本发明涉及含有二十碳五烯酸烷基酯的组合物及其制造方法。
背景技术：
近年来，二十碳五烯酸(epa)、二十二碳六烯酸(dha)等多不饱和脂肪酸(polyunsaturatedfattyacid、pufa)的药理效果变得明确，从而被用作药品、保健食品的原料。pufa因具有多个双键而不容易通过化学合成来获得。被工业利用的pufa绝大多数通过从来自富含pufa的生物的油脂原料、例如鱼油等中提取或精制来制造。
然而，来自生物的油脂原料是碳原子数、双键的数量、位置、以及立体异构体的构成比不同的多种脂肪酸的混合物，pufa的含量未必高。进而，从来自生物的油脂原料中精制的pufa包含来自该油脂原料或通过精制过程中的加热处理等而产生的各种微量杂质。这种杂质之中可能包含例如花生四烯酸、饱和脂肪酸、pufa反式异构体等对于心血管系统而言不优选的脂肪酸、环境激素等环境污染物质等对生物体造成不良影响的物质。因此，作为药品、保健食品的原料，寻求不仅高浓度地包含pufa，且对生物体造成不良影响的杂质的含量尽可能低的含有高纯度pufa的组合物。
截止至今，公开了含有高纯度pufa的组合物的制造方法。专利文献1记载了环境污染物质的含量得以降低的pufa乙酯的制造方法，其包括通过薄膜蒸馏从含有pufa作为构成脂肪酸的原料油中去除多氯二苯并对二噁英(pcdd)、多氯二苯并呋喃(pcdf)等环境污染物质。专利文献2记载了花生四烯酸酯和epa烷基酯的单反式体的含量为规定量以下的含有高浓度epa烷基酯的组合物的制造方法，其包括对含有epa烷基酯的组合物进行0.2torr、190℃以下的精细蒸馏后，使用色谱法进行浓缩处理。专利文献3记载了通过对油组合物进行水性流体处理后，通过实施短工序蒸馏等气提处理而去除油组合物中的不优选成分、例如蛋白质性化合物等亲水性成分、环境污染物质、胆固醇等亲油性成分的方法。专利文献4记载了精制鱼油的制造方法，其包括使鱼油接触碱、接着接触活性白土后，通过减压水蒸气蒸馏等而使水蒸气接触150~230℃的鱼油，从而进行脱臭处理。专利文献5记载了通过使多不饱和脂肪酸的烷基酯体接触包含银盐的水性溶液后，在170~190℃、塔顶真空度为1pa以下的条件下进行真空蒸馏，从而制造反式异构体的含量极低的含有pufa烷基酯的组合物。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：国际公开公报第2013/172346号
专利文献2：国际公开公报第2016/043251号
专利文献3：日本特表2016-502573号公报
专利文献4：日本特开2015-105354号公报
专利文献5：国际公开公报第2014/054435号。
技术实现要素：
发明所要解决的问题
通过本发明人的研究而发现：通过以往的方法(例如专利文献5记载的方法)而制造的含有epa的组合物中含有未知的杂质，且这些杂质为至今为止未知的新型的epa的有关物质。由于该杂质为未知物质，因此，以往未进行着眼于该杂质而对epa进行精制的操作。此外，该杂质的化学结构与epa类似，因此，极其难以从含有epa的组合物中去除。基于这些理由可推测：该杂质在未知其存在的情况下包含在以往的含有epa的组合物中。通过去除这些杂质而能够进一步提高含有epa的组合物的纯度。
本发明提供去除上述以往未知的epa的有关物质而得到的含有高浓度且高纯度epa的组合物及其制造方法。
用于解决问题的手段
因此，本发明提供含有二十碳五烯酸烷基酯的组合物的制造方法，其包括：
(1)使含有二十碳五烯酸烷基酯的原料油与包含银盐的水溶液接触后，回收水层；
(2)向该水层中添加有机溶剂后，回收有机溶剂层；以及
(3)将该有机溶剂层在温度为180~188℃、塔顶真空度为0.7pa以下的条件下进行真空蒸馏，从该有机溶剂层中回收二十碳五烯酸烷基酯。
此外，本发明提供含有二十碳五烯酸烷基酯的组合物，其中，二十碳五烯酸的烷基酯的含量为95面积%以上，且(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸烷基酯、(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸烷基酯和(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸烷基酯的含量分别为0.1面积%以下。
此外，本发明提供测定含有二十碳五烯酸烷基酯的组合物的纯度的方法，其包括：测定该组合物中的选自(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸烷基酯、(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸烷基酯和(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸烷基酯中的至少1种物质的含量。
此外，本发明提供(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸烷基酯、(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸烷基酯或(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸烷基酯。
发明效果
有可能对生物体造成不良影响的脂肪酸的含量尽可能少、含有高浓度且高纯度的epa的组合物作为药品、保健食品的原料是有用的。根据本发明，提供在作为现有杂质而被去除的花生四烯酸等的基础上，至今为止未被视作杂质的epa的有关物质的浓度得以降低的含有更高浓度且高纯度的epa的组合物。
具体实施方式
本发明涉及以往的含有二十碳五烯酸(epa)烷基酯的组合物中包含的未知杂质。
有可能对生物体造成不良影响的脂肪酸、反式异构体等杂质的含量尽可能少、含有高浓度且高纯度的二十碳五烯酸(epa)的组合物作为药品、保健食品的原料是有用的。本发明人为了探求含有更高纯度的epa的组合物而进行了以往的含有epa的组合物中包含的杂质的检测和鉴定。其结果，本发明人发现：通过以往的方法(例如专利文献5记载的方法)而得到的含有epa烷基酯的组合物中包含以下记载的以往未知的杂质：
(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸烷基酯、
(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸烷基酯、
(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸烷基酯。
这三种物质均是epa的有关物质，且是以往未知的新型物质。在以下的本说明书中，将这三种物质也统称为本发明的杂质。本发明的杂质可以是从含有epa烷基酯的组合物中分离出的杂质。本发明的杂质的结构与epa类似，因此，通过以往的epa精制方法极难与epa分离，推测这或许是至今为止本发明的杂质未被分离或鉴定出来的原因。
进而，本发明人为了制造含有更高纯度的epa的组合物而针对从含有epa烷基酯的组合物中去除本发明杂质的方法反复进行研究，从而开发出经改良的含有epa烷基酯的组合物的制造方法。
因此，本发明的一个方式涉及本发明的杂质含量得以降低的含有epa烷基酯的组合物的制造方法。此外，本发明的另一个方式涉及通过该制造方法而制造的、本发明的杂质含量得以降低的含有epa烷基酯的组合物。
本发明的制造方法中，含有epa烷基酯的组合物的原料油可以由来自含有epa的生物的油脂进行制备。作为来自该生物的油脂的例子，可列举出来自鱼类等海产动物、浮游生物的油脂；来自藻类等微生物的油脂等，其中，作为优选例可列举出来自沙丁鱼、金枪鱼、鲔等鱼类的油脂；以及来自藻类的油脂。这些来自生物的油脂主要以1分子甘油键合有3分子脂肪酸的甘油三酯的形态而含有脂肪酸。此外，虽为少量，但可以含有二甘油酯、单甘油酯、游离脂肪酸。
该来自生物的油脂优选为所含有的全部脂肪酸中含有20面积%以上epa的油脂。epa可以在该来自生物的油脂中以游离脂肪酸的形态存在，或者以单甘油酯、二甘油酯或甘油三酯的脂肪酸链的形态存在。油脂中的全部脂肪酸中的各构成脂肪酸的比率可通过后述条件下的气相色谱法进行测定。
该来自生物的油脂通过对所包含的epa进行烷基酯化，并根据需要对epa进行浓缩而以本发明的制造方法中的原料油的形式制备。epa烷基酯可通过例如使含有epa的油脂与具有期望烷基的酸利用公知方法发生酯化反应来制造。或者，可通过使该来自生物的油脂所包含的甘油酯中的epa在催化剂或酶的存在下与低级醇发生反应而进行烷基酯化来获得epa烷基酯。烷基酯化的程度越高越适合，该原料油中包含的目标pufa(包含游离体)的总量之中，优选90%以上、更优选95%以上被烷基酯化。作为构成该epa的烷基酯的烷基，可列举出碳原子数1~6的直链状或支链状的烷基，优选为甲基或乙基，更优选为乙基。
作为被用作该原料油的含有epa烷基酯的油脂，可以使用市售的油脂。从以高含量获得epa烷基酯的观点出发，优选使用所含有的epa量经标准化而得的市售的来自鱼油的油脂。本发明的制造方法中使用的该原料油优选为所含有的全部脂肪酸中含有40面积%以上epa的油脂。本发明的制造方法中，通过使用全部脂肪酸中的epa含量为40面积%以上的原料油，最终能够高效地获得包含高浓度epa的组合物。
本发明的含有epa烷基酯的组合物的制造方法的各工序中，上述原料油优选以液体形态来应用。该原料油在各工序中的反应温度下为液体形态时，可以直接应用于本发明的各工序。在各工序中的反应温度下为固体形态时，该原料油可以适当溶解或稀释至有机溶剂、其它油中来应用。作为该有机溶剂，为了完成下述工序(1)，可使用能够与水分离的有机溶剂，可列举出例如乙酸乙酯、氯仿、四氯化碳、二乙基醚、己烷等。
本发明的含有epa烷基酯的组合物的制造方法包括以下工序：
(1)使含有epa烷基酯的原料油与包含银盐的水溶液接触后，回收水层；
(2)向该水层中添加有机溶剂后，回收有机溶剂层；以及
(3)将该有机溶剂层在温度为180~188℃、塔顶真空度为0.7pa以下的条件下进行真空蒸馏，从该有机溶剂层中回收epa烷基酯。
本发明的制造方法中，该工序(1)和(2)是利用通过在多不饱和脂肪酸(pufa)的碳-碳双键部与银盐形成络合物来改变包含epa的pufa烷基酯在提取溶剂中的溶解性，从而从原料油中分离精制epa烷基酯的工序。更详细而言，该工序(1)是使包含epa烷基酯的原料油接触包含银盐的水性溶液后，回收水层的工序。该工序可按照例如日本特许第2786748号公报、日本特许第2895258号公报、日本特许第2935555号公报、日本特许第3001954号公报等记载的方法来进行。
更详细而言，向上述包含epa烷基酯的原料油中添加包含银盐的水性溶液，并搅拌5分钟~4小时、优选搅拌10分钟~2小时左右。此时的反应温度优选的是：以该工序(1)的产物完全成为液体的温度作为上限，例如为约80℃以下，另一方面，作为下限而设为5℃以上。更优选反应温度在室温(20~30℃)附近。通过该反应而生成银-epa的络合物。该络合物会溶解在水性溶液的层中，因此，可通过从溶液中回收水层来选择性地回收epa。
作为该银盐，只要是能够与pufa的不饱和键形成络合物的银盐即可，没有特别限定，可以使用硝酸银、高氯酸银、四氟硼酸银、乙酸银等。其中优选为硝酸银。作为水性溶液的溶剂，可列举出水、或者水与甘油、乙二醇等具有羟基的化合物的混合介质，优选使用水。水性溶液中的银盐浓度只要为0.1mol/l以上即可，优选设为1~20mol/l左右。pufa与银盐的摩尔比为1:100~100:1、优选为1:5~1:1左右。
本发明的制造方法的工序(2)是向通过上述工序(1)而回收的水层中添加有机溶剂，使该水层中的epa烷基酯提取至有机溶剂层后，对包含该epa烷基酯的有机溶剂层进行回收的工序。该工序可按照例如日本特许第2786748公报、日本特许第2895258公报、日本特许第2935555公报、日本特许第3001954公报等中记载的方法来进行。
作为向该水层中添加的有机溶剂，可列举出己烷、醚、乙酸乙酯、乙酸丁酯、氯仿、环己烷、苯、甲苯、二甲苯等在pufa中的溶解性高且能够与水分离的溶剂。优选的是：将添加有有机溶剂的溶液(反应液)以达到比上述工序(1)中的反应温度、即上述银-epa的络合物的生成温度更高的温度的方式进行加热。更优选设为比工序(1)中的反应温度、即该络合物的生成温度高20℃以上的温度。例如，通过上述工序(1)在室温下生成络合物时，工序(2)中的反应液的温度优选设为40℃以上、更优选设为50~80℃左右。epa烷基酯在有机溶剂层中的提取反应的时间可以设为10分钟~6小时、优选设为30分钟~2小时，此外，可以在反应中搅拌溶液。接着，去除水层，对含有epa烷基酯的有机溶剂层进行回收。或者，通过将所回收的有机溶剂层进一步通入至硅胶、活性炭、二氧化硅等吸附剂中，也可以进一步去除所残留的银离子。
一个实施方式中，上述工序(1)和(2)也可以按照wo2017/191821中记载的方法来进行，用以代替如上那样地通过分批方式将原料油与水性溶液、或者水性溶液与有机溶剂进行混合。即，通过使包含银盐的水性溶液的液滴在第一反应槽中的含有epa烷基酯的原料油中通过，从而使该水性溶液接触原料油来生成包含银-epa的络合物的水性溶液，并对其进行回收。接着，通过使所回收的包含银-epa的络合物的水性溶液的液滴在第二反应槽中的有机溶剂中通过，从而将epa烷基酯提取至该有机溶剂中，接着，对包含该epa烷基酯的有机溶剂层进行回收。该水性溶液的液滴在原料油中的通过与包含银-epa的络合物的水性溶液的回收、和/或、包含该银-epa的络合物的水性溶液的液滴在有机溶剂中的通过与包含epa烷基酯的有机溶剂层的回收优选在该第一反应槽和/或第二反应槽中随时边添加水性溶液和根据需要的原料油或有机溶剂边一并实施，且优选连续实施。水性溶液在该第一反应槽和第二反应槽中的通过时间(与原料油或有机溶剂接触的时间)可根据水性溶液与原料油或有机溶剂的比重差、以及原料油或有机溶剂的容积(反应槽的尺寸)来控制，也可通过用泵等控制反应槽中的水性溶液和根据需要的原料油或有机溶剂的流速、流量来控制。该第一反应槽和第二反应槽中的液体温度可分别与上述工序(1)和(2)的反应液的温度相同。进而，本实施方式中，也可以反复再利用包含与有机溶剂接触后的银盐的水性溶液，并再次用于与原料油的接触。因此，本实施方式中，与向上述原料油中一并添加包含银盐的水性溶液并搅拌的方法相比，能够将包含银盐的水性溶液的用量减量至1/2~1/20左右。
本发明的制造方法的工序(3)是对通过工序(2)而得到的有机溶剂层进行真空蒸馏，从而回收作为目标的epa烷基酯的工序。更详细而言，通过沸点差，从通过工序(2)而得到的含有epa烷基酯的有机溶剂层中选择性地回收作为目标的epa烷基酯。
为了工序(3)的真空蒸馏，可以使用基于填充式、弹簧式、塔板式等公知方式的真空蒸馏装置，此外，也可以采用连续蒸馏方式。另一方面，本发明方法中的真空蒸馏条件与以往的真空蒸馏法(例如专利文献5中记载的方法)相比被设定至更低的压力且进一步受限的范围的温度。即，本发明的方法中，工序(3)的真空蒸馏条件如下：蒸馏机的塔顶真空度为0.7pa以下，蒸馏温度为180~188℃、优选为185~188℃。若塔顶真空度超过0.7pa，则与本发明杂质的分离变差，难以回收高纯度的epa烷基酯。此外，若蒸馏温度小于180℃，则对于浓缩epa、去除本发明杂质而言所需的蒸馏时间变长，另一方面，若超过188℃，则虽然能量成本上升，但蒸馏效率不会上升，成本变高。本工序中的蒸馏温度可示作含有epa烷基酯的有机溶剂层的温度。
上述真空蒸馏工序中获得的包含epa烷基酯的馏分可经回流，并再次供于上述条件下的真空蒸馏。
本发明的含有epa烷基酯的组合物的制造方法中，按照(1)→(2)→(3)的顺序来进行上述各工序。若变更该顺序，则无法获得大量含有作为目标的epa且本发明的杂质比率充分降低的组合物。尤其是，若在工序(1)或(2)之前进行工序(3)，则难以获得大量含有目标epa的组合物，或者，形成虽然epa的含量高但本发明的杂质含量也高的组合物。
通过本发明的制造方法而制造的含有epa烷基酯的组合物中，在所含有的全部脂肪酸中，含有优选为95面积%以上、更优选为96面积%以上、进一步优选为98面积%以上、进一步优选为99面积%以上的epa烷基酯。
本说明书中，油脂组合物中的给予的脂肪酸的含量用通过下述条件下的气相色谱而测得的、该脂肪酸的峰面积相对于组合物中的全部脂肪酸的总峰面积的比例(面积%)来表示。
<试样>
将测定试样9μl稀释在正己烷1.5ml中。
<柱条件>
柱：对内径0.25mm、长度60m的熔融二氧化硅管以0.25μm的膜厚覆盖聚乙二醇而得的毛细管柱(例如j&w公司制、db-wax)
柱温度：210℃
he流量：1.3ml/min。
<检测条件>
h2流量：30ml/min、air流量：400ml/min
det温度：260℃
或者，柱条件和检测条件可以如下所示。
<柱条件>
柱：对内径0.25mm、长度100m的熔融二氧化硅管以0.20μm的膜厚覆盖氰基丙基而得的非化学键合类型的毛细管柱(例如glsciences公司制、tc-2560、0.25mm×100m×0.20μm)
柱温度：170℃(保持150min)→升温(10℃/min)→240℃(保持15min)
he流量：1.0~1.5ml/min。
<检测条件>
h2流量：30ml/min、air流量：400ml/min
det温度：270℃。
关于该含有epa烷基酯的组合物中的本发明的杂质含量，(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸烷基酯、(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸烷基酯和(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸烷基酯均为0.1面积%以下。优选的是：该含有epa烷基酯的组合物中，(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸烷基酯的含量为0.1面积%以下，(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸烷基酯的含量为0.07面积%以下，(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸烷基酯的含量为0.09面积%以下。更优选的是：该含有epa烷基酯的组合物中，(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸烷基酯的含量为0.05面积%以下，(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸烷基酯的含量为0.07面积%以下，(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸烷基酯的含量为0.08面积%以下。
在优选的实施方式中，该含有epa烷基酯的组合物中，epa烷基酯的含量为95面积%以上、优选为96面积%以上、更优选为98面积%以上、进一步优选为99面积%以上，且(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸烷基酯、(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸烷基酯和(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸烷基酯的含量分别为0.1面积%以下。
在更优选的实施方式中，该含有epa烷基酯的组合物中，epa烷基酯的含量为95面积%以上、优选为96面积%以上、更优选为98面积%以上、进一步优选为99面积%以上，(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸烷基酯的含量为0.1面积%以下，(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸烷基酯的含量为0.07面积%以下，且(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸烷基酯的含量为0.09面积%以下。
在进一步优选的实施方式中，该含有epa烷基酯的组合物中，epa烷基酯的含量为98面积%以上、优选为99面积%以上，(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸烷基酯的含量为0.05面积%以下，(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸烷基酯的含量为0.07面积%以下，且(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸烷基酯的含量为0.08面积%以下。
进而，本发明人发现：由于本发明的杂质是极难与epa分离的epa的有关物质，因此，它们的含量可成为含有epa烷基酯的组合物的纯度指标。因此，本发明的进一步方式涉及测定含有epa烷基酯的组合物的纯度的方法，其包括对本发明的杂质的含量进行测定。
更详细而言，在本发明所述的测定含有epa烷基酯的组合物的纯度的方法中，测定选自(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸烷基酯、(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸烷基酯和(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸烷基酯中的至少1种物质的含量。该物质的含量可以由例如通过上述条件下的气相色谱而测得的、该物质的峰面积相对于全部脂肪酸的合计峰面积的比例来计算。所测得的物质在该含有epa烷基酯的组合物中的含量表示测定物质对于目标epa的混入水平，若考虑到本发明的杂质是极难与epa分离的物质，则其反映出该组合物中的目标epa的纯度。
在优选的实施方式中，如果含有epa烷基酯的组合物中的(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸烷基酯、(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸烷基酯和(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸烷基酯中任一者的含量为0.5面积%以下、优选为0.3面积%以下、更优选为0.1面积%以下，则可评价该含有epa烷基酯的组合物为高纯度。更详细而言，可评价该含有epa烷基酯的组合物作为医药或食品的原料，其纯度充分高。
在更优选的实施方式中，如果含有epa烷基酯的组合物中的(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸烷基酯、(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸烷基酯和(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸烷基酯的含量均为0.5面积%以下、优选为0.3面积%以下、更优选为0.1面积%以下，则可评价该含有epa烷基酯的组合物为高纯度。更详细而言，可评价该含有epa烷基酯的组合物作为医药或食品的原料，其纯度充分高。
在进一步优选的实施方式中，如果含有epa烷基酯的组合物中的(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸烷基酯的含量为0.1面积%以下，(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸烷基酯的含量为0.07面积%以下，且(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸烷基酯的含量为0.09面积%以下，则可评价该含有epa烷基酯的组合物为高纯度。更详细而言，可评价该含有epa烷基酯的组合物作为医药或食品的原料，其纯度充分高。
在进一步优选的实施方式中，如果含有epa烷基酯的组合物中的(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸烷基酯的含量为0.05面积%以下，(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸烷基酯的含量为0.07面积%以下，且(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸烷基酯的含量为0.08面积%以下，则可评价该含有epa烷基酯的组合物为高纯度。更详细而言，可评价该含有epa烷基酯的组合物作为医药或食品的原料，其纯度充分高。
本发明所述的含有epa烷基酯的组合物的纯度测定方法中，可以进一步测定该含有epa烷基酯的组合物中的epa烷基酯的含量。
因此，在进一步优选的实施方式中，如果含有epa烷基酯的组合物中的epa烷基酯的含量为95面积%以上、优选为96面积%以上、更优选为98面积%以上、进一步优选为99面积%以上，且(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸烷基酯、(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸烷基酯和(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸烷基酯的含量均为0.5面积%以下、优选为0.3面积%以下、更优选为0.1面积%以下，则可评价该含有epa烷基酯的组合物为高纯度。更详细而言，可评价该含有epa烷基酯的组合物作为医药或食品的原料，其纯度充分高。
在进一步优选的实施方式中，如果含有epa烷基酯的组合物中的epa烷基酯的含量为95面积%以上、优选为96面积%以上、更优选为98面积%以上、进一步优选为99面积%以上，(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸烷基酯的含量为0.1面积%以下，(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸烷基酯的含量为0.07面积%以下，且(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸烷基酯的含量为0.09面积%以下，则可评价该含有epa烷基酯的组合物为高纯度。更详细而言，可评价该含有epa烷基酯的组合物作为医药或食品的原料，其纯度充分高。
在进一步优选的实施方式中，如果含有epa烷基酯的组合物中的epa烷基酯的含量为98面积%以上、进一步优选为99面积%以上，(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸烷基酯的含量为0.05面积%以下，(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸烷基酯的含量为0.07面积%以下，且(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸烷基酯的含量为0.08面积%以下，则可评价该含有epa烷基酯的组合物为高纯度。更详细而言，可评价该含有epa烷基酯的组合物作为医药或食品的原料，其纯度充分高。
实施例
以下，列举出实施例，更详细地说明本发明，但本发明不仅仅限定于这些实施例。
参考例1脂肪酸组成分析
将测定试样9μl稀释在正己烷1.5ml中，使用气相色谱分析装置(type6890gc；agilenttechnologies公司制)，利用以下的条件对脂肪酸进行分析。脂肪酸的含量以色谱中的各脂肪酸的峰面积相对于全部脂肪酸的合计峰面积的比例(面积%)的形式来计算。
<柱条件>
柱：j&w公司制、db-wax0.25mm×60m
(对内径0.25mm、长度60m的熔融二氧化硅管以0.25μm的膜厚覆盖聚乙二醇而得的毛细管柱)
柱温度：210℃
he流量：1.3ml/min。
<检测条件>
h2流量：30ml/min、air流量：400ml/min
det温度：260℃
或者，
<柱条件>
柱：glsciences公司制、tc-25600.25mm×100m×0.20μm
(对内径0.25mm、长度100m的熔融二氧化硅管以0.20μm的膜厚覆盖氰基丙基而得的非化学键合类型的毛细管柱)
柱温度：170℃(保持150min)→升温(10℃/min)→240℃(保持15min)
he流量：1.0~1.5ml/min。
<检测条件>
h2流量：30ml/min、air流量：400ml/min
det温度：270℃。
参考例2原料油的制备
向沙丁鱼油2kg中添加溶解有氢氧化钠100g的无水乙醇溶液2000ml，在70~80℃混合搅拌1小时，进一步添加水1000ml并充分混合，静置1小时。去除所分离的水层，将油层清洗数次而使洗液呈中性，得到乙酯化沙丁鱼油。按照参考例1来调查该沙丁鱼油的脂肪酸组成。该沙丁鱼油如表1所示那样，在全部脂肪酸中含有epa20.4面积%，且含有(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸0.047面积%(相对于epa之比为0.0023)、(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸0.018面积%(相对于epa之比为0.0009)、以及(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸0.024面积%(相对于epa之比为0.0012)。
在塔顶真空度为13.3pa、蒸馏温度为120℃~170℃的条件下，对所制备的乙酯化沙丁鱼油1g进行真空蒸馏，得到粗精制物。按照参考例1来调查该粗精制物的脂肪酸组成。该粗精制物如表1所示那样，在全部脂肪酸中含有epa44.0面积%，且含有(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸0.097面积%(相对于epa之比为0.0022)、(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸0.040面积%(相对于epa之比为0.0009)、以及(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸0.053面积%(相对于epa之比为0.0012)。在以下的实施例中，将该精制物用作原料油。
实施例1含有epa的组合物的制造
工序(1)：向通过参考例2而得到的原料油300g中添加正己烷160ml，充分混合而使其溶解。向其中添加50质量%的硝酸银水溶液500ml，在5~30℃的条件下进行搅拌。将混合液静置后，去除所分离的正己烷层，回收水层。
工序(2)：向回收的水层中重新添加正己烷2000ml，在52~68℃下充分混合，使水层中的脂肪酸乙酯提取至正己烷中。将混合液静置后，去除所分离的水层，浓缩正己烷层。
按照参考例1来调查工序(2)中得到的正己烷层的脂肪酸组成。该正己烷层中包含的脂肪酸乙酯如表1所示那样，在全部脂肪酸中含有epa74.5面积%，且含有(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸0.156面积%(相对于epa之比为0.0021)、(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸0.067面积%(相对于epa之比为0.0009)、以及(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸0.089面积%(相对于epa之比为0.0012)。
工序(3)：使用填充塔式精密蒸馏机，边维持塔顶真空度为0.7pa以下、蒸馏温度为180~183℃的条件，边对通过工序(2)而得到的包含脂肪酸乙酯的正己烷层进行真空蒸馏，得到含有epa乙酯的组合物。按照参考例1来调查所得组合物的脂肪酸组成。该组合物如表1所示那样，在全部脂肪酸中含有epa98.4面积%，且含有(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸0.098面积%(相对于epa之比为0.0010)、(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸0.069面积%(相对于epa之比为0.0007)、(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸0.089面积%(相对于epa之比为0.0009)。
实施例2
在工序(3)中，将塔顶真空度设为0.7pa，将蒸馏温度设为180℃~188℃，除此之外，按照与实施例1相同的步骤，得到含有epa乙酯的组合物。按照参考例1来调查所得组合物的脂肪酸组成。该组合物如表1所示那样，在全部脂肪酸中含有epa98.2面积%，且含有(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸0.079面积%(相对于epa之比为0.0008)、(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸0.069面积%(相对于epa之比为0.0007)、(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸0.088面积%(相对于epa之比为0.0009)。
实施例3
在工序(3)中，将塔顶真空度设为0.7pa，将蒸馏温度设为185℃~188℃，除此之外，按照与实施例1相同的步骤，得到含有epa乙酯的组合物。按照参考例1来调查所得组合物的脂肪酸组成。该组合物如表1所示那样，在全部脂肪酸中含有epa99.0面积%，且含有(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸0.050面积%(相对于epa之比为0.0005)、(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸0.069面积%(相对于epa之比为0.0007)、(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸0.079面积%(相对于epa之比为0.0008)。
比较例1
在工序(3)中，将塔顶真空度设为0.9~1.0pa，将蒸馏温度设为172℃~188℃，除此之外，按照与实施例1相同的步骤，得到含有epa乙酯的组合物。按照参考例1来调查所得组合物的脂肪酸组成。该组合物如表1所示那样，全部脂肪酸中的epa含量高达98.3%，但作为杂质的(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸、(7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-7,10,13,16,19-五烯酸和(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸的含量分别为0.157面积%(相对于epa之比为0.0016)、0.088面积%(相对于epa之比为0.0009)、0.108面积%(相对于epa之比为0.0011)，(4z,7z,10z,13z,16z)-二十碳-4,7,10,13,16-五烯酸和(4z,7z,10z,13z,16z,19z)-二十碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸为高值。
如表1所示那样，实施例1的工序(2)中，杂质相对于epa的比率与原料油基本相同，杂质与epa一同被浓缩。与此相对，实施例1的工序(3)中，epa被浓缩，另一方面，杂质减少，由此示出：通过该工序(3)而从epa中分离出杂质。此外，比较例1中的杂质相对于epa的比率与原料油和工序(2)基本相同，因此示出：工序(3)中的真空蒸馏条件对于杂质的分离而言是重要的。