本发明属药物技术领域，具体涉及二甲基环己烯类衍生物及其在抗流感病毒中的应用。
背景技术：
流行性感冒，是由流感病毒引起的一种急性上呼吸道传染病，具有高致病率和高致死率的特点，严重威胁人类的健康和生命。因此，对流感的预防与治疗已成为世界公共卫生领域非常紧迫的任务。
鉴于神经氨酸酶(na)在流感病毒生命周期中的关键作用，己成为目前抗流感病毒药物设计的重要靶点。迄今为止，己经有四种神经氨酸酶抑制剂(nai)上市，分别是扎那米韦、奥司他韦、帕拉米韦和拉尼娜米韦。但是，耐药性毒株的广泛出现和给药不便等问题使目前的抗流感形势依旧严峻。
因此，开发新型、高效、抗耐药的na抑制剂，仍具有重要意义。
技术实现要素：
本发明针对现有技术的不足，提供了二甲基环己烯类衍生物，及其制备方法和抗流感病毒中的应用。
为了实现上述目的，本发明提供如通式(i)所示的二甲基环己烯类衍生物：
所述的r1选自选自氢、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、(c1-c6)烷基、(c2-c6)烯基、(c2-c6)炔基、(c1-c6)烷氧基。
所述的r2选自氢、(c1-c6)烷基、(c2-c6)烯基、(c2-c6)炔基。
优选的，所述r1选自氢、卤素、(c1-c4)烷氧基、(c1-c4)烷基。
优选的，所述r2选自氢、(c1-c3)烷基。
本发明通式i化合物优选以下化合物，但这些化合物并不意味着对本发明的任何限制：
本发明所述的衍生物物可在抗流感病毒药物中应用。
本发明所述的衍生物作为药物用于治疗和/或预防流感病毒感染。
优选的，本发明所述的流感病毒感染为h5n1或h5n6型。
本发明含有通式i的衍生物可以通过包括化学领域众所周知的方法来合成，尤其按照本发明公开的路线1的方法，具体为：4,4-二甲基环己酮为起始原料，经过vilsmeier-haack-arnold反应制备中间体2；再与各种取代的苯硼酸经suzuki偶联反应制备中间体3；中间体3与奥司他韦经还原胺化，得目标化合物t1-t4；再分别在碱性条件下水解得目标化合物t5-t8。
合成路线1如下：
合成路线1试剂和条件:(a)dmf,pbr3,chcl3,rt；(b)phenylboronicacid,pd(oac)2,k2co3,etoh,80℃；(c)(d)nabh(oac)3,etoh,rt；(d)naoh,etoh/h2o,rt.
本发明的积极进步效果在于：本发明人在借助计算机辅助药物设计手段，设计并合成了一系列新的二甲基环己烯类衍生物。此类化合物活性较优，骨架新颖，二甲基环己烯片段能够伸入到150-腔中，增强了奥司他韦的抗病毒活性。
具体实施方式
下面提供的实施例旨在阐述而不是限制本发明的范围。原料一般可以从商业来源获取的或者使用本领域技术人员所熟知的方法来制备，或根据本发明所述的方法制备。未经特殊说明，所用试剂均为分析纯或化学纯。
实施例1。
(1)2-溴-5,5-二甲基环己-1-烯基甲醛的制备。
将n,n-二甲基甲酰胺2.1ml(30.0mmol)溶于15ml氯仿中，冰浴降温至0℃，缓慢滴加三溴化磷3.1ml(30.0mmol)，继续维持0℃搅拌2h后，分批加入4,4-二甲基环己酮1.3g(10.0mmol)，升至室温反应8h。tlc检测反应完成，将反应液缓慢慢倒入冰水中，然后用碳酸氢钠调节ph至7-8。用二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥过夜。滤除干燥剂，减压浓缩，残余物经硅胶柱层析纯化得淡黄色油状物1.35g，收率61.7％。
(2)2-苯基-5,5-二甲基环己-1-烯基甲醛的制备。
将2-溴-5,5-二甲基环己-1-烯基甲醛2.5g(11.5mmol)、苯硼酸1.4g(11.5mmol)、碳酸钾3.2g(23.0mmol)、醋酸钯129mg,(0.58mmol)溶于乙醇-水混合溶液中，然后氩气保护下升温回流反应5h。tlc检测反应完成，停止加热温度降至室温，浓缩反应液，向残余物中加入乙酸乙酯，依次用水、饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥过夜。滤除干燥剂，减压浓缩，残余物经硅胶柱层析纯化，得淡黄色油状物1.7g，收率69.3％。ms(esi)m/z215.3[m+h]+.
(3)目标化合物的合成。
将2-苯基-5,5-二甲基环己-1-烯基甲醛0.5g(2.33mmol)和磷酸奥司他韦0.95g(2.33mmol)溶于30ml无水乙醇中，然后加入醋酸硼氢化钠0.99g(4.67mmol)，室温下继续搅拌24h，tlc检测反应完成，浓缩反应液，向残余物中加入乙酸乙酯，依次用水、饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥过夜。滤除干燥剂，减压浓缩，残余物经硅胶柱层析纯化得白色固体0.72g，收率60.43％。ms(esi)m/z511.8[m+h]+.
1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.81(d,j＝8.9hz,1h),7.22(dd,j＝7.8,1.5hz,1h),7.15(dt,j＝6.8,1.4hz,2h),7.01(dd,j＝8.9,5.4hz,2h),6.64(s,1h),4.13(q,j＝6.6hz,2h),4.02(d,j＝6.4hz,1h),3.86(d,j＝14.0hz,1h),3.24-3.21(m,2h),2.80–2.70(m,1h),2.64(d,j＝17.5hz,1h),2.12(s,2h),1.96–1.93(m,2h),1.86(s,3h),1.80(s,2h),1.52–1.34(m,6h),1.21(t,j＝6.9hz,3h),0.94(s,6h),0.82(dt,j＝14.0,7.1hz,6h).
按照实施例1的方法，4,4-二甲基环己酮为起始原料，利用各种取代的苯甲酸为中间体，经vilsmeier-haack-arnold反应、suzuki偶联反应和还原胺化三步反应制备得到实施例2-4。
实施例2。
ms(esi)m/z529.3[m+h]+.
1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.82(d,j＝9.0hz,1h),7.36(dd,j＝8.6,5.4hz,2h),7.25(t,j＝8.6hz,2h),6.63(s,1h),4.13(q,j＝6.6hz,2h),4.02(d,j＝6.4hz,1h),3.86(d,j＝14.0hz,1h),3.24-3.21(m,2h),2.80–2.70(m,1h),2.64(d,j＝17.5hz,1h),2.12(s,2h),1.96–1.93(m,2h),1.86(s,3h),1.81(s,2h),1.51–1.33(m,6h),1.21(t,j＝6.9hz,3h),0.93(s,6h),0.81(dt,j＝14.1,7.2hz,6h).
实施例3。
ms(esi)m/z544.2[m+h]+.
1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.81(d,j＝8.9hz,1h),7.48(d,j＝8.6hz,2h),7.29(d,j＝8.5hz,2h),6.64(s,1h),4.14(q,j＝6.6hz,2h),4.03(d,j＝6.4hz,1h),3.86(d,j＝14.0hz,1h),3.24-3.20(m,2h),2.80–2.70(m,1h),2.63(d,j＝16.5hz,1h),2.12(s,2h),1.96–1.93(m,2h),1.86(s,3h),1.81(s,2h),1.50–1.34(m,6h),1.21(t,j＝6.8hz,3h),0.92(s,6h),0.81(dt,j＝14.0,7.2hz,6h).
实施例4。
ms(esi)m/z525.3[m+h]+.
1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.81(d,j＝8.9hz,1h),7.20(d,j＝8.4hz,2h),6.90(d,j＝7.5hz,2h),6.64(s,1h),4.13(q,j＝6.6hz,2h),4.02(d,j＝6.4hz,1h),3.86(d,j＝14.0hz,1h),3.24-3.20(m,2h),2.80–2.70(m,1h),2.64(d,j＝17.5hz,1h),2.42(s,3h),2.12(s,2h),1.96–1.93(m,2h),1.86(s,3h),1.80(s,2h),1.52–1.34(m,6h),1.21(t,j＝6.9hz,3h),0.94(s,6h),0.82(dt,j＝14.0,7.1hz,6h).
实施例5。
将实施例1化合物0.5g(0.98mmol)溶以于20ml乙醇中，然后加入5ml2n的氢氧化钠水溶液，室温搅拌6h，tlc检测反应完全，减压蒸除溶剂，加水溶解用1n的hcl调节ph至4-5，析出固体，过滤得白色固体395mg，收率83.6％。ms(esi)m/z483.2[m+h]+.
1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.71(s,1h),7.81(d,j＝8.9hz,1h),7.22(dd,j＝7.8,1.5hz,1h),7.15(dt,j＝6.8,1.4hz,2h),7.01(dd,j＝8.9,5.4hz,2h),6.56(s,1h),4.13(q,j＝8.1hz,2h),4.02(d,j＝6.4hz,1h),3.86(d,j＝14.0hz,1h),3.24-3.21(m,2h),2.73(td,j＝10.1,5.4hz,1h),2.64(dd,j＝17.5,4.1hz,1h),2.04-1.96(m,3h),1.87(s,3h),1.84(s,2h),1.53(d,j＝7.1hz,2h),1.42-1.38(m,4h),0.94(s,6h),0.82(dt,j＝15.1,7.4hz,6h).
按照实施例5的方法，以实施例2-4化合物为原料，在碱性条件下水解得到实施例6-8。
实施例6。
ms(esi)m/z501.4[m+h]+.
1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.69(s,1h),7.82(d,j＝8.6hz,1h),7.37(dd,j＝8.6,5.4hz,2h),7.24(t,j＝8.6hz,2h),6.58(s,1h),4.13(q,j＝8.1hz,2h),4.02(d,j＝6.4hz,1h),3.86(d,j＝14.0hz,1h),3.24-3.21(m,2h),2.73(td,j＝10.1,5.4hz,1h),2.64(dd,j＝17.5,4.1hz,1h),2.04-1.96(m,3h),1.87(s,3h),1.84(s,2h),1.53(d,j＝7.2hz,2h),1.42-1.39(m,4h),0.93(s,6h),0.81(t,j＝7.4hz,6h).
实施例7。
ms(esi)m/z517.3[m+h]+.
1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.70(s,1h),7.81(d,j＝8.9hz,1h),7.48(d,j＝8.6hz,2h),7.29(d,j＝8.5hz,2h),6.56(s,1h),4.13(q,j＝8.1hz,2h),4.02(d,j＝6.4hz,1h),3.86(d,j＝14.0hz,1h),3.24-3.21(m,2h),2.73(td,j＝10.1,5.4hz,1h),2.64(dd,j＝17.5,4.1hz,1h),2.04-1.96(m,3h),1.87(s,3h),1.84(s,2h),1.53(d,j＝7.1hz,2h),1.43-1.38(m,4h),0.92(s,6h),0.81(dt,j＝15.2,7.4hz,6h).
实施例8
ms(esi)m/z497.2[m+h]+.
1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.68(s,1h),7.82(d,j＝8.9hz,1h),7.21(d,j＝8.4hz,2h),6.92(d,j＝7.5hz,2h),6.56(s,1h),4.13(q,j＝8.1hz,2h),4.02(d,j＝6.4hz,1h),3.86(d,j＝14.0hz,1h),3.24-3.20(m,2h),2.73(td,j＝10.1,5.4hz,1h),2.64(dd,j＝17.5,4.1hz,1h),2.04-1.96(m,3h),1.87(s,3h),1.82(s,2h),1.54(d,j＝7.2hz,2h),1.42-1.37(m,4h),0.93(s,6h),0.84-0.81(m,6h).
药理活性测试
本发明的化合物进行了神经氨酸酶的抑制活性测试。测试原理为munana是流感病毒神经氨酸酶的特异性底物，经神经氨酸酶代谢所生成的物质，在355nm的照射光激发下，能够产生460nm的荧光，通过荧光强度的变化可以灵敏的反映出神经氨酸酶的活性，从而间接的测试化合物对神经氨酸酶的抑制活性。进一步得到相应的ic50值。
测试方法：96孔板中每孔加入10μl含有酶的溶液，70μl缓冲液(33mm吗啉乙磺酸，4mmcacl2),10μl的上述化合物的不同浓度的待测液，同时设空白组和对照组(奥司他韦)。在37℃条件下，孵育10分钟；然后，加入100μm的荧光底物munana10μl，充分混匀，在37℃条件下孵育30分钟，加150μl终止液(14mmnaoh的83％乙醇溶液)测定荧光强度，其中激发波长355nm，发射波长460nm。计算抑制率，拟合ic50。
酶抑制活性结果见表1，本发明化合物对h5n1型和h5n6型流感病毒神经氨酸酶的抑制活性。结果表明化合物对h5n1和h5n6型神经氨酸酶显示出良好的抑制活性。其中，实施例1和实施例2化合物与阳性对照药活性相当，甚至更高。
表1实施例化合物对神经氨酸酶的抑制活性。
尽管已经通过特定实施方案描述了本发明，但修改和等价变化对于精通此领域的技术人员而言是显见的，且它们都包含在本发明范围。