1.一种人脂肪间充质干细胞裂解物的获取与纯化方法,其特征在于,具体包括以下步骤:
(1)细胞获取:取人脂肪组织样品,进行原代细胞获取原代间充质干细胞,将获取的原代间充质干细胞进行传代培养;
(2)初步裂解:将第(1)步获得的传代细胞调整细胞浓度为1×106-6×106,溶解于生理盐水中,所用生理盐水的体积(ml)与第(1)步中人脂肪组织样品质量(g)的比例为2:1,于-80℃冰箱中冷冻至完全冻结,后置于40℃温度条件下加热,完成冻融操作,离心得到细胞悬液a和沉淀a,收集细胞悬液a,得到初步裂解物;
(3)深度裂解:向第(2)步获得的沉淀a中加入含有体积浓度为0.1%的动物细胞裂解液的生理盐水,所用生理盐水的体积(ml)与第(1)步中人脂肪组织样品质量(g)的比例为2:1,于振幅为20%、4℃的超声条件下超声处理,离心得到细胞悬液b和沉淀b,收集细胞悬液b,得到深度裂解物,弃去沉淀b;
(4)裂解物纯化:将第(3)步获得的细胞悬液a和第(4)步获得的细胞悬液b分别用生理盐水溶解并混合,所用生理盐水的体积(ml)与第(1)步中人脂肪组织样品质量(g)的比例为1:1,得到混合裂解液;
将混合裂解液离心得到细胞悬液c和沉淀c,弃去沉淀c,收集细胞悬液c,得到最终裂解物,将最终裂解物用生理盐水溶解,所用生理盐水的体积(ml)与第(1)步中人脂肪组织样品质量(g)的比例为2:1,在4℃条件下保存,备用。
2.根据权利要求1所述的一种人脂肪间充质干细胞裂解物的获取与纯化方法,其特征在于,所述第(1)步中获取的原代间充质干细胞的传代培养方式为用0.25%胰蛋白酶和生理盐水以1:1比例混合的混合液对原代间充质干细胞进行传代培养。
3.根据权利要求1所述的一种人脂肪间充质干细胞裂解物的获取与纯化方法,其特征在于,所述第(1)步中获取的原代间充质干细胞的传代培养至p3代细胞。
4.根据权利要求1所述的一种人脂肪间充质干细胞裂解物的获取与纯化方法,其特征在于,将所述第(2)步中的冻融操作重复三次。
5.根据权利要求1所述的一种人脂肪间充质干细胞裂解物的获取与纯化方法,其特征在于,所述第(2)步中的冻融操作的加热时间为20min。
6.根据权利要求1所述的一种人脂肪间充质干细胞裂解物的获取与纯化方法,其特征在于,所述第(3)步中的超声处理的时间为10min。