本发明属于天然植物提取
技术领域：
，具体涉及一种从牛油果中提取烟酰胺单核苷酸的方法。
背景技术：
：烟酰胺单核苷酸(nmn)是人体内一种内源性物质，由烟酰胺在烟酰胺磷酸核糖转移酶的催化下生成，而nmn又在烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶的催化下生成nad+(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)。nmn作为nad+补救途径中的中间体，具有抗氧化、减少氧化应激的作用，可以增强能量代谢，减缓生物体的生理衰退，延长寿命，因而nmn主要应用于改善缺血性脑损伤和阿尔茨海默症，且对帕金森病、退行性疾病和肥胖也具有治疗作用。同时，也有研究表明nmn还在延缓衰老中产生一定的作用。目前，烟酰胺单核苷酸主要利用微生物发酵、化学合成或体外酶催化制备而得，如cn110195089a公开了一烟酰胺单核苷酸及其制备方法，其中烟酰胺单核苷酸的制备方法包括步骤：(a)加入一缓冲溶液于一反应容器中；(b)加入一反应原料于所述缓冲溶液中形成反应溶液；(c)加入一催化酶于所述反应溶液中；和(d)后处理反应产物得到nmn。除了上述制备方法外，天然食物如蔬菜、水果、肉类和哺乳动物的乳液中也发现nmn，具体如蔬菜中的毛豆、西兰花、黄瓜种子和果皮、卷心菜，水果中的牛油果和番茄，肉类中的生牛肉和虾等。其中，牛油果是一种热带亚热带水果，富含人体所需的微量金属元素、维生素、生育酚等，以及每100g牛油果中含有0.36～1.6mg的nmn。因而，若能将牛油果中的nmn进行提取，即能够提供一种新的思路用于得到nmn，且来源天然，安全性较高。技术实现要素：本发明旨在提供一种从牛油果中提取烟酰胺单核苷酸的方法，本发明采用提取溶剂协同超声波辅助提取的方式从牛油果中得到烟酰胺单核苷酸，其提取率达到13.3～16.1μg/g。为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：一种从牛油果中提取烟酰胺单核苷酸的方法，包括以下步骤：s1)取牛油果去皮去核，得到牛油果果肉，然后将果肉切成小块，置于50～60℃烘箱中干燥，粉碎，过筛，得到牛油果粉；s2)取步骤s1的牛油果粉与提取溶剂混合后，采用超声辅助提取，冷却，离心，将离心后得到的混合物进行减压过滤和滤膜超滤，收集滤液；s3)将步骤s2的滤液进行真空冷冻干燥，即得。在本发明中，提取溶剂形成了微乳液体系，提取溶剂协同超声波辅助提取的方式从牛油果中提取得到了烟酰胺单核苷酸。为了提高烟酰胺单核苷酸的提取率，发明人基于现有技术进行了大量创造性实验，通过实验一发现由谷甾醇、正丙醇、牛油果油和水所形成的微乳液体系能够显著提高提取率，而对谷甾醇和牛油果油进行替换后，其提取率发生下降，推测有可能是因为特定的提取溶剂促使牛油果粉在超声波下被更强的空化效应所作用，而当改变提取溶剂时，相应地影响了该效果产生。进一步地，所述牛油果粉与提取溶剂的料液比为1：(25～35)，g：ml。进一步地，所述提取溶剂的制备方法为：将谷甾醇和正丙醇均匀混合，再与牛油果油混合，待混合均匀后向其中缓慢的滴加水，使体系由澄清透明变浑浊粘稠再重新变澄清透明，即得提取溶剂。进一步地，所述谷甾醇、正丙醇、牛油果油和水的质量比为(4.8～5.2)：(1.5～2)：1：1。进一步地，所述谷甾醇、正丙醇、牛油果油和水的质量比为5：1.5：1：1。进一步地，所述牛油果油的制备方法为：取牛油果去皮去核，收集新鲜果肉，加入上述新鲜果肉2倍量的纯化水进行制浆，得到浆料；调节浆料ph值为7.5～8.0后，将浆料置于置于60～75℃下搅拌1～1.5h，离心，取上层油，去除乳化层，离心去杂质，得到牛油果油。进一步地，所述步骤s2中超声辅助提取的温度为40～45℃，功率为100～400w，时间为30～60min。进一步地，所述步骤s2中用于减压过滤的滤纸孔径为10～20μm，用于超滤的超滤膜截留分子量为1～5kd。进一步地，所述步骤s3中真空冷冻干燥的温度为-5～-15℃，真空压力为50～60pa，时间为1～2h。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：(1)本发明采用提取溶剂协同超声波辅助提取的方式从牛油果中提取烟酰胺单核苷酸，从实验一可以看出，所得到的烟酰胺单核苷酸含量高，达到13.3～16.1μg/g。(2)本发明的提取溶剂来源广泛，且提取完后可以再回收，方法简单可靠，耗时短，且成本较低。具体实施方式以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。实施例1、一种从牛油果中提取烟酰胺单核苷酸的方法包括以下步骤：s1)取牛油果去皮去核，得到牛油果果肉，然后将果肉切成小块，置于50℃烘箱中干燥，粉碎，过筛，得到牛油果粉；s2)取步骤s1的牛油果粉与提取溶剂混合后，采用超声辅助提取，温度为40℃，功率为200w，时间为40min，冷却，离心，将离心后得到的混合物进行减压过滤，滤纸孔径为10μm，滤膜超滤，截留分子量为1kd，收集滤液；s3)将步骤s2的滤液进行真空冷冻干燥，温度为-10℃，真空压力为50pa，时间为1.5h，即得。其中，牛油果粉与提取溶剂的料液比为1：25，g：ml。提取溶剂的制备方法为：将谷甾醇和正丙醇均匀混合，再与牛油果油混合，待混合均匀后向其中缓慢的滴加水，使体系由澄清透明变浑浊粘稠再重新变澄清透明，即得提取溶剂。谷甾醇、正丙醇、牛油果油和水的质量比为4.8：1.5：1：1。牛油果油的制备方法为：取牛油果去皮去核，收集新鲜果肉，加入上述新鲜果肉2倍量的纯化水进行制浆，得到浆料；调节浆料ph值为8.0后，将浆料置于置于70℃下搅拌1.5h，离心，取上层油，去除乳化层，离心去杂质，得到牛油果油。实施例2、一种从牛油果中提取烟酰胺单核苷酸的方法包括以下步骤：s1)取牛油果去皮去核，得到牛油果果肉，然后将果肉切成小块，置于50℃烘箱中干燥，粉碎，过筛，得到牛油果粉；s2)取步骤s1的牛油果粉与提取溶剂混合后，采用超声辅助提取，温度为40℃，功率为200w，时间为35min，冷却，离心，将离心后得到的混合物进行减压过滤，滤纸孔径为20μm，滤膜超滤，截留分子量为1kd，收集滤液；s3)将步骤s2的滤液进行真空冷冻干燥，温度为-10℃，真空压力为50pa，时间为1.2h，即得。其中，牛油果粉与提取溶剂的料液比为1：27，g：ml。提取溶剂的制备方法为：将谷甾醇和正丙醇均匀混合，再与牛油果油混合，待混合均匀后向其中缓慢的滴加水，使体系由澄清透明变浑浊粘稠再重新变澄清透明，即得提取溶剂。谷甾醇、正丙醇、牛油果油和水的质量比为5：1.5：1：1。牛油果油的制备方法与实施例1相同。实施例3、一种从牛油果中提取烟酰胺单核苷酸的方法包括以下步骤：s1)取牛油果去皮去核，得到牛油果果肉，然后将果肉切成小块，置于50℃烘箱中干燥，粉碎，过筛，得到牛油果粉；s2)取步骤s1的牛油果粉与提取溶剂混合后，采用超声辅助提取，温度为45℃，功率为250w，时间为35min，冷却，离心，将离心后得到的混合物进行减压过滤，滤纸孔径为15μm，滤膜超滤，截留分子量为1kd，收集滤液；s3)将步骤s2的滤液进行真空冷冻干燥，温度为-10℃，真空压力为50pa，时间为1.5h，即得。其中，牛油果粉与提取溶剂的料液比为1：30，g：ml。提取溶剂的制备方法为：将谷甾醇和正丙醇均匀混合，再与牛油果油混合，待混合均匀后向其中缓慢的滴加水，使体系由澄清透明变浑浊粘稠再重新变澄清透明，即得提取溶剂。谷甾醇、正丙醇、牛油果油和水的质量比为5：2：1：1。牛油果油的制备方法与实施例1相同。实施例4、一种从牛油果中提取烟酰胺单核苷酸的方法包括以下步骤：s1)取牛油果去皮去核，得到牛油果果肉，然后将果肉切成小块，置于50℃烘箱中干燥，粉碎，过筛，得到牛油果粉；s2)取步骤s1的牛油果粉与提取溶剂混合后，采用超声辅助提取，温度为45℃，功率为200w，时间为30min，冷却，离心，将离心后得到的混合物进行减压过滤，滤纸孔径为20μm，滤膜超滤，截留分子量为1.5kd，收集滤液；s3)将步骤s2的滤液进行真空冷冻干燥，温度为-10℃，真空压力为50pa，时间为1.5h，即得。其中，牛油果粉与提取溶剂的料液比为1：34，g：ml。提取溶剂的制备方法为：将谷甾醇和正丙醇均匀混合，再与牛油果油混合，待混合均匀后向其中缓慢的滴加水，使体系由澄清透明变浑浊粘稠再重新变澄清透明，即得提取溶剂。谷甾醇、正丙醇、牛油果油和水的质量比为5.2：2：1：1。牛油果油的制备方法与实施例1相同。实施例5、一种从牛油果中提取烟酰胺单核苷酸的方法包括以下步骤：s1)取牛油果去皮去核，得到牛油果果肉，然后将果肉切成小块，置于55℃烘箱中干燥，粉碎，过筛，得到牛油果粉；s2)取步骤s1的牛油果粉与提取溶剂混合后，采用超声辅助提取，温度为45℃，功率为200w，时间为40min，冷却，离心，将离心后得到的混合物进行减压过滤，滤纸孔径为20μm，滤膜超滤，截留分子量为2kd，收集滤液；s3)将步骤s2的滤液进行真空冷冻干燥，温度为-10℃，真空压力为50pa，时间为1.5h，即得。其中，牛油果粉与提取溶剂的料液比为1：30，g：ml。提取溶剂的制备方法为：将谷甾醇和正丙醇均匀混合，再与牛油果油混合，待混合均匀后向其中缓慢的滴加水，使体系由澄清透明变浑浊粘稠再重新变澄清透明，即得提取溶剂。谷甾醇、正丙醇、牛油果油和水的质量比为4.8：2：1：1。牛油果油的制备方法与实施例1相同。对比例1、一种从牛油果中提取烟酰胺单核苷酸的方法包括以下步骤：s1)取牛油果去皮去核，得到牛油果果肉，然后将果肉切成小块，置于50～60℃烘箱中干燥，粉碎，过筛，得到牛油果粉；s2)取步骤s1的牛油果粉与提取溶剂混合后，采用超声辅助提取，温度为40℃，功率为200w，时间为55min，冷却，离心，将离心后得到的混合物进行减压过滤，滤纸孔径为20μm，滤膜超滤，截留分子量为1kd，收集滤液；s3)将步骤s2的滤液进行真空冷冻干燥，温度为-10℃，真空压力为50pa，时间为1.2h，即得。其中，牛油果粉与提取溶剂的料液比为1：27，g：ml。提取溶剂的制备方法为：将谷甾醇、正丙醇和水均匀混合，即得提取溶剂。谷甾醇、正丙醇和水的质量比为5：1.5：1。与实施例2相比，本对比例的区别仅在于：未添加牛油果油。对比例2、一种从牛油果中提取烟酰胺单核苷酸的方法与实施例2相比，本对比例的区别仅在于：使用吐温-80代替谷甾醇，用量不变。对比例3、一种从牛油果中提取烟酰胺单核苷酸的方法与实施例2相比，本对比例的区别仅在于：使用十二烷基硫酸钠代替谷甾醇，用量不变。对比例4、一种从牛油果中提取烟酰胺单核苷酸的方法与实施例2相比，本对比例的区别仅在于：使用橄榄油代替牛油果油，用量不变。对比例5、一种从牛油果中提取烟酰胺单核苷酸的方法与实施例2相比，本对比例的区别仅在于：谷甾醇、正丙醇和牛油果油的质量比为1.5：1.5：1。对比例6、一种从牛油果中提取烟酰胺单核苷酸的方法与实施例2相比，本对比例的区别仅在于：谷甾醇、正丙醇和牛油果油的质量比为8.5：1.5：1。实验一、牛油果中的烟酰胺单核苷酸含量测定(1)烟酰胺单核苷酸的提取率1.1实验对象：实施例1～5和对比例1～6，牛油果品种为“hass”，从沃尔玛超市中购得；1.2实验方法：称取步骤s1中牛油果粉的质量w0，而本次实验中实施例和对比例的w0均为2.0g。当提取完，称取烟酰胺单核苷酸的质量w1，再计算出提取率。1.3计算公式：提取率μg/g1.4实验结果表1组别w1/gw0/μg提取率μg/g实施例12.025.212.6实施例22.027.113.5实施例32.025.912.9实施例42.036.518.2实施例52.044.122.1对比例12.012.16.5对比例22.016.38.1对比例32.016.78.7对比例42.026.113.1对比例52.022.311.1对比例62.024.111.9从表1可以看出，实施例1～5的烟酰胺单核苷酸提取率较高。(2)烟酰胺单核苷酸的含量2.1实验对象：实施例1～5和对比例1～6；2.2实验方法：称取实施例1～5和对比例1～5各0.2g，加入10ml纯水溶解，在超声波清洗器中超声20min，然后用纯水定容至20ml，混匀。然后采用高效液相色谱仪进行色谱分离，再用质谱正离子模式下用多反应离子检测模式进行定量测定。具体仪器条件参考文献“液相联用用法测定蔬菜和水果中的烟酰胺核苷酸”。表2组别烟酰胺单核苷酸(μg/g)实施例113.5实施例216.1实施例314.4实施例414.7实施例513.3对比例12.1对比例23.6对比例34.3对比例47.9对比例54.7对比例65.8从表2可以看出，实施例1～5提取得到的烟酰胺单核苷酸含量为13.3～16.1μg/g，结合表1来看，实施例1～5提取得到的烟酰胺单核苷酸纯度也较高，说明实施例1～5的方法能够对烟酰胺单核苷酸的溶出起到促进作用。与实施例2相比，对比例1～6提取得到的烟酰胺单核苷酸含量不高。对比例1(未添加牛油果油)的烟酰胺单核苷酸含量低；对比例2使用吐温-80代替谷甾醇，吐温-80为现有技术常用的一种提取溶剂，但烟酰胺单核苷酸含量不高。同样地，对比例3也使用现有技术常用的十二烷基硫酸钠代替谷甾醇，但其提取效果为不高。对比例4的烟酰胺单核苷酸含量低于实施例2。对比例5和对比例6分别调整了提取溶剂中各个组分的含量，使得烟酰胺单核苷酸下降，说明只有当提取溶剂在一定范围内才能提高烟酰胺单核苷酸的提取率。上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属
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中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。当前第1页12