一种人脂肪间充质干细胞裂解物的获取与纯化方法与流程

文档序号:22587023发布日期:2020-10-20 17:55阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种人脂肪间充质干细胞裂解物的获取与纯化方法,其特征在于,具体包括以下步骤:

(1)细胞获取:取人脂肪组织样品,进行原代细胞获取原代间充质干细胞,将获取的原代间充质干细胞进行传代培养;

(2)初步裂解:将第(1)步获得的传代细胞调整细胞浓度为1×106-6×106,溶解于生理盐水中,所用生理盐水的体积(ml)与第(1)步中人脂肪组织样品质量(g)的比例为2:1,于-80℃冰箱中冷冻至完全冻结,后置于40℃温度条件下加热,完成冻融操作,离心得到细胞悬液a和沉淀a,收集细胞悬液a,得到初步裂解物;

(3)深度裂解:向第(2)步获得的沉淀a中加入含有体积浓度为0.1%的动物细胞裂解液的生理盐水,所用生理盐水的体积(ml)与第(1)步中人脂肪组织样品质量(g)的比例为2:1,于振幅为20%、4℃的超声条件下超声处理,离心得到细胞悬液b和沉淀b,收集细胞悬液b,得到深度裂解物,弃去沉淀b;

(4)裂解物纯化:将第(3)步获得的细胞悬液a和第(4)步获得的细胞悬液b分别用生理盐水溶解并混合,所用生理盐水的体积(ml)与第(1)步中人脂肪组织样品质量(g)的比例为1:1,得到混合裂解液;

将混合裂解液离心得到细胞悬液c和沉淀c,弃去沉淀c,收集细胞悬液c,得到最终裂解物,将最终裂解物用生理盐水溶解,所用生理盐水的体积(ml)与第(1)步中人脂肪组织样品质量(g)的比例为2:1,在4℃条件下保存,备用。

2.根据权利要求1所述的一种人脂肪间充质干细胞裂解物的获取与纯化方法,其特征在于,所述第(1)步中获取的原代间充质干细胞的传代培养方式为用0.25%胰蛋白酶和生理盐水以1:1比例混合的混合液对原代间充质干细胞进行传代培养。

3.根据权利要求1所述的一种人脂肪间充质干细胞裂解物的获取与纯化方法,其特征在于,所述第(1)步中获取的原代间充质干细胞的传代培养至p3代细胞。

4.根据权利要求1所述的一种人脂肪间充质干细胞裂解物的获取与纯化方法,其特征在于,将所述第(2)步中的冻融操作重复三次。

5.根据权利要求1所述的一种人脂肪间充质干细胞裂解物的获取与纯化方法,其特征在于,所述第(2)步中的冻融操作的加热时间为20min。

6.根据权利要求1所述的一种人脂肪间充质干细胞裂解物的获取与纯化方法,其特征在于,所述第(3)步中的超声处理的时间为10min。


技术总结
本发明涉及细胞工程的技术领域,更具体地说,涉及一种人脂肪间充质干细胞裂解物的获取与纯化方法,具体包括以下步骤:(1)细胞获取:获取原代间充质干细胞并进行传代培养;(2)初步裂解:将第(1)步获得的传代细胞调整细胞浓度,溶解于生理盐水中,并完成冻融操作,离心并收集细胞悬液A;(3)深度裂解:向第(2)步获得的沉淀A中加入含有0.1%的动物细胞裂解液的生理盐水,超声处理,离心收集细胞悬液B,弃去沉淀B;(4)裂解物纯化:将第(3)步获得的细胞悬液A和第(4)步获得的细胞悬液B分别用生理盐水溶解并混合,得到混合裂解液,离心收集细胞悬液C,得到最终裂解物,将最终裂解物用生理盐水溶解,保存,备用。

技术研发人员:杨桂花;赵进军;赵宇飞
受保护的技术使用者:和携科技有限公司
技术研发日:2020.06.05
技术公布日:2020.10.20
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