本发明属于医药技术领域，涉及一种异戊烯基黄酮类化合物及其制备方法和应用，具体涉及从苦参根皮中提取分离得到的一种异戊烯基色原酮及其制备方法和在制备抗宫颈癌药物中的应用。
背景技术：
宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率在女性恶性肿瘤中居第二位，仅在乳腺癌之后，但在某些发展中国家甚至位居首位。据世界范围内的统计，每年大约有50万左右的宫颈癌新发病例，占所有癌症新发病例的5％，其中80％的病例发生在发展中国家。全世界每年死于宫颈癌的患者约24万人。因此，寻找有效的治疗宫颈癌药物与方法，彻底攻克宫颈癌，是当今我国乃至世界医学界的一个重要研究方向。近年来，由于中药良好的抗宫颈癌作用和低的毒副作用而受到科研人员的广泛关注。
中药苦参又名地槐、野槐、牛参等，为豆科植物苦参的干燥根。其性寒味苦，入心、脾、肾三经，有清热解毒，明目止泪，燥湿利尿，祛风杀虫，安五脏，转身定志等作用，广泛用于中成药及临床方剂之中。现代研究表明苦参的化学成分主要为生物碱和黄酮两大类。苦参中的黄酮一般都具有异戊烯基结构。据报道，异戊烯基基团是多种生物活性的活性部位。色原酮也属于黄酮类化合物中的一种类型。黄酮类成分是苦参中重要的化学成分,具有抗炎、抗肿瘤、抗心率失常、抗滴虫和抗菌等作用，本发明所涉及的一种新的异戊烯基色原酮类化合物及其活性，迄今为止尚未见有专利或文献报道。
技术实现要素：
本发明提供一种异戊烯基色原酮类化合物或其盐酸盐。
本发明所述化合物的结构如式ⅰ所示，
本发明还提供了所述化合物i的制备方法，包括如下步骤：
(1)以苦参根皮干燥药材为原料，以乙醇加热回流提取，浓缩得浸膏状乙醇提取物，将乙醇提取物混悬于水中得混悬液；
(2)依次加入与混悬液体积相等的乙酸乙酯，将萃取溶液浓缩，得到浸膏；
(3)将乙酸乙酯萃取物经硅胶柱色谱，用体积配比为100:0-0:100的二氯甲烷/三氯甲烷-甲醇溶液进行梯度洗脱；
(4)二氯甲烷/三氯甲烷-甲醇100:1-100:2的洗脱物经聚酰胺柱色谱，用体积比为0:100-100:0的甲醇/乙醇-水溶剂梯度洗脱；
(5)甲醇/乙醇-水体积比为75:25-100:0的洗脱物经中压ods柱色谱以体积比为50:50-100:0的甲醇-水溶剂梯度洗脱；
(6)甲醇-水70：30-100:0的洗脱部分经制备ods高效液相色谱进行纯化，以甲醇-水溶液为流动相，得式ⅰ化合物。
所述制备方法中，
步骤(1)中所述乙醇的浓度为：75％-100％。
所述回流提取的次数为2-4次，提取时间为每次1.5-3小时。
步骤(6)所述的制备ods高效液相色谱流动相甲醇-水溶液合适的体积比为60：40-90:10。
式ⅰ化合物为黄色粉末，[α]20d–95.16(c0.19,meoh)，10％硫酸乙醇显淡黄色。hr-esi-ms给出其准分子离子峰313.1437[m-h]-，确定式ⅰ化合物的分子式为c19h21o4(不饱和度为9)。由13c-nmr数据中的9个碳信号，δc181.4、162.6、159.1、157.2、155.5、110.6、110.4、104.5、93.0表明该化合物是以色原酮为母核。从另外10个碳信号δc26.5、46.0、31.0、123.2、130.8、17.7、25.6、147.5、111.1和18.4表明有两个异戊烯基以及一组烯烃质子信号δh4.99(1h,t,j＝6.6hz)和一组端基双键氢信号δh4.57(1h,t,j＝3.0hz)和4.49(1h,t,j＝3.0hz)。此外,还有一个单峰的烯质子信号δh6.41(1h,s)，表明有五取代苯的存在。从hmbc谱中得出了质子信号δh12.23(5-oh)、8.16(1h,d,j＝5.4hz,2-h)和6.26(1h,d,j＝6.0hz,3-h)与羰基信号δ181.4(c-4)存在远程相关。此外，从1h-1hcosy谱中得出4个质子信号δh2.60(h-1”)，2.43(2-h”),2.04(h-3”)和4.99(h-4”)最后通过做计算ecd，确定了化合物i的立体构型。化合物i在238nm处显示正的cotton效应和在248nm和212nm处左右的负的cotton效应。通过实验计算的ecd数据与实际测的ecd数据对比，证实1的绝对构型为2r”。
通过以上解析，最终确定式ⅰ化合物即为本发明的具有两个异戊烯基的黄酮。
表1：式ⅰ化合物的1h-nmr(600mhz,dmso-d6)和13c-nmr(150mhz,dmso-d6)数据
1h-nmr(600mhz)and13c-nmr(150mhz)dataforcompoundiindmso-d6
本发明进一步提供一种药物组合物，包含所述的异戊烯基色原酮类化合物或其盐酸盐及其药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明所述的异戊烯基色原酮化合物或其盐酸盐或其药物组合物具有良的抗癌活性，可以用于制备抗宫颈癌药物。
具体实施方式
实施例1：式i化合物的制备：
以苦参根皮干燥药材4.5kg为原料，以95％乙醇加热回流提取3次，每次2小时，浓缩得浸膏状乙醇提取物，将乙醇提取物混悬于水中，加入与混悬物体积相等的乙酸乙酯萃取，将萃取溶液浓缩，得到浸膏。将乙酸乙酯萃取物经硅胶柱色谱，用体积配比为100:0-0:100的二氯甲烷-甲醇溶液进行梯度洗脱，其中二氯甲烷-甲醇配比为50:1的洗脱物经聚酰胺柱色谱谱，用体积比为0:100-100:0的乙醇-水溶剂梯度洗脱，将其中乙醇-水体积比为75:25、90:10和100:0的洗脱物合并，经硅胶柱色谱以体积比为10:1-0:100石油醚-乙酸乙酯等度洗脱得21个组分fr1......fr21，将fr5部位以体积比为80:20的甲醇-水溶液为流动相经制备ods液相色谱制备，得式ⅰ化合物。
实施例2：式i化合物的药理活性
试验方法和结果
1、mtt法检测式i化合物对1种宫颈癌细胞hela增殖的影响
取对数生长期培养的宫颈癌细胞hela用含10％胎牛血清的新鲜1640培养基培养，将细胞密度调至5×104个/ml接种于96孔板中。将孔板放置于含5％co2于37摄氏度下培养24h，然后加100μm受试化合物，药物预处理48h后吸上培养基并加上200μl500μg/ml的mtt溶液于培养箱中继续培养4h。小心吸弃mtt，每孔加入150μl的dmso。放置10min，震荡40s左右，使甲瓒晶体完全溶解。将96孔板置于酶标仪中，检测490nm处的od值。利用酶标仪及相应软件进行数据处理，利用平均值按如下公式计算细胞抑制率：细胞抑制率％＝1－样品组od平均值/空白对照组od平均值×100％。
2、式i化合物对宫颈癌活性结果
通过初步筛选式i化合物对宫颈癌细胞hela增殖的影响，发现式i化合物具有明显的抑制活性。当式i化合物的浓度为100μm时对宫颈癌细胞hela具有良好的抗增殖作用，其抑制率为98％，其ic50＝67.7μm。