一种从水体中分离单个纤毛虫的方法与流程

本发明属于微生物处理技术领域，尤其涉及一种从水体中分离单个纤毛虫的方法。

背景技术：

目前，纤毛虫(ciliate)是具纤毛的单细胞生物，目前从水体中分离单个纤毛虫主要是利用毛细吸管(微吸管)在显微镜或解剖镜下吸取单个纤毛虫，这种操作需要长期的训练才能掌握，操作耗费时间长、效率低且不能批量操作。

综上所述，现有技术存在的问题是：现有技术分离单个纤毛虫中操作繁琐，而且需要操作人员进行训练才能进行；而且现有技术的操作方式不能进行批量操作；对于水体中多种纤毛虫分离很困难。

(1)操作难度大：因纤毛虫虫体小且数量多，因此用毛细吸管(微吸管)吸取单个个体操作难度大，很难快速准确地吸取到单个个体。

(2)时间长：因准确吸取单个虫体的操作难度大，操作人员需进行长期训练后才能较快的准确吸取到单个虫体，整个过程需要较长的时间。

(3)效率低：即便操作者经训练后能够熟练的吸取到单个虫体，但因为难以实现批量操作，导致现有操作方法的效率低下。

(4)不易分类：现有的操作方法在水体中存在多种微型真核浮游生物时，难以实现对所有浮游生物的分离。

解决上述技术问题的难度：获取单个纤毛虫是纤毛虫纯培养和单细胞测序的基础，此类研究往往需要大量的单个纤毛虫虫体，但在获取纤毛虫时，因为纤毛虫个体微小(几微米到几十微米)且运动迅速，从水体中获得单个纤毛虫个体是一件困难的工作，目前的人工显微镜下逐个吸取单个纤毛虫的操作方法耗时耗力且效率低下，到现在为止，除此之外并没有发现其他能够高效的获取单个纤毛虫的方法，因为，为了更快地推进纤毛虫的研究进展，亟需建立一种快速、便捷、易于操作的从水体中分离单个纤毛虫的方法。

解决上述技术问题的意义：纤毛虫个体微小且运动迅速，目前的技术操作难度大，新技术的发现可以使操作难度大大降低，有利于更加快速便捷的分离单个纤毛虫；因准确吸取单个虫体的操作难度大，操作人员需进行长期训练后才能较快的准确吸取到单个虫体，整个过程需要较长的时间，新技术的发现可以缩短操作时间，无需操作人员进行长期训练，避免在基础操作方面花费过多的时间；现有的技术难以实现批量操作，导致分离单个纤毛虫的效率低下，批量操作的实现，可以相当大程度的提高分离的效率，事半功倍；分离单个纤毛虫通常是从水体中进行分离，水体中不可避免的会有其他种类的浮游生物，能够快速准确地将其进行分离是继续推进下一步实验操作的重要保证。

技术实现要素：

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种从水体中分离单个纤毛虫的方法。

本发明是这样实现的，一种从水体中分离单个纤毛虫的方法，所述从水体中分离单个纤毛虫的方法包括以下步骤：

步骤一，取含有目的纤毛虫的水溶液，使每毫升水体中有900-1000个虫体；

步骤二，用移液器将水溶液吸取到载玻片；

步骤三，分析每滴液体中虫体的数量。

进一步，步骤一中，若水体中纤毛虫数量多于1000个虫体，进行稀释。

进一步，步骤二用移液器将水溶液吸取到载玻片时，1微升/滴，根据需要确定吸取的滴数。

进一步，步骤三分析每滴液体中虫体的数量中，滴液体中仅一个虫体，利用移液器吸走该液滴，利用显微镜观察该液滴所在的位置确认虫体是否已被取走，确认虫体已吸入到移液器，则根据需要将移液器中的液体转移到指定位置；虫体仍留原处，则向该处加1微升液体，重复上述操作直至吸走虫体。

进一步，步骤三分析每滴液体中虫体的数量中，该滴液体中含有不止一个虫体，则根据虫体数量n向该液体添加n-1微升液体，然后再将n微升液体分为n份，每份液滴1微升液体，直到每滴液体中仅含有一个虫体。

进一步，步骤三分析每滴液体中虫体的数量中，该滴液体中没有虫体，直接舍弃该液滴。

本发明的另一目的在于提供一种实施所述从水体中分离单个纤毛虫的方法从水体中分离单个纤毛虫的装置。

综上所述，本发明的优点及积极效果为：本发明取含有目的纤毛虫的水溶液，使每毫升水体中不超过1000个虫体；用移液器将水溶液吸取到载玻片(1微升/滴)；分析每滴液体中虫体的数量：每滴液体中有一个虫体的保留；未发现虫体的舍弃；发现多个虫体的，继续将该滴液体稀释至平均每微升一个虫体。重复上述操作至每滴液体中仅一个虫体，利用移液器吸走该液滴，利用显微镜观察该液滴所在的位置确认虫体是否已被取走，确认虫体已吸入到移液器，则根据需要将移液器中的液体转移到指定位置；虫体仍留原处，则向该处加1微升液体，重复上述操作直至吸走虫体。本发明提供的从水体中分离单个纤毛虫的方法操作简单，不需要操作人员进行训练；可以进行批量操作；适合分离水体中任何一种纤毛虫；适合单一纤毛虫样品或者多种纤毛虫混合样品。

附图说明

图1是本发明实施例提供的从水体中分离单个纤毛虫的方法流程图。

图2是本发明实施例提供的用移液器将水溶液吸取到载玻片，1微升/滴，根据需要确定吸取的滴数效果图。图中：灰色圆圈为为液滴，黑点为为虫体。

图3是本发明实施例提供的显微镜分析每滴液体中虫体的数量效果图。图中：灰色圆圈为为液滴，黑点为为虫体。

图4是本发明实施例提供的如果该滴液体中仅一个虫体效果图。图中：灰色圆圈为为液滴，黑点为为虫体。

图5是本发明实施例提供的根据虫体数量(n)向该液体添加n-1微升液体效果图。图中：灰色圆圈为为液滴，黑点为为虫体。

图6是本发明实施例提供的如果该滴液体中没有虫体，直接舍弃该液滴效果图。图中：灰色圆圈为为液滴，黑点为为虫体。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

现有技术分离单个纤毛虫中操作繁琐，而且需要操作人员进行训练才能进行；而且现有技术的操作方式不能进行批量操作；对于水体中多种纤毛虫分离很困难。

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种从水体中分离单个纤毛虫的方法，下面结合附图对本发明作详细的描述。

如图1所示，本发明实施例提供的从水体中分离单个纤毛虫的方法包括：

s101，取含有目的纤毛虫的水溶液，如果水体中纤毛虫数量较多可以进行稀释，使得每毫升水体中不超过1000个虫体。

s102，用移液器将水溶液吸取到载玻片，1微升/滴，根据需要确定吸取的滴数。(如图2)

s103，显微镜分析每滴液体中虫体的数量。(如图3)。

步骤s103中，具体包括：

(1)如果该滴液体中仅一个虫体(如图4)，利用移液器吸走该液滴，利用显微镜观察该液滴所在的位置确认虫体是否已被取走，如果确认虫体已吸入到移液器，则根据需要将移液器中的液体转移到指定位置；如果虫体仍留原处，则向该处加1微升液体，重复上述操作直至吸走虫体。

(2)如果该滴液体中含有不止一个虫体，则根据虫体数量(n)向该液体添加n-1微升液体，然后再将n微升液体分为n份，每份液滴1微升液体，直到每滴液体中仅含有一个虫体，重复步骤(1)。如图5。

(3)如果该滴液体中没有虫体，直接舍弃该液滴。(如图6)。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。