PSCACAR-T细胞的制作方法

psca car
‑
t细胞
1.相关申请
2.本技术要求2018年12月13日提交的美国临时专利申请号62/779,394的优先权，其公开通过引用全文纳入本文。
3.序列表
4.本技术包含以ascii格式电子提交的序列表并通过引用其全部内容纳入本文。所述ascii拷贝创建于2019年12月19日，命名为14562
‑
068
‑
228_sl.txt，并且大小为61,765字节。
技术领域
5.该技术一般涉及免疫学领域并且部分涉及用于治疗与表达前列腺干细胞抗原的肿瘤细胞的存在相关的疾病和病症的t细胞组合物和方法。
6.背景
7.前列腺干细胞抗原(psca)是一种糖基磷脂酰肌醇锚定的细胞表面蛋白，具有123个氨基酸。虽然psca在前列腺、膀胱、肾脏、皮肤、食道、胃、眼部和胎盘的正常上皮细胞中表达较低，psca在胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌和膀胱癌中上调(abate
‑
daga d 2014hum gene ther 25:1003
‑
1012)。psca的表达与前列腺癌的晚期临床分期和转移呈正相关(saeki n 2010cancer res 16：3533
‑
3538)。
8.psca代表了抗癌免疫疗法的潜在靶点。针对psca的单克隆抗体(ags
‑
1c4d4或ags
‑
psca)的安全性和临床活性在用于治疗晚期胰腺癌(wolpin bm 2013ann oncol 24：1792)和前列腺癌(antonarakis es 2012《癌症化疗与药理学(cancer chemother pharmacol)》69：763
‑
771,morris mj 2012ann oncol 23：2714
‑
2719)的i期和ii期临床试验中得到评价。在约200名对象中，抗psca抗体的治疗在剂量高达48mg/kg时表现出低毒性和中等功效。这种有利的安全性概况归因于psca在正常组织(abate
‑
daga d 2014hum gene ther25：1003
‑
1012)上的有限表达，这有助于减少针对靶标且在肿瘤外的副作用。同时，这些数据提供了临床证据，证明psca是治疗干预的相关靶标。
9.诱导型psca car
‑
t细胞可能是一种有用的免疫疗法，可用于治疗表达psca的实体瘤恶性肿瘤。临床前数据显示，与传统car
‑
t疗法相比，t细胞增殖、持久性和体内抗肿瘤活性增强(foster ae 2017mol ther 25：2176
‑
2188,mata m 2017cancer discov 7：1306
‑
1319)。迄今为止，传统car
‑
t细胞免疫疗法的有意义的临床活性仅限于血液系统恶性肿瘤，而对实体瘤适应症的疗效可能受到普遍较低的car
‑
t细胞持久性的限制，因此随着时间的推移缺乏持续的抗肿瘤活性。向抗psca car
‑
t细胞添加可诱导的“开启”开关提供了受控的激活和增殖信号，从而不仅提高了修饰的t细胞的持久性，还延长了抗肿瘤功效的潜力。
10.在以下说明书、实施例、权利要求和附图中进一步描述某些实施方式。


技术实现要素：

11.在一个方面，本发明提供一种治疗人类对象的方法，其中对象已被诊断具有与表
达前列腺干细胞抗原(psca)的一个或多个实体瘤的存在相关的疾病，其包括：给予对象0.3
×
106个细胞/kg至约9
×
106个细胞/kg包含(i)编码诱导型myd88/cd40多肽的第一多核苷酸和(ii)编码前列腺干细胞抗原嵌合抗原受体(psca
‑
car)多肽的第二多核苷酸的修饰的t细胞。
12.在一些实施方式中，本文提供的治疗人类对象的方法进一步包括以0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量给予未修饰的多克隆t细胞。在特定的实施方式中，给予对象包含修饰的和未修饰的t细胞的异质性t细胞群的输注，其中约20％至约90％的t细胞是修饰的t细胞。在一些实施方式中，给予对象包含修饰的和未修饰的t细胞的异质性t细胞群的输注，其中约20％至约80％的t细胞是修饰的t细胞。在一些实施方式中，给予对象包含修饰的和未修饰的t细胞的异质性t细胞群的输注，其中约20％至约70％的t细胞是修饰的t细胞。在一些实施方式中，给予对象包含修饰的和未修饰的t细胞的异质性t细胞群的输注，其中约20％至约60％的t细胞是修饰的t细胞。在一些实施方式中，给予对象包含修饰的和未修饰的t细胞的异质性t细胞群的输注，其中约20％至约50％的t细胞是修饰的t细胞。
13.在特定的实施方式中，在适于输注到对象的包含约20
×
106至120
×
106个细胞/毫升的稀释剂中将t细胞给予对象。
14.在一些实施方式中，本文提供的治疗人类对象的方法进一步包括给予对象多个剂量的利米多塞。在特定的实施方式中，每天一次向对象给予利米多塞。在其他的实施方式中，每周三次向对象给予利米多塞。在另外的实施方式中，每周两次向对象给予利米多塞。在一些实施方式中，每周一次向对象给予利米多塞。在一些实施方式中，隔周一次向对象给予利米多塞。在其他的实施方式中，每月两次向对象给予利米多塞。
15.在特定的实施方式中，每次给予对象的利米多塞为约0.4mg/kg对象体重。在具体的实施方式中，每周一次向对象给予利米多塞，其中每次给予对象的利米多塞为约0.4mg/kg对象体重。在其他的实施方式中，每天一次向对象给予利米多塞，其中每次给予对象的利米多塞为约0.4mg/kg对象体重。在另外的实施方式中，每周三次向对象给予利米多塞，其中每次给予对象的利米多塞为约0.4mg/kg对象体重。在一些实施方式中，每周两次向对象给予利米多塞，其中每次给予对象的利米多塞为约0.4mg/kg对象体重。在一些实施方式中，隔周一次向对象给予利米多塞，其中每次给予对象的利米多塞为约0.4mg/kg对象体重。
16.本文提供的治疗人类对象的任一种方法的一些实施方式中，所述实体瘤是胰腺癌、胃癌或前列腺癌。
17.本文提供的治疗人类对象的任一种方法的一些实施方式中，所述诱导型myd88/cd40多肽包括
18.i)两个多聚体配体结合区；
19.ii)缺乏tir结构域的myd88多肽或截短的myd88多肽；以及iii)缺乏cd40胞外结构域的cd40胞质多肽区。
20.在特定的实施方式中，每个多聚体配体结合区包含一个fkbp12变体多肽。在一些实施方式中，每个fkbp12变体多肽包含36位的氨基酸取代，其与野生型fkbp12多肽相比对多聚体配体以较高亲和力结合。在具体的实施方式中，36位的氨基酸取代选自缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、和丙氨酸。在一些实施方式中，每个多聚体配体结合区是fkb12v36区。
21.在一些实施方式中，所述截短的myd88多肽具有氨基酸序列seq id no：21或其功
能片段。
22.在特定的实施方式中，所述cd40胞质多肽包含氨基酸序列seq id no：23或其功能片段。
23.在本文提供的任一种方法的一些实施方式中，所述psca
‑
car多肽包括抗原识别部分、跨膜区、和t细胞活化分子。在特定的实施方式中，所述抗原识别部分来自选自1g8、2a2、2h9、3c5、3e6、3g3、4a10、和a11的psca抗体，其中1g8、2a2、2h9、3c5、3e6、3g3、和4a10分别由命名为hb
‑
12612、hb
‑
12613、hb
‑
12614、hb
‑
12616、hb
‑
12618、hb
‑
12615、和hb
‑
12617的杂交瘤产生，保存在美国典型培养物保藏中心。
24.在一些实施方式中，所述抗原识别部分包含选自seq id no：65、67、69、和71的氨基酸序列的重链可变结构域和轻链可变结构域的互补决定区(cdr)。
25.在其他的实施方式中，所述抗原识别部分包含可变重链氨基酸序列和可变轻链氨基酸序列，其选自seq id no：51和49；seq id no：55和53；seq id no：57和59；和seq id no：61和63。
26.在另外的实施方式中，所述抗原识别部分是包含seq id no：49的可变轻链氨基酸序列和seq id no：51的可变重链氨基酸序列的单链可变区(scfv)。
27.在一些实施方式中，所述抗原识别部分是包含seq id no：53的可变轻链氨基酸序列和seq id no：55的可变重链氨基酸序列的scfv。
28.在其他的实施方式中，所述抗原识别部分是包含seq id no：57的可变轻链氨基酸序列和seq id no：59的可变重链氨基酸序列的scfv。
29.在另外的实施方式中，所述抗原识别部分是包含seq id no：61的可变轻链氨基酸序列和seq id no：63的可变重链氨基酸序列的scfv。
30.在一些实施方式中，所述抗原识别部分是包含seq id no：65的可变轻链氨基酸序列和seq id no：67的可变重链氨基酸序列的scfv。
31.在其他的实施方式中，所述抗原识别部分是包含seq id no：69的可变轻链氨基酸序列和seq id no：71的可变重链氨基酸序列的scfv。
32.在另一方面，本发明提供包含修饰的和未修饰的t细胞的异质性t细胞群，其中修饰的t细胞包含a)编码诱导型myd88/cd40多肽的第一多核苷酸和b)编码psca
‑
car多肽的第二多核苷酸。
33.在一些实施方式中，约20％至约90％的t细胞是修饰的t细胞。在一些实施方式中，约20％至约80％的t细胞是修饰的t细胞。在一些实施方式中，约20％至约70％的t细胞是修饰的t细胞。在一些实施方式中，约20％至约60％的t细胞是修饰的t细胞。在一些实施方式中，约20％至约50％的t细胞是修饰的t细胞。
34.在一些实施方式中，所述t细胞群悬浮在冷冻培养基中。在特定的实施方式中，本文提供的t细胞群是冷冻保存的t细胞群。
35.在一些实施方式中，本文提供的t细胞群在适于输注到对象的稀释液中包含约20
×
106至150
×
106个细胞/毫升。在其他实施方式中，本文提供的t细胞群在适于输注到对象的稀释液中包含约20
×
106至120
×
106个细胞/毫升。
36.在一些实施方式中，本文提供的t细胞群包含含有编码第一多核苷酸的诱导型myd88/cd40多肽的修饰的t细胞，且诱导型myd88/cd40多肽包含
37.i)两个多聚体配体结合区；
38.ii)缺乏tir结构域的myd88多肽或截短的myd88多肽；以及iii)缺乏cd40胞外结构域的cd40胞质多肽区。
39.在一些的实施方式中，每个多聚体配体结合区包含一个fkbp12变体多肽。在其他的实施方式中，每个fkbp12变体多肽与野生型fkbp12多肽相比对多聚体配体以较高亲和力结合。在特定的实施方式中，每个fkbp12变体多肽包含36位的氨基酸取代，其与野生型fkbp12多肽相比对多聚体配体以较高亲和力结合。在一些的实施方式中，36位的氨基酸取代选自缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、和丙氨酸。在一些实施方式中，每个多聚体配体结合区是fkb12v36区。
40.在一些实施方式中，本文提供的t细胞群包含含有编码第一多核苷酸的诱导型myd88/cd40多肽的修饰的t细胞，且诱导型myd88/cd40多肽包含
41.i)两个多聚体配体结合区；
42.ii)缺乏tir结构域的myd88多肽或截短的myd88多肽；以及
43.iii)缺乏cd40胞外结构域的cd40胞质多肽区，且截短的myd88多肽具有氨基酸序列seq id no：21、或其功能片段。在具体的实施方式中，所述截短的myd88多肽由氨基酸序列seq id no：21组成。
44.在一些实施方式中，本文提供的t细胞群包含含有编码第一多核苷酸的诱导型myd88/cd40多肽的修饰的t细胞，且诱导型myd88/cd40多肽包含
45.i)两个多聚体配体结合区；
46.ii)缺乏tir结构域的myd88多肽或截短的myd88多肽；以及
47.iii)缺乏cd40胞外结构域的cd40胞质多肽区，
48.并且所述cd40胞质多肽包含氨基酸序列seq id no：23或其功能片段。在一些的实施方式中，所述cd40胞质多肽由氨基酸序列seq id no：23或其功能片段组成。
49.在一些实施方式中，本发明提供包含修饰的和未修饰的t细胞的异质性t细胞群，其中修饰的t细胞包含a)编码诱导型myd88/cd40多肽的第一多核苷酸和b)编码psca
‑
car多肽的第二多核苷酸，并且psca
‑
car多肽包括抗原识别部分、跨膜区、和t细胞活化分子。在特定的实施方式中，所述抗原识别部分来自选自1g8、2a2、2h9、3c5、3e6、3g3、4a10、和a11的psca抗体，其中1g8、2a2、2h9、3c5、3e6、3g3、和4a10分别由命名为hb
‑
12612、hb
‑
12613、hb
‑
12614、hb
‑
12616、hb
‑
12618、hb
‑
12615、和hb
‑
12617的杂交瘤产生，保存在美国典型培养物保藏中心。
50.在一些实施方式中，所述抗原识别部分包含选自seq id no：65、67、69、和71的氨基酸序列的重链可变结构域和轻链可变结构域的互补决定区(cdr)。在其他的实施方式中，所述抗原识别部分包含可变重链氨基酸序列和可变轻链氨基酸序列，其选自seq id no：51和49；seq id no：55和53；seq id no：57和59；和seq id no：61和63。在一些实施方式中，所述抗原识别部分是包含seq id no：49的可变轻链氨基酸序列和seq id no：51的可变重链氨基酸序列的scfv。在一些实施方式中，所述抗原识别部分是包含seq id no：53的可变轻链氨基酸序列和seq id no：55的可变重链氨基酸序列的scfv。在一些实施方式中，所述抗原识别部分是包含seq id no：57的可变轻链氨基酸序列和seq id no：59的可变重链氨基酸序列的scfv。在一些实施方式中，所述抗原识别部分是包含seq id no：61的可变轻链氨
基酸序列和seq id no：63的可变重链氨基酸序列的scfv。在一些实施方式中，所述抗原识别部分是包含seq id no：65的可变轻链氨基酸序列和seq id no：67的可变重链氨基酸序列的scfv。在一些实施方式中，所述抗原识别部分是包含seq id no：69的可变轻链氨基酸序列和seq id no：71的可变重链氨基酸序列的scfv。
附图说明
51.附图说明了该技术的某些实施方式并且不是限制性的。为了清楚和易于说明，附图没有按比例绘制，并且在一些情况下，可以夸大或放大显示各个方面以促进对特定实施方式的理解。
52.图1示出了肿瘤组织中的psca表达。
53.图2示出了一个包含诱导型myd88/cd40组件和抗
‑
psca car组件的逆转录病毒载体构建体。q，cd34。
54.图3示出了诱导型myd88/cd40的图示。myd88和cd40信号传导通路被共同选择以产生诱导型共刺激。ifn，干扰素；imc，诱导型myd88/cd40；tir，toll/白介素
‑
1受体；tlr，toll样受体。
55.图4示出了用诱导型共刺激工程改造的t细胞(即，诱导型myd88/cd40psca car
‑
t细胞)的图示。细胞特性包括：自体t细胞产品候选；通过psca
‑
cd3ζcar进行抗原特异性激活；和通过诱导型myd88/cd40结构域的利米多塞依赖性共刺激。car，嵌合抗原受体；imc，诱导型myd88/cd40；psca，前列腺干细胞抗原；rim，利米多塞；tcr，t细胞受体。
56.图5a
‑
5b示出了在携带hpac的nsg小鼠中诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞的剂量依赖性肿瘤杀伤。图5a：在以指定剂量注射非转导细胞或诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞后随时间测量的肿瘤体积。红色箭头表示适用剂量组的利米多塞注射液。图5b：以指定剂量注射非转导细胞或诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞后的存活率。cid＝利米多塞；nt＝非转导t细胞。
57.图6示出了支持前列腺干细胞抗原(psca)目标原理的数据。gpi，糖基磷脂酰肌醇；hactb，人β
‑
肌动蛋白；loq，定量极限。
58.图7示出了细胞剂量研究设计(即，使用诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞)的图示。研究第1部分的目标包括：安全性、耐受性、mtd和/或rde(用于第2部分的)。mtd，最大耐受剂量；psca，前列腺干细胞抗原；rde，推荐剂量扩大。
59.图8提供了显示患者人口统计和临床特征的表格。*在第3天通过静脉输注1g/m
2 cytoxan；psca(每106个拷贝的hactb的拷贝数)，在筛选时测量。
60.ctx，环磷酰胺；hactb，人β
‑
肌动蛋白；ld，淋巴耗竭；psca，前列腺干细胞抗原；rim，利米多塞。
61.图9示出了安全性总结。未观察到dlt、神经毒性或细胞因子释放综合征事件。发热是＞1名患者(n＝2)报告的唯一与治疗相关的ae(输注诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞后第0天的1
‑
2级)。在支持性护理下，这两个事件均在24
‑
36小时内得到解决。ae＝不良事件；dlt＝剂量限制性毒性。
62.图10显示了诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞的扩增和持久性。观察结果包括：仅使用环磷酰胺(ctx)方案的淋巴耗竭(ld)的有限证据(留存79％
±
25％的细胞)；到第4天
时细胞快速扩增，但没有利米多塞则没有持久性；使用单剂量利米多塞，4名患者在7天内细胞扩增3至20倍，3名患者的细胞持续时间超过3周。*载体拷贝数＜定量极限。ctx，环磷酰胺；ld，淋巴耗竭；psca，前列腺干细胞抗原；rim，利米多塞。
63.图11示出了随时间变化的外周细胞因子谱。rim，利米多塞。
64.图12示出了用诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞治疗的患者中抗肿瘤活性的证据。在第4周(第1个月)、第8周(第2个月)和此后每8周(每2个月)进行扫描，直至进展。ca19
‑
9，癌抗原19
‑
9；cr，完全响应；pd，进行性疾病；pr，部分响应；psca，前列腺干细胞抗原；sd，稳定的疾病。
65.图13示出了用诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞治疗的患者中抗肿瘤活性的证据。psca，前列腺干细胞抗原。
66.图14示出了在给予诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞后至下一次治疗的时间。pd，进行性疾病；假性pd，假性进展，疾病进展；sd，稳定的疾病。
67.详细描述
68.前列腺干细胞抗原(psca)是一种糖基磷脂酰肌醇锚定的细胞表面蛋白，具有123个氨基酸。虽然psca在前列腺、膀胱、肾脏、皮肤、食道、胃、眼部和胎盘的正常上皮细胞中表达较低，psca在胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌和膀胱癌中上调(图1；abate
‑
daga d 2014hum gene ther 25:1003
‑
1012)。psca的表达与前列腺癌的晚期临床分期和转移呈正相关(saeki n 2010cancer res 16：3533
‑
3538)。
69.具有显著未满足医疗需求的表达psca的实体瘤胰腺癌
70.胰腺癌是美国癌症相关死亡的第四大常见原因(siegel rl 2017ca cancer j clin 67：7
‑
30)。由于生存率低，死于胰腺癌的人群分布与确诊患者相似。预计2018年将有55,440人被确诊为胰腺癌，约44,330人将死于胰腺癌(seer pancreatic cancer 2018，于2018年5月14日访问自https://seer.cancer.gov/statfacts/html/prost.html)。放射成像、肝功能检测和循环肿瘤生物标记物(ca 19
‑
9)水平是用于诊断和分期的主要手段。
71.手术切除是治疗可切除和临界可切除的胰腺癌的唯一潜在治愈疗法。然而，这种疾病在这些早期阶段通常很难被发现，许多患者直到疾病已经发展到不可切除的状态，变得局部晚期或远处转移时才被诊断出来。对于先前未经治疗、局部晚期或转移性疾病且身体状况良好的对象，联合化疗仍然是标准的治疗方法。尽管随机临床试验显示folfirinox和吉西他滨联合白蛋白结合型紫杉醇作为一线治疗具有生存优势，但中位总生存期仍少于12个月，并且与治疗相关的严重毒性(特别是骨髓抑制和周围神经病变)很常见。这些数据强调了需要开发超越当前护理标准的安全有效的二线疗法；后者仅限于单药化疗或姑息治疗(conroy t 2011n engl j med 364：1817
‑
1825,von hoff dd 2013n engl j med 369：1691
‑
1703)。
72.前列腺癌
73.前列腺癌是美国男性中最常见的非皮肤癌(litwin ms 2017jama 317：2532
‑
2542)。2018年，大约165,000名男性将被诊断出患有前列腺癌，这是男性癌症死亡的第二大原因，估计年死亡率为29,000(siegel rl 2017ca cancer j clin 67：7
‑
30)。诊断通常通过超声引导的针活检进行。使用格里森系统对组织学模式进行评分。
74.对于患有转移性前列腺癌的男性，有或没有多西他赛(docetaxel)的雄激素剥夺
疗法(adt)是一线治疗(sweeney cj 2015n engl j med 373:737
‑
746.，james nd 2016lancet 387：1163
‑
1177，litwin ms 2017jama 317：2532
‑
2542)。在转移性前列腺癌对adt无反应的患者中，其他阻断雄激素通路的药物(阿比特龙(abiraterone)、恩杂鲁胺(enzalutamide))可能会减缓疾病进展、提高生存率和生活质量(de bono js 2011n engl j med 364：1995
‑
2005,scher h 2012n engl j med 367：1187
‑
1197,ryan cj 2013n engl j med 368:138
‑
148.,beer tm 2014n engl j med 371：424
‑
433)。其他药物如sipuleucel
‑
t(一种自体细胞疗法)(kantoff pw2010,schellhammer pf 2013urology 81：1297
‑
1302)和卡巴他赛(cabazitaxel)(一种紫杉烷)(de bono js 2011n engl j med 364：1995
‑
2005)也可用于治疗。其他药物如地诺单抗(denosomab)、唑来膦酸(zoledronic acid)或223镭可用于预防骨转移和骨骼相关事件(beer tm 2014n engl j med 371：424
‑
433,parker c 2013n engl j med 369：1659
‑
1660)。虽然随着这些疗法的出现有所改善，但复发性转移性前列腺癌患者的生存率受到限制。化疗后复发患者的总生存率为14.0至18.4个月。
75.胃癌
76.胃癌是全球第四大常见癌症，也是全球癌症相关死亡的第二大原因。每年有超过950,000个新病例。2012年，估计有720,000名患者死于胃癌(ferlay j 2015int j cancer 136：e359
‑
e386)。胃癌分为胃腺癌和胃食管交界处腺癌。在组织学上，胃癌分为两种主要类型，弥漫性和肠癌。幽门螺杆菌(h.pylori)感染是远端胃癌的最重要原因(bornschein j 2010dig dis 28：609
‑
614)。
77.胃癌的治疗选择取决于治疗环境，包括手术、放疗、化疗，以及最近的单克隆抗体靶向治疗和免疫治疗。对于转移性胃癌患者，联合化疗、特别是5
‑
氟尿嘧啶加铂，已被确立为标准的一线治疗(kim nk 1993cancer 71：3813
‑
3818，ohtsu s 2003j clin oncol 21：54
‑
59，van cutsem e 2006j clin oncol 24：4991
‑
4997)。虽然主要治疗目标是延长生存期、缓解症状和改善生活质量，但所有患者最终都会经历疾病进展，有或没有临床显著的治疗相关毒性。对于那些继续接受二线和后期治疗的患者，亚洲临床试验的结果表明，与最佳支持性护理相比，化疗可提高生存获益(takashima a 2014gastric cancer 17：522
‑
528)。尽管有这些疗效益处，但一线治疗后的化疗使用通常仅限于身体状况良好的患者。这凸显了开发额外的后线治疗方案的重要性，这些方案不仅可以改善治疗结果和延长生存期，还可以保持所有晚期胃癌患者的生活质量。
78.psca特异性car
‑
t细胞
79.psca特异性car
‑
t细胞(例如，诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞)是针对psca的、经基因修饰的t细胞，其与表达psca的细胞结合。
80.带有第一代嵌合抗原受体(car)的t细胞(其包括肿瘤抗原特异性单链可变片段(scfv)结构域和t细胞受体(tcr)相关的cd3ζ细胞内信号分子)无法在体内持续存在或扩增(kershaw,m.h.等(2006)clinical cancer research：an official journal of the american association for cancer research 12：6106
‑
6115；pule,m.a.等(2008)nature med.14：1264
‑
1270；till,b.g.等(2012)blood 119：3940
‑
3950)，因为肿瘤细胞通常缺乏完全t细胞激活所必需的共刺激分子(inman,b.a.,等(2007)current cancer drug targets 7：15
‑
30)。包含有效细胞内共刺激结构域(如cd28或4
‑
1bb)(carpenito，c.等(2009)
proc.natl.acad.sci.usa 106：3360
‑
3365；song，d.g.等(2012)blood 119：696
‑
706)的第二代car
‑
t细胞在过继转移后显示出改善的存活率和体内扩增(kalos，m.等(2011)science translational medicine 3：95ra73；porter，d.l.，et al.(2011)the new eng.j.med.365：725
‑
733；brentjens，r.j.等(2013)science translational medicine 5：177ra138；kochenderfer，j.n.等(2015)j.clin.oncol.33(6)：540
–
549)。表达car的t细胞已显示出治疗某些类型癌症的长期疗效，但是，与过度t细胞激活相关的毒性、如细胞因子释放综合征(crs)仍然是一个问题。此外，由于car
‑
t细胞的存活、激活和增殖较差，car
‑
t细胞在实体瘤中的疗效更加有限，这想来是由于肿瘤微环境的抑制作用更显著(jena，b.，等(2014)current hematologic malignancy reports 9：50
‑
56；dotti，g.，等(2014)immunological reviews 257：107
‑
126)。因此，允许肿瘤靶向t细胞受控扩增和存活的策略将最大限度地提高治疗效力，同时将毒性最小化。
81.car
‑
t细胞的抗肿瘤活性与输注后强大的car
‑
t细胞扩增有关，这通常与毒性(即，严重的细胞因子释放综合征和神经毒性)有关，而car
‑
t增殖和持久性较差的患者显示出持久缓解率降低。在本文的实施例中，证明来自诱导型嵌合刺激多肽(例如诱导型myd88/cd40(imc))的可控信号传导可以增强car
‑
t存活、增殖能力和抗肿瘤活性。
82.t细胞(也称为t淋巴细胞)属于一组被称为淋巴细胞的白细胞。淋巴细胞通常参与细胞介导的免疫。“t细胞”中的“t”是指源自胸腺或其成熟受胸腺影响的细胞。通过称为t细胞受体的细胞表面蛋白的存在，可以将t细胞与其他淋巴细胞类型(如b细胞和自然杀伤(nk)细胞)区分开来。如本文所用，术语“活化的t细胞”是指通过识别抗原决定簇，例如在ii类主要组织相容性(mhc)标记物的背景下呈现的，已被刺激以产生免疫应答(例如，活化t细胞的克隆扩增)的t细胞。t细胞通过抗原决定簇、细胞因子和/或淋巴因子和分化细胞表面蛋白簇(例如cd3、cd4、cd8等及其组合)的存在而被激活。表达分化蛋白簇的细胞通常被认为对该蛋白在t细胞表面的表达呈“阳性”(例如，cd3、cd4或cd8表达阳性的细胞称为cd3+、cd4+或cd8+)。cd3和cd4蛋白是细胞表面受体或共受体，可直接和/或间接参与t细胞的信号传导。
83.t细胞在其表面表达受体(即，t细胞受体)，识别细胞表面呈递的抗原。在正常的免疫应答过程中，这些抗原与t细胞受体结合，在mhc抗原呈递的背景下，启动导致t细胞活化的细胞内变化。嵌合抗原受体(car)是人工受体，旨在将抗原特异性传递给t细胞，而不需要mhc抗原呈递。它们包括抗原特异性成分、跨膜成分和经选择以活化t细胞并提供特异性免疫的细胞内成分。表达嵌合抗原受体的t细胞可用于各种疗法，包括癌症疗法。
[0084]“嵌合抗原受体”或“car”是指，例如，包含识别靶抗原的多肽序列(抗原识别结构域、抗原识别区、抗原识别部分或抗原结合区)的嵌合多肽，所述多肽序列与被选择以活化t细胞并提供特异性免疫的跨膜多肽和胞内结构域多肽连接。抗原识别结构域可以是与抗原结合的任何多肽或其片段，例如天然衍生的或合成的抗体片段可变结构域。抗原识别部分的实例包括但不限于源自抗体的多肽，例如单链可变片段(scfv)、fab、fab’、f(ab’)2和fv片段；源自t细胞受体的多肽，例如tcr可变结构域；源自模式识别受体的多肽，以及与细胞外同源蛋白结合的任何配体或受体片段。
[0085]“t细胞活化分子”是指当并入表达嵌合抗原受体的t细胞时增强t细胞活化的多肽。实例包括但不限于含有itam的信号1赋予分子，例如cd3ζ(cd3 zeta；cd247)多肽和fc受
体γ，例如fcε受体γ(fcεr1γ)亚基(haynes,n.m.,et al.j.immunol.166:182
‑
7(2001))。胞内结构域可包含至少一种引起t细胞活化的多肽，例如但不限于cd3ζ。
[0086]
在一些实施方式中，嵌合抗原受体(car)的基本组件包括以下。肿瘤特异性单克隆抗体的可变重(vh)和轻(vl)链与来自t细胞受体复合物的cd3ζ链(ζ)框内融合。vh和vl通常使用柔性的甘氨酸
‑
丝氨酸接头连接在一起，然后通过间隔物(例如，cd8a杆(stalk)或ch2ch3)连接到跨膜结构域，将scfv延伸远离细胞表面，使其可以与肿瘤抗原相互作用。
[0087]
在一些实施方式中，psca特异性car
‑
t细胞用包含传统cd3ζ胞质信号传导结构域以及人源化psca抗体的单链可变区结构域(scfv)的第一代car构建体靶向psca。在一些实施方式中，抗psca car被工程改造成表达由两个fk结合蛋白(fkbp)与来自myd88和cd40的信号传导结构域(诱导型myd88/cd40或imc)在框内构成的诱导型双重共刺激结构域。
[0088]
在一些实施方式中，单链可变区结构域(scfv)可来自选自1g8、2a2、2h9、3c5、3e6、3g3和4a10的psca抗体，它们分别由命名为hb
‑
12612、hb
‑
12613、hb
‑
12614、hb
‑
12616、hb
‑
12618、hb
‑
12615、和hb
‑
12617的杂交瘤产生，如保存在美国典型培养物保藏中心的，并且例如由reiter，r.e.等2009年5月5日在美国专利号7,527,786中公告、2003年6月19日在us 2003
‑
0113810 a1中公布，其全部内容以引用方式并入本文。
[0089]
在一些实施方式中，单链可变区结构域(scfv)可源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0090]
在一些实施方式中，psca特异性car
‑
t细胞用第一代car构建体靶向psca，该第一代car构建体包含传统的cd3ζ胞质信号传导结构域以及分别含有可变重链和可变轻链a11 vl(seq id no：49)与a11 vh(seq id no：51)的单链可变区结构域(scfv)。在一些实施方式中，包含可变重链和可变轻链a11vl(seq id no：49)和a11 vh(seq id no：51)的抗psca car被工程改造成表达由两个fk结合蛋白(fkbp)与来自myd88和cd40的信号传导结构域(诱导型myd88/cd40或imc)在框内构成的诱导型双重共刺激结构域。
[0091]
在一些实施方式中，psca特异性car
‑
t细胞用第一代car构建体靶向psca，该第一代car构建体包含传统的cd3ζ胞质信号传导结构域以及分别含有可变重链和可变轻链bm2b3 vl(seq id no：53)和bm2b3 vh(seq id no：55)的单链可变区结构域(scfv)。在一些实施方式中，包含可变重链和可变轻链bm2b3 vl(seq id no：53)和bm2b3 vh(seq id no：55)的抗psca car被工程改造成表达由两个fk结合蛋白(fkbp)与来自myd88和cd40的信号传导结构域(诱导型myd88/cd40或imc)在框内构成的诱导型双重共刺激结构域。
[0092]
在一些实施方式中，psca特异性car
‑
t细胞用第一代car构建体靶向psca，该第一代car构建体包含传统的cd3ζ胞质信号传导结构域以及分别含有可变重链和可变轻链ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)和hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)的单链可变区结构域(scfv)。在一些实施方式中，包含可变重链和可变轻链ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)和hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)的抗psca car被工程改造成表达由两个fk结合蛋白(fkbp)与来自myd88和cd40的信号传导结构域(诱导型myd88/cd40或imc)在框内构成的诱导型双重共刺激结构
域。
[0093]
在一些实施方式中，psca特异性car
‑
t细胞用第一代car构建体靶向psca，该第一代car构建体包含传统的cd3ζ胞质信号传导结构域以及分别含有可变重链和可变轻链h1
‑
1.10vh(seq id no：61)和h1
‑
1.10vl(seq id no：63)的单链可变区结构域(scfv)。在一些实施方式中，包含可变重链和可变轻链h1
‑
1.10vh(seq id no：61)和h1
‑
1.10vl(seq id no：63)的抗psca car被工程改造成表达由两个fk结合蛋白(fkbp)与来自myd88和cd40的信号传导结构域(诱导型myd88/cd40或imc)在框内构成的诱导型双重共刺激结构域。
[0094]
在一些实施方式中，psca特异性car
‑
t细胞用第一代car构建体靶向psca，该第一代car构建体包含传统的cd3ζ胞质信号传导结构域以及分别含有可变重链和可变轻链1g8(2b3)(seq id no：65)和1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)的单链可变区结构域(scfv)。在一些实施方式中，包含可变重链和可变轻链1g8(2b3)(seq id no：65)和1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)的抗psca car被工程改造成表达由两个fk结合蛋白(fkbp)与来自myd88和cd40的信号传导结构域(诱导型myd88/cd40或imc)在框内构成的诱导型双重共刺激结构域。
[0095]
在一些实施方式中，psca特异性car
‑
t细胞用第一代car构建体靶向psca，该第一代car构建体包含传统的cd3ζ胞质信号传导结构域以及分别含有可变重链和可变轻链1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)的单链可变区结构域(scfv)。在一些实施方式中，包含可变重链和可变轻链1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)的抗psca car被工程改造成表达由两个fk结合蛋白(fkbp)与来自myd88和cd40的信号传导结构域(诱导型myd88/cd40或imc)在框内构成的诱导型双重共刺激结构域。
[0096]
共刺激
[0097]
在一些实施方式中，本文提供包含car
‑
t细胞群的组合物和方法，该car
‑
t细胞群包含诱导型嵌合刺激多肽。诱导型嵌合刺激多肽可包括一个或多个共刺激信号传导区，如cd27、icos、rank、trance、cd28、4
‑
1bb、ox40、dap10、myd88、或cd40，或例如其胞质区。诱导型嵌合刺激多肽可包括一个或多个合适的共刺激信号传导区，其活化由cd27、icos、rank、trance、cd28、4
‑
1bb、ox40、dap10、myd88、或cd40活化的信号通路。诱导型嵌合刺激多肽可包括肿瘤坏死因子受体(tnfr)家族(即，cd40，rank/trance
‑
r，ox40，4
‑
1bb)和cd28家族成员(cd28，icos)的激活nf
‑
κb通路、akt通路和/或p38通路的任何多肽。一种以上的共刺激多肽或共刺激多肽胞质区可以在本文讨论的修饰的t细胞中表达。
[0098]
myd88和cd40提供的共刺激
[0099]
在一些实施方式中，本文提供的car t细胞群包含诱导型嵌合刺激多肽。诱导型嵌合刺激多肽可包括一个或多个共刺激信号传导区，其活化由cd27、icos、rank、trance、cd28、4
‑
1bb、ox40、dap10、myd88、或cd40活化的信号通路。
[0100]
第二代car的主要功能之一是通过cd3ζ激活活化的t细胞核因子(nfat)转录因子(信号1)、和通过cd28或4
‑
1bb.32激活nf
‑
κb(信号2)，从而产生支持t细胞存活和生长的il
‑
2的能力。其他类似的激活nf
‑
κb的分子也可能与car分子内的cd3ζ链配对。一种方法使用t细胞共刺激分子，该分子最初是作为树突细胞(dc)疫苗的佐剂开发的(narayanan等(2011)j clin invest 121：1524
‑
1534；kemnade等(2012)mol ther 20(7)：1462
‑
1471)。对于dc的完全激活或许可，通常涉及toll样受体(tlr)信号传导。在tlr信号传导中，tlr的胞质tlr/
il
‑
1结构域(称为tir结构域)二聚化，导致细胞质衔接蛋白(例如骨髓分化初级反应蛋白)的募集和结合(myd88；全长氨基酸序列参见seq id no：29或seq id no：47，编码它的核苷酸序列参见seq id no：30或seq id no：48)。
[0101]
在一些实施方式中，本文描述的car t细胞群包括诱导型嵌合刺激多肽，其包含一个或多个活化被myd88、cd40和/或myd88
‑
cd40融合嵌合多肽激活的信号传导通路的共刺激信号传导区。
[0102]
myd88是tlr的通用衔接体分子，也是先天免疫系统的关键信号传导成分，可触发对外来入侵者的警报，启动免疫细胞的募集和活化。myd88是一种胞质衔接体蛋白，在先天性和适应性免疫应答中起着核心作用。这种蛋白质在白介素
‑
1和toll样受体信号通路中作为一种重要的信号传导器起作用。这些通路调节数种促炎基因的活化。编码的蛋白质由n端死亡结构域和c端toll
‑
白介素
‑
1受体结构域组成。myd88 tir结构域能够与tlr异二聚化并与其他myd88蛋白同二聚化。这反过来通过myd88和irak激酶氨基末端的死亡结构域(dd)的相互作用导致irak家族激酶的募集和激活，从而启动导致jnk、p38 mapk(丝裂原活化蛋白激酶)和nf
‑
κb(一种诱导细胞因子和趋化因子编码基因(及其他基因)表达的转录因子)活化的信号通路。myd88通过irak1、irak2、irf7和traf6起作用，导致nf
‑
κb活化、细胞因子分泌和炎症反应。其还活化irf1，导致其快速迁移到细胞核中，以介导ifn
‑
β、nos2/inos和il12a基因的有效诱导。myd88介导的肠上皮细胞信号传导对于维持肠道稳态和控制小肠中抗菌凝集素reg3g的表达至关重要。tlr信号传导还上调cd40的表达，cd40是肿瘤坏死因子受体(tnfr)家族的成员，它与抗原引发的cd4
+
t细胞上的cd40配体(cd154或cd40l)相互作用。
[0103]
cd40是适应性免疫响应的重要组成部分，通过与其同源cd40l结合来帮助活化apc，进而极化更强的ctl响应。cd40/cd154信号传导系统是t细胞功能和b细胞
─
t细胞相互作用的重要组成部分。cd40信号传导通过cd40同源二聚体的形成和与tnfr相关因子(traf)的相互作用进行，通过将traf募集到cd40的胞质结构域来进行，这会导致涉及多种次级信号如nf
‑
κb、jnk和akt通路的t细胞活化。
[0104]
除了存活和生长优势外，基于myd88或myd88
‑
cd40融合嵌合多肽的共刺激还可以为car修饰的t细胞提供额外的功能。myd88信号传导对th1和th17响应至关重要，并通过il
‑
1发挥作用，使cd4
+
t细胞对调节性t细胞(treg)驱动的抑制产生耐性(参见，例如，schenten等(2014)immunity 40:78
‑
90)。此外，cd8
+
t细胞中通过ras、pi3k和蛋白激酶c的cd40信号传导导致细胞毒性介质颗粒酶和穿孔素的nf
‑
κb依赖性诱导，从而裂解cd4
+
cd25
+
treg细胞(martin等(2010)j immunol 184：5510
‑
5518)。因此，myd88和cd40的共活化可能会使car
‑
t细胞对treg细胞的免疫抑制作用产生抵抗力，这一功能在实体瘤和其他类型癌症的治疗中可能至关重要。
[0105]
在免疫细胞(包括t细胞)中的myd88和cd40共同作用于下游转录因子，上调促炎细胞因子i型干扰素，并促进增殖和存活。连同来自car的cd3ζ的信号输入，myd88/cd40构成了一种强效的多效共刺激分子。在一些实施方式中，本文的技术提供了car t细胞群，其包括诱导型嵌合刺激多肽，其包含一个或多个活化被myd88、cd40和/或myd88
‑
cd40融合嵌合多肽激活的信号传导通路的共刺激信号传导区。合适的共刺激信号传导区的实例包括但不限于irak
‑
4、irak
‑
1、traf6、traf2、traf3、traf5、act、jak3、或其任意功能片段。
no：29或seq id no：47对应的全长myd88氨基酸序列。在本文提供的实施方式中，缺乏胞外结构域的胞质cd40多肽可以位于myd88或截短的myd88多肽部分的上游或下游。
[0108]
术语“嵌合刺激多肽”可与“嵌合刺激分子”、“共刺激多肽”、“共刺激分子”、“嵌合共刺激分子”和“嵌合共刺激多肽”及其语法变体互换。
[0109]
术语“嵌合”、“融合”和“嵌合融合”在本文中可互换使用，指的是含有两个或更多个蛋白质(或两种或多种蛋白质中的一种或多种的一部分)的多肽，这些蛋白质已被连接以产生嵌合多肽。两种或多种蛋白质(或其部分)可以直接相互连接，其中一种蛋白质(或其部分)的末端氨基酸残基与另一种蛋白质(或其部分)的末端氨基酸残基直接结合，或者可以通过一个或多个中间元件(例如，一个或多个不属于任一蛋白质的一部分的氨基酸，例如接头或衔接子，或非氨基酸聚合物)连接。例如，由编码多聚化蛋白质(或其部分)与另一种蛋白质(例如，dna结合蛋白、转录激活蛋白、促凋亡蛋白或免疫细胞激活途径的蛋白质组分)或其部分的融合物的核酸产生的多肽可称为嵌合、融合或嵌合融合多肽。
[0110]
美国专利申请公开号us2016/0058857和国际专利申请公开号wo2018/208849讨论了在表达嵌合抗原受体的t细胞中通过myd88和cd40多肽以及通过包含共刺激多肽胞质信号传导区的嵌合信号传导多肽进行的共刺激，出于所有目的，其中的每一个都通过引用整体并入本文。
[0111]
可用于诱导细胞活化的嵌合多肽的非限制性实例、和用于诱导car
‑
t细胞活化的相关方法(包括例如表达构建体、构建载体的方法和活性或功能测定)也可以在以下专利和专利申请中找到：美国专利申请公开号us2014/0286987；国际专利申请公开号wo2014/151960；美国专利申请公开号us2016/0046700；国际专利申请公开号wo2015/123527；美国专利申请公开号us2004/0209836；美国专利号7,404,950；国际专利申请公开号wo2004/073641；美国专利申请公开号us2011/0033388；美国专利号8,691,210；国际专利申请公开号wo2008/049113；美国专利申请公开号us2014/0087468；美国专利号9,315,559；国际专利申请公开号wo2010/33949；美国专利申请公开号us2011/0287038；国际专利申请公开号wo2011/130566；美国专利申请公开号us2016/0175359；国际专利申请公开号wo2016/036746；国际专利申请公开号wo2016/100241；美国专利申请公开号us2017/0166877；国际专利申请公开号wo2017/106185；和国际专利申请公开号wo2018/208849，出于所有目的，其中的每一个均通过引用整体并入本文，包括所有文本、表格和附图。
[0112]
诱导型嵌合刺激多肽(例如，诱导型myd88/cd40(imc))可包括一个或多个配体结合区，包括例如一个或多个fkbp区。在一些实施方式中，诱导型嵌合刺激多肽(例如，诱导型myd88/cd40(imc))包括一个或多个fkbp12多肽。在一些实施方式中，诱导型嵌合刺激多肽(例如，诱导型myd88/cd40(imc))包括一个或多个合适的fkbp12变体多肽，包括与ap1903、或其他合成的同二聚体例如ap20187或ap2015结合的变体多肽。变体多肽可以包括例如具有选自缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和丙氨酸的36位的氨基酸取代的fkbp区(clackson t，等proc natl acad sci usa(1998)95：10437
‑
10442)。在一些实施方式中，诱导型嵌合刺激多肽(例如，诱导型myd88/cd40(imc))包括一个或多个fkbp12v36多肽。在一些实施方式中，诱导型嵌合刺激多肽(例如，诱导型myd88/cd40(imc))包括两个fkbp12v36多肽。
[0113]
ap1903，也称为利米多塞，(cas索引名称：2
‑
哌啶羧酸，1
‑
[(2s)
‑1‑
氧代
‑2‑
(3,4,5
‑
三甲氧基苯基)丁基]
‑
,1,2
‑
乙二基双[亚氨基(2
‑
氧代
‑
2,1
‑
乙二基)氧
‑
3,1
‑
亚苯基
[(1r)
‑3‑
(3,4
‑
二甲氧基苯基)亚丙基]]酯，[2s
‑
[1(r*),2r*[s*[s*[1(r*),2r*]]]]]
‑
(9ci)cas登记号：195514
‑
63
‑
7；分子式：c78h98n4o20分子量：1411.65)，是一种合成分子，已被证明对健康志愿者是安全的(iuliucci jd，等(2001)j clin pharmacol.41：870
‑
879)。
[0114]
如本文所用，术语“药学上或药理学上可接受的”是指当施用于动物或人时不产生不良反应、过敏反应或其他不良反应的分子实体和组合物。
[0115]
如本文所用，“药学上可接受的运载体”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。此类介质和试剂用于药物活性物质的用途是本领域公知的。除非任何常规介质或试剂与本文提供的载体或细胞不相容，否则考虑其在治疗组合物中的用途。也可将补充活性成分掺入组合物中。在一些实施方式中，所述对象是哺乳动物。
[0116]
工程改造表达构建体
[0117]
本文提供了表达本发明嵌合抗原受体和诱导型嵌合刺激多肽的表达构建体。
[0118]
如本文所用，术语“cdna”意指以信使rna(mrna)为模板制备的dna。与基因组dna或从基因组、非或部分加工的rna模板聚合的dna相比，使用cdna的优势在于cdna主要包含相应蛋白质的编码序列。有时会使用完整或部分基因组序列，例如最佳表达需要非编码区域或在反义策略中靶向非编码区域(如内含子)。
[0119]
如本文所用，术语“多肽”定义为氨基酸残基链，通常具有确定的序列。如本文所用，术语多肽可以与术语“蛋白质”互换使用。
[0120]
如本文所用，术语“表达构建体”或“转基因”定义为含有编码基因产物的核酸的任何类型的基因构建体，其中部分或全部能够转录的核酸编码序列能够被插入到载体中。转录物被翻译成蛋白质，但不一定如此。在特定的实施方式中，表达包括基因转录和mrna翻译成基因产物。在其他的实施方式中，表达仅包括编码目的基因的核酸的转录。术语“治疗构建体”也可用于指表达构建体或转基因。表达构建体或转基因可用作例如治疗过度增殖性疾病或病症例如癌症的疗法，因此表达构建体或转基因是治疗性构建体或预防性构建体。如本文所用的关于疾病、病症或病状的术语“治疗”是指预防和/或治疗。
[0121]
如本文所用，术语“表达载体”是指含有核酸序列的载体，该核酸序列编码能够转录的基因产物的至少一部分。在一些情况下，然后将rna分子翻译成蛋白质、多肽或肽。在其他情况下，例如，在反义分子或核酶的生产中，这些序列不会被翻译。表达载体可包含多种控制序列，其指特定宿主生物中可操作连接的编码序列的转录和可能的翻译所必需的核酸序列。除了支配转录和翻译的控制序列外，载体和表达载体还可以包含具有其他功能的核酸序列，这些将在下文讨论。
[0122]
在特定的实例中，编码嵌合抗原受体的多核苷酸与编码第二多肽的多核苷酸包含在相同的载体中，例如病毒或质粒载体。该第二多肽可以是例如嵌合信号传导多肽、诱导型共刺激多肽、诱导型嵌合刺激多肽，如本文所讨论的，或标记多肽。在这些实例中，构建体可以设计有一个启动子，该启动子可操作地连接到核酸，该核酸包含编码两个多肽的多核苷酸，通过2a多肽连接。在该实例中，第一和第二多肽在翻译过程中分开，产生两个多肽，或者在包括渗漏2a的实例中，产生一个或两个多肽。在其他实例中，两种多肽可以自同一载体分开表达，其中包含编码其中一种多肽的多核苷酸的每个核酸与单独的启动子可操作地连
接。在另外的其他实例中，一个启动子可以与两个多核苷酸可操作地连接，指导两个单独的rna转录物的产生，从而指导两个多肽的产生；在一个实例中，启动子可以是双向的，并且编码区可以在相反的方向5'
‑
3'。因此，本文讨论的表达构建体可包括至少一个、或至少两个启动子。
[0123]
在一些实施方式中，核酸构建体包含在病毒载体中。在特定的实施方式中，病毒载体是逆转录病毒载体。在特定的实施方式中，病毒载体是腺病毒载体或慢病毒载体。应理解，在一些实施方式中，细胞与病毒载体在体外接触，并且在一些实施方式中，细胞与病毒载体在体内接触。因此，可以将表达构建体插入载体、例如病毒载体或质粒。所提供方法的步骤可以使用任何合适的方法进行；这些方法包括但不限于在此描述的将核酸转导、转化或以其他方式向细胞提供核酸的方法。
[0124]
如本文所用，术语“基因”定义为功能性蛋白质、多肽或肽编码单位。应当理解，该功能术语包括基因组序列、cdna序列和较小的工程基因片段，它们表达或适合表达蛋白质、多肽、结构域、肽、融合蛋白和/或突变体。
[0125]
如本文所用，术语“多核苷酸”定义为核苷酸链。而且，核酸是核苷酸的聚合物。因此，如本文所用的核酸和多核苷酸是可互换的。核酸是多核苷酸，其可以水解成单体“核苷酸”。单体核苷酸可以水解成核苷。如本文所用，多核苷酸包括但不限于通过本领域可用的任何方法获得的所有核酸序列，包括但不限于重组手段、即从重组文库或细胞基因组中克隆核酸序列，使用普通克隆技术和pcr
tm
等，以及通过合成方式。而且，多核苷酸包括多核苷酸的突变，包括但不限于通过本领域公知的方法对核苷酸或核苷的突变。核酸可包含一个或多个多核苷酸。
[0126]“功能保守的变体”是其中给定氨基酸残基已被改变而不改变蛋白质或酶的整体构象和功能的蛋白质或酶，包括但不限于用具有相似特性(包括极性或非极性特征、大小、形状和电荷)的氨基酸替换氨基酸。许多公知的非遗传编码氨基酸的保守氨基酸取代是本领域公知的。其他非编码氨基酸的保守取代可以根据它们的物理特性与遗传编码氨基酸的特性相比较来确定。
[0127]
除了被标明为保守的氨基酸外，蛋白质或酶中的氨基酸可能不同，因此任何两种功能相似的蛋白质之间的蛋白质或氨基酸序列相似性百分比可能会有所不同,并且可以是例如根据比对方案确定的至少70％、至少80％、至少90％和至少95％。如本文所指，“序列相似性”是指核苷酸或蛋白质序列相关的程度。两个序列之间的相似性可以基于序列同一性和/或保守性百分比。本文的“序列同一性”是指两个核苷酸或氨基酸序列不变的程度。“序列比对”是指排列两个或多个序列以达到最大程度的同一性(并且，在氨基酸序列的情况下，指保守性)以评估相似程度的过程。许多用于比对序列和评估相似性/同一性的方法是本领域已知的，例如聚类方法，其中相似性基于megalign算法以及blastn、blastp和fasta。当使用这些程序中的任何一个时，可以选择导致最高序列相似性的设置。
[0128]
如本文所用，术语“启动子”定义为被细胞的合成机制或引入的合成机制识别的、启动基因的特异性转录所需要的dna序列。在一些实施方式中，所述启动子是发育调节启动子。如本文所用，术语“在转录控制下”或“可操作地连接”定义为启动子相对于核酸处于正确的位置和方向，以控制rna聚合酶的起始和基因的表达。在一些实例中，一种或多种多肽被称为“可操作地连接”。通常，术语“可操作地连接”是指启动子序列与第二序列功能性地
连接，其中启动子序列启动并介导对应于第二序列的dna的转录。
[0129]
用于控制感兴趣的多核苷酸序列表达的特定启动子被认为并不重要，只要它能够指导多核苷酸在靶细胞中的表达即可。因此，当靶向人类细胞时，多核苷酸序列编码区可以例如被置于能够在人类细胞中表达的启动子附近并在其控制下。通常，此类启动子可能包括人启动子或病毒启动子。可以选择适合用于表达本文提供的car和其他多肽的载体的启动子。
[0130]
在例如表达载体是逆转录病毒的各种实施方式中，合适启动子的一个例子是鼠莫洛尼白血病病毒启动子。在其他的实施方式中，启动子可以是例如(cmv)立即早期启动子、sv40早期启动子、劳斯肉瘤病毒长末端重复序列、β
‑
肌动蛋白、大鼠胰岛素启动子和3
‑
磷酸甘油醛脱氢酶，可用于获得目标编码序列的高水平表达。也考虑使用本领域众所周知的其他病毒或哺乳动物细胞或细菌噬菌体启动子来实现感兴趣的编码序列的表达，条件是表达水平足以用于给定目的。通过使用具有公知特性的启动子，可以优化转染或转化后目标蛋白质的表达水平和模式。
[0131]
选择启动子和其他调节元件，使得它们在所需细胞或组织中起作用。此外，该启动子列表不应被解释为详尽无遗或限制性的；与本文公开的启动子和方法相关联地使用其他启动子。
[0132]
本文讨论的核酸可包括一个或多个多核苷酸。在一些实施方式中，一个或多个多核苷酸可被描述为定位，或“是”另一多核苷酸的“5
’”
或“3
’”
，或以“5’到3’顺序”定位。在这些上下文中，参考5'到3'被理解为指核酸中多核苷酸编码区的方向，例如，其中第一个多核苷酸位于第二个多核苷酸的5'端并与编码不可切割接头多肽的第三个多核苷酸连接，翻译产物将产生由位于较大多肽氨基末端的第一个多核苷酸编码的多肽，其包含第一个、第三个和第二个多核苷酸的翻译产物。
[0133]
在一些实施方式中，两种或多种多肽、例如嵌合抗原受体、诱导型嵌合刺激多肽(例如，诱导型myd88/cd40(imc))、和/或另外的多肽可以使用两个分开的载体在细胞中表达。细胞可以与载体共转染或共转化，或者可以在不同时间将载体引入细胞。
[0134]
多肽的顺序可以不同，从氨基末端到羧基末端。例如，图2中呈现的和实施例1中讨论的载体组件的顺序可以变化。在一些实施方式中，诱导型嵌合刺激多肽组件的顺序可以变化。在一些实施方式中，嵌合抗原受体多肽组件的顺序可以变化。各种结构域的顺序可以使用例如本文讨论的方法来测定，以获得最佳表达和活性。
[0135]
在一些实施方式中，当表达构建体编码myd88多肽时，该多肽可以是全长myd88多肽的一部分。myd88或myd88多肽是指骨髓分化初级反应基因88的多肽产物，例如但不限于人类版本，作为ncbi gene id 4615引用。在一些实施方式中，表达构建体编码缺乏tir结构域的myd88多肽的部分。在一些实施方式中，表达构建体编码包含dd(死亡结构域)或dd和中间结构域的myd88多肽的一部分。“截短的”是指蛋白质不是全长的并且可能缺少例如结构域。例如，截短的myd88不是全长并且可以例如缺失tir结构域。在一些实施方式中，所述截短的myd88多肽具有氨基酸序列seq id no：21或其功能性等效片段。在一些实施方式中，所述截短的myd88多肽由核苷酸序列seq id no：22或其功能性等效片段编码。myd88多肽的功能性等效部分具有与seq id no:21的多肽基本上相同的刺激细胞内信号传导的能力，具有seq id no：21的多肽的至少50％、60％、70％、80％、90％、或95％的活性。在一些实施方式
中，表达构建体编码缺乏tir结构域的myd88多肽的一部分。编码“截短的myd88”的核酸序列是指编码截短的myd88多肽的核酸序列，该术语还可以指包括编码作为克隆人工产物添加的任何氨基酸(包括被编码作为接头的任何氨基酸)的部分的核酸序列。
[0136]
应理解，当方法或构建体指截短的myd88多肽时，也可使用该方法，或设计的构建体指另一种myd88多肽，例如全长myd88多肽。当方法或构建体指全长myd88多肽时，也可使用该方法，或设计的构建体指截短的myd88多肽。在其中嵌合多肽包含myd88多肽(或其部分)和cd40多肽(或其部分)的本文的方法中，嵌合多肽的myd88多肽可以位于cd40多肽的上游或下游。在特定的实施方式中，myd88多肽(或其部分)位于cd40多肽(或其部分)的上游。如本文所用，术语“功能等效物”当其涉及myd88或其部分时，例如是指刺激细胞信号传导应答的myd88多肽或编码这种myd88多肽的核酸。“功能等效物”是指，例如，缺乏tir结构域但能够刺激细胞信号传导应答的myd88多肽。
[0137]
可选择的标记物
[0138]
在特定的实施方式中，表达构建体包含核酸构建体，其表达通过在表达构建体中包含标记物而在体外或体内鉴定。这样的标记物将赋予细胞可识别的变化，从而允许容易地识别含有表达构建体的细胞。通常包含药物选择标记物有助于克隆和转化体的选择。例如，赋予新霉素、嘌呤霉素、潮霉素、dhfr、gpt、零霉素和组氨醇抗性的基因是有用的可选择的标记物。或者，使用酶、如单纯疱疹病毒胸苷激酶(tk)。还可以使用包含胞外、非信号传导结构域或各种蛋白质(例如cd34、cd19、lngfr)的免疫表面标记，从而为磁性或荧光抗体介导的分选提供一种简单的方法。所采用的可选择的标记物被认为并不重要，只要它能够与编码基因产物的核酸同时表达即可。可选择的标记物的其他例子包括例如报告基因如gfp、egfp、β
‑
gal或氯霉素乙酰转移酶(cat)。在特定的实施方式中，标记物蛋白质例如cd19用于选择用于输血的细胞，例如在免疫磁性选择中。如本文所讨论，cd19标记物不同于抗cd19抗体，或例如scfv、tcr或其他结合cd19的抗原识别部分。
[0139]
在特定的实施方式中，标记物多肽与诱导型嵌合刺激多肽连接。例如，标记物多肽可以通过多肽序列(如可切割的2a样序列)与诱导型嵌合刺激多肽连接。
[0140]
本文提供的car
‑
t细胞可以表达细胞表面转基因标记物，其存在于表达car的表达载体上，或者，在一些实施方式中，其存在于编码不同于car的蛋白质的表达载体上，如与car共表达的诱导型嵌合刺激多肽。
[0141]
在一个实施方式中，细胞表面转基因标记物是截短的cd19(δcd19)多肽(di stasi等(2011)supra)，其包含在氨基酸333处截短以去除大部分胞质内结构域的人cd19。胞外cd19结构域仍可被识别(例如在流式细胞术、facs或macs中)，但触发细胞内信号传导的可能性已降至最低。cd19通常由b细胞而非t细胞表达，因此选择cd19+t细胞可以将基因修饰的t细胞与未修饰的供体t细胞分开。
[0142]
在一些实施方式中，标记物多肽可以包括在多肽中，例如包括在由表达载体编码的car中以帮助分选细胞。在一些实施方式中，用于表达本文提供的嵌合抗原受体或诱导型嵌合刺激多肽的表达载体进一步包含编码16个氨基酸的cd34最小表位的多核苷酸。在一些实施方式中，cd34最小表位掺入cd8茎的氨基末端位置。
[0143]
接头多肽
[0144]
接头多肽包括例如可切割的和不可切割的接头多肽。不可切割的多肽可以包括例
如可以在myd88
‑
cd40嵌合多肽、myd88多肽、cd40多肽或共刺激多肽胞质信号传导区和嵌合抗原受体的cd3ζ部分之间可操作地连接的任何多肽。接头多肽包括例如由约2至约30个氨基酸组成的那些，(例如，弗林蛋白酶裂解位点，(ggggs)n)。在一些实施方式中，接头多肽由约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30个氨基酸组成。在一些实施方式中，接头多肽由约18至22个氨基酸组成。在一些实施方式中，接头多肽由约20个氨基酸组成。在一些实施方式中，可切割的接头包括被细胞群中修饰的细胞的外源酶切割的接头，例如由多核苷酸编码的酶，其通过转染或转导与编码接头的多核苷酸同时或不同时间引入细胞。在一些实施方式中，可切割的接头包括被细胞群中修饰的细胞的内源性酶切割的接头，包括例如在细胞中天然表达的酶和由细胞天然的多核苷酸编码的酶，例如溶菌酶。
[0145]
2a肽键跳跃序列
[0146]
2a样序列或“肽键跳跃”2a序列来自例如许多不同的病毒，包括例如来自东亚细亚病毒(thosea asigna)的序列。这些序列有时也被称为“肽键跳跃序列”。当这种类型的序列被置于顺反子内时，在两个要被分开的多肽之间，核糖体似乎跳过了肽键，在东亚细亚病毒序列的情况下；在羧基末端“p
‑
g
‑
p”的gly和pro氨基酸之间的键被省略。这可以留下两到三个多肽、例如诱导型嵌合刺激多肽和嵌合抗原受体、或例如标记多肽和诱导型嵌合刺激多肽。当使用该序列时，编码2a序列5'端的多肽可能会在羧基末端带有额外的氨基酸，包括gly残基和2a序列中的任何上游残基。编码2a序列的3'端的肽可能会在氨基末端带有额外的氨基酸，包括pro残基和2a序列之后的任何下游残基。在一些实施方式中，可切割的接头是源自猪捷申病毒
‑
1的2a多肽(p2a)。在一些实施方式中，2a共翻译序列是2a样序列。在一些实施方式中，2a共翻译序列是t2a(东亚细亚病毒2a)、f2a(口蹄疫病毒2a)、p2a(猪捷申病毒
‑
1 2a)、bmcpv 2a(胞质多角体病毒2a)、bmifv 2a(b.mori的软化病病毒2a)、或e2a(马鼻炎a病毒2a)。在一些实施方式中，2a共翻译序列是t2a
‑
gsg、f2a
‑
gsg、p2a
‑
gsg、或e2a
‑
gsg。在一些实施方式中，2a共翻译序列选自t2a、p2a和f2a。“可切割的接头”是指通过任何方式切割接头，包括例如非酶促方式，如肽跳跃、或酶促方式。(donnelly,ml 2001,j.gen.virol.82:1013
‑
25)。
[0147]
2a样序列有时是“渗漏的”，因为一些多肽在翻译过程中没有分离，而是在翻译后作为一个长多肽保留。关于渗漏接头原因的一种理论是，短2a序列有时可能不会折叠成促进核糖体跳跃所需的结构(“2a折叠”)。在这些情况下，核糖体可能不会错过脯氨酸肽键，从而产生融合蛋白。为了降低渗漏水平，从而减少形成的融合蛋白的数量，可以将gsg(或类似的)接头添加到2a多肽的氨基末端侧；gsg接头阻止新翻译多肽的二级结构自发折叠和破坏“2a折叠”。
[0148]
在特定的实施方式中，2a接头包括氨基酸序列seq id no：19。在特定的实施方式中，2a接头进一步包括在多肽氨基末端的gsg氨基酸序列，在其他的实施方式中，2a接头包括位于多肽氨基末端的gsgpr氨基酸序列。因此，对于“2a”序列，该术语可指本文所述实施例中的2a序列，或还可指本文所列的2a序列，在接头的氨基末端进一步包含gsg或gsgpr序列。
[0149]
在一些实施方式中，接头例如2a接头在约10、20、30、40、50、60、70、75、80、85、90、95、98或99％的嵌合抗原受体中被切割，即，嵌合抗原受体部分与嵌合myd88和cd40、myd88
多肽、cd40多肽或共刺激多肽胞质信号传导区如cd28、ox40、4
‑
1bb等分离。在其他实施方式中，2a接头在约75、80、85、90、95、98、或99％的嵌合抗原受体中被切割。在一些实施方式中，2a接头在约80
‑
99％的嵌合抗原受体中被切割。在一些实施方式中，2a接头在约90％的嵌合抗原受体中被切割。在一些实施方式中，组成型活性嵌合抗原受体多肽存在于修饰的细胞中，其中2a接头未被切割，即，嵌合抗原受体部分连接至嵌合myd88和cd40、myd88多肽、cd40多肽或共刺激多肽胞质信号传导区如cd28、ox40、4
‑
1bb等，代表嵌合抗原受体多肽的约1、2、5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80或90％。在其他实施方式中，2a接头在约5、10、15、20、或25％的嵌合抗原受体中没有被切割。在一些实施方式中，2a接头在约5
‑
20％的嵌合抗原受体中没有被切割。在一些实施方式中，2a接头在约10％的嵌合抗原受体中没有被切割。
[0150]
嵌合抗原受体
[0151]
抗原识别部分
[0152]“抗原识别部分”可以是与抗原结合的任何多肽或其片段，例如天然衍生的或合成的、与抗原结合的抗体片段可变结构域。抗原识别部分的实例包括但不限于源自抗体的多肽，例如单链可变片段(scfv)、fab、fab’、f(ab’)2和fv片段；源自t细胞受体的多肽，例如tcr可变结构域；可以人工融合到信号传导结构域(例如，“zytokines”)的分泌因子(例如，细胞因子、生长因子)，以及与细胞外同源蛋白结合的任何配体或受体片段(例如cd27、nkg2d)。组合文库还可用于鉴定与肿瘤相关靶标以高亲和力结合的肽。此外，“通用”car可以通过将亲和素与信号传导结构域融合并结合生物素化肿瘤靶向抗体、或通过使用fcγ受体/cd16与igg靶向肿瘤结合来制造。
[0153]
跨膜区
[0154]
本文的嵌合蛋白可包括单程或多程跨膜序列(例如，在嵌合蛋白的n端或c端)。在某些cd分子、酪氨酸激酶受体、丝氨酸/苏氨酸激酶受体、tgfβ、bmp、激活素和磷酸酶中发现了单程跨膜区。单程跨膜区通常包括信号肽区和约20至约25个氨基酸的跨膜区，其中许多是疏水性氨基酸并且可以形成α螺旋。一小段带正电荷的氨基酸通常跟随跨膜跨度，以将蛋白质锚定在膜中。多程蛋白包括离子泵、离子通道和转运蛋白，并且包括多次跨膜的两个或多个螺旋。有时将全部或基本上全部的多程蛋白质并入嵌合蛋白质中。单程和多程跨膜区的序列是已知的，可以被选择并入嵌合蛋白分子中。
[0155]
在一些实施方式中，跨膜结构域与car的胞外结构域融合。在一个实施方式中，使用与car中的结构域之一天然相关的跨膜结构域。在其他实施方式中，使用与car中的结构域之一非天然相关的跨膜结构域。在一些情况下，可以通过氨基酸取代(例如，通常带电荷到疏水残基上)来选择或修饰跨膜结构域，以避免这些结构域与相同或不同表面膜蛋白的跨膜结构域结合，从而使与受体复合物的其他成员的相互作用最小化。
[0156]
例如，跨膜结构域可以源自t细胞受体的α、β或ζ链、cd3
‑
ε、cd3ζ、cd4、cd5、cd8、cd8α、cd9、cd16、cd22、cd28、cd33、cd38、cd64、cd80、cd86、cd134、cd137、或cd154。或者，在一些实例中，跨膜结构域可以从头合成，主要包含疏水性残基，如亮氨酸和缬氨酸。在特定的实施方式中，短多肽接头可以形成嵌合抗原受体的跨膜结构域和胞内结构域之间的连接。嵌合抗原受体可进一步包含茎，即胞外结构域和跨膜结构域之间的氨基酸的胞外区。例如，茎可以是与选择的跨膜结构域天然相关的氨基酸序列。在一些实施方式中，嵌合抗原受体包括cd8跨膜结构域，在特定的实施方式中，嵌合抗原受体包括cd8跨膜结构域、以及跨膜结构
域的胞外部分上的额外氨基酸，在特定的实施方式中，嵌合抗原受体包括cd8跨膜结构域和cd8茎。嵌合抗原受体还可包含跨膜结构域和胞质结构域之间的氨基酸区域，其与衍生跨膜结构域的多肽天然相关。
[0157]
在一些实施方式中，嵌合抗原受体是抗
‑
psca嵌合抗原受体。抗
‑
psca嵌合抗原受体包括与psca结合的抗原识别部分。结合psca的抗原识别部分多肽和可变重链和轻链氨基酸序列的实例提供于例如，gudas，j.的美国专利号8,013,128，2011年9月6日公告，作为us2009
‑
0181034a1公布于2009年7月16日；gudas，j.的美国专利号8,206,932，2012年6月26日公告，作为us2009
‑
0202548a1公布于2009年8月13日；美国专利号7,541442，2009年6月2日公告，作为us 2006
‑
0147375 a1公布于2006年7月6日；以及wu，a.w.等的美国专利号8,940,298，2015年1月27日公告，作为us 2010
‑
0297004公布于2010年11月25日，其全部内容通过引用并入本文。抗原识别部分多肽的实例可来自选自1g8、2a2、2h9、3c5、3e6、3g3和4a10的psca抗体，它们分别由命名为hb
‑
12612、hb
‑
12613、hb
‑
12614、hb
‑
12616、hb
‑
12618、hb
‑
12615、和hb
‑
12617的杂交瘤产生，如保存在美国典型培养物保藏中心的，并且例如由reiter，r.e.等2009年5月5日在美国专利号7,527,786中公告、2003年6月19日在us2003
‑
0113810a1中公布，其全部内容以引用方式并入本文。“源自”是指抗原识别部分包含含有由指定杂交瘤产生的psca抗体的可变重链多肽和可变轻链多肽的多肽，或与其具有70、80、90、95、97、98或99％同源性的多肽，其中抗原识别部分与psca结合。
[0158]
在一些实施方式中，抗原识别部分多肽是来自选自下组的psca抗体的单链可变区结构域(scfv)：1g8、2a2、2h9、3c5、3e6、3g3和4a10的psca抗体，分别由命名为hb
‑
12612、hb
‑
12613、hb
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12614、hb
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12616、hb
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12618、hb
‑
12615、和hb
‑
12617的杂交瘤产生，如保存在美国典型培养物保藏中心的，并且例如由reiter，r.e.等2009年5月5日在美国专利号7,527,786中公告、2003年6月19日在us 2003
‑
0113810 a1中公布，其全部内容以引用方式并入本文。在一些实施方式中，单链可变区结构域(scfv)是源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0159]
在一些实施方式中，psca特异性car
‑
t细胞用第一代car构建体靶向psca，该第一代car构建体包含传统的cd3ζ胞质信号传导结构域以及分别含有可变重链和可变轻链a11 vl(seq id no：49)与a11 vh(seq id no：51)的单链可变区结构域(scfv)。在一些实施方式中，包含可变重链和可变轻链a11vl(seq id no：49)和a11 vh(seq id no：51)的抗psca car被工程改造成表达由两个fk结合蛋白(fkbp)与来自myd88和cd40的信号传导结构域(诱导型myd88/cd40或imc)在框内构成的诱导型双重共刺激结构域。
[0160]
在一些实施方式中，psca特异性car
‑
t细胞用第一代car构建体靶向psca，该第一代car构建体包含传统的cd3ζ胞质信号传导结构域以及分别含有可变重链和可变轻链bm2b3 vl(seq id no：53)和bm2b3 vh(seq id no：55)的单链可变区结构域(scfv)。在一些实施方式中，包含可变重链和可变轻链bm2b3 vl(seq id no：53)和bm2b3 vh(seq id no：55)的抗psca car被工程改造成表达由两个fk结合蛋白(fkbp)与来自myd88和cd40的信号传导结构域(诱导型myd88/cd40或imc)在框内构成的诱导型双重共刺激结构域。
[0161]
在一些实施方式中，psca特异性car
‑
t细胞用第一代car构建体靶向psca，该第一代car构建体包含传统的cd3ζ胞质信号传导结构域以及分别含有可变重链和可变轻链ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)和hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)的单链可变区结构域(scfv)。在一些实施方式中，包含可变重链和可变轻链ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)和hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)的抗psca car被工程改造成表达由两个fk结合蛋白(fkbp)与来自myd88和cd40的信号传导结构域(诱导型myd88/cd40或imc)在框内构成的诱导型双重共刺激结构域。
[0162]
在一些实施方式中，psca特异性car
‑
t细胞用第一代car构建体靶向psca，该第一代car构建体包含传统的cd3ζ胞质信号传导结构域以及分别含有可变重链和可变轻链h1
‑
1.10vh(seq id no：61)和h1
‑
1.10vl(seq id no：63)的单链可变区结构域(scfv)。在一些实施方式中，包含可变重链和可变轻链h1
‑
1.10vh(seq id no：61)和h1
‑
1.10vl(seq id no：63)的抗psca car被工程改造成表达由两个fk结合蛋白(fkbp)与来自myd88和cd40的信号传导结构域(诱导型myd88/cd40或imc)在框内构成的诱导型双重共刺激结构域。
[0163]
在一些实施方式中，psca特异性car
‑
t细胞用第一代car构建体靶向psca，该第一代car构建体包含传统的cd3ζ胞质信号传导结构域以及分别含有可变重链和可变轻链1g8(2b3)(seq id no：65)和1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)的单链可变区结构域(scfv)。在一些实施方式中，包含可变重链和可变轻链1g8(2b3)(seq id no：65)和1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)的抗psca car被工程改造成表达由两个fk结合蛋白(fkbp)与来自myd88和cd40的信号传导结构域(诱导型myd88/cd40或imc)在框内构成的诱导型双重共刺激结构域。
[0164]
在一些实施方式中，psca特异性car
‑
t细胞用第一代car构建体靶向psca，该第一代car构建体包含传统的cd3ζ胞质信号传导结构域以及分别含有可变重链和可变轻链1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)的单链可变区结构域(scfv)。在一些实施方式中，包含可变重链和可变轻链1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)的抗psca car被工程改造成表达由两个fk结合蛋白(fkbp)与来自myd88和cd40的信号传导结构域(诱导型myd88/cd40或imc)在框内构成的诱导型双重共刺激结构域。
[0165]
t细胞的基因转移/基因修饰方法
[0166]
为了在细胞中介导转基因表达的作用，有必要将表达构建体转移到细胞中。这种转移可以采用病毒或非病毒的基因转移方法。本节讨论基因转移的方法和组成。
[0167]
包含表达载体的转化细胞是通过将表达载体引入细胞而产生的。与当前方法一起使用的用于转化细胞器、细胞、组织或生物体的多核苷酸递送的合适方法实际上包括可将多核苷酸(例如，dna)引入细胞、组织或生物体中的任何方法。
[0168]
如本文所用，术语“细胞”、“细胞系”和“细胞培养物”可互换使用。所有这些术语还包括它们的后代，即任何和所有后代。应当理解，由于有意或无意的突变，所有后代可能不相同。如本文所用，术语“体外”是指身体“外部”。术语“离体”和“体外”在本文中可以互换使用。
[0169]
术语“转染”和“转导”可互换，指将外源核酸序列引入真核宿主细胞的过程。转染(或转导)可以通过多种方式中的任何一种实现，包括电穿孔、显微注射、基因枪递送、逆转录病毒感染、脂质转染、超染等。
[0170]
可以使用任何合适的方法来转染或转化细胞，例如t细胞，或施用本方法的核苷酸序列或组合物。本文提供了某些非限制性实例。在一些实施方式中，病毒载体是基于sfg的病毒载体，如tey等在(2007)biol blood marrow transpl 13:913
‑
24中和di stasi等(2011)在n engl j med 365:1673
‑
83(2011)所讨论的。
[0171]
如本文公开的经遗传修饰的t细胞可用于对可受益于供体淋巴细胞给予的对象进行给予。这些对象通常是人类，因此本文的方法通常使用人类t细胞进行。
[0172]
修饰的细胞可以从供体获得，或者可以是从患者获得的细胞，例如，细胞可以是自体的、同基因的或同种异体的。例如，细胞可用于再生，例如以替代患病细胞的功能。细胞还可以被修饰以表达异源基因，从而可以将生物制剂递送至特定微环境，例如患病骨髓或转移性沉积物。“治疗性细胞”是指用于细胞疗法的细胞，即给予对象以治疗或预防病症或疾病的细胞。
[0173]“获得或制备”例如在细胞的情况下是指从来源分离、纯化或部分纯化细胞或细胞培养物，其中来源可以是例如脐带血、骨髓或外周血。这些术语也适用于原始来源或细胞培养物已经经过培养并且细胞已经复制的情况，以及后代细胞现在来自原始来源的情况。
[0174]
外周血：如本文所用，术语“外周血”是指血液的细胞成分(例如，红细胞、白细胞和血小板)，其从循环血液池中获得或制备，且未隔离在淋巴系统、脾脏、肝脏或骨髓内。
[0175]
脐带血：脐带血不同于外周血和隔离在淋巴系统、脾脏、肝脏或骨髓中的血液。术语“脐带血”、“胎血”或“脐血”可互换使用，是指分娩后残留在胎盘和附着脐带中的血液。脐带血通常含有干细胞，包括造血细胞。
[0176]
如本文所用，术语“同种异体”是指在宿主细胞和供体细胞之间抗原性不同的hla或mhc基因座。因此，从同一物种转移的细胞或组织可能在抗原上是不同的。同基因小鼠可以在一个或多个基因座(同类基因)上不同，而同种异体小鼠可以具有相同的背景。术语“自体的”是指源自与之后所要给予的个体相同的个体的细胞、核酸、蛋白质、多肽等。本方法的修饰的细胞可以是例如自体细胞，例如自体t细胞。
[0177]
供体t细胞通常在进行遗传修饰之前进行培养(通常在活化条件下，例如使用抗cd3和/或抗cd28抗体，可选地使用il
‑
2)。该步骤在修饰过程结束时提供了更高的t细胞产量。
[0178]
在一些实施方式中，样品可以进行同种异体去除(allodepletion)或可以不进行异源去除。在本文提供的实例中，样品不经历同种异体去除，因此是同种异体性的，如zhou等在(2015)blood 125:4103
‑
13中所讨论的。这些群体提供了更强大的t细胞库，以提供供体细胞的治疗优势。
[0179]
可以使用编码本技术的多核苷酸的病毒载体转导t细胞。合适的转导技术可以涉及纤连蛋白片段ch
‑
296。作为使用病毒载体转导的替代方法，可以用本领域已知的任何合适的方法转染细胞，例如用编码诱导型嵌合刺激多肽和/或感兴趣的嵌合抗原受体的dna，例如使用磷酸钙、阳离子聚合物(如pei)、磁珠、电穿孔和商业脂质试剂，如lipofectamine
tm
和fugene
tm
。转导/转染步骤的一个结果是各种供体t细胞现在将是基因修饰的t细胞，可以表达感兴趣的多肽。
[0180]
在某些实施方式中可以使用编码所需蛋白质的病毒载体。在一些实施方式中，将可为每个细胞提供高拷贝数的前病毒整合体的逆转录病毒载体用于转导。
[0181]
转导/转染后，可将细胞与转导/转染材料分离并再次培养，以允许基因修饰的t细胞扩增。可以扩增t细胞，以便获得所需的最少数量的基因修饰的t细胞。
[0182]
然后可以从已获得的细胞群中选择经基因修饰的t细胞。诱导型嵌合刺激多肽和/或嵌合抗原受体可能不适合对所需t细胞进行阳性选择，因此在一些实施方式中，遗传修饰的t细胞表达感兴趣的细胞表面转基因标记物。可以选择表达这种表面标记物的细胞，例如使用免疫磁性技术。例如，可以使用与识别感兴趣的细胞表面转基因标记物的单克隆抗体偶联的顺磁珠，例如，使用clinimacs系统(可从miltenyi biotec获得)。在一些实施方式中，不进行选择步骤并且向对象给予遗传修饰的t细胞和未修饰的t细胞的混合物。
[0183]
在另一种方案中，在转导步骤后选择基因修饰的t细胞，进行培养，然后喂食。因此可以改变转导、投料和选择的顺序。
[0184]
这些方案的结果是含有已经过遗传修饰、因此可以表达例如诱导型嵌合刺激多肽和/或感兴趣的嵌合抗原受体(有时，还有感兴趣的细胞表面转基因标记物)的供体t细胞的组合物。这些基因修饰的t细胞可以给予接受者，并且在给予前可以冷冻保存(可选地在进一步扩增之后)。
[0185]
治疗方法
[0186]
本文提供的修饰细胞群可用于治疗有需要的人类对象的方法，并可用于制备治疗此类对象的药物。通常通过输注将细胞递送给接受者对象。
[0187]
术语“患者”或“对象”是可互换的，并且如本文所用包括但不限于生物体或动物；哺乳动物，包括例如人、非人灵长类动物(例如猴)、小鼠、猪、牛、山羊、兔、大鼠、豚鼠、仓鼠、马、猴、绵羊或其他非人哺乳动物；非哺乳动物，包括例如非哺乳动物脊椎动物，例如鸟(例如鸡或鸭)或鱼，以及非哺乳动物无脊椎动物。对象可以是例如人类，例如免疫功能低下或患有过度增殖性疾病的患者。对象可以是例如人，例如患有癌症和/或实体瘤的患者。
[0188]
如本文所用，术语“治疗”是指预防和/或治疗。例如，当用于实体瘤，例如癌性实体瘤时，该术语是指通过预防性治疗来预防，这会增加对象对实体瘤或癌症的抵抗力。在一些实例中，可以治疗对象以预防癌症，其中癌症是家族性的或遗传相关的。例如，当用于传染病时，该术语是指增加对象对病原体感染的抵抗力的预防性治疗，或者，换言之，降低对象被病原体感染或表现出可归因于感染的疾病迹象的可能性，以及在对象被感染后进行治疗以对抗感染，例如减少或消除感染或防止其恶化。
[0189]
对象的典型t细胞剂量为104‑
107个细胞/kg。在一些实施方式中，对象的t细胞剂量为约0.1
×
106个细胞/kg至约9
×
106个细胞/kg。在一些实施方式中，对象的t细胞剂量为约0.1
×
106个细胞/kg至约8
×
106个细胞/kg。在一些实施方式中，对象的t细胞剂量为约0.1
×
106个细胞/kg至约7.5
×
106个细胞/kg。在一些实施方式中，对象的t细胞剂量为约0.1
×
106个细胞/kg至约7
×
106个细胞/kg。在一些实施方式中，对象的t细胞剂量为约0.1
×
106个细胞/kg至约6
×
106个细胞/kg。在一些实施方式中，对象的t细胞剂量为约0.3
×
106个细胞/kg至约5
×
106个细胞/kg。在一些实施方式中，对象的t细胞剂量为约1.25
×
106个细胞/kg至约2.5
×
106个细胞/kg。在一些实施方式中，对象的t细胞剂量为约0.3
×
106个细胞/kg(
±
20％)。在一些实施方式中，对象的t细胞剂量为约0.625
×
106个细胞/kg(
±
20％)。在一些实施方式中，对象的t细胞剂量为约1.25
×
106个细胞/kg(
±
20％)。在一些实施方式中，对象的t细胞剂量为约2.5
×
106个细胞/kg(
±
20％)。在一些实施方式中，对象的t细胞剂量为
约5
×
106个细胞/kg(
±
20％)。在一些实施方式中，对象的t细胞剂量为约6
×
106个细胞/kg(
±
20％)。在一些实施方式中，对象的t细胞剂量为约7
×
106个细胞/kg(
±
20％)。在一些实施方式中，对象的t细胞剂量为约7.5
×
106个细胞/kg(
±
20％)。
[0190]
接受者可以在接受包含遗传修饰的t细胞的修饰细胞群之前经历骨髓摧毀性调节。因此，接受者自身的α/βt细胞(和b细胞)可在接受转基因t细胞之前耗尽。类似地，给予接受者的造血(干)细胞可能会耗尽α/β细胞。相比之下，给予接受者的转基因供体t细胞通常不会耗尽α/β细胞。
[0191]
在一些实施方式中，在输注修饰的t细胞之前施用淋巴细胞清除化疗方案。在一些实施方式中，在输注psca car t细胞前的第五天、第四天和第三天给予包括静脉内500mg/m2环磷酰胺和静脉内30mg/m2的氟达拉滨的淋巴清除化疗方案，除非不能耐受该组合。如果确定基于组合的淋巴清除对对象存在不利的安全风险，则淋巴清除可以单独使用环磷酰胺进行。
[0192]
接受者可以是儿童，例如0
‑
16岁或0
‑
10岁的儿童。在一些实施方式中，接受者是成人。
[0193]
接受基因修饰的t细胞的对象还可以接受来自同种异体供体的其他组织，例如可以接受造血细胞和/或造血干细胞(例如cd34+细胞)。该同种异体移植组织和经过基因改造的t细胞最好来自同一个供体，以便其在基因上匹配。在一些实施方式中，供体和接受者是匹配的无关供体、或合适的家庭成员。例如，供体可能是接受者的父母或孩子。因此，当对象被鉴定为需要遗传修饰的t细胞时，合适的供体可被鉴定为t细胞供体。
[0194]
当本文提供的修饰的细胞群、例如包含修饰的t细胞的修饰的细胞群与造血细胞和/或造血干细胞联合使用时，修饰的细胞群在一些实例中可以在较晚的时间点施用，例如在20
‑
100天后。
[0195]
在某些实施方式中，本方法利用化学诱导二聚化(cid)技术对修饰的细胞产生有条件提供的共刺激。除了这种技术是可诱导的之外，由于不稳定的二聚化剂的降解，它也是可逆的。
[0196]
在一些实施方式中，配体是小分子。通常，配体是二聚体，有时，配体是二聚体fk506或二聚体fk506类似物。在特定的实施方式中，配体是ap1903(cas索引名称：2
‑
哌啶羧酸，1
‑
[(2s)
‑1‑
氧代
‑2‑
(3,4,5
‑
三甲氧基苯基)丁基]
‑
,1,2
‑
乙二基双[亚氨基(2
‑
氧代
‑
2,1
‑
乙二基)氧
‑
3,1
‑
亚苯基[(1r)
‑3‑
(3,4
‑
二甲氧基苯基)亚丙基]]酯，[2s
‑
[1(r*),2r*[s*[s*[1(r*),2r*]]]]]
‑
(9ci)cas登记号：195514
‑
63
‑
7；分子式：c78h98n4o20分子量：1411.65)。在特定的实施方式中，配体是ap20187。在特定的实施方式中，配体是ap20187类似物，例如ap1510。在一些实施方式中，特定的类似物适用于fkbp12，某些类似物适用于fkbp12的摆动版本。在特定的实施方式中，一个配体结合区包含在嵌合蛋白质中。在其他的实施方式中，包含两种或多种配体结合区。例如，在配体结合区是fkbp12的情况下，其中包含两个这些区域，一个例如可能是摆动版本。
[0197]
在一些实施方式中，利米多塞的剂量是0.01mg/kg
‑
1.0mg/kg。在一些实施方式中，使用固定剂量的ap1903用于注射，例如，可以在2小时内静脉输注0.4mg/kg。细胞有效信号传导所需的体外ap1903量约为10
–
100nm(mw：1412da)。这相当于14
–
140μg/l或～0.014
–
0.14mg/kg(1.4
–
140μg/kg)。剂量可以根据应用而变化，并且在某些实例中可以在0.1
‑
10nm
的范围内更多，或在50
‑
150nm、50
‑
150nm、10
‑
200nm、75
‑
125nm、100
‑
500nm、100
‑
600nm、100
‑
700nm、100
‑
800nm、或100
‑
900nm的范围内。多聚体配体或cid、例如ap1903(利米多塞)可例如以约0.01至1mg/kg对象体重、约0.05至0.5mg/kg对象体重、0.1至2mg/kg对象体重、约0.05至1.0mg/kg对象体重、约0.1至5mg/kg对象体重、约0.2至4mg/kg对象体重、约0.3至3mg/kg对象体重、约0.3至2mg/kg对象体重、或约0.3至1mg/kg对象体重，例如约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、7、8、9、或10mg/kg对象体重的剂量被递送。在一些实施方式中，配体以每剂0.4mg/kg、例如以5mg/ml的浓度提供。可以提供包含配体的小瓶或其他容器，例如每小瓶的体积为约0.25ml至约10ml，例如，约0.25、0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、或10ml，例如，约2ml。
[0198]
配体(例如利米多塞)的给予时间表可以根据患者确定并且例如可包括给药时间表，其中在第0周给予修饰的t细胞然后通过给予二聚化的化学诱导剂进行诱导，然后在需要时给予额外的诱导剂以获得有效的治疗结果，或者例如此后在总共2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、或30、40、50、60、70、80、90、或100周中以2、4、6、8、10、12、14、16、18、20周的间隔进行。
[0199]
配体(例如利米多塞)的给予时间表可以根据患者确定并且例如可包括给药时间表，其中在第0周给予诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞然后通过给予二聚化的化学诱导剂进行诱导，然后在需要时给予额外的诱导剂以获得有效的治疗结果，或者例如此后在总共2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、或30、40、50、60、70、80、90、或100周中以2、4、6、8、10、12、14、16、18、20周的间隔进行。
[0200]
在一些实施方式中，对于转导的t细胞的给予，一个剂量的细胞可能就足够了，然后是多剂配体。在一些实施方式中，可提供多于一次t细胞。因此，例如，给予时间表可以根据患者确定并且例如可包括给药时间表，其中在第0周给予t细胞，然后通过给予二聚化的化学诱导剂进行诱导，然后在需要时给予额外的t细胞和诱导剂，此后在总共2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、或30周中以2周的间隔进行。
[0201]
其他给药时间表包括，例如，给予一个剂量的细胞和一个剂量的诱导剂的时间表。在其他实例中，时间表可以包括在第0周给予细胞和诱导剂，然后给予额外的细胞和诱导剂，在总共4、8、12、16、20、24、28、或32周中以4周的间隔进行。
[0202]
在其他实例中，时间表可以包括给予细胞一次(在第0周)，然后在第0周一起或在给予细胞后给予诱导剂(例如利米多塞)。例如，细胞和诱导剂的给予可以同时进行，或者诱导剂可以在细胞后的同一天或后一天，或2、3、4、5或天后给予。在一些实施方式中，在第一次给予诱导剂之后，以特定间隔(例如，1、2、3或4周的间隔)给予另外的诱导剂(例如利米多塞)。在一些的实施方式中，每天一次向对象给予诱导剂(例如利米多塞)。在一些的实施方式中，每周三次向对象给予诱导剂(例如利米多塞)。在一些的实施方式中，每周两次向对象给予诱导剂(例如利米多塞)。在一些的实施方式中，每周一次向对象给予诱导剂(例如利米多塞)。在一些的实施方式中，隔周一次向对象给予诱导剂(例如利米多塞)。在一些的实施方式中，每月两次向对象给予诱导剂(例如利米多塞)。在一些的实施方式中，每月一次向对象给予诱导剂(例如利米多塞)。
[0203]
在其他实例中，时间表可以包括给予细胞一次(在第0周)，然后在第1周给予诱导
剂(例如利米多塞)，然后以特定时间间隔(例如，1、2、3或4周间隔)给予额外的诱导剂(例如利米多塞)。在一些的实施方式中，每天一次向对象给予诱导剂(例如利米多塞)。在一些的实施方式中，每周三次向对象给予诱导剂(例如利米多塞)。在一些的实施方式中，每周两次向对象给予诱导剂(例如利米多塞)。在一些的实施方式中，每周一次向对象给予诱导剂(例如利米多塞)。在一些的实施方式中，隔周一次向对象给予诱导剂(例如利米多塞)。在一些的实施方式中，每月两次向对象给予诱导剂(例如利米多塞)。在一些的实施方式中，每月一次向对象给予诱导剂(例如利米多塞)。
[0204]
在一些实施方式中，配体(例如利米多塞)的给药时间表包括在第0周给予诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后每天一次给予二聚化化学诱导剂进行诱导的给药时间表。
[0205]
在一些实施方式中，配体(例如利米多塞)的给药时间表包括在第0周给予诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后每周六次给予二聚化化学诱导剂进行诱导的给药时间表。
[0206]
在一些实施方式中，配体(例如利米多塞)的给药时间表包括在第0周给予诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后每周五次给予二聚化化学诱导剂进行诱导的给药时间表。
[0207]
在一些实施方式中，配体(例如利米多塞)的给药时间表包括在第0周给予诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后每周四次给予二聚化化学诱导剂进行诱导的给药时间表。
[0208]
在一些实施方式中，配体(例如利米多塞)的给药时间表包括在第0周给予诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后每周三次给予二聚化化学诱导剂进行诱导的给药时间表。
[0209]
在一些实施方式中，配体(例如利米多塞)的给药时间表包括在第0周给予诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后每周两次给予二聚化化学诱导剂进行诱导的给药时间表。
[0210]
在一些实施方式中，配体(例如利米多塞)的给药时间表包括在第0周给予诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后每周一次给予二聚化化学诱导剂进行诱导的给药时间表。
[0211]
在一些实施方式中，配体(例如利米多塞)的给药时间表包括在第0周给予诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后每月两次给予二聚化化学诱导剂进行诱导的给药时间表。
[0212]
在一些实施方式中，配体(例如利米多塞)的给药时间表包括在第0周给予诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后每月一次给予二聚化化学诱导剂进行诱导的给药时间表。
[0213]
在一些实施方式中，向对象给予约0.1
×
106个细胞/kg至约9
×
106个细胞/kg的剂量的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每
周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，psca car
‑
t包含源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0214]
在一些实施方式中，向对象给予约0.1
×
106个细胞/kg至约8
×
106个细胞/kg的剂量的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，psca car
‑
t包含源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0215]
在一些实施方式中，向对象给予约0.1
×
106个细胞/kg至约7.5
×
106个细胞/kg的剂量的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，psca car
‑
t包含源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0216]
在一些实施方式中，向对象给予约0.1
×
106个细胞/kg至约7
×
106个细胞/kg的剂量的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，psca car
‑
t包含源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：
51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0217]
在一些实施方式中，向对象给予约0.1
×
106个细胞/kg至约6
×
106个细胞/kg的剂量的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，psca car
‑
t包含源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0218]
在一些实施方式中，向对象给予约0.3
×
106个细胞/kg至约5
×
106个细胞/kg的剂量的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，psca car
‑
t包含源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0219]
在一些实施方式中，向对象给予约1.25
×
106个细胞/kg至约2.5
×
106个细胞/kg的剂量的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，psca car
‑
t包含源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和
1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0220]
在一些实施方式中，向对象给予约0.3
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，psca car
‑
t包含源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0221]
在一些实施方式中，向对象给予约0.625
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，psca car
‑
t包含源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0222]
在一些实施方式中，向对象给予约1.25
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，psca car
‑
t包含源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0223]
在一些实施方式中，向对象给予约2.5
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间
隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，psca car
‑
t包含源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0224]
在一些实施方式中，向对象给予约5
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，psca car
‑
t包含源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0225]
在一些实施方式中，向对象给予约6
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，psca car
‑
t包含源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0226]
在一些实施方式中，向对象给予约7
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两
次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，psca car
‑
t包含源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0227]
在一些实施方式中，向对象给予约7.5
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，psca car
‑
t包含源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0228]
在一些实施方式中，向对象给予约8
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，psca car
‑
t包含源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0229]
在一些实施方式中，向对象给予约0.3
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自a11 vl(seq id no：49)和a11 vh(seq id no：51)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0230]
在一些实施方式中，向对象给予约0.625
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自a11 vl(seq id no：49)和a11 vh(seq id no：51)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0231]
在一些实施方式中，向对象给予约1.25
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自a11 vl(seq id no：49)和a11 vh(seq id no：51)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0232]
在一些实施方式中，向对象给予约2.5
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自a11 vl(seq id no：49)和a11 vh(seq id no：51)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0233]
在一些实施方式中，向对象给予约5
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自a11 vl(seq id no：49)和a11 vh(seq id no：51)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0234]
在一些实施方式中，向对象给予约6
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自a11 vl(seq id no：49)和a11 vh(seq id no：51)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0235]
在一些实施方式中，向对象给予约7
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自a11 vl(seq id no：49)和a11 vh(seq id no：51)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0236]
在一些实施方式中，向对象给予约7.5
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自a11 vl(seq id no：49)和a11 vh(seq id no：51)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0237]
在一些实施方式中，向对象给予约8
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自a11 vl(seq id no：49)和a11 vh(seq id no：51)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0238]
在一些实施方式中，向对象给予约0.3
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自bm2b3 vl(seq id no:53)和bm2b3 vh(seq id no:55)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0239]
在一些实施方式中，向对象给予约0.625
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自bm2b3 vl(seq id no:53)和bm2b3 vh(seq id no:55)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量
为0.4mg/kg每周一次。
[0240]
在一些实施方式中，向对象给予约1.25
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自bm2b3 vl(seq id no:53)和bm2b3 vh(seq id no:55)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0241]
在一些实施方式中，向对象给予约2.5
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自bm2b3 vl(seq id no:53)和bm2b3 vh(seq id no:55)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0242]
在一些实施方式中，向对象给予约5
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自bm2b3 vl(seq id no:53)和bm2b3 vh(seq id no:55)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0243]
在一些实施方式中，向对象给予约6
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自bm2b3 vl(seq id no:53)和bm2b3 vh(seq id no:55)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0244]
在一些实施方式中，向对象给予约7
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自bm2b3 vl(seq id no:53)和bm2b3 vh(seq id no:55)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或
每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0245]
在一些实施方式中，向对象给予约7.5
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自bm2b3 vl(seq id no:53)和bm2b3 vh(seq id no:55)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0246]
在一些实施方式中，向对象给予约8
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自bm2b3 vl(seq id no:53)和bm2b3 vh(seq id no:55)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0247]
在一些实施方式中，向对象给予约0.3
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)和hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0248]
在一些实施方式中，向对象给予约0.625
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)和hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0249]
在一些实施方式中，向对象给予约1.25
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)和hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或
1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0250]
在一些实施方式中，向对象给予约2.5
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)和hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0251]
在一些实施方式中，向对象给予约5
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)和hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0252]
在一些实施方式中，向对象给予约6
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)和hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0253]
在一些实施方式中，向对象给予约7
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)和hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0254]
在一些实施方式中，向对象给予约7.5
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)和hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/
kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0255]
在一些实施方式中，向对象给予约8
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)和hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0256]
在一些实施方式中，向对象给予约0.3
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自ha1
‑
4.121vh h1
‑
1.10vh(seq id no：61)和h1
‑
1.10vl(seq id no：63)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0257]
在一些实施方式中，向对象给予约0.625
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自h1
‑
1.10vh(seq id no：61)和h1
‑
1.10vl(seq id no：63)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0258]
在一些实施方式中，向对象给予约1.25
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自h1
‑
1.10vh(seq id no：61)和h1
‑
1.10vl(seq id no：63)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0259]
在一些实施方式中，向对象给予约2.5
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自h1
‑
1.10vh(seq id no：61)和h1
‑
1.10vl(seq id no：63)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米
多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0260]
在一些实施方式中，向对象给予约5
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自h1
‑
1.10vh(seq id no：61)和h1
‑
1.10vl(seq id no：63)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0261]
在一些实施方式中，向对象给予约6
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自h1
‑
1.10vh(seq id no：61)和h1
‑
1.10vl(seq id no：63)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0262]
在一些实施方式中，向对象给予约7
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自h1
‑
1.10vh(seq id no：61)和h1
‑
1.10vl(seq id no：63)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0263]
在一些实施方式中，向对象给予约7.5
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自h1
‑
1.10vh(seq id no：61)和h1
‑
1.10vl(seq id no：63)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0264]
在一些实施方式中，向对象给予约8
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自h1
‑
1.10vh(seq id no：61)和h1
‑
1.10vl(seq id no：63)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t
细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0265]
在一些实施方式中，向对象给予约0.3
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自1g8(2b3)(seq id no：65)和1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0266]
在一些实施方式中，向对象给予约0.625
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自1g8(2b3)(seq id no：65)和1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0267]
在一些实施方式中，向对象给予约1.25
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自1g8(2b3)(seq id no：65)和1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0268]
在一些实施方式中，向对象给予约2.5
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自1g8(2b3)(seq id no：65)和1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0269]
在一些实施方式中，向对象给予约5
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自
1g8(2b3)(seq id no：65)和1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0270]
在一些实施方式中，向对象给予约6
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自1g8(2b3)(seq id no：65)和1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0271]
在一些实施方式中，向对象给予约7
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自1g8(2b3)(seq id no：65)和1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0272]
在一些实施方式中，向对象给予约7.5
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自1g8(2b3)(seq id no：65)和1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0273]
在一些实施方式中，向对象给予约8
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自1g8(2b3)(seq id no：65)和1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0274]
在一些实施方式中，向对象给予约0.3
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0275]
在一些实施方式中，向对象给予约0.625
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0276]
在一些实施方式中，向对象给予约1.25
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0277]
在一些实施方式中，向对象给予约2.5
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0278]
在一些实施方式中，向对象给予约5
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量
为0.4mg/kg每周一次。
[0279]
在一些实施方式中，向对象给予约6
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0280]
在一些实施方式中，向对象给予约7
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0281]
在一些实施方式中，向对象给予约7.5
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0282]
在一些实施方式中，向对象给予约8
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的含有源自1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0283]
在一些实施方式中，修饰的t细胞与未修饰的多克隆t细胞一起给予。未修饰的多克隆t细胞可以以约0.1
×
106个细胞/kg至约30
×
106个细胞/kg的量给予。多克隆t细胞可以以约0.1
×
106、0.5
×
106、1
×
106、1.25
×
106、2
×
106、3
×
106、4
×
106、5
×
106、10
×
106、15
×
106、20
×
106、25
×
106或30
×
106个细胞/kg的量给予。
[0284]
在一些实施方式中，向对象给予约0.1
×
106个细胞/kg至约9
×
106个细胞/kg的剂量的修饰的t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至约30
×
106个细胞/kg的剂量的未修饰的多克隆t
细胞。在t细胞给予之后，以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，修饰的t细胞是myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，其含有源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0285]
在一些实施方式中，向对象给予约0.1
×
106个细胞/kg至约8
×
106个细胞/kg的剂量的修饰的t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至约30
×
106个细胞/kg的剂量的未修饰的多克隆t细胞。在t细胞给予之后，以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，修饰的t细胞是myd88/cd40psca car
‑
t细胞，其含有源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0286]
在一些实施方式中，向对象给予约0.1
×
106个细胞/kg至约7.5
×
106个细胞/kg的剂量的修饰的t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至约30
×
106个细胞/kg的剂量的未修饰的多克隆t细胞。在t细胞给予之后，以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，修饰的t细胞是myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，其含有源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0287]
在一些实施方式中，向对象给予约0.1
×
106个细胞/kg至约7
×
106个细胞/kg的剂量的修饰的t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至约30
×
106个细胞/kg的剂量的未修饰的多克隆t
细胞。在t细胞给予之后，以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，修饰的t细胞是myd88/cd40psca car
‑
t细胞，其含有源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0288]
在一些实施方式中，向对象给予约0.1
×
106个细胞/kg至约6
×
106个细胞/kg的剂量的修饰的t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至约30
×
106个细胞/kg的剂量的未修饰的多克隆t细胞。在t细胞给予之后，以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，修饰的t细胞是myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，其含有源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0289]
在一些实施方式中，向对象给予约0.3
×
106个细胞/kg至约5
×
106个细胞/kg的剂量的修饰的t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至25
×
106个细胞/kg的剂量的未修饰的多克隆t细胞。在t细胞给予之后，以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，修饰的t细胞是myd88/cd40psca car
‑
t细胞，其含有源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0290]
在一些实施方式中，向对象给予约1.25
×
106个细胞/kg至约2.5
×
106个细胞/kg的剂量的修饰的t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至20
×
106个细胞/kg的剂量的未修饰的多克隆t
细胞。在t细胞给予之后，以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，修饰的t细胞是myd88/cd40psca car
‑
t细胞，其含有源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0291]
在一些实施方式中，向对象给予约1.25
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的修饰的t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至20
×
106个细胞/kg的剂量的未修饰的多克隆t细胞。在t细胞给予之后，以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，修饰的t细胞是myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，其含有源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0292]
在一些实施方式中，向对象给予约2.5
×
106个细胞/kg(
±
25％)的剂量的修饰的t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至25
×
106个细胞/kg的剂量的未修饰的多克隆t细胞。在t细胞给予之后，以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，修饰的t细胞是myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，其含有源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0293]
在一些实施方式中，向对象给予约5
×
106个细胞/kg(
±
30％)的剂量的修饰的t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的剂量的未修饰的多克隆t细胞。在t细胞给予
之后，以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，修饰的t细胞是myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，其含有源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0294]
在一些实施方式中，向对象给予约6
×
106个细胞/kg(
±
30％)的剂量的修饰的t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的剂量的未修饰的多克隆t细胞。在t细胞给予之后，以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，修饰的t细胞是myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，其含有源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0295]
在一些实施方式中，向对象给予约7
×
106个细胞/kg(
±
30％)的剂量的修饰的t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的剂量的未修饰的多克隆t细胞。在t细胞给予之后，以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，修饰的t细胞是myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，其含有源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0296]
在一些实施方式中，向对象给予约7.5
×
106个细胞/kg(
±
30％)的剂量的修饰的t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的剂量的未修饰的多克隆t细胞。在t细胞给
予之后，以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，修饰的t细胞是myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，其含有源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0297]
在一些实施方式中，向对象给予约8
×
106个细胞/kg(
±
30％)的剂量的修饰的t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的剂量的未修饰的多克隆t细胞。在t细胞给予之后，以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，修饰的t细胞是myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，其含有源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0298]
在一些实施方式中，向对象给予约1.25
×
106个细胞/kg(
±
20％)剂量的含有源自a11 vl(seq id no：49)和a11 vh(seq id no：51)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至20
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0299]
在一些实施方式中，向对象给予约2.5
×
106个细胞/kg(
±
25％)剂量的含有源自a11 vl(seq id no：49)和a11 vh(seq id no：51)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至25
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例
如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0300]
在一些实施方式中，向对象给予约5
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自a11 vl(seq id no：49)和a11 vh(seq id no：51)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0301]
在一些实施方式中，向对象给予约6
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自a11 vl(seq id no：49)和a11 vh(seq id no：51)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0302]
在一些实施方式中，向对象给予约7
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自a11 vl(seq id no：49)和a11 vh(seq id no：51)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0303]
在一些实施方式中，向对象给予约7.5
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自a11 vl(seq id no：49)和a11 vh(seq id no：51)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0304]
在一些实施方式中，向对象给予约8
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自a11 vl(seq id no：49)和a11 vh(seq id no：51)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞
的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0305]
在一些实施方式中，向对象给予约1.25
×
106个细胞/kg(
±
20％)剂量的含有源自bm2b3 vl(seq id no:53)和bm2b3 vh(seq id no:55)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至20
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0306]
在一些实施方式中，向对象给予约2.5
×
106个细胞/kg(
±
25％)剂量的含有源自bm2b3 vl(seq id no:53)和bm2b3 vh(seq id no:55)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至25
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0307]
在一些实施方式中，向对象给予约5
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自bm2b3 vl(seq id no:53)和bm2b3 vh(seq id no:55)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0308]
在一些实施方式中，向对象给予约6
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自bm2b3 vl(seq id no:53)和bm2b3 vh(seq id no:55)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0309]
在一些实施方式中，向对象给予约7
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自bm2b3 vl(seq id no:53)和bm2b3 vh(seq id no:55)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞
的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0310]
在一些实施方式中，向对象给予约7.5
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自bm2b3 vl(seq id no:53)和bm2b3 vh(seq id no:55)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0311]
在一些实施方式中，向对象给予约8
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自bm2b3 vl(seq id no:53)和bm2b3 vh(seq id no:55)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0312]
在一些实施方式中，向对象给予约1.25
×
106个细胞/kg(
±
20％)剂量的含有源自ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)和hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至20
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0313]
在一些实施方式中，向对象给予约2.5
×
106个细胞/kg(
±
25％)剂量的含有源自ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)和hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至25
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0314]
在一些实施方式中，向对象给予约5
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)和hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例
如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0315]
在一些实施方式中，向对象给予约6
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)和hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0316]
在一些实施方式中，向对象给予约7
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)和hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0317]
在一些实施方式中，向对象给予约7.5
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)和hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0318]
在一些实施方式中，向对象给予约8
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)和hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0319]
在一些实施方式中，向对象给予约1.25
×
106个细胞/kg(
±
20％)剂量的含有源自h1
‑
1.10vh(seq id no：61)和h1
‑
1.10vl(seq id no：63)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至20
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、
每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0320]
在一些实施方式中，向对象给予约2.5
×
106个细胞/kg(
±
25％)剂量的含有源自h1
‑
1.10vh(seq id no：61)和h1
‑
1.10vl(seq id no：63)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至25
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0321]
在一些实施方式中，向对象给予约5
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自h1
‑
1.10vh(seq id no：61)和h1
‑
1.10vl(seq id no：63)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0322]
在一些实施方式中，向对象给予约6
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自h1
‑
1.10vh(seq id no：61)和h1
‑
1.10vl(seq id no：63)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0323]
在一些实施方式中，向对象给予约7
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自h1
‑
1.10vh(seq id no：61)和h1
‑
1.10vl(seq id no：63)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0324]
在一些实施方式中，向对象给予约7.5
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自h1
‑
1.10vh(seq id no：61)和h1
‑
1.10vl(seq id no：63)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t
细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0325]
在一些实施方式中，向对象给予约8
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自h1
‑
1.10vh(seq id no：61)和h1
‑
1.10vl(seq id no：63)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0326]
在一些实施方式中，向对象给予约1.25
×
106个细胞/kg(
±
20％)剂量的含有源自1g8(2b3)(seq id no：65)和1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至20
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0327]
在一些实施方式中，向对象给予约2.5
×
106个细胞/kg(
±
25％)剂量的含有源自1g8(2b3)(seq id no：65)和1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至25
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0328]
在一些实施方式中，向对象给予约5
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自1g8(2b3)(seq id no：65)和1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0329]
在一些实施方式中，向对象给予约6
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自1g8
(2b3)(seq id no：65)和1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0330]
在一些实施方式中，向对象给予约7
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自1g8(2b3)(seq id no：65)和1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0331]
在一些实施方式中，向对象给予约7.5
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自1g8(2b3)(seq id no：65)和1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0332]
在一些实施方式中，向对象给予约8
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自1g8(2b3)(seq id no：65)和1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0333]
在一些实施方式中，向对象给予约1.25
×
106个细胞/kg(
±
20％)剂量的含有源自1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至20
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0334]
在一些实施方式中，向对象给予约2.5
×
106个细胞/kg(
±
25％)剂量的含有源自1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至25
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0335]
在一些实施方式中，向对象给予约5
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0336]
在一些实施方式中，向对象给予约6
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0337]
在一些实施方式中，向对象给予约7
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。
[0338]
在一些实施方式中，向对象给予约7.5
×
106个细胞/kg(
±
30％)剂量的含有源自1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)的scfv的myd88/cd40 psca car
‑
t细胞和0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量的未修饰的多克隆t细胞，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，
id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0346]
在一些实施方式中，向对象给予约7
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的修饰的t细胞来提供前列腺癌的治疗和预防，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。
[0347]
在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，修饰的t细胞与未修饰的多克隆t细胞以0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量联合给予。在一些实施方式中，修饰的t细胞是myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，其含有源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0348]
在一些实施方式中，向对象给予约0.1
×
106个细胞/kg至约8
×
106个细胞/kg的剂量的修饰的t细胞来提供胰腺癌的治疗和预防，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，修饰的t细胞与未修饰的多克隆t细胞以0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量联合给予。在一些实施方式中，修饰的t细胞是myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，其含有源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0349]
在一些实施方式中，向对象给予约7
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的修饰的t细胞来提供胰腺癌的治疗和预防，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。
[0350]
在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，修饰的t细胞与未修饰的多克隆t细胞以0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量联合给予。在一些实施方式中，修饰的t细胞是myd88/
cd40 psca car
‑
t细胞，其含有源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0351]
在一些实施方式中，向对象给予约5
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的修饰的t细胞来提供胰腺癌的治疗和预防，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。
[0352]
在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，修饰的t细胞与未修饰的多克隆t细胞以0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量联合给予。在一些实施方式中，修饰的t细胞是myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，其含有源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0353]
在一些实施方式中，向对象给予约0.1
×
106个细胞/kg至约8
×
106个细胞/kg的剂量的修饰的t细胞来提供胃癌的治疗和预防，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，修饰的t细胞与未修饰的多克隆t细胞以0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量联合给予。在一些实施方式中，修饰的t细胞是myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，其含有源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0354]
在一些实施方式中，向对象给予约7
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的修饰的t细胞来提供胃癌的治疗和预防，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多
塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，修饰的t细胞与未修饰的多克隆t细胞以0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量联合给予。在一些实施方式中，修饰的t细胞是myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，其含有源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0355]
在一些实施方式中，向对象给予约5
×
106个细胞/kg(
±
20％)的剂量的修饰的t细胞来提供胃癌的治疗和预防，然后以每天、每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次的间隔给予利米多塞，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01至1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、或1.0mg/kg。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为每天0.4mg/kg，每周三次、每周两次、每周、每月两次或每月一次，只要需要(例如癌症缓解)。在一些实施方式中，利米多塞的剂量为0.4mg/kg每周一次。在一些实施方式中，修饰的t细胞与未修饰的多克隆t细胞以0.1
×
106个细胞/kg至30
×
106个细胞/kg的量联合给予。在一些实施方式中，修饰的t细胞是myd88/cd40 psca car
‑
t细胞，其含有源自选自下组的psca抗体的可变重链和可变轻链的scfv：a11 vl(seq id no：49)，a11 vh(seq id no：51)；bm2b3 vl(seq id no：53)，bm2b3 vh(seq id no：55)；ha1
‑
4.121vh(seq id no：57)，hla1
‑
4.121vl(seq id no：59)；h1
‑
1.10vh(seq id no：61)，h1
‑
1.10vl(seq id no：63)；1g8(2b3)(seq id no：65)，1g8(2b3
‑
c5)(seq id no：67)；1g8(2b3
‑
a2)(seq id no：69)，和1g8(2b3
‑
a11)(seq id no：71)。
[0356]
在一些实施方式中，监测对象中的肿瘤标记物的拷贝数。在一些实施方式中，测量肿瘤标记物的拷贝数的减少。例如，这可以包括肿瘤标记物的拷贝数减少约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。在一些实施方式中，监测对象中的前列腺干细胞抗原(psca)的拷贝数。在一些实施方式中，测量前列腺干细胞抗原(psca)拷贝数的减少。例如，这可以包括前列腺干细胞抗原(psca)的拷贝数减少约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。
[0357]
在一些实施方式中，监测对象中的肿瘤负荷。肿瘤负荷可以指癌细胞的数量、肿瘤的大小和/或体内癌症的数量。肿瘤负荷可称为肿瘤负担。在一些实施方式中，测量肿瘤负荷的减少。例如，这可以包括肿瘤负荷减少约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。
[0358]
根据标准指南，例如实体瘤的反应评估标准(recist)，实体瘤的“减小肿瘤大小”或“抑制肿瘤生长”或“减少肿瘤负荷”是指对治疗的反应或疾病的稳定。例如，这可能包括实体瘤直径减小约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、或100％，或肿瘤、循环肿瘤细胞或肿瘤标记物的数量减少约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、或100％。可以通过任何方法分析肿瘤的大小，包括例如ct扫描、mri，例如ct
‑
mri、胸部x射线(用于肺肿瘤)或分子成像，例如pet扫描，例如，在给予碘123标记的psa如psma配体后的pet扫描(例如，其中抑制剂是trofex
tm
/mip
‑
1072/1095)，或分子成像例如spect，或使用psa的pet扫描(例如psma抗体，例如capromad pendetide(prostascint)，111
‑
铱标记的psma抗体)。
[0359]“减少、减缓或抑制肿瘤血管形成”是指肿瘤血管形成减少约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、或100％，或新血管系统的出现减少约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、或100％，与治疗前的肿瘤血管形成量相比。减少可以指一种肿瘤，或者可以是多于一种肿瘤中血管形成的总和或平均值。测量肿瘤血管形成的方法包括例如cat扫描、mri，例如ct
‑
mri，或分子成像，例如spect，或pet扫描，例如给予碘123标记的psa后如psma配体的pet扫描，例如，其中抑制剂是trofex
tm
/mip
‑
1072/1095，或使用psa如psma抗体的pet扫描，例capromad pendetide(prostascint)，一种111
‑
铱标记的psma抗体。
[0360]
在一些实施方式中，癌症(例如，前列腺癌、胰腺癌、胃癌、卵巢癌)的进展被阻止或延迟至少6个月。在一些实施方式中，癌症的进展被阻止或延迟至少12个月。在一些实施方式中，癌症(例如，前列腺癌)的格里森评分为7、8、9、10或更高。在一些实施方式中，对象在给予诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞后3个月内有部分或完全响应。在一些实施方式中，对象在给予cid(例如利米多塞)后3个月有部分或完全响应。在一些实施方式中，对象在给予诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞后6个月内有部分或完全响应。在一些实施方式中，对象在给予cid(例如利米多塞)后6个月有部分或完全响应。在一些实施方式中，对象在给予诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞后9个月内有部分或完全响应。在一些实施方式中，对象在给予cid(例如利米多塞)后9个月有部分或完全响应。
[0361]
当肿瘤存在于器官中，或源自或转移自器官(例如，前列腺、胰腺、胃、卵巢)中的肿瘤，或产生一种或多种器官特异性肿瘤标记物时，肿瘤被分类或命名为器官的一部分。肿瘤已经从器官中的肿瘤转移，例如，当确定肿瘤具有与对象器官中的肿瘤相同或相似的染色体断点时。在某些情况下，肿瘤(例如，前列腺肿瘤；胰腺肿瘤、胃肿瘤、卵巢肿瘤)表达前列腺干细胞抗原(psca)。
[0362]
肿瘤被分类或命名为器官的一部分，例如，当肿瘤存在于前列腺中，或源自或转移自前列腺中的肿瘤，或产生psa时，例如分类或命名为前列腺癌肿瘤。肿瘤已经从前列腺中的肿瘤转移，例如，当确定肿瘤具有与对象前列腺中的肿瘤相同或相似的染色体断点时。
[0363]
可以以任何方便的方式提供调整或维持随后的药物剂量，例如修饰的t细胞的随后剂量和/或随后的cid(例如利米多塞)剂量的指示。在一些实施方式中，可以以表格形式(例如，在物理或电子介质中)提供指示。例如，样本中肿瘤细胞的大小或肿瘤细胞的数量或水平可以在表格中提供，并且临床医生可以将症状与疾病阶段的列表或表格进行比较。然后临床医生可以从该表中确定后续药物剂量的指示。在某些实施方式中，在症状被提供给计算机(例如，输入到计算机上的存储器中)之后，指示可以由计算机呈现(例如，显示)。例如，可以将该信息提供给计算机(例如，由用户输入计算机存储器或通过计算机网络中的远程设备传输到计算机)，并且计算机中的软件可以生成用于调整或维持后续药物剂量的指示、和/或提供后续药物剂量。
[0364]
一旦基于适应症确定后续剂量，临床医生就可以施用后续剂量或向另一个人或实体提供调整剂量的说明。本文所用的术语“临床医生”是指决策者，并且在某些实施方式中临床医生是医学专家。在一些实施方式中，决策者可以是计算机或显示的计算机程序输出，并且健康服务提供者可以根据计算机显示的指示或随后的药物剂量采取行动。决策者可直接(例如，将后续剂量注入对象)或远程(例如，泵参数可由决策者远程改变)施用后续剂量。
[0365]
在治疗过程中，可以通过确定与肿瘤相关的生物标记物(例如，psca)的浓度来优化实体瘤癌症(包括例如前列腺癌、胰腺癌、胃癌、卵巢癌)的治疗。由于患者可能对治疗过程有不同的反应，因此可以通过跟踪各种体液或组织中的生物标记物浓度或水平来监测对治疗的反应。生物标记物多肽的浓度、水平或量的确定可包括全长多肽或其片段或变体的检测。片段或变体可能足以通过例如免疫学方法、质谱、核酸杂交等检测。针对个别患者的优化治疗可能有助于避免过量服用引起的副作用，可能有助于确定治疗何时无效并改变治疗过程，或可能有助于确定何时可以增加剂量，或确定治疗时机。
[0366]
例如，已经确定某些生物标记物(例如，psca)的量或浓度在实体瘤的治疗过程中发生变化。提供此类生物标记物的预定目标水平，或可在正常对象中鉴定的生物标记物阈值，其允许临床医生确定给予有需要的对象的后续剂量的药物，例如患有实体瘤的对象，例如前列腺肿瘤、胰腺肿瘤、胃肿瘤、卵巢肿瘤，是否可以增加、减少或维持。在某些实施方式中，临床医生可以分别基于生物标记物的存在、不存在或量是否低于、高于或大约相同于生物标记物阈值来做出这样的确定。
[0367]
在考虑临床应用的情况下，有必要以适合于预期应用的形式制备药物组合物，如表达构建体、表达载体、融合蛋白、转导细胞、活化t细胞、转导和加载的t细胞。
[0368]
联合疗法
[0369]
为了增加本文所提供的表达载体的有效性，可能需要将这些组合物和方法与有效治疗疾病的药剂组合。
[0370]
在某些实施方式中，抗癌剂可以与本方法组合使用。“抗癌”剂能够对对象的癌症产生负面影响，例如，通过杀死一种或多种癌细胞、诱导一种或多种癌细胞凋亡、降低一种或多种癌细胞的生长速度、降低转移的发生率或数量、减小肿瘤的大小、抑制肿瘤的生长、减少对肿瘤或一种或多种癌细胞的血液供应、促进针对一种或多种癌细胞或肿瘤的免疫响应、预防或抑制癌症的进展、或延长患有癌症的对象的寿命。抗癌剂包括例如化疗剂(化学疗法)、放疗剂(放射疗法)、外科手术(手术)、免疫治疗剂(免疫疗法)、基因治疗剂(基因疗法)、激素治疗、其他生物制剂(生物疗法)和/或替代疗法。
[0371]
在一些实施方式中，抗生素可与药物组合物组合使用以治疗和/或预防传染病。此类抗生素包括但不限于阿米卡星、氨基糖苷类(例如庆大霉素)、阿莫西林、两性霉素b、氨苄西林、锑、阿托伐醌、葡萄糖酸锑钠、阿奇霉素、卷曲霉素、头孢噻肟、头孢西丁、头孢曲松、氯霉素、克拉霉素、氯法齐明、环丝氨酸、氨苯砜、强力霉素、乙胺丁醇、乙硫异烟胺、氟康唑、氟喹诺酮类、异烟肼、伊曲康唑、卡那霉素、酮康唑、米诺环素、氧氟沙星)，对氨基水杨酸、喷他脒、多粘菌素定义素、丙硫异烟胺、吡嗪酰胺、乙胺嘧啶磺胺嘧啶、喹诺酮类(例如环丙沙星)、利福布汀、利福平、司帕沙星、链霉素、磺胺类、四环素、磺胺甲恶唑、三甲氧嘧啶、磺胺嘧啶的组合。
[0372]
更一般地，这样的药剂将以有效杀死或抑制癌细胞和/或微生物的增殖的表达载体组合的量提供。该过程可能涉及同时或在一段时间内将细胞与药剂和药物组合物接触，其中药物组合物和药剂分别给予细胞、组织或生物体将产生期望的治疗益处。这可以通过将细胞、组织或生物体与包括药物组合物和一种或多种药剂的单一组合物或药理学制剂接触，或通过将细胞与两种或更多种不同的组合物或制剂接触来实现，其中一种组合物包括药物组合物，而另一种组合物包括一种或多种药剂。
[0373]
当应用于细胞、组织或生物体时，术语“接触”和“暴露”在本文中用于描述药物组合物和/或另一种药剂，例如化学治疗剂或放射治疗剂，递送至靶细胞、组织或生物体的过程，或与靶细胞、组织或生物体直接并列放置的过程。为了实现细胞杀伤或停滞，将药物组合物和/或另外的药剂以有效杀死细胞或防止它们分裂的组合量递送至一种或多种细胞。在一些实施方式中，化疗剂选自卡铂、磷酸雌莫司汀(emcyt)和沙利度胺。在一些实施方式中，化疗剂是紫杉烷。紫杉烷可以例如选自多西紫杉醇(taxotere)、紫杉醇和卡巴他赛(cabazitaxel)。在一些实施方式中，紫杉烷是多西紫杉醇(docetaxel)。在一些实施方式中，在给予修饰的细胞或核酸的同时或一周内给予化学治疗剂。在其他实施方式中，在给予修饰的细胞或核酸后1至4周或1周至1个月、1周至2个月、1周至3个月、1周至6个月、1周至9个月或1周至12个月给予化学治疗剂。在一些实施方式中，在给予细胞或核酸之前至少1个月给予化疗剂。
[0374]
药物组合物的给予可在其他药剂之前、同时和/或之后间隔数分钟至数周。在将药物组合物和其他药剂分别给予细胞、组织或生物体的实施方式中，通常会确保在每次递送的时间之间不会有很长一段时间，这样药物组合物和药剂仍将能够对细胞、组织或生物体发挥有利的组合作用。例如，在这样的情况下，考虑到可以用两种、三种、四种或更多种方式将细胞、组织或生物体与药物组合物基本上同时(即，在不到约一分钟内)接触。在其他方面，一种或多种药剂可以在给予表达载体之前和/或之后基本上同时、约1分钟至约24小时至约7天至约1至约8周或更长时间以及其中可推导出的任何范围内给予。更进一步地，可以采用本文呈现的药物组合物和一种或多种药剂的各种组合方式。
[0375]
在一些实施方式中，化疗剂可以是淋巴耗竭化疗药物。在其他实施方式中，化疗剂可以是泰索帝(多西紫杉醇)，或另一种紫杉烷，例如卡巴他赛。可以在用细胞和诱导剂治疗之前、期间或之后给予化疗剂。例如，可以在给予第一剂活化核酸之前约1年、11、10、9、8、7、6、5、或4个月、或18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、周或1周给予化疗剂。或者，例如，可以在给予第一剂细胞或诱导剂后约1周或2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18周或4、5、6、7、8、9、10、或11个月或1年给予化疗剂。
[0376]
化疗剂的给予可包括多于一种化疗剂的给予。例如，除了泰索帝或其他紫杉烷如卡巴他赛，还可以给予顺铂。
[0377]
在一些实施方式中，本发明提供联合疗法，包括本文所述的修饰的细胞群与细胞因子或趋化因子中和剂，例如中和抗体。在一些实施方式中，本发明提供联合疗法，包括本文所述的修饰的细胞群与tnfα中和剂，例如抗tnfα抗体。
[0378]
调整或维持后续药物剂量的指示
[0379]
用于调整或维持后续药物剂量的指示可以基于生物标记物的存在或不存在。例如，当(i)生物标记物水平的低灵敏度测定可用，(ii)生物标记物水平对药物的反应急剧变化，(iii)存在低水平或高水平的生物标记物，和/或(iv)药物在给予水平上没有明显毒性时，生物标记物的存在或不存在足以产生调整或维持后续药物剂量的指示。
[0380]
调整或维持后续药物剂量的指示通常基于生物标记物(例如psca)的量或水平。在一些实施方式中，生物标记物的量可以是平均值、中值、标称、范围、区间、最大值、最小值或相对量。在某些实施方式中，可以在有或没有测量误差窗口的情况下表达一定量的生物标记物。
[0381]
在一些实施方式中，生物标记物的量可以表示为生物标记物浓度、每单位重量的生物标记物重量，每单位体积的生物标记物重量，生物标记物摩尔数，每单位体积的生物标记物摩尔数，每单位重量的生物标记物摩尔数，每单位细胞的生物标记物重量，每单位细胞的生物标记物体积、每单位细胞的生物标记物摩尔数等。例如，重量可以表示为飞克、皮克、纳克、微克、毫克和克。例如，体积可以表示为飞升、皮升、纳升、微升、毫升和升。例如，摩尔可以以皮摩尔、纳摩尔、微摩尔、毫摩尔和摩尔表示。在一些实施方式中，单位重量可以是对象的重量或来自对象的样品重量，单位体积可以是来自对象的样品体积(例如，血样体积)，单位细胞可以是每一个细胞或每一定数量的细胞(例如，每1000个细胞微克的生物标记物)。在一些实施例中，如本领域已知的，从一种组织或流体确定的生物标记物的量可以与另一种流体或组织中的生物标记物的量相关联。
[0382]
用于调整或维持后续药物剂量的指示通常是通过将对象体内生物标记物的确定水平与生物标记物的预定水平进行比较而产生的。在某些实施方式中，生物标记物的预定水平有时与对象的治疗或有效药物量有关，有时与药物的毒性水平有关，有时与病症的存在有关，有时与治疗中点有关，有时与治疗终点有关。生物标记物的预定水平有时包括时间作为要素，并且在一些实施方式中，阈值是时间依赖性特征。
[0383]
一些治疗方法包括(i)以一次或多次给予(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次剂量)向对象给予，(ii)在(i)之后确定对象体内或来自对象的生物标记物(例如，psca)的存在、不存在或数量，(iii)提供增加、减少或维持随后给予对象的药物剂量的指示，(iv)任选地向对象给予后续剂量，其中后续剂量相对于(i)中的较早剂量增加、减少或维持。在一些实施方式中，生物标记物的存在、不存在或量是在对对象给予每剂药物后确定的，有时在给予每剂药物后未确定生物标记物的存在、不存在或量(例如，在第一次、第二次、第三次、第四次、第五次、第六次、第七次、第八次、第九次或第十次剂量中的一个或多个之后评估生物标记物，但不是在每次给予后每次都评估)。
[0384]
调整后续药物剂量的指示可被视为需要增加或需要减少后续药物剂量。临床医生可以考虑用于调整或维持后续药物剂量的指示，并且在某些实施方式中，临床医生可以根据指示采取行动。在一些实施方式中，临床医生可以选择不对指示采取行动。因此，临床医生可以根据所提供的指示选择调整或不调整后续药物剂量。
[0385]
可以以任何方便的方式提供调整或维持后续药物剂量和/或后续药物剂量的指示。在一些实施方式中，可以以表格形式(例如，在物理或电子介质中)提供指示。例如，可以在表格中提供生物标记物阈值，并且临床医生可以将针对对象确定的生物标记物的存在、不存在或量与阈值进行比较。然后临床医生可以从该表中确定后续药物剂量的指示。在某些实施方式中，在生物标记物的存在、不存在或数量被提供给计算机(例如，输入到计算机上的存储器中)之后，指示可以由计算机呈现(例如，显示)。例如，可以将对象的生物标记物的存在、不存在或数量提供给计算机(例如，由用户输入计算机存储器或通过计算机网络中的远程设备传输到计算机)，并且计算机中的软件可以生成用于调整或维持后续药物剂量的指示、和/或提供后续药物剂量。后续剂量可以基于除生物标记物存在、不存在或数量之外的某些因素来确定，例如对象的体重、对象的一种或多种代谢物水平(例如，与肝功能有关的代谢物水平)等。
[0386]
一旦基于适应症确定后续剂量，临床医生就可以施用后续剂量或向另一个人或实
体提供调整剂量的说明。本文所用的术语“临床医生”是指决策者，并且在某些实施方式中临床医生是医学专家。在一些实施方式中，决策者可以是计算机或显示的计算机程序输出，并且健康服务提供者可以根据计算机显示的指示或随后的药物剂量采取行动。决策者可直接(例如，将后续剂量注入对象)或远程(例如，泵参数可由决策者远程改变)施用后续剂量。
[0387]
可以对对象进行预筛选以确定是否可以确定特定生物标记物(例如，psca)的存在、不存在或量。预筛选的非限制性实例包括鉴定遗传标记物的存在或不存在(例如，多态性、特定核苷酸序列)；识别特定代谢物的存在、不存在或数量。临床医生可以使用预筛选结果与生物标记物的存在、不存在或量相结合来确定是否可以调整或维持随后的药物剂量。
实施例
[0388]
下述实施例说明某些实施方式而不限制本技术。
[0389]
例1：psca特异性car
‑
t细胞临床研究
[0390]
本实例中的psca特异性car
‑
t细胞是针对psca的、转基因的、自体候选产物，可与表达psca的细胞结合。psca特异性car
‑
t细胞用包含传统cd3ζ胞质信号传导结构域以及人源化psca抗体的单链可变区结构域(scfv)的第一代car构建体靶向psca。除了抗psca car外，psca特异性car
‑
t细胞还被工程改造成表达由两个fk结合蛋白(fkbp)与来自myd88和cd40的信号传导结构域(诱导型myd88/cd40或imc)在框内构成的诱导型双重共刺激结构域。
[0391]
在小分子二聚体利米多塞的存在下，imc作为分子开关增强和控制t细胞的活化和增殖(图3)。串联fkbp结构域提供了一个配体二聚化支架，它以一种利米多塞依赖性方式诱导imc，以启动下游信号传导通路，上调促炎细胞因子和i型干扰素以及促进细胞增殖和存活。
[0392]
诱导型myd88/cd40 psca car逆转录病毒构建体在5'到3'方向包含编码以下蛋白质的多核苷酸：
[0393]
(1)一种含有截短的人myd88多肽(myd88的氨基末端172个氨基酸，含有dd结构域和中间结构域；由seq id no：22编码的seq id no：21)的融合蛋白，该多肽与人cd40多肽(羧基末端62个氨基酸，即cd40的第216
‑
277位氨基酸；由seq id no：24编码的seq id no：23)，(整个融合蛋白称为mc)的一部分融合，该多肽与突变人fkbp12蛋白(fkbp12(f36v))也称为fkbp12v36、fv36、fkbpv或fv；由seq id no：42和44编码的seq id no：41和43)的两个拷贝融合，其中氨基酸36位(如果计算蛋白质的初始蛋氨酸，则为37位)的苯丙氨酸被缬氨酸取代(整个融合蛋白可能被命名为imc)，
[0394]
(2)t2a多肽(由seq id no：6编码的seq id no：5)，和
[0395]
(3)第一代car多肽，在5'到3'方向上包括与人cd34表位多肽(cd34的氨基酸30
‑
45；由seq id no：12编码的seq id no：11)融合的scfv序列(包含与抗psca单克隆抗体的轻链和重链可变区融合的膜信号肽(由seq id no：8编码的seq id no：7)，以及插入的8氨基酸柔性甘氨酸
‑
丝氨酸接头，即链之间的柔性肽(由seq id no：10编码的seq id no：9))，它与人cd8的α茎区域(cd8的氨基酸141
‑
182；由seq id no：14编码的seq id no：13)融合，该区域与人cd8的跨膜结构域(cd8的氨基酸183
‑
219；由seq id no：16编码的seq id no：15)融合，后者与人cd3ζ(cd3ζ同种型x2的氨基酸83
‑
194；由seq id no：18编码的seq id no：
17)的一部分融合。
[0396]
诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞被合理设计为响应两种不同的信号而增殖(图4)：1)通过psca识别和cd3ζ信号传导结构域的抗原特异性激活(信号1)；和，2)通过imc的利米多塞依赖性共刺激(信号2)。这种设计可以优化诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞的抗原针对性和抗原非依赖性t细胞活化、增殖和持久性，从而可以提供相对于传统car治疗实体瘤恶性肿瘤有所增强的临床活性(信号3；图4)。
[0397]
为了确定抗原依赖性细胞毒性是否存在剂量响应关系，以及评估imc是否会影响这一点，荷瘤nsg小鼠在第0天通过静脉注射给予单次递增剂量的诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞(0.625
×
106个细胞、1.25
×
106个细胞、2.5
×
106个细胞、5.0
×
106个细胞和10.0
×
106个细胞)(图5a，图5b)。如果在t细胞注射后的两次连续测量中肿瘤测量显示生长，则开始每周腹膜内利米多塞5mg/kg。到第14天，剂量≥2.5
×
106个细胞导致hpac肿瘤的快速控制和最终消除。在不存在利米多塞的情况下，≤1.25
×
106个细胞的剂量不足以减少肿瘤体积。然而，在imc活化后，分别接受0.625
×
106或1.25
×
106个细胞的小鼠的肿瘤生长要么稳定要么减少。总之，这些数据不仅支持在hpac荷瘤小鼠中用利米多塞活化imc能够促进抗肿瘤功能，而且还定义了1.0
×
106个细胞作为影响体内肿瘤生长的最小剂量水平。此外，所有诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞治疗的小鼠在实验过程中体重保持或增加，无论t细胞剂量水平如何、有或没有利米多塞治疗，表明治疗耐受性良好，没有明显毒性的迹象。
[0398]
为了确定psca特异性car
‑
t细胞的可行性、安全性和临床活性，与利米多塞一起给予先前治疗过的psca阳性晚期实体瘤(胰腺癌、胃癌/gej、前列腺癌)对象，设计了图7中描述的研究。
[0399]
图6显示胰腺肿瘤的psca筛选。
[0400]
第1部分(第1阶段)：细胞剂量递增以确定与利米多塞(固定单剂量为0.4mg/kg)一起给予的诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞(从1.25
×
106个细胞/kg起增加到5.0
×
106个细胞/kg剂量)的最大剂量。
[0401]
第2部分(第2阶段)：用于评估安全性、药效学(包括诱导型myd88/cd40psca car
‑
t细胞持久性)和第1部分中确定的剂量在各种表达psca的实体瘤中的适应症特异性剂量扩展。
[0402]
诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞的初始起始剂量为1.25
×
106个细胞/kg。利米多塞以0.4mg/kg的固定剂量给予。
[0403]
小组0如下完成：招募三名对象并在第0天接受psca car
‑
t细胞(1.25
×
106个细胞/kg)，不存在随后的利米多塞。没有观察到剂量限制性毒性事件，也没有与psca car
‑
t细胞输注相关的不良事件(ae)、细胞因子水平升高或其他毒性迹象。外周血样本的定量聚合酶链式反应(qpcr)分析显示psca car
‑
t细胞计数在第0天至第15天之间增加，并在第5天至第15天观察到最大扩增，然后到第21天最终降低到检测水平以下。基于小组0中证明的有利的安全性概况和psca car
‑
t细胞的早期清除，在第7天向研究治疗方案中添加了固定的单剂量利米多塞(0.4mg/kg)。
[0404]
当psca car
‑
t细胞与利米多塞一起给予时，小组3(1.25
×
106个细胞/kg)是第1部分中细胞剂量递增决定的初始起始小组。3名对象的小组在第0天接受了递增剂量的psca car
‑
t细胞治疗，并在第7天给予了固定的单剂量利米多塞(0.4mg/kg)。psca car
‑
t细胞的
剂量详见图8。
[0405]
结果显示在图9
‑
14中。图9提供了安全性总结。未观察到dlt、神经毒性或细胞因子释放综合征事件。发热是由2位或更多患者报告的唯一与治疗相关的ae。在支持性护理下，这两个事件均在24
‑
36小时内得到解决。具体而言，小组4中的一名患者在第0天输注诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞后出现1级发热；使用扑热息痛后，该事件在24小时内恢复。小组5中的一名患者在第0天输注诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞后出现2级发热。尽管使用扑热息痛后事件在36小时内恢复，但这被报告为sae，因为发烧延长了患者计划的与输液相关的入院时间。没有报告其他治疗相关的严重不良事件(sae)。两个发热事件都与外周细胞因子的时间匹配的瞬时增加有关。1级事件伴有中度低血压，在静脉输液后2小时内恢复；2级事件是孤立的，并且在没有其他全身性临床症状的情况下发生。6名患者报告了14次sae，除1次(2级发热)外，所有患者均与所研究的疾病有关。
[0406]
诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞扩增和持久性如图10所示。观察到仅使用环磷酰胺(ctx)方案的淋巴耗竭(ld)(剩余79％
±
25％的细胞)的有限证据。到第4天观察到快速的细胞扩增，但没有利米多塞则没有持久性。尽管在除1名对象之外的所有对象中均进行了无效的淋巴清除，但在大多数患者中观察到了第4天的快速细胞植入。用环磷酰胺清除淋巴细胞后剩余淋巴细胞的平均百分比为79％(sd 25％)。在8名接受单剂量利米多塞的患者中，4名患者在7天内细胞扩增至少3倍至20倍，3名患者在利米多塞输注后细胞持续时间＞3周。在筛选时psca表达最高的一名患者中观察到细胞持续时间＞4个月。在小组0中，当单独输注诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞时，观察到有限的外周扩增。
[0407]
随时间变化的外周细胞因子分布如图11所示。在接受利米多塞的8名患者中，所有患者的细胞因子(ip
‑
10、tnf
‑
α)均升高，与细胞扩增相关。增加的血清ip
‑
10表明先前的ifnγ产生，并且与增加的血清tnf
‑
α一起支持t细胞活化，以响应利米多塞对imc的活化。增加的细胞剂量与整体增加的血清细胞因子和趋化因子水平有关。在rim输注后，许多患者观察到趋化因子水平升高，包括mcp
‑
1、mip
‑
1α和mip
‑
1β，它们由活化的淋巴细胞和巨噬细胞产生，具有重要的趋化和促炎功能。在1名患者中观察到外周淋巴细胞(与血清il
‑
7和il
‑
15水平升高有关的)减少，其中淋巴耗竭后il
‑
7和il
‑
15水平升高与外周淋巴细胞计数减少至起始水平的31％相关。总体而言，淋巴细胞减少到起始水平的平均78.7+/
‑
25％。
[0408]
用诱导型myd88/cd40 psca car
‑
t细胞治疗的患者抗肿瘤活性的证据示于图12和图13中。在第4周(第1个月)、第8周(第2个月)和此后每8周(每2个月)进行扫描，直至进展。两名患者的肿瘤缩小＞20％。
[0409]
图14示出了在给予psca car
‑
t细胞后至下一次治疗的时间。
[0410]
因此，这些结果一起表明，给予psca car
‑
t细胞与单剂量的利米多塞具有良好的耐受性。没有观察到任何级别的细胞因子释放综合征或神经毒性。最常见的ae与接受细胞毒性化疗或其他癌症免疫疗法的晚期癌症患者所经历的ae一致。
[0411]
与治疗相关的ae是有限的，强度为轻度至中度，并通过支持性护理得到解决。此外，尽管单独使用环磷酰胺缺乏淋巴耗竭，但psca car
‑
t细胞在一些患者中表现出增强的扩增和延长的持久性。因此，在这个经过大量预处理的患者群体中观察到了生物活性/疾病控制的证据。
[0412]
方法
[0413]
制造工艺说明：psca car
‑
t细胞是从患者的外周血单核细胞(pbmc)中制备的，pbmc是通过以下描述的标准单采程序获得的。pbmc富含t细胞，然后在细胞培养物中洗涤和扩增。一旦获得目标数量的细胞，扩增的t细胞就用含有抗psca car和利米多塞诱导型imc转基因的无复制能力的逆转录病毒载体转导。将转导的t细胞制成悬浮液并冷冻保存。最终的psca car
‑
t细胞产物必须通过释放测试、包括无菌测试，然后作为冷冻悬浮液在患者特定的输液袋中运输。
[0414]
包装及制剂：psca car
‑
t细胞冷冻保存在10
‑
15ml冷冻培养基中，并在液氮气相中冷冻保存在冷冻袋中。
[0415]
单采
[0416]
根据当地机构标准，对象接受外周血单核细胞(pbmc)采集。在单采之前，测量并记录对象的白细胞计数和分类。结果必须证明对象具有足够的骨髓功能，无需输血且无需生长因子支持：
[0417]
·
白细胞计数≥2
×
103/μl，绝对淋巴细胞计数≥1
×
102/μl
[0418]
·
中性粒细胞绝对计数≥1
×
103/μl，没有粒细胞集落刺激因子支持
[0419]
·
血小板≥100
×
103/μl
[0420]
·
血红蛋白≥9g/dl或根据机构单采指南
[0421]
根据机构标准程序，使用标准化连续流动离心收集和处理1
‑
2体积的血液。对体积进行处理，并记录单采的持续时间。在单采程序期间和之后，对象按照既定的监管指南接受传染病监测。根据机构指南进行单采术前的评估、静脉通路、单采术并发症的监测和治疗。
[0422]
psca cart细胞输注前的淋巴清除
[0423]
在输注psca car t细胞前的第五天、第四天和第三天给予静脉内500mg/m2环磷酰胺和静脉内30mg/m2的氟达拉滨的淋巴清除化疗方案，除非不能耐受该组合。如果确定基于组合的淋巴清除对对象存在不利的安全风险，则淋巴清除单独使用环磷酰胺进行。
[0424]
实施例2：核酸和氨基酸序列
[0425]
表1：氨基酸序列
[0426]
[0427]
[0428]
[0429]
[0430]
[0431][0432]
表2：核酸序列
[0433]
[0434]
[0435]
[0436]
[0437]
[0438]
[0439]
[0440]
[0441][0442]
实施例3：实施方式的实例
[0443]
下述实施例说明某些实施方式而不限制本技术。
[0444]
a1.包含修饰的和未修饰的t细胞的异质性t细胞群，其中修饰的t细胞包含a)编码诱导型myd88/cd40多肽的第一多核苷酸和b)编码前列腺干细胞抗原嵌合抗原受体psca
‑
car多肽的第二多核苷酸。
[0445]
a2.如实施方式a1所述的细胞群，其中，约20％至约90％的t细胞是修饰的t细胞。
[0446]
a3.如实施方式a1所述的细胞群，其中，约20％至约80％的t细胞是修饰的t细胞。
[0447]
a4.如实施方式a1所述的细胞群，其中，约20％至约70％的t细胞是修饰的t细胞。
[0448]
a5.如实施方式a1所述的细胞群，其中，约20％至约60％的t细胞是修饰的t细胞。
[0449]
a6.如实施方式a1所述的细胞群，其中，约20％至约50％的t细胞是修饰的t细胞。
[0450]
a7.如实施方式a1～a6中任一项所述的t细胞群，其悬浮在冷冻培养基中。
[0451]
a8.如实施方式a1～a6中任一项所述的t细胞群，其是冷冻保存的。
[0452]
a9.保留
[0453]
a10.如实施方式a1～a9中任一项所述的t细胞群，其包含在适于输注到对象中的稀释剂中的每毫升约20
×
106至120
×
106个细胞。
[0454]
a11.如实施方式a1～a10中任一项所述的t细胞群，其中所述诱导型myd88/cd40多肽包含
[0455]
i)两个多聚体配体结合区；
[0456]
ii)缺乏tir结构域的myd88多肽或截短的myd88多肽；以及
[0457]
iii)缺乏cd40胞外结构域的cd40胞质多肽区。
[0458]
a12.如实施方式a11所述的t细胞群，其中每个多聚体配体结合区包含一个fkbp12变体多肽。
[0459]
a13.如实施方式a2所述的t细胞群，其中，每个fkbp12变体多肽与野生型fkbp12多肽相比对多聚体配体以较高亲和力结合。
[0460]
a14.如实施方式a12或a13中任一项所述的t细胞群，其中，每个fkbp12变体多肽包含36位的氨基酸取代，其与野生型fkbp12多肽相比对多聚体配体以较高亲和力结合。
[0461]
a15.如实施方式a14所述的t细胞群，其中，36位的氨基酸取代选自缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、和丙氨酸。
[0462]
a16.如实施方式a15所述的t细胞群，其中每个多聚体配体结合区是fkb12v36区。
[0463]
a17.如实施方式a1～a16中任一项所述的t细胞群，其中，截短的myd88多肽具有氨基酸序列seq id no：21、或其功能片段。
[0464]
a18.如实施方式a1～a17中任一项所述的t细胞群，其中，截短的myd88多肽不包含全长myd88多肽的从156到c
‑
末端的连续氨基酸残基。
[0465]
a19.如实施方式a1～a17中任一项所述的t细胞群，其中，截短的myd88多肽不包含全长myd88多肽的从152到c
‑
末端的连续氨基酸残基。
[0466]
a20.如实施方式a1～a17中任一项所述的t细胞群，其中，截短的myd88多肽不包含全长myd88多肽的从173到c
‑
末端的连续氨基酸残基。
[0467]
a21.如实施方式a18～a20中任一项所述的t细胞群，其中，所述全长的myd88多肽包含氨基酸序列seq id no：47。
[0468]
a22.如实施方式a1～a17中任一项所述的t细胞群，其中，所述截短的myd88多肽由氨基酸序列seq id no：21组成。
[0469]
a23.如实施方式a1～a22中任一项所述的t细胞群，其中，所述胞质cd40多肽包含氨基酸序列seq id no：23或其功能片段。
[0470]
a24.如实施方式a1～a22中任一项所述的t细胞群，其中，所述胞质cd40多肽由氨基酸序列seq id no：23或其功能片段组成。
[0471]
a25.如方式a1～a24中任一项所述的t细胞群，其中，所述嵌合抗原受体包括抗原识别部分、跨膜区、和t细胞活化分子。
[0472]
a26.如实施方式a25所述的t细胞群，其中，所述抗原识别部分来自选自1g8、2a2、2h9、3c5、3e6、3g3、4a10、和a11的psca抗体，其中1g8、2a2、2h9、3c5、3e6、3g3、和4a10分别由命名为hb
‑
12612、hb
‑
12613、hb
‑
12614、hb
‑
12616、hb
‑
12618、hb
‑
12615、和hb12617的杂交瘤
产生，保存在美国典型培养物保藏中心。
[0473]
a27.如实施方式a25或a26中任一项所述的t细胞群，其中所述抗原识别部分包含选自seq id no：65、67、69、和71的氨基酸序列的重链可变结构域和轻链可变结构域的互补决定区(cdr)。
[0474]
a28.如实施方式a25所述的t细胞群，其中，所述抗原识别部分包含可变重链氨基酸序列可变轻链氨基酸序列，其选自seq id no：51和49；seq id no：55和53；seq id no：57和59；和seq id no：61和63。
[0475]
b1.一种治疗对象的方法，其中对象已被诊断患有与一种或多种表达前列腺干细胞抗原(psca)的实体瘤的存在相关的疾病，所述方法包括向对象给予药剂，其中所述对象先前已接受过实施方式a1～a28中任一项所述的t细胞群的输注。
[0476]
b2.如实施方式b1所述的方法，其中向对象给予多个剂量的药剂。
[0477]
b3.如实施方式b1或b2所述的方法，其中每天一次向对象给予药剂。
[0478]
b4.如实施方式b1或b2所述的方法，其中每周三次向对象给予药剂。
[0479]
b5.如实施方式b1或b2所述的方法，其中每周两次向对象给予药剂。
[0480]
b6.如实施方式b1或b2所述的方法，其中每周一次向对象给予药剂。
[0481]
b7.如实施方式b1或b2所述的方法，其中隔周一次向对象给予药剂。
[0482]
b8.如实施方式b1或b2所述的方法，其中每月两次向对象给予药剂。
[0483]
b9.如实施方式b1或b2所述的方法，其中每月一次向对象给予药剂。
[0484]
b10.如实施方式b1～b9中任一项所述的方法，其中进一步包括监测对象的肿瘤负荷。
[0485]
b11.如实施方式b1～b9中任一项所述的方法，其中进一步包括监测对象的psca拷贝数。
[0486]
b12.如实施方式b1～b11中任一项所述的方法，其中进一步包括监测对象的脐带血中的修饰的t细胞的数量或浓度。
[0487]
b13.如实施方式b1～b12中任一项所述的方法，其中在输注t细胞群后四天或更多天给予第一剂药学组合物。
[0488]
b14.如实施方式b1～b12中任一项所述的方法，其中在输注t细胞群后七天或更多天给予第一剂药学组合物。
[0489]
b15.如实施方式b1～b14中任一项所述的方法，其中包括在确定对象的肿瘤负荷或psca拷贝数未充分降低或疾病正在进展后增加药剂的给予频率。
[0490]
b16.如实施方式b1～b14中任一项所述的方法，其中包括在确定对象的肿瘤负荷或psca拷贝数降低小于50％后增加药剂的给予频率。
[0491]
b17.如实施方式b1～b14中任一项所述的方法，其中包括在确定对象的肿瘤负荷或psca拷贝数降低小于20％后增加药剂的给予频率。
[0492]
b18.如实施方式b10～b16中任一项所述的方法，其中包括在确定对象的肿瘤负荷或psca拷贝数降低50％或更多后降低给予频率。
[0493]
b19.如实施方式b10～b16中任一项所述的方法，其中包括在确定对象的肿瘤负荷或psca拷贝数降低90％或更多后降低给予频率。
[0494]
b20.如实施方式b10～b16中任一项所述的方法，其中包括在确定对象已达到疾病
稳定或缓解状态后降低药剂的给予频率。
[0495]
b21.如实施方式b18～b20中任一项所述的方法，其中包括将药剂的给予频率降低至每月一次。
[0496]
b22.如实施方式b18～b20中任一项所述的方法，其中包括将药剂的给予频率降低至两月一次。
[0497]
b23.如实施方式b18～b20中任一项所述的方法，其中包括将药剂的给予频率降低至四月一次。
[0498]
b24.如实施方式b18～b20中任一项所述的方法，其中包括将药剂的给予频率降低至六月一次。
[0499]
b25.如实施方式b18～b20中任一项所述的方法，其中包括将药剂的给予频率降低至每月一次。
[0500]
b26.如实施方式b18～b20中任一项所述的方法，其中包括将药剂的给予频率降低至每年一次。
[0501]
b28.如实施方式b18～b20中任一项所述的方法，其中包括停止给予药剂。
[0502]
b29.如实施方式b21～b26中任一项所述的方法，其中包括确定对象需要增加car
‑
t细胞活性并增加药剂的给予频率。
[0503]
b30.实施方式b21～b26中任一项所述的方法，包括
[0504]
i)确定与降低药剂给予频率之前对象的肿瘤负荷或psca拷贝数相比，对象的肿瘤负荷或psca拷贝数增加；和
[0505]
ii)恢复给予时间表，或增加药剂的给予频率。
[0506]
b31.如实施方式b1～b30中任一项所述的方法，其中所述药剂是利米多塞。
[0507]
b32.如实施方式b31中任一项所述的方法，其中,每次给予对象的利米多塞为约0.4mg/kg对象体重。
[0508]
c1.如实施方式b1～b32中任一项所述的方法，其中在输注t细胞群后，对象不接受il
‑
2治疗。
[0509]
c2.如实施方式b1～c1中任一项所述的方法，其中所述对象已被诊断出患有胰腺、前列腺、胃、卵巢或膀胱的肿瘤。
[0510]
c3.如实施方式b1～c1中任一项所述的方法，其中所述对象已被诊断出患有胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌或膀胱癌。
[0511]
c4.如实施方式b1～c1中任一项所述的方法，其中所述对象已被诊断患有激素难治性前列腺癌、前列腺腺癌或转移性前列腺癌。
[0512]
c5.如实施方式b1～c1中任一项所述的方法，其中所述对象已被诊断患有胃食管交界处癌、弥漫性胃癌、肠胃癌或胃腺癌。
[0513]
c6.如实施方式b1～c1中任一项所述的方法，其中所述对象已被诊断患有胰腺癌、可切除的胰腺癌或临界可切除的胰腺癌。
[0514]
c7.如实施方式b1～c1中任一项所述的方法，其中在给予药剂之前从对象获得的样品中每104个人β
‑
肌动蛋白(hactb)拷贝包含5000或更多拷贝的前列腺干细胞抗原(psca)。
[0515]
c8.如实施方式c7所述的方法，其中样品每104个hactb拷贝包含10000或更多psca
拷贝。
[0516]
c9.如实施方式c7所述的方法，其中样品每104个hactb拷贝包含20,000或更多psca拷贝。
[0517]
c10.如实施方式c7所述的方法，其中样品每104个hactb拷贝包含30,000或更多psca拷贝。
[0518]
c11.如实施方式c7所述的方法，其中样品每104个hactb拷贝包含100,000或更多psca拷贝。
[0519]
c12.如实施方式c7所述的方法，其中样品每104个hactb拷贝包含200,000或更多psca拷贝。
[0520]
c13.如实施方式c7所述的方法，其中样品每104个hactb拷贝包含300,000或更多psca拷贝。
[0521]
c14.如实施方式b1～c13中任一项所述的方法，其中给予药剂后，修饰的t细胞在对象体内持续超过1个月。
[0522]
c15.如实施方式b1～c13中任一项所述的方法，其中给予药剂后，修饰的t细胞在对象体内持续超过2个月。
[0523]
c16.如实施方式b1～c13中任一项所述的方法，其中给予药剂后，修饰的t细胞在对象体内持续超过4个月。
[0524]
c17.如实施方式b1～c13中任一项所述的方法，其中给予药剂后，修饰的t细胞在对象体内持续超过6个月。
[0525]
c18.如实施方式b1～c17中任一项所述的方法，其中给予药剂后，修饰的细胞在对象的外周血中扩增3倍或更多倍。
[0526]
c19.如实施方式b1～c17中任一项所述的方法，其中给予药剂后，修饰的细胞在对象的外周血中扩增5倍或更多倍。
[0527]
c20.如实施方式b1～c17中任一项所述的方法，其中给予药剂后，修饰的细胞在对象的外周血中扩增10倍或更多倍。
[0528]
c21.如实施方式b1～c17中任一项所述的方法，其中给予药剂后，修饰的细胞在对象的外周血中扩增15倍或更多倍。
[0529]
c22.如实施方式b1～c17中任一项所述的方法，其中给予药剂后，修饰的细胞在对象的外周血中扩增20倍或更多倍。
[0530]
本文中引用的各专利、专利申请、出版物和文献的全部内容均通过引用纳入本文。对上述专利、专利申请、出版物和文献的引用并不表示承认上述任何内容是相关的现有技术，也并不表示承认这些出版物或文献的内容或日期。他们的引用并不表示搜索相关公开。关于文件日期或内容的所有陈述均基于现有信息，并不承认其准确性或正确性。
[0531]
可对上述内容进行改变而不背离本技术的基本方面。尽管参考一个或多个具体实施方式详细描述了本技术，但是本领域普通技术人员将认识到可对本技术中具体揭示的实施方式进行改变，只要这些改变和改进在本技术的范围和精神内。
[0532]
在本文中适当描述的本技术可以在无本文中具体揭示的任何元素存在下实施。因此，例如，在本文的各种情况下，术语“包含”、“基本由
…
组成”和“由
…
组成”可相互替换。已经使用的术语和表达用作说明而非限制性的术语，这些术语和表达的使用并不排除所显示
和所描述的特征或其部分的任何等同特征或其部分，以及在要求专利权的本技术范围内的各种可行的改变。术语“一个”或“一种”修饰某个元素时，表示一个或一种该元素或者多个或多种该元素(例如“一个试剂”可表示一个或多个试剂)，除非由上下文可以清楚地知道所描述的是一种元素还是不止一种元素。如本文所用，术语“约”是指基础参数的10％以内的值(即正负10％)，并且在一串值的开头使用术语“约”会修改每个值(即，“约1、2和3”指的是约1、约2和约3)。例如，“约100克”的重量可包括在90克到110克之间的重量。此外，当本文描述值的列表时(例如，约50％、60％、70％、80％、85％或86％)，该列表包括其所有中间值和分数值(例如，54％、85.4％)。因此，应理解尽管本技术通过代表性实施方式和任选的特征进行了具体描述，但是本领域技术人员能够想到本文所揭示的内容的改变和变体，这些改变和变体应认为落在本技术的范围内。
[0533]
在所附权利要求书中陈述了本技术的某些实施方式。