省略重复的内容。发明的效果本发明的特征及优点的概述如下。(a)本发明提供如下的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段、编码其的核酸分子、重组载体、宿主细胞等：取代母源抗体的特定部位的氨基酸残基，通过执行互补决定区移植来改善稳定性。(b)相比于作为母源抗体的1e4，本发明的上述稳定性得到改善的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段具有优秀的生产率和生物活性且改善稳定性、减少免疫原性。(c)因此，在研发抗c-肝细胞生长因子受体抗体的过程中，本发明的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段示出生产成本节减、抑制功效的减少及副作用的减少等的优秀的特性。附图说明图1a及图1b为示出为了筛选用于抗c-肝细胞生长因子受体抗体的互补决定区移植的候选序列，对于个体生殖系序列(individualgermlinesequence)的发生频率进行与可变域(variabledomain)的稳定性有关的代理变量(surrogate)分析的图。图2a至图2l为示出为了筛选用于抗c-肝细胞生长因子受体抗体的互补决定区移植的候选序列，对重链可变区(图2a至图2f)及轻链可变区(2g至图2l)候选序列的硅中(insilico)免疫原性进行评价的图。图3a至图3e比较示出以往的抗c-肝细胞生长因子受体抗体和用于互补决定区移植的重链可变区候选序列(图3a至图3c)和轻链可变区候选序列(图3d至图3e)的氨基酸序列的图。抗体的氨基酸序列的编号以kabat系统为基准，通过阴影示出具有差异的氨基酸残基。图4为示出在本发明中筛选的21种候选抗体的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)分析结果的图。图5a至图5d为用于确认与在本发明中筛选的21种候选抗体的抗原(c-肝细胞生长因子受体)的结合力的单循环动力学传感器图。图6为示出用于比较在本发明中筛选的21种候选抗体的生物活性的与人脐静脉内皮细胞(huvec)有关的迁移(migration)效果的图表。图7a至图7c为在硅中(insilico)水平下对人类生殖系序列(humangermlinesequence)与1e4的重链恒定区序列(图7a及图7b)及轻链恒定区序列(图7c)进行比较的结果的图。具体实施方式以下，通过实施例更详细地说明本发明。这些实施例仅用于具体说明本发明，根据本发明的主旨，本发明的范围并不局限于这些实施例，这对本领域的普通技术人员而言是显而易见的。实施例在本说明书全文中，在未另行提及的情况下，为了表示特定物质的浓度而使用的“％”在固体/固体中为(重量/重量)％、固体/液体中为(重量/体积)％且液体/液体中为(体积/体积)％。实施例1.1e4抗体的恒定区取代及生物活性确认为了在以往的专利wo2016/021864a1及wo2017/135791a1中公开的作为基于igg1的抗c-肝细胞生长因子受体抗体的1e4中，在维持抗c-肝细胞生长因子受体抗体的的特性的同时提高结构稳定性，本发明人利用了将以往的抗体的互补决定区移植在比以往的抗体的骨架区更稳定的骨架区的互补决定区移植方法。在执行互补决定区移植方法之前，委托英国abzena公司在硅中(insilico)水平对1e4的重链恒定区序列及轻链恒定区序列与人类生殖系序列进行比较。分析结果，可确认，在重链恒定区中，除ch1结构域的赖氨酸残基(k)之外，与g1m(3)异型(allotype)一致(图7a、图7b)。本赖氨酸(k)残基为存在于g1m(17，1)异型的残基，上述g1m(17，1)异型通常在人类群体(humanpopulation)中很少表达，包含潜在免疫原性的可能性(lefrancandlefranc,2012)。因此，考虑到体内稳定性，将相应残基取代为精氨酸(r)残基，从而与g1m(3)异型完全一致。在轻链恒定区的情况下，为了使潜在的免疫原性最小化，将本数据的1号丝氨酸(s)残基取代为苏氨酸(t)残基，从而与作为人类生殖系序列的km3异型一致(图7c)。将包含上述残基的被取代的恒定区的修饰的1e4抗体命名为vh0/vk0。并且，为了在体外(invitro)水平确认vh0/vk0的生物活性，执行了人脐静脉内皮细胞迁移分析(huvecmigrationassay)。实验结果，与作为阳性对照组的肝细胞生长因子(hepatocytegrowthfactor，hgf)相同地，1e4和vh0/vk0均在90ng/ml的浓度中示出促进人脐静脉内皮细胞的移动的效果。定量性地，1e4和vh0/vk0分别以相对于阴性对照组的158％和161％的非常相似的水平促进细胞的移动。从上述结果可确认，即使相应恒定区发生变化，也维持以往的生物活性。并且，变更恒定区来与人类生殖系序列一致，由此，对于通过免疫原性及减少中和现象的体内稳定性(免疫原性等)和安全性(半衰期等)具有效果。(reference:lefranc,m.-p.,andlefranc,g.(2012).humangm,kmandamallotypesandtheirmolecularcharacterization:aremarkabledemonstrationofpolymorphism.inimmunogenetics(f.christiansenandb.tait,eds.),chap.34.humanapress,springer,newyork.methodsmolbiol.882,635-680.)实施例2.寻找用于互补决定区移植的最优骨架(framework)与以往的专利wo2016/021864a1及wo2017/135791a1中公开的作为基于igg1的抗c-肝细胞生长因子受体抗体的1e4相关地，本发明人所要在维持抗c-肝细胞生长因子受体抗体的特性的同时提高结构稳定性。为此，本发明人利用了将以往的抗体的互补决定区移植在比以往的抗体的骨架区更稳定的骨架区的互补决定区移植方法。首先，为了筛选最优的骨架区，对重链可变区(heavychainvariabledomain，以下，称为“vh”)及轻链可变区(lightchainvariabledomain，以下，称为“vk”)部位的氨基酸序列与人类生殖系变量(humangermlinevariable)(v)及连接(junction)(j)片段序列的数据库进行比较，从而确认了对于人抗体的重链可变区及轻链可变区的序列的抗c-肝细胞生长因子受体抗体1e4与重链可变区(vh)及轻链可变区(vk)的序列同源性(sequencehomology)。结果确认，当将作为重链可变区(vh)的骨架区的ighv5-51*01和ighv1-69*02、作为轻链可变区(vk)的骨架区的igkv1-39*01、igkv3-20*01与1e4抗体所基于的人类生殖系序列ighv5-10-1*01和igkv1-9*01分别比较时，具有60％以上的序列同源性(表1)。表1对于人抗体的重链可变区及轻链可变区序列的抗c-肝细胞生长因子受体抗体(1e4)的vh及vk的序列同源性比较*ighv5-51*01ighv：重链变量(heavychainvariable)1)ighv5：基因组2)51：基因定位(genelocalization)(基因座(genelocus))3)*01：参考序列(referencesequence)*ighv1-69*02ighv：重链变量1)ighv1：基因组2)69：基因定位(基因座)3)*02：序列变体(sequencevariant)*igkv1-39*01igkv：kappa轻链变量(kappalightchainvariable)1)ighv1：基因组2)39：基因定位3)*01：参考序列*igkv3-20*01igkv：kappa轻链变量1)ighv3：基因组2)20:基因定位3)*01：参考序列接着进行了如下的作业，即，以上述序列同源性为基准，根据以往周知的人类生殖系序列的稳定性，将第一次采用的骨架进一步细分为候选组。在此过程中，参照对于可变域(variabledomain)的稳定性的代理变量(surrogate)分析个体生殖系序列的发生频率。结果确认，重链可变区ighv5-51*01和ighv1-69*02、轻链可变区igkv1-39*01和igkv3-20*01具有1e4抗体的发生频率(图1)。以上述表1及图1的结果为基础，最终示出60％以上的序列同源性，将稳定性高于1e4抗体的可变区的重链可变区ighv5-51*01和ighv1-69*02、轻链可变区igkv1-39*01和igkv3-20*01选定为用于抗c-肝细胞生长因子受体抗体的互补决定区移植的骨架的最终候选人类生殖系序列并进行之后的研究。实施例3.通过硅中(insilico)免疫原性评价的最终候选重链可变区及轻链可变区序列确立将1e4抗体的互补决定区移植到在实施例2中筛选的骨架，对确认为保持抗原-抗体结合力重要的氨基酸残基进行回复突变(back-mutation)后，使用英国abzena公司的itopetm和tcedtm(perryetal.2008；brysonetal.2010)分析技术评价硅中(insilico)免疫原性。具体地，在实施例2中筛选的骨架候选序列的肽(peptide)中，以9个肽为1个氨基酸单位来增加并实施扫描分析。根据该分析技术，使用kabat编号系统对抗体可变区序列的氨基酸残基进行编号，在“itopetm”列中表示包含具有潜在免疫原性的肽的区域。红色表示混杂高亲和力mhcii类结合肽(promiscuoushighaffinitymhcclassiibindingpeptides)，黄色表示混杂的中等mhcii类结合肽(promiscuousmoderatemhcclassiibindingpeptides)。在“tcedtm(t细胞表位数据库(tcellepitopedatabase))”列中，与t细胞抗原表位数据库进行比较，通过绿色表示分析为阴性肽(negativepeptide)的氨基酸区域，通过红色强调以vh0/vk0的可变区序列为基准存在于候选可变区序列的其他氨基酸残基(图2)。分析结果，除了发现本发明人研发的抗c-肝细胞生长因子受体抗体1e4的共享圆形可变区的恒定区修饰抗体(vh0/vk0)，还在其他修饰序列中发现了各种混杂的高/中度亲和力(promiscuoushigh/moderateaffinity)的预测为mhcii类配体的肽序列。但是，该肽序列(抗原表位，epitope)为以本来包含在人类生殖系序列而周知的序列，因此，本发明人预测，由于t细胞耐受(tcelltolerance)，不能很好地诱发免疫反应。与之相似地，本发明人判断，根据tcedtm分析鉴定为t细胞阴性肽(tcellnegativepeptides)的混杂的中/高表位(promiscuousmoderate/highepitopes)的免疫原性的风险也低。在候选序列中发现一部分预测为未包含在人类种系序列(humangermlinesequence)的非胚芽混杂的高亲和力和中等亲和力的mhcii类结合配体(non-germlinepromiscuoushighandmoderateaffinitymhcclassiibindingligands)的肽序列，但是，通过人源化设计步骤(humanizationdesignprocess)去除大部分，具有诱发免疫原性的可能性，但是，在与互补决定区相关的(例：vk互补决定区2(cdr2))氨基酸残基的情况下，为了保持抗体的结合力，在没有追加变更的情况下进行。由此，在硅中(insilico)水平确保在维持互补决定区序列的同时使免疫原性(immunogenicity)的潜在风险最小化的最终候选重链可变区及轻链可变区序列。在重链可变区的情况下，设计了以ighv5-51*01为基础的1种候选序列(代码名：vh2)和从ighv1-69*02中衍生的4种候选序列(代码名：vh3、vh4、vh5、vh6)，在轻链可变区的情况下，设计了以igkv1-39*01为基础的1种候选序列(代码名：vk2)和以igkv3-20*01为基础的3种候选序列(代码名：vk3、vk4、vk5)。在表2及图3示出这些序列。各个氨基酸残基通过kabat系统进行编号，通过蓝色强调表示互补决定区，在各个候选可变区序列内通过红色强调表示与以往的抗体序列相比不同的氨基酸残基(图3)。表2用于互补决定区移植的重链可变区及轻链可变区的候选序列实施例4.候选抗c-肝细胞生长因子受体抗体变异体(variants)的igg表达及纯化设计了包括在实施例3中选择的重链可变区及轻链可变区氨基酸序列及1e4抗体的重链及可变区氨基酸序列(vh0及vk0)在内共30个组合的候选抗c-肝细胞生长因子受体抗体变异体(antic-metantibodyvariants)。为了以全抗体(fullantibody)形态的igg结构表达抗c-肝细胞生长因子受体抗体变异体，通过abzena公司的panttm载体系统制备将在实施例1中筛选的重链及轻链恒定区(constantdomain)分别与候选可变区结合的重链及轻链表达重组载体。通过使用聚乙烯亚胺转染方法(polyethyleniminetransfectionmethod)向hek293ebna附着性细胞(lgcstandards，teddington，uk)转染抗体表达重组载体，培养9天后，收集细胞上清液(培养基)。通过igg1定量酶联免疫吸附试验(igg1quantitationelisa)方法分析所收集的上述细胞上清液来对细胞上清液中的抗体浓度进行定量。在表3示出c-肝细胞生长因子受体抗体变异体的组合及表达量结果。如表3所示，从候选抗体排除完全未发生表达的4种候选抗体(vh0/vk3、vh0/vk4、vh0/vk5及vh3/vk0)和表达量为1.5μg/ml以下的非常低的5种候选抗体(vh2/vk3、vh2/vk4、vh3/vk3、vh3/vk4及vh3/vk5)(表3)。表3候选抗c-肝细胞生长因子受体抗体变异体的组合及表达量(μg/ml)-vh0vh2vh3vh4vh5vh6vk037.131.9未表达(notexpressed)22.421.630.2vk232.421.117.249.746.440.5vk3未表达0.90.35.35.87.4vk4未表达1.30.56.73.47.9vk5未表达3.11.416.510.314.7并且，为了追加分析，根据制造商记述的协议使用蛋白a琼脂糖柱(proteinasepharosecolumns)(gehealthcare,littlechalfont,uk)并从细胞上清液分离抗体，利用1xpbsph7.2缓冲液透析来最终纯化共21种候选抗体。还原纯化的抗体的一部分(1μg)并在4％～12％的双-三十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(bis-trissds-page)凝胶(thermofisher,loughborough,uk)中进行电泳后，利用instantblue(expedeon,swavesey,uk))染色来分析分子量，在图4示出实验结果。如图4所示，在上文中筛选的21种候选抗体在源自人的细胞中的表达量良好。实施例5.对于候选抗体的抗原(c-肝细胞生长因子受体)的结合力测定通过使用biacore测定对于在实施例4中筛选的候选抗体地抗原(c-肝细胞生长因子受体)的结合力进行测定。通过使用biacoret200(serialno.1909913)设备及biacoret200controlsoftwarev2.0.1和biacoret200evaluationsoftwarev3.0(gehealthcare,uppsala,sweden)分析程序并利用离解常数(dissociationconstant,kd值(value))测定对于抗原c-肝细胞生长因子受体的候选抗体21种的结合力。在蛋白acm5(proteinacm5)芯片(gehealthcare,littlechalfont,uk)上固定所要分析的抗c-肝细胞生长因子受体抗体后，使多种浓度的人c-肝细胞生长因子受体抗原(sinobiological，beijing，china)在0.25nm～2nm的范围内流动来确保传感器图。以所确保的传感器图为基础测定速率常数kon及koff，从速率常数的比koff/kon计算kd值。在图5及表4示出结果。图5示出本发明的21种候选抗体的单循环动力学传感器图，在下述表4中，以结合力高至低的顺序罗列21种分析抗体的结合力。可从表4及图5的结果确认，本发明的20种候选抗体的结合力在相比于于以往的抗体1e4共享相同的可变区的修饰抗体(vh0/vk0)的2倍数以内的范围变动。并且，经确认，21种候选抗体均示出皮摩尔(picomolar)(pm，kd值：10-10～10-12)水平的高结合力。表4候选抗体的结合力实施例6.候选抗体的热稳定性(thermalstability)分析接着，为了评价候选抗体的热稳定性，使用orange(thermofisher,loughborough,uk)。使用steponeplusreal-timepcrsystem(thermofisher,loughborough,uk)经过56分钟将温度从25℃增加至99℃来分析抗体展开的熔点。通过使用proteinthermalshiftsoftwareversion1.2(thermofisher,loughborough,uk)分析溶解曲线(meltingcurves)。在表5示出结果。如表5所示，经确认，抗体的稳定性主要受到重链区域的影响，稳定性以vh6＞vh4＞vh5＞vh0＞＞vh2＞vh3的顺序减少。并且，以抗体额fab(抗原结合片段(fragmentantigenbinding))结构展开时的熔点(meltingtemperature，tm1)为基准，包括vh6在内的的5种候选抗体及候选抗体vh4/vk0和vh5/vk0的热稳定性与基准抗体vh0/vk0相比增加。表5候选抗体的热稳定性分析结果no.抗体平均(average)熔点tm1(℃)平均熔点tm2(℃)1vh6/vk065.4*2vh6/vk563.5*3vh6/vk263.2*4vh6/vk363.0*5vh5/vk062.6～686vh4/vk062.6～687vh6/vk462.4*8vh0/vk060.067.79vh5/vk259.767.310vh4/vk259.667.311vh5/vk559.367.512vh2/vk059.168.113vh4/vk558.767.514vh5/vk358.467.315vh4/vk358.067.316vh5/vk458.066.217vh0/vk258.067.518vh2/vk557.667.319vh2/vk257.667.520vh4/vk457.567.221vh3/vk248.967.9实施例7.候选抗体的生物活性(biopotency)分析为了推断候选抗体的生物活性，执行人脐静脉内皮细胞迁移分析(huvecmigrationassay)。人脐静脉内皮细胞迁移分析为以如下的原理为基础构建的简单的实验法，即，当细胞的c-肝细胞生长因子受体蛋白受体通过如肝细胞生长因子的配体活化时，人脐静脉内皮细胞(huvec，humanumbilicalveinendothelialcell)迁移，可理解的是，作为分析值的％migration越高，则更急促进人脐静脉内皮细胞的迁移。与肝细胞生长因子相似地，抗c-肝细胞生长因子受体抗体可使作为抗原的c-肝细胞生长因子受体磷酸化(phosphorylation)并活化，因此，可期待诱发细胞迁移的可能性。以2×104细胞/孔的比例在以1％的明胶(sigmaaldrich，usa)涂敷的转移小室(transwell)(corninginc.,usa)接种人脐静脉内皮细胞(lonza，usa)，在转移小室的上部腔室添加10％的胎牛血清(gibco，newzealand)、在下部腔室添加1％的胎牛血清的medium199(gibco，usa)培养基以37℃、5％的co2条件下进行培养。在培养50分钟后，在下部腔室分别以50ng/ml和90ng/ml处理重组人肝细胞生长因子(recombinanthumanhepatocytegrowthfactor，rhhgf)(r&dsystems，usa)和候选抗体。在37℃、5％的co2条件下培养2小时后，利用3.7％的甲醛(vwrlifescience，usa)固定细胞，利用结晶紫(vwrlifescience，usa)染色后，通过显微镜观察并拍摄照片，从而，对人脐静脉内皮细胞从转移小室的内侧向外侧迁移的距离进行定量。在图6示出结果。实验结果，与作为阳性对照组的重组人肝细胞生长因子相同地，21种候选抗体以相对于阴性对照组的约120％～179％的程度促进细胞的迁移(图6)。因此，从上述结果可知，本发明的候选抗体具有优秀的生物活性。实施例8.比较分析用于选定最终候选抗体的数据为了从在实施例4中筛选的21种候选抗体中诗选最终候选组，细分为抗体表达量(expressionlevel)、与抗原的结合力(affinity)、热稳定性(thermalstability)以及生物活性来设置基准并进行比较。通常，当在生产观点上考虑时间和费用时，判断抗体表达量可成为最重要的指标。因此，本发明人优先考虑顺利的抗体生产来排除了抗体表达量小于15μg/ml的候选抗体。之后，从各个选择指数对各个候选抗体的相对于基准抗体(vh0/vk0)得到改善的程度数值化，并通过对在从各个选择指数测定的候选抗体的分析指除以平均分析值来求得的比(index1)再次以vh0/vk0的比为基准除以(index2)来标准化(表6至表9)。并且，将从4种各个指标分析的该数值相乘来在4种选择指标综合分析候选抗体，从而以最终结果值(index3)高的顺序罗列。结果，筛选了与以往的原型(vh0/vk0)相比得到改善的4种候选抗体vh4/vk2、vh5/vk2、vh6/vk2、vh6/vk0(表10)。表6表7*：kd值越低意味着高结合力，因此，以倒数计算表8表9表10根据4种选择基准的候选抗体地最终结果值(index3)抗体名index3vh4/vk21.938vh5/vk21.816vh6/vk21.399vh6/vk01.128vh0/vk01.000vh0/vk20.932vh2/vk00.861vh5/vk00.767vh4/vk00.674vh2/vk20.668vh4/vk50.491vh3/vk20.451以上，详细记述了本发明的特定部分，对于本领域的普通技术人员而言，这种具体记述仅为优选的实例，可明确的是，本发明的范围并不局限于此。序列表<110>helixmithco.,ltd<120>稳定性得到提高的抗c-肝细胞生长因子受体抗体或其抗原结合片段<130>pp190061<150>kr10-2018-0140196<151>2018-11-14<160>58<170>kopatentin3.0<210>1<211>5<212>prt<213>人工序列<220><223>抗c-met抗体1e4的cdrh1<400>1thrhistrpilethr15<210>2<211>17<212>prt<213>人工序列<220><223>抗c-met抗体1e4的cdrh2<400>2thrileaspprothraspsertyrasnphetyrglyproserphegln151015gly<210>3<211>17<212>prt<213>人工序列<220><223>抗c-met抗体1e4的cdrh3<400>3aspglyasntyrtyraspserargglytyrtyrtyraspthrpheasp151015met<210>4<211>11<212>prt<213>人工序列<220><223>抗c-met抗体1e4的cdrl1<400>4argalaserglnglyileserthrtyrleuala1510<210>5<211>7<212>prt<213>人工序列<220><223>抗c-met抗体1e4的cdrl2<400>5seralaserthrleugluser15<210>6<211>9<212>prt<213>人工序列<220><223>抗c-met抗体1e4的cdrl3<400>6glnglnalaaspserpheproleuthr15<210>7<211>98<212>prt<213>人工序列<220><223>抗c-met抗体1e4(vh)的重链(ch1)的恒定区1<400>7alaserthrlysglyproservalpheproleualaproserserlys151015serthrserglyglythralaalaleuglycysleuvallysasptyr202530pheprogluprovalthrvalsertrpasnserglyalaleuthrser354045glyvalhisthrpheproalavalleuglnserserglyleutyrser505560leuserservalvalthrvalproserserserleuglythrglnthr65707580tyrilecysasnvalasnhislysproserasnthrlysvalasplys859095lysval<210>8<211>107<212>prt<213>人工序列<220><223>抗c-met抗体1e4(ck)的κ-恒定区(ck)<400>8argservalalaalaproservalpheilepheproproseraspglu151015glnleulysserglythralaservalvalcysleuleuasnasnphe202530tyrproargglualalysvalglntrplysvalaspasnalaleugln354045serglyasnserglngluservalthrgluglnaspserlysaspser505560thrtyrserleuserserthrleuthrleuserlysalaasptyrglu65707580lyshislysvaltyralacysgluvalthrhisglnglyleuserser859095provalthrlysserpheasnargglyglucys100105<210>9<211>98<212>prt<213>人工序列<220><223>抗c-met抗体1e4(vh0)的变体ch1<400>9alaserthrlysglyproservalpheproleualaproserserlys151015serthrserglyglythralaalaleuglycysleuvallysasptyr202530pheprogluprovalthrvalsertrpasnserglyalaleuthrser354045glyvalhisthrpheproalavalleuglnserserglyleutyrser505560leuserservalvalthrvalproserserserleuglythrglnthr65707580tyrilecysasnvalasnhislysproserasnthrlysvalasplys859095argval<210>10<211>107<212>prt<213>人工序列<220><223>抗c-met抗体1e4(ck0)的变体κ恒定区<400>10argthrvalalaalaproservalpheilepheproproseraspglu151015glnleulysserglythralaservalvalcysleuleuasnasnphe202530tyrproargglualalysvalglntrplysvalaspasnalaleugln354045serglyasnserglngluservalthrgluglnaspserlysaspser505560thrtyrserleuserserthrleuthrleuserlysalaasptyrglu65707580lyshislysvaltyralacysgluvalthrhisglnglyleuserser859095provalthrlysserpheasnargglyglucys100105<210>11<211>126<212>prt<213>人工序列<220><223>1e4(vh或vh0)的重链可变区<400>11glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyglu151015serleuargilesercysglnglyserglytyrserpheprothrhis202530trpilethrtrpvalargglnmetproglylysglyleuglutrpmet354045glythrileaspprothraspsertyrasnphetyrglyproserphe505560glnglyhisvalthrileseralaaspserserserserthralatyr65707580leuglntrpserserleulysalaseraspthralamettyrtyrcys859095alaargaspglyasntyrtyraspserargglytyrtyrtyraspthr100105110pheaspmettrpglyglnglythrleuvalthrvalserser115120125<210>12<211>126<212>prt<213>人工序列<220><223>1e4(vh2)的变体重链可变区<400>12gluvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyglu151015serleulysilesercyslysglyserglytyrserpheprothrhis202530trpilethrtrpvalargglnmetproglylysglyleuglutrpmet354045glythrileaspprothraspsertyrasnphetyrglyproserphe505560glnglyglnvalthrileseralaasplysserileserthralatyr65707580leuglntrpserserleulysalaseraspthralamettyrtyrcys859095alaargaspglyasntyrtyraspserargglytyrtyrtyraspthr100105110pheaspmettrpglyglnglythrleuvalthrvalserser115120125<210>13<211>126<212>prt<213>人工序列<220><223>1e4(vh3)的变体重链可变区<400>13glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyser151015servallysvalsercysglnglyserglytyrserpheprothrhis202530trpilethrtrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpmet354045glythrileaspprothraspsertyrasnphetyrglyproserphe505560glnglyargvalthrilethralaaspserserthrserthralatyr65707580leuglntrpserserleulysalaseraspthralamettyrtyrcys859095alaargaspglyasntyrtyraspserargglytyrtyrtyraspthr100105110pheaspmettrpglyglnglythrleuvalthrvalserser115120125<210>14<211>126<212>prt<213>人工序列<220><223>1e4(vh4)的变体重链可变区<400>14glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyser151015servallysvalsercysglnglyserglytyrserpheprothrhis202530trpilethrtrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpmet354045glythrileaspprothraspsertyrasnphetyrglyproserphe505560glnglyargvalthrilethralaaspserserthrserthralatyr65707580metgluleuserserleuargsergluaspthralamettyrtyrcys859095alaargaspglyasntyrtyraspserargglytyrtyrtyraspthr100105110pheaspmettrpglyglnglythrleuvalthrvalserser115120125<210>15<211>126<212>prt<213>人工序列<220><223>1e4(vh5)的变体重链可变区<400>15glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyser151015servallysvalsercysglnglyserglytyrserpheprothrhis202530trpilethrtrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpmet354045glythrileaspprothraspsertyrasnphetyrglyproserphe505560glnglyargvalthrilethralaaspserserthrserthralatyr65707580metgluleuserserleuargsergluaspthralavaltyrtyrcys859095alaargaspglyasntyrtyraspserargglytyrtyrtyraspthr100105110pheaspmettrpglyglnglythrleuvalthrvalserser115120125<210>16<211>126<212>prt<213>人工序列<220><223>1e4(vh6)的变体重链可变区<400>16glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyser151015servallysvalsercyslysalaserglytyrserpheprothrhis202530trpilethrtrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpmet354045glythrileaspprothraspsertyrasnphetyrglyproserphe505560glnglyargvalthrilethralaasplysserthrserthralatyr65707580metgluleuserserleuargsergluaspthralavaltyrtyrcys859095alaargaspglyasntyrtyraspserargglytyrtyrtyraspthr100105110pheaspmettrpglyglnglythrleuvalthrvalserser115120125<210>17<211>107<212>prt<213>人工序列<220><223>1e4(vk或vk0)的κ链可变区<400>17aspileglnmetthrglnserproserpheleuseralaservalgly151015aspargvalthrilethrcysargalaserglnglyileserthrtyr202530leualatrptyrglnglnlysproglythralaprolysleuleuile354045tyrseralaserthrleugluserglyvalproserargphesergly505560serglyserglythraspphethrleuthrileserserleuglnpro65707580gluaspseralathrtyrtyrcysglnglnalaaspserpheproleu859095thrpheglyglyglythrlysvalgluilelys100105<210>18<211>107<212>prt<213>人工序列<220><223>1e4(vk2)的变体κ链可变区<400>18aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly151015aspargvalthrilethrcysargalaserglnglyileserthrtyr202530leualatrptyrglnglnlysproglylysalaprolysleuleuile354045tyrseralaserthrleugluserglyvalproserargphesergly505560serglyserglythraspphethrleuthrileserserleuglnpro65707580gluaspphealathrtyrtyrcysglnglnalaaspserpheproleu859095thrpheglyglyglythrlysvalgluilelys100105<210>19<211>107<212>prt<213>人工序列<220><223>1e4(vk3)的变体κ链可变区<400>19aspileglnmetthrglnserproglypheleuserleuserprogly151015gluargalathrleusercysargalaserglnglyileserthrtyr202530leualatrptyrglnglnlysproglyglnalaproargleuleuile354045tyrseralaserthrleugluserglyvalproaspargphesergly505560serglyserglythraspphethrleuthrileserargleuglupro65707580gluaspphealathrtyrtyrcysglnglnalaaspserpheproleu859095thrpheglyglyglythrlysvalgluilelys100105<210>20<211>107<212>prt<213>人工序列<220><223>1e4(vk4)的变体κ链可变区<400>20gluileglnmetthrglnserproglythrleuserleuserprogly151015gluargalathrleusercysargalaserglnglyileserthrtyr202530leualatrptyrglnglnlysproglyglnalaproargleuleuile354045tyrseralaserthrleugluserglyvalproaspargphesergly505560serglyserglythraspphethrleuthrileserargleuglupro65707580gluaspphealathrtyrtyrcysglnglnalaaspserpheproleu859095thrpheglyglyglythrlysvalgluilelys100105<210>21<211>107<212>prt<213>人工序列<220><223>1e4(vk5)的变体κ链可变区<400>21gluilevalleuthrglnserproglythrleuserleuserprogly151015gluargalathrleusercysargalaserglnglyileserthrtyr202530leualatrptyrglnglnlysproglyglnalaproargleuleuile354045tyrseralaserthrleugluserglyileproaspargphesergly505560serglyserglythraspphethrleuthrileserargleuglupro65707580gluaspphealathrtyrtyrcysglnglnalaaspserpheproleu859095thrpheglyglyglythrlysvalgluilelys100105<210>22<211>378<212>dna<213>人工序列<220><223>1e4(vh或vh0)的重链可变区<400>22caggtgcagctggtgcagtctggcgccgaagtgaagaagcccggcgaatccctgcggatc60tcctgccagggctccggctactccttccccacccactggatcacctgggtgcgacagatg120cccggcaagggcctggaatggatgggcaccatcgaccccaccgactcctacaacttctac180ggccccagcttccagggccacgtgaccatctccgccgactcctccagctccaccgcctac240ctgcagtggtcctccctgaaggcctccgacaccgccatgtactactgcgccagggacggc300aactactacgactcccggggctactactacgataccttcgacatgtggggccagggcacc360ctggtcaccgtctcctca378<210>23<211>378<212>dna<213>人工序列<220><223>1e4(vh2)的变体重链可变区<400>23gaggtgcagctggtgcagtctggcgccgaagtgaagaagcccggcgaatccctgaagatc60tcctgcaagggctccggctactccttccccacccactggatcacctgggtgcgacagatg120cccggcaagggcctggaatggatgggcaccatcgaccccaccgactcctacaacttctac180ggccccagcttccagggccaagtgaccatctccgccgacaagtccatctccaccgcctac240ctgcagtggtcctccctgaaggcctccgacaccgccatgtactactgcgccagggacggc300aactactacgactcccggggctactactacgataccttcgacatgtggggccagggcacc360ctggtcaccgtctcctca378<210>24<211>378<212>dna<213>人工序列<220><223>1e4(vh3)的变体重链可变区<400>24caggtgcagctggtgcagtctggcgccgaagtgaagaagcccggctcctccgtgaaggtc60tcctgccagggctccggctactccttccccacccactggatcacctgggtgcgacaggcc120cccggccaaggcctggaatggatgggcaccatcgaccccaccgactcctacaacttctac180ggccccagcttccagggcagagtgaccatcaccgccgactcctccacgtccaccgcctac240ctgcagtggtcctccctgaaggcctccgacaccgccatgtactactgcgccagggacggc300aactactacgactcccggggctactactacgataccttcgacatgtggggccagggcacc360ctggtcaccgtctcctca378<210>25<211>378<212>dna<213>人工序列<220><223>1e4(vh4)的变体重链可变区<400>25caggtgcagctggtgcagtctggcgccgaagtgaagaagcccggctcctccgtgaaggtc60tcctgccagggctccggctactccttccccacccactggatcacctgggtgcgacaggcc120cccggccaaggcctggaatggatgggcaccatcgaccccaccgactcctacaacttctac180ggccccagcttccagggcagagtgaccatcaccgccgactcctccacgtccaccgcctac240atggagctgtcctccctgagatctgaggacaccgccatgtactactgcgccagggacggc300aactactacgactcccggggctactactacgataccttcgacatgtggggccagggcacc360ctggtcaccgtctcctca378<210>26<211>378<212>dna<213>人工序列<220><223>1e4(vh5)的变体重链可变区<400>26caggtgcagctggtgcagtctggcgccgaagtgaagaagcccggctcctccgtgaaggtc60tcctgccagggctccggctactccttccccacccactggatcacctgggtgcgacaggcc120cccggccaaggcctggaatggatgggcaccatcgaccccaccgactcctacaacttctac180ggccccagcttccagggcagagtgaccatcaccgccgactcctccacgtccaccgcctac240atggagctgtcctccctgagatctgaggacaccgccgtgtactactgcgccagggacggc300aactactacgactcccggggctactactacgataccttcgacatgtggggccagggcacc360ctggtcaccgtctcctca378<210>27<211>378<212>dna<213>人工序列<220><223>1e4(vh6)的变体重链可变区<400>27caggtgcagctggtgcagtctggcgccgaagtgaagaagcccggctcctccgtgaaggtc60tcctgcaaggcttccggctactccttccccacccactggatcacctgggtgcgacaggcc120cccggccaaggcctggaatggatgggcaccatcgaccccaccgactcctacaacttctac180ggccccagcttccagggcagagtgaccatcaccgccgacaagtccacgtccaccgcctac240atggagctgtcctccctgagatctgaggacaccgccgtgtactactgcgccagggacggc300aactactacgactcccggggctactactacgataccttcgacatgtggggccagggcacc360ctggtcaccgtctcctca378<210>28<211>321<212>dna<213>人工序列<220><223>1e4(vk或vk0)的κ链可变区<400>28gacatccagatgacccagtcccccagcttcctgtccgcctccgtgggcgacagagtgacc60atcacctgtcgggcctcccagggcatctccacctacctggcctggtatcagcagaagccc120ggcaccgcccccaagctgctgatctactccgcctccaccctggaatccggcgtgccctcc180agattctccggctccggctctggcaccgacttcaccctgaccatctccagcctgcagccc240gaggactccgccacctactactgccagcaggccgactccttccccctgaccttcggcgga300ggcaccaaggtggaaatcaaa321<210>29<211>321<212>dna<213>人工序列<220><223>1e4(vk2)的变体κ链可变区<400>29gacatccagatgacccagtcccccagctccctgtccgcctccgtgggcgacagagtgacc60atcacctgtcgggcctcccagggcatctccacctacctggcctggtatcagcagaagccc120ggcaaagcccccaagctgctgatctactccgcctccaccctggaatccggcgtgccctcc180agattctccggctccggctctggcaccgacttcaccctgaccatctccagcctgcagccc240gaggactttgccacctactactgccagcaggccgactccttccccctgaccttcggcgga300ggcaccaaggtggaaatcaaa321<210>30<211>321<212>dna<213>人工序列<220><223>1e4(vk3)的变体κ链可变区<400>30gacatccagatgacccagtcccccggcttcctgtccttgtccccaggcgaaagagccacc60ctctcctgtcgggcctcccagggcatctccacctacctggcctggtatcagcagaagccc120ggccaggcccccaggctgctgatctactccgcctccaccctggaatccggcgtgcccgac180agattctccggctccggctctggcaccgacttcaccctgaccatctccagactggagccc240gaggactttgccacctactactgccagcaggccgactccttccccctgaccttcggcgga300ggcaccaaggtggaaatcaaa321<210>31<211>321<212>dna<213>人工序列<220><223>1e4(vk4)的变体κ链可变区<400>31gaaatccagatgacccagtcccccggcaccctgtccttgtccccaggcgaaagagccacc60ctctcctgtcgggcctcccagggcatctccacctacctggcctggtatcagcagaagccc120ggccaggcccccaggctgctgatctactccgcctccaccctggaatccggcgtgcccgac180agattctccggctccggctctggcaccgacttcaccctgaccatctccagactggagccc240gaggactttgccacctactactgccagcaggccgactccttccccctgaccttcggcgga300ggcaccaaggtggaaatcaaa321<210>32<211>321<212>dna<213>人工序列<220><223>1e4(vk5)的变体κ链可变区<400>32gaaatcgtgttgacccagtcccccggcaccctgtccttgtccccaggcgaaagagccacc60ctctcctgtcgggcctcccagggcatctccacctacctggcctggtatcagcagaagccc120ggccaggcccccaggctgctgatctactccgcctccaccctggaatccggcatccccgac180agattctccggctccggctctggcaccgacttcaccctgaccatctccagactggagccc240gaggactttgccacctactactgccagcaggccgactccttccccctgaccttcggcgga300ggcaccaaggtggaaatcaaa321<210>33<211>456<212>prt<213>人工序列<220><223>1e4(vh)的重链<400>33glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyglu151015serleuargilesercysglnglyserglytyrserpheprothrhis202530trpilethrtrpvalargglnmetproglylysglyleuglutrpmet354045glythrileaspprothraspsertyrasnphetyrglyproserphe505560glnglyhisvalthrileseralaaspserserserserthralatyr65707580leuglntrpserserleulysalaseraspthralamettyrtyrcys859095alaargaspglyasntyrtyraspserargglytyrtyrtyraspthr100105110pheaspmettrpglyglnglythrleuvalthrvalserseralaser115120125thrlysglyproservalpheproleualaproserserlysserthr130135140serglyglythralaalaleuglycysleuvallysasptyrphepro145150155160gluprovalthrvalsertrpasnserglyalaleuthrserglyval165170175histhrpheproalavalleuglnserserglyleutyrserleuser180185190servalvalthrvalproserserserleuglythrglnthrtyrile195200205cysasnvalasnhislysproserasnthrlysvalasplyslysval210215220gluprolyssercysasplysthrhisthrcysproprocysproala225230235240progluleuleuglyglyproservalpheleupheproprolyspro245250255lysaspthrleumetileserargthrprogluvalthrcysvalval260265270valaspvalserhisgluaspprogluvallyspheasntrptyrval275280285aspglyvalgluvalhisasnalalysthrlysproarggluglugln290295300tyrasnserthrtyrargvalvalservalleuthrvalleuhisgln305310315320asptrpleuasnglylysglutyrlyscyslysvalserasnlysala325330335leuproalaproileglulysthrileserlysalalysglyglnpro340345350arggluproglnvaltyrthrleuproproserarggluglumetthr355360365lysasnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyrproser370375380aspilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyr385390395400lysthrthrproprovalleuaspseraspglyserphepheleutyr405410415serlysleuthrvalasplysserargtrpglnglnglyasnvalphe420425430sercysservalmethisglualaleuhisasnhistyrthrglnlys435440445serleuserleuserproglylys450455<210>34<211>456<212>prt<213>人工序列<220><223>1e4变体(vh0)的重链<400>34glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyglu151015serleuargilesercysglnglyserglytyrserpheprothrhis202530trpilethrtrpvalargglnmetproglylysglyleuglutrpmet354045glythrileaspprothraspsertyrasnphetyrglyproserphe505560glnglyhisvalthrileseralaaspserserserserthralatyr65707580leuglntrpserserleulysalaseraspthralamettyrtyrcys859095alaargaspglyasntyrtyraspserargglytyrtyrtyraspthr100105110pheaspmettrpglyglnglythrleuvalthrvalserseralaser115120125thrlysglyproservalpheproleualaproserserlysserthr130135140serglyglythralaalaleuglycysleuvallysasptyrphepro145150155160gluprovalthrvalsertrpasnserglyalaleuthrserglyval165170175histhrpheproalavalleuglnserserglyleutyrserleuser180185190servalvalthrvalproserserserleuglythrglnthrtyrile195200205cysasnvalasnhislysproserasnthrlysvalasplysargval210215220gluprolyssercysasplysthrhisthrcysproprocysproala225230235240progluleuleuglyglyproservalpheleupheproprolyspro245250255lysaspthrleumetileserargthrprogluvalthrcysvalval260265270valaspvalserhisgluaspprogluvallyspheasntrptyrval275280285aspglyvalgluvalhisasnalalysthrlysproarggluglugln290295300tyrasnserthrtyrargvalvalservalleuthrvalleuhisgln305310315320asptrpleuasnglylysglutyrlyscyslysvalserasnlysala325330335leuproalaproileglulysthrileserlysalalysglyglnpro340345350arggluproglnvaltyrthrleuproproserarggluglumetthr355360365lysasnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyrproser370375380aspilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyr385390395400lysthrthrproprovalleuaspseraspglyserphepheleutyr405410415serlysleuthrvalasplysserargtrpglnglnglyasnvalphe420425430sercysservalmethisglualaleuhisasnhistyrthrglnlys435440445serleuserleuserproglylys450455<210>35<211>456<212>prt<213>人工序列<220><223>1e4变体(vh2)的重链<400>35gluvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyglu151015serleulysilesercyslysglyserglytyrserpheprothrhis202530trpilethrtrpvalargglnmetproglylysglyleuglutrpmet354045glythrileaspprothraspsertyrasnphetyrglyproserphe505560glnglyglnvalthrileseralaasplysserileserthralatyr65707580leuglntrpserserleulysalaseraspthralamettyrtyrcys859095alaargaspglyasntyrtyraspserargglytyrtyrtyraspthr100105110pheaspmettrpglyglnglythrleuvalthrvalserseralaser115120125thrlysglyproservalpheproleualaproserserlysserthr130135140serglyglythralaalaleuglycysleuvallysasptyrphepro145150155160gluprovalthrvalsertrpasnserglyalaleuthrserglyval165170175histhrpheproalavalleuglnserserglyleutyrserleuser180185190servalvalthrvalproserserserleuglythrglnthrtyrile195200205cysasnvalasnhislysproserasnthrlysvalasplysargval210215220gluprolyssercysasplysthrhisthrcysproprocysproala225230235240progluleuleuglyglyproservalpheleupheproprolyspro245250255lysaspthrleumetileserargthrprogluvalthrcysvalval260265270valaspvalserhisgluaspprogluvallyspheasntrptyrval275280285aspglyvalgluvalhisasnalalysthrlysproarggluglugln290295300tyrasnserthrtyrargvalvalservalleuthrvalleuhisgln305310315320asptrpleuasnglylysglutyrlyscyslysvalserasnlysala325330335leuproalaproileglulysthrileserlysalalysglyglnpro340345350arggluproglnvaltyrthrleuproproserarggluglumetthr355360365lysasnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyrproser370375380aspilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyr385390395400lysthrthrproprovalleuaspseraspglyserphepheleutyr405410415serlysleuthrvalasplysserargtrpglnglnglyasnvalphe420425430sercysservalmethisglualaleuhisasnhistyrthrglnlys435440445serleuserleuserproglylys450455<210>36<211>456<212>prt<213>人工序列<220><223>1e4变体(vh3)的重链<400>36glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyser151015servallysvalsercysglnglyserglytyrserpheprothrhis202530trpilethrtrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpmet354045glythrileaspprothraspsertyrasnphetyrglyproserphe505560glnglyargvalthrilethralaaspserserthrserthralatyr65707580leuglntrpserserleulysalaseraspthralamettyrtyrcys859095alaargaspglyasntyrtyraspserargglytyrtyrtyraspthr100105110pheaspmettrpglyglnglythrleuvalthrvalserseralaser115120125thrlysglyproservalpheproleualaproserserlysserthr130135140serglyglythralaalaleuglycysleuvallysasptyrphepro145150155160gluprovalthrvalsertrpasnserglyalaleuthrserglyval165170175histhrpheproalavalleuglnserserglyleutyrserleuser180185190servalvalthrvalproserserserleuglythrglnthrtyrile195200205cysasnvalasnhislysproserasnthrlysvalasplysargval210215220gluprolyssercysasplysthrhisthrcysproprocysproala225230235240progluleuleuglyglyproservalpheleupheproprolyspro245250255lysaspthrleumetileserargthrprogluvalthrcysvalval260265270valaspvalserhisgluaspprogluvallyspheasntrptyrval275280285aspglyvalgluvalhisasnalalysthrlysproarggluglugln290295300tyrasnserthrtyrargvalvalservalleuthrvalleuhisgln305310315320asptrpleuasnglylysglutyrlyscyslysvalserasnlysala325330335leuproalaproileglulysthrileserlysalalysglyglnpro340345350arggluproglnvaltyrthrleuproproserarggluglumetthr355360365lysasnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyrproser370375380aspilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyr385390395400lysthrthrproprovalleuaspseraspglyserphepheleutyr405410415serlysleuthrvalasplysserargtrpglnglnglyasnvalphe420425430sercysservalmethisglualaleuhisasnhistyrthrglnlys435440445serleuserleuserproglylys450455<210>37<211>456<212>prt<213>人工序列<220><223>1e4变体(vh4)的重链<400>37glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyser151015servallysvalsercysglnglyserglytyrserpheprothrhis202530trpilethrtrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpmet354045glythrileaspprothraspsertyrasnphetyrglyproserphe505560glnglyargvalthrilethralaaspserserthrserthralatyr65707580metgluleuserserleuargsergluaspthralamettyrtyrcys859095alaargaspglyasntyrtyraspserargglytyrtyrtyraspthr100105110pheaspmettrpglyglnglythrleuvalthrvalserseralaser115120125thrlysglyproservalpheproleualaproserserlysserthr130135140serglyglythralaalaleuglycysleuvallysasptyrphepro145150155160gluprovalthrvalsertrpasnserglyalaleuthrserglyval165170175histhrpheproalavalleuglnserserglyleutyrserleuser180185190servalvalthrvalproserserserleuglythrglnthrtyrile195200205cysasnvalasnhislysproserasnthrlysvalasplysargval210215220gluprolyssercysasplysthrhisthrcysproprocysproala225230235240progluleuleuglyglyproservalpheleupheproprolyspro245250255lysaspthrleumetileserargthrprogluvalthrcysvalval260265270valaspvalserhisgluaspprogluvallyspheasntrptyrval275280285aspglyvalgluvalhisasnalalysthrlysproarggluglugln290295300tyrasnserthrtyrargvalvalservalleuthrvalleuhisgln305310315320asptrpleuasnglylysglutyrlyscyslysvalserasnlysala325330335leuproalaproileglulysthrileserlysalalysglyglnpro340345350arggluproglnvaltyrthrleuproproserarggluglumetthr355360365lysasnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyrproser370375380aspilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyr385390395400lysthrthrproprovalleuaspseraspglyserphepheleutyr405410415serlysleuthrvalasplysserargtrpglnglnglyasnvalphe420425430sercysservalmethisglualaleuhisasnhistyrthrglnlys435440445serleuserleuserproglylys450455<210>38<211>456<212>prt<213>人工序列<220><223>1e4变体(vh5)的重链<400>38glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyser151015servallysvalsercysglnglyserglytyrserpheprothrhis202530trpilethrtrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpmet354045glythrileaspprothraspsertyrasnphetyrglyproserphe505560glnglyargvalthrilethralaaspserserthrserthralatyr65707580metgluleuserserleuargsergluaspthralavaltyrtyrcys859095alaargaspglyasntyrtyraspserargglytyrtyrtyraspthr100105110pheaspmettrpglyglnglythrleuvalthrvalserseralaser115120125thrlysglyproservalpheproleualaproserserlysserthr130135140serglyglythralaalaleuglycysleuvallysasptyrphepro145150155160gluprovalthrvalsertrpasnserglyalaleuthrserglyval165170175histhrpheproalavalleuglnserserglyleutyrserleuser180185190servalvalthrvalproserserserleuglythrglnthrtyrile195200205cysasnvalasnhislysproserasnthrlysvalasplysargval210215220gluprolyssercysasplysthrhisthrcysproprocysproala225230235240progluleuleuglyglyproservalpheleupheproprolyspro245250255lysaspthrleumetileserargthrprogluvalthrcysvalval260265270valaspvalserhisgluaspprogluvallyspheasntrptyrval275280285aspglyvalgluvalhisasnalalysthrlysproarggluglugln290295300tyrasnserthrtyrargvalvalservalleuthrvalleuhisgln305310315320asptrpleuasnglylysglutyrlyscyslysvalserasnlysala325330335leuproalaproileglulysthrileserlysalalysglyglnpro340345350arggluproglnvaltyrthrleuproproserarggluglumetthr355360365lysasnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyrproser370375380aspilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyr385390395400lysthrthrproprovalleuaspseraspglyserphepheleutyr405410415serlysleuthrvalasplysserargtrpglnglnglyasnvalphe420425430sercysservalmethisglualaleuhisasnhistyrthrglnlys435440445serleuserleuserproglylys450455<210>39<211>456<212>prt<213>人工序列<220><223>1e4变体(vh6)的重链<400>39glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyser151015servallysvalsercyslysalaserglytyrserpheprothrhis202530trpilethrtrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpmet354045glythrileaspprothraspsertyrasnphetyrglyproserphe505560glnglyargvalthrilethralaasplysserthrserthralatyr65707580metgluleuserserleuargsergluaspthralavaltyrtyrcys859095alaargaspglyasntyrtyraspserargglytyrtyrtyraspthr100105110pheaspmettrpglyglnglythrleuvalthrvalserseralaser115120125thrlysglyproservalpheproleualaproserserlysserthr130135140serglyglythralaalaleuglycysleuvallysasptyrphepro145150155160gluprovalthrvalsertrpasnserglyalaleuthrserglyval165170175histhrpheproalavalleuglnserserglyleutyrserleuser180185190servalvalthrvalproserserserleuglythrglnthrtyrile195200205cysasnvalasnhislysproserasnthrlysvalasplysargval210215220gluprolyssercysasplysthrhisthrcysproprocysproala225230235240progluleuleuglyglyproservalpheleupheproprolyspro245250255lysaspthrleumetileserargthrprogluvalthrcysvalval260265270valaspvalserhisgluaspprogluvallyspheasntrptyrval275280285aspglyvalgluvalhisasnalalysthrlysproarggluglugln290295300tyrasnserthrtyrargvalvalservalleuthrvalleuhisgln305310315320asptrpleuasnglylysglutyrlyscyslysvalserasnlysala325330335leuproalaproileglulysthrileserlysalalysglyglnpro340345350arggluproglnvaltyrthrleuproproserarggluglumetthr355360365lysasnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyrproser370375380aspilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyr385390395400lysthrthrproprovalleuaspseraspglyserphepheleutyr405410415serlysleuthrvalasplysserargtrpglnglnglyasnvalphe420425430sercysservalmethisglualaleuhisasnhistyrthrglnlys435440445serleuserleuserproglylys450455<210>40<211>214<212>prt<213>人工序列<220><223>1e4(vk)的轻链<400>40aspileglnmetthrglnserproserpheleuseralaservalgly151015aspargvalthrilethrcysargalaserglnglyileserthrtyr202530leualatrptyrglnglnlysproglythralaprolysleuleuile354045tyrseralaserthrleugluserglyvalproserargphesergly505560serglyserglythraspphethrleuthrileserserleuglnpro65707580gluaspseralathrtyrtyrcysglnglnalaaspserpheproleu859095thrpheglyglyglythrlysvalgluilelysargservalalaala100105110proservalpheilepheproproseraspgluglnleulyssergly115120125thralaservalvalcysleuleuasnasnphetyrproarggluala130135140lysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnserglyasnsergln145150155160gluservalthrgluglnaspserlysaspserthrtyrserleuser165170175serthrleuthrleuserlysalaasptyrglulyshislysvaltyr180185190alacysgluvalthrhisglnglyleuserserprovalthrlysser195200205pheasnargglyglucys210<210>41<211>214<212>prt<213>人工序列<220><223>1e4变体(vk0)的轻链<400>41aspileglnmetthrglnserproserpheleuseralaservalgly151015aspargvalthrilethrcysargalaserglnglyileserthrtyr202530leualatrptyrglnglnlysproglythralaprolysleuleuile354045tyrseralaserthrleugluserglyvalproserargphesergly505560serglyserglythraspphethrleuthrileserserleuglnpro65707580gluaspseralathrtyrtyrcysglnglnalaaspserpheproleu859095thrpheglyglyglythrlysvalgluilelysargthrvalalaala100105110proservalpheilepheproproseraspgluglnleulyssergly115120125thralaservalvalcysleuleuasnasnphetyrproarggluala130135140lysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnserglyasnsergln145150155160gluservalthrgluglnaspserlysaspserthrtyrserleuser165170175serthrleuthrleuserlysalaasptyrglulyshislysvaltyr180185190alacysgluvalthrhisglnglyleuserserprovalthrlysser195200205pheasnargglyglucys210<210>42<211>214<212>prt<213>人工序列<220><223>1e4变体(vk2)的轻链<400>42aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly151015aspargvalthrilethrcysargalaserglnglyileserthrtyr202530leualatrptyrglnglnlysproglylysalaprolysleuleuile354045tyrseralaserthrleugluserglyvalproserargphesergly505560serglyserglythraspphethrleuthrileserserleuglnpro65707580gluaspphealathrtyrtyrcysglnglnalaaspserpheproleu859095thrpheglyglyglythrlysvalgluilelysargthrvalalaala100105110proservalpheilepheproproseraspgluglnleulyssergly115120125thralaservalvalcysleuleuasnasnphetyrproarggluala130135140lysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnserglyasnsergln145150155160gluservalthrgluglnaspserlysaspserthrtyrserleuser165170175serthrleuthrleuserlysalaasptyrglulyshislysvaltyr180185190alacysgluvalthrhisglnglyleuserserprovalthrlysser195200205pheasnargglyglucys210<210>43<211>214<212>prt<213>人工序列<220><223>1e4变体(vk3)的轻链<400>43gluileglnmetthrglnserproglythrleuserleuserprogly151015gluargalathrleusercysargalaserglnglyileserthrtyr202530leualatrptyrglnglnlysproglyglnalaproargleuleuile354045tyrseralaserthrleugluserglyvalproaspargphesergly505560serglyserglythraspphethrleuthrileserargleuglupro65707580gluaspphealathrtyrtyrcysglnglnalaaspserpheproleu859095thrpheglyglyglythrlysvalgluilelysargthrvalalaala100105110proservalpheilepheproproseraspgluglnleulyssergly115120125thralaservalvalcysleuleuasnasnphetyrproarggluala130135140lysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnserglyasnsergln145150155160gluservalthrgluglnaspserlysaspserthrtyrserleuser165170175serthrleuthrleuserlysalaasptyrglulyshislysvaltyr180185190alacysgluvalthrhisglnglyleuserserprovalthrlysser195200205pheasnargglyglucys210<210>44<211>214<212>prt<213>人工序列<220><223>1e4变体(vk4)的轻链<400>44gluilevalleuthrglnserproglythrleuserleuserprogly151015gluargalathrleusercysargalaserglnglyileserthrtyr202530leualatrptyrglnglnlysproglyglnalaproargleuleuile354045tyrseralaserthrleugluserglyileproaspargphesergly505560serglyserglythraspphethrleuthrileserargleuglupro65707580gluaspphealathrtyrtyrcysglnglnalaaspserpheproleu859095thrpheglyglyglythrlysvalgluilelysargthrvalalaala100105110proservalpheilepheproproseraspgluglnleulyssergly115120125thralaservalvalcysleuleuasnasnphetyrproarggluala130135140lysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnserglyasnsergln145150155160gluservalthrgluglnaspserlysaspserthrtyrserleuser165170175serthrleuthrleuserlysalaasptyrglulyshislysvaltyr180185190alacysgluvalthrhisglnglyleuserserprovalthrlysser195200205pheasnargglyglucys210<210>45<211>214<212>prt<213>人工序列<220><223>1e4变体(vk5)的轻链<400>45gluilevalleuthrglnserproglythrleuserleuserprogly151015gluargalathrleusercysargalaserglnglyileserthrtyr202530leualatrptyrglnglnlysproglyglnalaproargleuleuile354045tyrseralaserthrleugluserglyileproaspargphesergly505560serglyserglythraspphethrleuthrileserargleuglupro65707580gluaspphealathrtyrtyrcysglnglnalaaspserpheproleu859095thrpheglyglyglythrlysvalgluilelysargthrvalalaala100105110proservalpheilepheproproseraspgluglnleulyssergly115120125thralaservalvalcysleuleuasnasnphetyrproarggluala130135140lysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnserglyasnsergln145150155160gluservalthrgluglnaspserlysaspserthrtyrserleuser165170175serthrleuthrleuserlysalaasptyrglulyshislysvaltyr180185190alacysgluvalthrhisglnglyleuserserprovalthrlysser195200205pheasnargglyglucys210<210>46<211>1371<212>dna<213>人工序列<220><223>1e4(vh)的重链<400>46caggtgcagctggtgcagtctggcgccgaagtgaagaagcccggcgagtccctgcggatc60tcctgccagggctccggctactccttccccacccactggatcacctgggtgcgacagatg120cccggcaagggcctggaatggatgggcaccatcgaccccaccgactcctacaacttctac180ggccccagcttccagggccacgtgaccatctccgccgactcctccagctccaccgcctac240ctgcagtggtcctccctgaaggcctccgacaccgccatgtactactgcgccagggacggc300aactactacgactcccggggctactactacgataccttcgacatgtggggccagggcacc360ctggtgacagtgtcctctgcctctaccaagggcccttccgtgttccccctggccccctcc420agcaagtccacctctggcggcaccgctgccctgggctgcctggtgaaagactacttcccc480gagcccgtgaccgtgtcctggaactctggcgccctgacctccggcgtgcacaccttccct540gccgtgctgcagtcctccggcctgtactccctgtcctccgtggtgaccgtgccctccagc600tctctgggcacccagacctacatctgcaacgtgaaccacaagccctccaacaccaaggtg660gacaagaaggtggaacccaagtcctgcgacaagacccacacctgtcccccctgccctgcc720cctgaactgctgggcggaccctccgtgttcctgttccccccaaagcccaaggacaccctg780atgatctcccggacccccgaagtgacctgcgtggtggtggacgtgtcccacgaggaccct840gaagtgaagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagccc900agagaggaacagtacaactccacctaccgggtggtgtctgtgctgaccgtgctgcaccag960gactggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtctccaacaaggccctgcctgccccc1020atcgaaaagaccatctccaaggccaagggccagccccgcgagccccaggtgtacacactg1080ccccctagccgggaagagatgaccaagaaccaggtgtccctgacctgtctggtgaaaggc1140ttctacccctccgacattgccgtggaatgggagtccaacggccagcccgagaacaactac1200aagaccaccccccctgtgctggactccgacggctcattcttcctgtactccaagctgacc1260gtggacaagtcccggtggcagcagggcaacgtgttctcctgctccgtgatgcacgaggcc1320ctgcacaaccactacacccagaagtccctgtccctgagccccggcaagtga1371<210>47<211>1371<212>dna<213>人工序列<220><223>1e4变体(vh0)的重链<400>47caggtgcagctggtgcagtctggcgccgaagtgaagaagcccggcgaatccctgcggatc60tcctgccagggctccggctactccttccccacccactggatcacctgggtgcgacagatg120cccggcaagggcctggaatggatgggcaccatcgaccccaccgactcctacaacttctac180ggccccagcttccagggccacgtgaccatctccgccgactcctccagctccaccgcctac240ctgcagtggtcctccctgaaggcctccgacaccgccatgtactactgcgccagggacggc300aactactacgactcccggggctactactacgataccttcgacatgtggggccagggcacc360ctggtcaccgtctcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcc420tccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttcccc480gaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccg540gctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagc600agcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtg660gacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagca720cctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctc780atgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccct840gaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccg900cgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccag960gactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagccccc1020atcgagaaaaccatctccaaagccaaaggtcagccccgagaaccacaggtgtacaccctg1080cccccatcccgggaagagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggc1140ttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactac1200aagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcacc1260gtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggct1320ctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatga1371<210>48<211>1371<212>dna<213>人工序列<220><223>1e4变体(vh2)的重链<400>48gaggtgcagctggtgcagtctggcgccgaagtgaagaagcccggcgaatccctgaagatc60tcctgcaagggctccggctactccttccccacccactggatcacctgggtgcgacagatg120cccggcaagggcctggaatggatgggcaccatcgaccccaccgactcctacaacttctac180ggccccagcttccagggccaagtgaccatctccgccgacaagtccatctccaccgcctac240ctgcagtggtcctccctgaaggcctccgacaccgccatgtactactgcgccagggacggc300aactactacgactcccggggctactactacgataccttcgacatgtggggccagggcacc360ctggtcaccgtctcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcc420tccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttcccc480gaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccg540gctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagc600agcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtg660gacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagca720cctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctc780atgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccct840gaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccg900cgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccag960gactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagccccc1020atcgagaaaaccatctccaaagccaaaggtcagccccgagaaccacaggtgtacaccctg1080cccccatcccgggaagagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggc1140ttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactac1200aagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcacc1260gtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggct1320ctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatga1371<210>49<211>1371<212>dna<213>人工序列<220><223>1e4变体(vh3)的重链<400>49caggtgcagctggtgcagtctggcgccgaagtgaagaagcccggctcctccgtgaaggtc60tcctgccagggctccggctactccttccccacccactggatcacctgggtgcgacaggcc120cccggccaaggcctggaatggatgggcaccatcgaccccaccgactcctacaacttctac180ggccccagcttccagggcagagtgaccatcaccgccgactcctccacgtccaccgcctac240ctgcagtggtcctccctgaaggcctccgacaccgccatgtactactgcgccagggacggc300aactactacgactcccggggctactactacgataccttcgacatgtggggccagggcacc360ctggtcaccgtctcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcc420tccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttcccc480gaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccg540gctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagc600agcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtg660gacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagca720cctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctc780atgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccct840gaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccg900cgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccag960gactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagccccc1020atcgagaaaaccatctccaaagccaaaggtcagccccgagaaccacaggtgtacaccctg1080cccccatcccgggaagagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggc1140ttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactac1200aagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcacc1260gtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggct1320ctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatga1371<210>50<211>1371<212>dna<213>人工序列<220><223>1e4变体(vh4)的重链<400>50caggtgcagctggtgcagtctggcgccgaagtgaagaagcccggctcctccgtgaaggtc60tcctgccagggctccggctactccttccccacccactggatcacctgggtgcgacaggcc120cccggccaaggcctggaatggatgggcaccatcgaccccaccgactcctacaacttctac180ggccccagcttccagggcagagtgaccatcaccgccgactcctccacgtccaccgcctac240atggagctgtcctccctgagatctgaggacaccgccatgtactactgcgccagggacggc300aactactacgactcccggggctactactacgataccttcgacatgtggggccagggcacc360ctggtcaccgtctcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcc420tccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttcccc480gaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccg540gctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagc600agcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtg660gacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagca720cctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctc780atgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccct840gaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccg900cgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccag960gactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagccccc1020atcgagaaaaccatctccaaagccaaaggtcagccccgagaaccacaggtgtacaccctg1080cccccatcccgggaagagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggc1140ttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactac1200aagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcacc1260gtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggct1320ctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatga1371<210>51<211>1371<212>dna<213>人工序列<220><223>1e4变体(vh5)的重链<400>51caggtgcagctggtgcagtctggcgccgaagtgaagaagcccggctcctccgtgaaggtc60tcctgccagggctccggctactccttccccacccactggatcacctgggtgcgacaggcc120cccggccaaggcctggaatggatgggcaccatcgaccccaccgactcctacaacttctac180ggccccagcttccagggcagagtgaccatcaccgccgactcctccacgtccaccgcctac240atggagctgtcctccctgagatctgaggacaccgccgtgtactactgcgccagggacggc300aactactacgactcccggggctactactacgataccttcgacatgtggggccagggcacc360ctggtcaccgtctcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcc420tccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttcccc480gaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccg540gctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagc600agcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtg660gacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagca720cctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctc780atgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccct840gaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccg900cgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccag960gactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagccccc1020atcgagaaaaccatctccaaagccaaaggtcagccccgagaaccacaggtgtacaccctg1080cccccatcccgggaagagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggc1140ttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactac1200aagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcacc1260gtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggct1320ctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatga1371<210>52<211>1371<212>dna<213>人工序列<220><223>1e4变体(vh6)的重链<400>52caggtgcagctggtgcagtctggcgccgaagtgaagaagcccggctcctccgtgaaggtc60tcctgcaaggcttccggctactccttccccacccactggatcacctgggtgcgacaggcc120cccggccaaggcctggaatggatgggcaccatcgaccccaccgactcctacaacttctac180ggccccagcttccagggcagagtgaccatcaccgccgacaagtccacgtccaccgcctac240atggagctgtcctccctgagatctgaggacaccgccgtgtactactgcgccagggacggc300aactactacgactcccggggctactactacgataccttcgacatgtggggccagggcacc360ctggtcaccgtctcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcc420tccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttcccc480gaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccg540gctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagc600agcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtg660gacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagca720cctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctc780atgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccct840gaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccg900cgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccag960gactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagccccc1020atcgagaaaaccatctccaaagccaaaggtcagccccgagaaccacaggtgtacaccctg1080cccccatcccgggaagagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggc1140ttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactac1200aagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcacc1260gtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggct1320ctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatga1371<210>53<211>645<212>dna<213>人工序列<220><223>1e4(vk)的轻链<400>53gacatccagatgacccagtcccccagcttcctgtccgcctccgtgggcgacagagtgacc60atcacctgtcgggcctcccagggcatctccacctacctggcctggtatcagcagaagccc120ggcaccgcccccaagctgctgatctactccgcctccaccctggaatccggcgtgccctcc180agattctccggctccggctctggcaccgacttcaccctgaccatctccagcctgcagccc240gaggactccgccacctactactgccagcaggccgactccttccccctgaccttcggcgga300ggcaccaaggtggaaatcaagagatccgtggccgctccctccgtgttcatcttcccaccc360tccgacgagcagctgaagtctggcaccgccagcgtggtctgcctgctgaacaacttctac420ccccgcgaggccaaggtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagtccggcaactcccag480gaatccgtcaccgagcaggactccaaggacagcacctactccctgtccagcaccctgacc540ctgtccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgacccaccagggc600ctgtccagccctgtgaccaagtccttcaaccggggcgagtgctga645<210>54<211>645<212>dna<213>人工序列<220><223>1e4变体(vk0)的轻链<400>54gacatccagatgacccagtcccccagcttcctgtccgcctccgtgggcgacagagtgacc60atcacctgtcgggcctcccagggcatctccacctacctggcctggtatcagcagaagccc120ggcaccgcccccaagctgctgatctactccgcctccaccctggaatccggcgtgccctcc180agattctccggctccggctctggcaccgacttcaccctgaccatctccagcctgcagccc240gaggactccgccacctactactgccagcaggccgactccttccccctgaccttcggcgga300ggcaccaaggtggaaatcaaacgtactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgcca360tctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctat420cccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccag480gagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacg540ctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggc600ctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgttag645<210>55<211>645<212>dna<213>人工序列<220><223>1e4变体(vk2)的轻链<400>55gacatccagatgacccagtcccccagctccctgtccgcctccgtgggcgacagagtgacc60atcacctgtcgggcctcccagggcatctccacctacctggcctggtatcagcagaagccc120ggcaaagcccccaagctgctgatctactccgcctccaccctggaatccggcgtgccctcc180agattctccggctccggctctggcaccgacttcaccctgaccatctccagcctgcagccc240gaggactttgccacctactactgccagcaggccgactccttccccctgaccttcggcgga300ggcaccaaggtggaaatcaaacgtactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgcca360tctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctat420cccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccag480gagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacg540ctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggc600ctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgttag645<210>56<211>645<212>dna<213>人工序列<220><223>1e4变体(vk3)的轻链<400>56gacatccagatgacccagtcccccggcttcctgtccttgtccccaggcgaaagagccacc60ctctcctgtcgggcctcccagggcatctccacctacctggcctggtatcagcagaagccc120ggccaggcccccaggctgctgatctactccgcctccaccctggaatccggcgtgcccgac180agattctccggctccggctctggcaccgacttcaccctgaccatctccagactggagccc240gaggactttgccacctactactgccagcaggccgactccttccccctgaccttcggcgga300ggcaccaaggtggaaatcaaacgtactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgcca360tctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctat420cccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccag480gagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacg540ctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggc600ctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgttag645<210>57<211>645<212>dna<213>人工序列<220><223>1e4变体(vk4)的轻链<400>57gaaatccagatgacccagtcccccggcaccctgtccttgtccccaggcgaaagagccacc60ctctcctgtcgggcctcccagggcatctccacctacctggcctggtatcagcagaagccc120ggccaggcccccaggctgctgatctactccgcctccaccctggaatccggcgtgcccgac180agattctccggctccggctctggcaccgacttcaccctgaccatctccagactggagccc240gaggactttgccacctactactgccagcaggccgactccttccccctgaccttcggcgga300ggcaccaaggtggaaatcaaacgtactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgcca360tctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctat420cccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccag480gagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacg540ctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggc600ctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgttag645<210>58<211>645<212>dna<213>人工序列<220><223>1e4变体(vk5)的轻链<400>58gaaatcgtgttgacccagtcccccggcaccctgtccttgtccccaggcgaaagagccacc60ctctcctgtcgggcctcccagggcatctccacctacctggcctggtatcagcagaagccc120ggccaggcccccaggctgctgatctactccgcctccaccctggaatccggcatccccgac180agattctccggctccggctctggcaccgacttcaccctgaccatctccagactggagccc240gaggactttgccacctactactgccagcaggccgactccttccccctgaccttcggcgga300ggcaccaaggtggaaatcaaacgtactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgcca360tctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctat420cccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccag480gagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacg540ctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggc600ctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgttag645当前第1页12