本发明涉及生物制药和生物化工
技术领域：
，特别涉及用于制备烟酰胺单核苷酸的酶组合物及酶法制备烟酰胺单核苷酸的方法。
背景技术：
：烟酰胺单核苷酸(nmn)是辅酶i的合成底物，结构式如下：其在被烟酰胺核苷酸腺苷转移酶腺苷化后即变成辅酶i(nad)。在生物体内nmn的水平和烟酰胺核苷酸腺苷转移酶(nampt)的活性直接影响到nad的浓度，同时nmn直接参与体内腺苷转移，是体内重要的一种合成底物和功能调节物质。在治疗应用方面，nmn可以用于抗衰老、治疗慢性病等，同时研究表明nmn还对胰岛素的分泌起到调节作用，对mrna表达水平也有影响。因此，nmn在医药治疗方面有着广泛的应用前景，同时也作为一种反应底物在化工方面有着广泛的市场前景。nmn一般应用离子交换树脂进行纯化，由于其与多种类似物如nad带电荷和极性极为相近，分离纯化有很大困难，无法将其中的类似物杂质完全去除，所以离子交换法获得的产品纯度只有60％左右，收率只有40％，生产效率低下，不适合规模化生产。因此，现有技术还有待于改进和发展。相比较而言，生物酶法催化生产nmn更加高效、整个反应过程中催化用酶可循环利用，成本低，节能环保。目前，有两种方法生产nmn，一种是以烟酰胺、amp和atp为底物，经腺嘌呤磷酸核糖转移酶与烟酰胺磷酸核糖转移酶催化反应生成nmn；另一种是以烟酰胺、核糖和atp为底物，经核糖激酶和烟酰胺核糖磷酸转移酶催化反应生成nmn。与以腺苷为原料相比，以amp(一磷酸腺苷)作为生产原料价格偏高。因此，以amp为生产原料的方法，在实际生产中少有应用。目前，现有技术中还未见有采用腺苷为底物生产nmn的报道。技术实现要素：有鉴于此，本发明提供了用于制备烟酰胺单核苷酸的酶组合物及酶法制备烟酰胺单核苷酸的方法。该方法以腺苷为原料，将腺苷激酶、腺嘌呤磷酸核糖转移酶、烟酰胺磷酸核糖转移酶这三种酶合理组合可以高效催化制备烟酰胺单核苷酸，成本低。为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：本发明提供了一种用于制备烟酰胺单核苷酸的酶组合物，由腺苷激酶、腺嘌呤磷酸核糖转移酶、烟酰胺磷酸核糖转移酶组成。作为优选，腺苷激酶、腺嘌呤磷酸核糖转移酶与烟酰胺磷酸核糖转移酶的酶活力比例为(2～3)：(1～2)：(0.5～1)。优选地，腺苷激酶、腺嘌呤磷酸核糖转移酶与烟酰胺磷酸核糖转移酶的酶活力比例为2.5：(1～2)：(0.5～1)。在本发明提供的具体实施例中，腺苷激酶、腺嘌呤磷酸核糖转移酶与烟酰胺磷酸核糖转移酶的酶活力比例为2.5：1：0.5。在本发明提供的具体实施例中，腺苷激酶、腺嘌呤磷酸核糖转移酶与烟酰胺磷酸核糖转移酶的酶活力比例为2.5：2：0.5。在本发明提供的具体实施例中，腺苷激酶、腺嘌呤磷酸核糖转移酶与烟酰胺磷酸核糖转移酶的酶活力比例为2.5：1：1。作为优选，腺苷激酶、腺嘌呤磷酸核糖转移酶或烟酰胺磷酸核糖转移酶的存在形式为游离酶液、固定化酶或固定化重组细胞。本发明还提供了一种酶法制备烟酰胺单核苷酸的方法，包括如下步骤：将腺苷、烟酰胺、atp、mgcl2、磷酸缓冲溶液和权利要求1至4中任一项酶组合物混合得到酶反应液，催化反应后，得到烟酰胺单核苷酸。作为优选，酶反应液中，腺苷的浓度为18～22g/l，烟酰胺的浓度为12～15g/l，atp的浓度为56～64g/l，mgcl2的浓度为9～12g/l，腺苷激酶的酶活力为2×105～3×105u，腺嘌呤磷酸核糖转移酶的酶活力为1×105～2×105u，烟酰胺磷酸核糖转移酶的酶活力为0.5×105～1×105u。优选地，酶反应液中，腺苷的浓度为20g/l，烟酰胺的浓度为13.7g/l，atp的浓度为60g/l，mgcl2的浓度为10.3g/l，腺苷激酶的酶活力为2.5×105u，腺嘌呤磷酸核糖转移酶的酶活力为1×105～2×105u，烟酰胺磷酸核糖转移酶的酶活力为0.5×105～1×105u。在本发明提供的具体实施例中，酶反应液中，腺苷的浓度为20g/l，烟酰胺的浓度为13.7g/l，atp的浓度为60g/l，mgcl2的浓度为10.3g/l，腺苷激酶的酶活力为2.5×105u，腺嘌呤磷酸核糖转移酶的酶活力为1×105u，烟酰胺磷酸核糖转移酶的酶活力为0.5×105u。在本发明提供的具体实施例中，酶反应液中，腺苷的浓度为20g/l，烟酰胺的浓度为13.7g/l，atp的浓度为60g/l，mgcl2的浓度为10.3g/l，腺苷激酶的酶活力为2.5×105u，腺嘌呤磷酸核糖转移酶的酶活力为2×105u，烟酰胺磷酸核糖转移酶的酶活力为0.5×105u。在本发明提供的具体实施例中，酶反应液中，腺苷的浓度为20g/l，烟酰胺的浓度为13.7g/l，atp的浓度为60g/l，mgcl2的浓度为10.3g/l，腺苷激酶的酶活力为2.5×105u，腺嘌呤磷酸核糖转移酶的酶活力为1×105u，烟酰胺磷酸核糖转移酶的酶活力为1×105u。作为优选，磷酸缓冲溶液的ph值为7.0。作为优选，催化反应的条件为：反应温度30～35℃，反应时间为6～10小时。优选地，催化反应的条件为：反应温度33℃，反应时间为8小时。本发明提供了用于制备烟酰胺单核苷酸的酶组合物及酶法制备烟酰胺单核苷酸的方法。该酶组合物由腺苷激酶、腺嘌呤磷酸核糖转移酶、烟酰胺磷酸核糖转移酶组成。本发明具有如下技术效果：本发明将三种酶合理组合可以高效催化制备烟酰胺单核苷酸。本发明所述酶组合物可循环利用，成本低，节能环保。本发明所述酶法制备烟酰胺单核苷酸的方法以腺苷为底物，通过添加烟酰胺单核苷酸生产用酶组合物，可以低成本、安全可靠制备烟酰胺单核苷酸，降低现有路线的成本，使其适应规模化生产，为烟酰胺单核苷酸在生物催化和药品领域的使用提供保证。本发明专利在原有nmn生产酶系基础上添加腺苷激酶，该酶可催化腺苷生成amp。腺苷价格仅为amp的30％，价格低廉，来源广泛，为工业化生产nmn节省成本。具体实施方式本发明公开了用于制备烟酰胺单核苷酸的酶组合物及酶法制备烟酰胺单核苷酸的方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。本发明提供了一种酶组合物，由腺苷激酶、腺嘌呤磷酸核糖转移酶、烟酰胺磷酸核糖转移酶组成。本发明所述酶组合物中腺苷激酶(ak)、腺嘌呤磷酸核糖转移酶(aprt)、烟酰胺磷酸核糖转移酶(nmprt)三种酶合理组合可以用于酶解催化合成nmn。在一些实施方案中，所述的酶组合物中所述腺苷激酶、腺嘌呤磷酸核糖转移酶、烟酰胺磷酸核糖转移酶的质量比为1:1:1。在一些具体实施例中，所述腺苷激酶、腺嘌呤磷酸核糖转移酶、烟酰胺磷酸核糖转移酶的比例为1:2:1。在一些具体实施例中，所述腺苷激酶、腺嘌呤磷酸核糖转移酶、烟酰胺磷酸核糖转移酶的比例为1:1:2。在一些具体实施例中，所述腺苷激酶、腺嘌呤磷酸核糖转移酶、烟酰胺磷酸核糖转移酶的比例为2:1:1。本发明所述酶组合物中所述腺苷激酶、腺嘌呤磷酸核糖转移酶、烟酰胺磷酸核糖转移酶为通过基因工程技术通过pcr扩增目的片段、与载体连接转入宿主菌后诱导蛋白表达获得的相关酶制剂。所述酶制剂可以是粗酶液或者干粉，也可以是再经固定化处理后的固定化酶或者固定化重组细胞。所述固定化的酶制剂或固定化重组细胞可以通过离心方式分利，也可通过过滤方式分离回收。回收的固定化酶或固定化重组细胞可重复利用，用于酶促反应。本发明还提供了利用上述酶组合物制备烟酰胺单核苷酸的方法。一种酶法制备烟酰胺单核苷酸的方法，在ph7.0磷酸缓冲溶液中加入腺苷、烟酰胺、atp、mgcl2·6h2o混匀，加入上述的酶组合物，催化制得烟酰胺单核苷酸。本发明所述方法以腺苷为底物，通过添加烟酰胺单核苷酸生产用酶组合物，在生物催化体系中进行酶促反应，可以低成本、安全可靠制备烟酰胺单核苷酸。具体反应式如下：在一些实施方案中，本发明所述酶法制备烟酰胺单核苷酸的方法中，所述腺苷的终浓度为18g/l～22g/l，烟酰胺的终浓度为12g/l～15g/l，atp的终浓度为56g/l～64g/l，mgcl2·6h2o的终浓度为20g/l～24g/l。在一些具体实施例中，所述腺苷的终浓度为20g/l，烟酰胺的终浓度为13.7g/l，atp的终浓度为60g/l，mgcl2·6h2o的终浓度为22g/l。作为优选，本发明所述酶法制备烟酰胺单核苷酸的方法中，所述催化反应条件为在ph7.0、反应温度30-35℃条件下反应6-10小时。催化反应后分离的反应液可通过离子交换层析、浓缩、结晶和干燥等制备烟酰胺单核苷酸成品。腺苷激酶(ak)酶活测定方法：反应体系如下：1ml0.1mmgac2，1ml1mgly-naoh(ph9.0)，2ml0.1％溴麝香草酚蓝，48mgatp和53mg腺甘酸，并加超纯水至总体积20ml获得反应混和液，其各组分浓度如下：5mmmgac2(醋酸镁)，50mmgly-naoh(甘氨酸-氢氧化钠)，0.01％溴麝香草酚蓝，4.7mmatp，和10mm腺苷。用0.5mnaoh调节614nm处的吸光值约为2.2±0.3，使反应混合液ph值接近7.4±0.3，反应混合物需现配现用。将ak(3.68mg/ml)用tris-buffer(20mmtrishcl，500mmnacl，5％glycerol，ph8.0)进行梯度稀释，然后取5μl稀释后的bmadk加入995μl反应混合物中，利用光程为1cm的塑料比色皿，在du800核酸/蛋白分析仪(beckman，usa)上记录反应体系在180s内614nm处的吸光度。反应速度定义为反应前10s在614nm处吸光值变化直线的斜率。腺嘌呤磷酸核糖转移酶(aprt)酶活测定方法：酶反应体系及反应条件如下：100mmtris-hcl(ph7.0)，20mmmgcl2，1mmamp，1mm烟酰胺，30℃反应15min，沸水煮5min灭酶，离心，上清液过膜。采用hplc检测腺嘌呤的含量，具体为c18hplc色谱柱，250mm×4.6mm；流动相：磷酸三乙胺水溶液(其中磷酸含量0.6％(v/v)，用三乙胺调节ph至6.6)：甲醇＝90:10；紫外检测器，波长254nm，柱温30℃，流速1ml/min，进样量5μl。烟酰胺磷酸核糖转移酶(nmprt)酶活测定方法：酶反应体系及反应条件如下：100mmtris-hcl(ph7.0)，1mmatp，1mm烟酰胺，1mm5-phospho-α-d-ribose1-diphosphate，30℃反应15min，用盐酸水灭酶，离心，上清液过膜。采用hplc检测nmn的含量，具体为c18hplc色谱柱，250mm×4.6mm；流动相：0.1％tfa，甲醇；紫外检测器，波长260nm，柱温25℃，流速0.8ml/min，进样量5μl。如无特殊说明，本发明实施例中所涉及的试剂均为市售产品，均可以通过商业渠道购买获得。其中，种子培养基配方为蛋白胨10g/l，酵母粉5g/l，nacl10g/l。发酵培养基配方为蛋白胨10g/l，酵母粉5g/l，nacl8g/l，甘油10g/l，磷酸一氢钾1.2g/l，磷酸二氢钾1.8g/l，硫酸镁1g/l。下面结合实施例，进一步阐述本发明：实施例1、制备nmn生产用酶根据3种酶基因的序列，设计3对扩增引物。提取大肠杆菌(escherichiacoli)菌株基因组dna，以其为模板，pcr扩增ak片段，并将其连接至pet28a载体(购于novagene公司)；提取大肠杆菌(escherichiacoli)菌株基因组dna，以其为模板，pcr扩增aprt片段，并将其连接至pet28a载体(购于novagene公司)；提取杜克雷氏嗜血杆菌(haemophilusducreyi)(购于上海捷瑞生物工程有限公司)基因组dna，以其为模板，pcr扩增nmprt基因片段，并将其连接至pet28a载体(购于novagene公司)；3种基因片段连接成功经测序正确后，分别转入e.colibl21(de3)菌株(上海唯地生物技术有限公司)。其中，腺苷激酶(ak)的序列为：atgcgtatcattctgcttggcgctccgggcgcggggaaagggactcaggctcagttcatcatggagaaatatggtattccgcaaatctccactggcgatatgctgcgtgctgcggtcaaatctggctccgagctgggtaaacaagcaaaagacattatggatgctggcaaactggtcaccgacgaactggtgatcgcgctggttaaagagcgcattgctcaggaagactgccgtaatggtttcctgttggacggcttcccgcgtaccattccgcaggcagacgcgatgaaagaagcgggcatcaatgttgattacgttctggaattcgacgtaccggacgaactgatcgttgaccgtatcgtcggtcgccgcgttcacgcgccgtctggtcgtgtttatcacgttaaattcaatccgccgaaagtagaaggtaaagacgacgttaccggtgaagaactgactacccgtaaagacgatcaggaagaaaccgtacgtaaacgtctggttgaataccatcagatgacagcaccgctgatcggctactactccaaagaagcggaagcgggtaacaccaaatacgcgaaagttgacggcaccaagccggttgctgaagttcgcgctgatctggaaaaaatcctcggc；扩增引物序列为ak-f:5’-3’:agtcgcatcatatgcgtatcattctgctt，划线为酶切位点ndei；ak-r:3’-5’:gcgcgatagaattcgccgaggattttttcc，划线为酶切位点ecori。腺嘌呤磷酸核糖转移酶(aprt)的序列为：atgaccgcgactgcacagcagcttgagtatctcaaaaatagcatcaaaagcattcaggactacccaaaacccggcattcttttccgcgatgtcaccagcttactggaagacccgaaagcttacgctctcagcatcgacttgctggttgagcgttacaaaaatgcgggcattaccaaagttgtcggcaccgaagcgcgtggcttcttgtttggcgctccggtagctctgggtctgggcgttggctttgtaccggtccgtaaaccgggcaaactgccgcgtgaaaccatcagtgaaacttacgacctggaatacggcaccgatcagctggagatccacgttgatgccatcaaaccgggcgacaaagttctggtggtggacgacctgctggcaaccggcggcactatcgaagcgaccgttaaactgatccgtcgtctgggtggtgaagtggctgacgctgcgttcattatcaacctgttcgatctcggcggcgaacagcgtctcgaaaaacagggcattaccagctacagccttgtcccgttcccgggccattaa；扩增引物序列为aprt-f:5’-3’:agtcgcatcatatgaccgcgactgcacag，划线为酶切位点ndei；aprt-r:3’-5’:gcgcgatagaattcttaatggcccgggaacggg，划线为酶切位点ecori。烟酰胺磷酸核糖转移酶(nmprt)的序列为atggataacctattaaattatagtagtcgtgctagtgctataccatcattattatgcgatttttacaaaacatctcatcgaataatgtatcccgaatgttcacaaattatttatagtacatttacacctcgtagcaatgaacaagcgccttatttaacacaagttgtgtcatttggttttcaagcctttatcattaaatatttaattcattattttaatgataactttttttctcgagataaacatgatgttgtgactgaatactctgcatttattgagaaaaccttacagttagaggatacgggtgaacacattgcaaaattacatgagttgggttatttgcctatccggattaaagctattcctgaaggaaaaacggtggcaattaaagttccggtgatgacgattgaaaatacgcattctgatttcttttggcttactaactatttagaaacattaattaatgtatcactttggcagccgatgacttctgcctcgattgcttttgcttatcggacagcattaattaaatttgctaatgaaacttgtgataatcaagaacatgtgccatttcaatcgcatgatttttcaatgcgtggtatgagttctttagaatccgcagaaacttcaggtgctggccatttaacttcttttttaggtacagacactattcctgcactctcttttgttgaagcgtattatggttcaagcagtctaattggcacgtctatacccgcttctgagcattcagtaatgagttcacatggtgtcgatgaattatcaacatttcgttatttaatggcaaaatttccgcataatatgttgtcaattgtgtcagatactacagacttttggcataacattaccgttaatttgccgttattaaagcaagaaattatagcaaggccagaaaatgcccgtttagtcattcgtccagatagcggtaacttttttgcgattatttgtggtgatccaaccgctgatactgagcatgaacgtaaaggactcattgaatgtttatgggatatttttggtggtacagttaatcagaaaggttataaagtgatcaatccacatattggggcaatttatggtgatggcgtgacttatgaaaaaatgtttaagatcttagaaggattacaagccaaaggatttgcctcaagtaatattgtgtttggcgttggtgcacaaacctatcaacgtaatacacgtgatacgttgggctttgcgcttaaagcgacatctatcactattaatggcgaagaaaaagctattttcaaaaatcctaaaaccgatgatggttttaaaaaatcgcaaaaaggtcgtgttaaagtgctttctcgtgatacttacgttgatggtttaacttcagcggatgattttagtgatgatttattagagctgttatttgaagatggtaagttattacgccaaacagactttgatgaaattcggcaaaacttgttagttagtcgcactacgctatga；扩增引物序列为nmprt-f:5’-3’:agtcgcatcatatggataacctattaaattatag，划线为酶切位点ndei；nmprt-r:3’-5’:gcgcgatagaattctcatagcgtagtgcgactaactaac，划线为酶切位点ecori。菌株在无菌条件下接入种子培养基，培养至对数生长期后接入5l发酵培养基的发酵罐中，继续培养至对数生长期后接入含50l发酵培养基的发酵罐中，培养5小时后加入1mmiptg25℃诱导20小时，离心收集菌体。收获的菌体分别经超声或高压均质破碎后，离心收集上清并用镍离子亲和柱进行纯化，获得高质量纯化的酶。制备固定化生产用酶或细胞：将4.0克聚乙二醇溶解在45m1的水中，加入6.0克聚乙烯醇(pva)并将温度升到90-95℃溶解。待聚乙烯醇完全溶解后，将温度降至25-30℃，加入重组细胞或纯化的酶，混合均匀，用一次性吸管吸取混合液，并注在平面上形成圆片状，并在30℃温浴1小时。移入0.1m硫酸钠溶液稳定2-3小时，滤干并用灭菌水洗涤两次，置于磷酸缓冲液中待用。使用上述测定酶活性的方法，检测到1mg/ml腺苷激酶(ak)、腺嘌呤磷酸核糖转移酶(aprt)和烟酰胺磷酸核糖转移酶(nmprt)酶液活性分别约为50u、20u和10u，其中1个活性单位(u)定义为将1μm底物在1分钟内完全转化为产物所需要的酶量。实施例2、制备nmn底物腺苷100g、烟酰胺68.5g、atp300g、mgcl2·6h2o110g，加入5lph7.0磷酸缓冲溶液中，搅拌均匀，调节ph至7.0。在反应液中加入ak、aprt和nmprt三种酶组成的酶组合物，其中酶组合物中ak:aprt:nmprt的质量比为1:1:1，反应期间控制ph保持在7.0，反应温度33℃，振荡反应8小时后，hplc检测反应上清液中nmn生成量为19.67g/l，纯度55％，腺苷转化率为96％。hplc检测条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相a相为0.1％tfa，b相为甲醇，检测波长260nm，柱温25℃，洗脱程序如表1所示。表1洗脱程序时间(min)流动相a(％)流动相b(％)流速(ml/min)0.0110000.83.0010000.85.3080200.86.6080201.08.6080201.29.010001.212.01000stop过滤收集的上清液通过大孔强碱性阴离子交换树脂离子交换层析、浓缩、结晶、干燥后制得成品nmn98.38g，纯度99.0％，总收率82％。实施例3、制备nmn底物腺苷100g、烟酰胺68.5g、atp300g、mgcl2·6h2o110g，加入5lph7.0磷酸缓冲溶液中，搅拌均匀，调节ph至7.0。在反应液中加入ak、aprt和nmprt三种酶组成的酶组合物，其中酶组合物中ak:aprt:nmprt的质量比为1:2:1，反应期间控制ph保持在7.0，反应温度30-35℃，振荡反应8小时后，hplc检测反应上清液中nmn生成量为17.4g/l，纯度50％，腺苷转化率为92％。hplc检测条件同实施例2。过滤收集的上清液通过大孔强碱性阴离子交换树脂离子交换层析、浓缩、结晶、干燥后制得成品nmn87.4g，纯度98.8％，总收率76％。实施例4、制备nmn底物腺苷100g、烟酰胺68.5g、atp300g、mgcl2·6h2o110g，加入5lph7.0磷酸缓冲溶液中，搅拌均匀，调节ph至7.0。在反应液中加入ak、aprt和nmprt三种酶组成的酶组合物，其中酶组合物中ak:aprt:nmprt的质量比为1:1:2，反应期间控制ph保持在7.0，反应温度30-35℃，振荡反应8小时后，hplc检测反应上清液中nmn生成量为18.3/l，纯度52％，腺苷转化率为94％。hplc检测条件同实施例2。过滤收集的上清液通过大孔强碱性阴离子交换树脂离子交换层析、浓缩、结晶、干燥后制得成品nmn91.6g，纯度98.7％，总收率78％。实施例5、制备nmn底物腺苷100g、烟酰胺68.5g、atp300g、mgcl2·6h2o110g，加入5lph7.0磷酸缓冲溶液中，搅拌均匀，调节ph至7.0。在反应液中加入ak、aprt和nmprt三种酶组成的酶组合物，其中酶组合物中ak:aprt:nmprt的质量比为2:1:1，反应期间控制ph保持在7.0，反应温度30-35℃，振荡反应8小时后，hplc检测反应上清液中nmn生成量为19g/l，纯度54％，腺苷转化率为95％。hplc检测条件同实施例2。过滤收集的上清液通过大孔强碱性阴离子交换树脂离子交换层析、浓缩、结晶、干燥后制得成品nmn95g，纯度98.9％，总收率80％。实施例6、固定化酶或固定化细胞活性检测nmn的三种生产用酶的固定化酶或固定化细胞可以循环使用，按照现有技术记载的公知的测定酶活性的方法对nmn的三种生产用固定化酶按1:1:1的质量比混合循环反应20次进行跟踪检测，结果如表2。表2固定化酶循环反应或4℃储存的酶活性变化固定化酶使用次数/4℃存储时间酶活性u/mg固定化酶酶活20固定化酶使用5次18.2固定化酶使用10次17.5固定化酶使用15次16.3固定化酶使用20次15.1未使用存储15天17.8未使用存储30天15.6结果显示nmn的三种生产用固定化酶随着循环次数的增加，酶活性逐渐降低。循环反应20次，酶活性仅降低约25％。nmn的三种生产用固定化酶在4℃储存时间一月以上的酶活性也仅降低约20-25％。按1:2:1、1:1:2、2:1:1的质量比混合后循环反应20次酶活性也仅降低20-25％。此外，nmn的三种生产用酶的固定化细胞的活性随着循环次数的增加或4℃储存时间的延长也仅降低20-25％。对比例1以烟酰胺、核糖和atp为底物，经核糖激酶和烟酰胺核糖磷酸转移酶催化反应生成nmn，其收率为65％-70％左右。而本发明中的nmn收率为75％-82％，收率提高。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页12