吡啶[2,3-d]并嘧啶-4-(3H)-酮类化合物及其制备方法和应用

吡啶[2,3-d]并嘧啶-4-(3h)-酮类化合物及其制备方法和应用
技术领域
[0001]
本发明属于药物化学领域，具体涉及一种吡啶[2,3-d]并嘧啶-4-(3h)-酮类化合物及其制备方法，以及其在制备用于治疗癫痫、自闭症等神经系统疾病的药物中的应用。


背景技术：

[0002]
电压门控型钠离子通道(voltage gated sodium channel，vgsc)是位于细胞膜上的一种跨膜蛋白，在去极化电刺激下可被激活开放，使细胞膜进一步去极化，在神经元兴奋性的调控和动作电位的产生等方面起着重要的作用。生理状态下由α(260kda)和β(33～36kda)两种亚基构成。α为功能性亚基，是构成通道的核心亚基，根据α亚基氨基酸序列不同将na
v
分为na
v
1.1～na
v
1.9九个亚型，分别由scn1a～scn11a基因所编码。其中在中枢神经系统有高表达的为na
v
1.1，na
v
1.2，na
v
1.3和na
v
1.6亚型。na
v
1.2钠离子通道，由scn2a基因编码，主要位于皮层和海马的无髓鞘轴突的起始段上，对于动作电位形成，节律放电，以及动作电位由胞体向树突的反向传播至关重要。na
v
1.2由四个高度相似的结构域组成，分别为i、ii、iii和iv，每个结构域包含6个跨膜段s1
–
s6。s4为电压感受区，s5
–
s6形成孔环和deka选择性过滤器。
[0003]
na
v
1.2功能的失调可导致多种神经发育障碍性疾病，如癫痫、智力障碍和自闭症。从生理水平上研究na
v
1.2通道的功能和特性，从分子水平上揭示通道蛋白的空间构象与通道门控动力学之间的关系，以及从药理学水平上探究药物与通道之间的作用关系，对于人们克服nav1.2钠离子通道相关疾病疾病，寻找更好的治疗方式，有着极其重大的现实意义。
[0004]
现已上市的治疗癫痫的钠离子通道阻滞剂如奥卡西平、卡马西平、苯妥英钠、拉莫三嗪等对中枢钠离子通道的作用选择性差，它们能使scn2a基因突变导致的癫痫发作缓解或减少，但部分无效，少数还可使发作加重，提示scn2a基因功能及其突变的复杂性。发现新的选择性nav1.2钠离子通道的调控剂对疾病的干预和治疗具有重大的意义。


技术实现要素：

[0005]
本发明的目的在于针对目前手段的缺点，提供一种治疗癫痫、自闭症等一系列中枢神经系统疾病的药物活性成分。
[0006]
本发明的第一方面提供了一种吡啶[2,3-d]并嘧啶-4-(3h)-酮类化合物，所述化合物具有如化学式(i)所示的结构：
[0007][0008]
其中，r1选自c1
–
c6烷基、一个或多个取代或未取代的苯基或芳香杂环；r2选自一个或多个取代或未取代的苯基、五元或六元杂环；r3选自氢、c1
–
c6烷基；x为-(ch2)n-，其中n＝
0～3。
[0009]
根据本发明第一方面的化合物，其中，r1选自取代或未取代的苯基；
[0010]
优选地，r1为取代的苯基时，所述取代基选自c1
–
c6烷基和/或卤素；
[0011]
更优选地，r1为取代的苯基时，所述取代基为甲基和/或cl。
[0012]
根据本发明第一方面的化合物，其中，r2为取代的苯基时，所述取代基选自c1
–
c6烷基、卤素和/或氰基；
[0013]
更优选地，r2为取代的苯基时，所述取代基为甲基、f、cl和/或氰基。
[0014]
根据本发明第一方面的化合物，其中，r3为氢；和/或n为0。
[0015]
本发明的第二方面提供了第一方面化合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
[0016]
(1)将反应物、溶剂和催化剂加入封管中；
[0017]
(2)氩气氛围下加热反应；
[0018]
(3)过滤浓缩分离提纯得到所述化合物。
[0019]
根据本发明第二方面的制备方法，其中，所述步骤(1)中，所述催化剂选自以下一种或多种：钯催化剂、无机碱、有机胺。
[0020]
根据本发明第二方面的制备方法，其中，所述步骤(2)中所述加热温度为60
–
150℃，优选为80
–
120℃，更优选为90
–
100℃。
[0021]
根据本发明第二方面的制备方法，其中，所述步骤(3)中，所述提纯方法选自以下一种或多种：硅胶柱色谱法、重结晶法；优选为硅胶柱色谱法。
[0022]
本发明的第三方面提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括第一方面所述的化合物和药学上可接受的辅料。
[0023]
本发明的第四方面提供了第一方面的化合物在制备用于治疗中枢神经系统疾病的药物中的应用；
[0024]
优选地，所述中枢性神经系统疾病为癫痫和/或自闭症。
[0025]
本发明人在研究过程中，合成了一系列吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮母核结构的中间体，意外发现其对na
v
1.2离子通道有一定的抑制作用。在此基础上，本发明人以吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮母核为苗头化合物进行了一系列结构的修饰，设计并合成了lx-c系列的化合物。其中化合物lx-c-14对na
v
1.2的抑制活性到达了85％以上，ic
50
＝1.26
±
0.35μm，并且lx-c-14的亚型选择性较好。其对na
v
1.7亚型的ic
50
＝46.68
±
26.56μm，对na
v
1.5亚型的ic
50
>100μm。大鼠体内药代动力学数据表明：化合物lx-c-14代谢较稳定，口服(灌胃)生物利用度良好(t
1/2
＝3.79小时,f＝18.9％)。化合物lx-c-14预给药的小鼠(20mg/kg和50mg/kg)显示出了明显的抑制癫痫痉挛活性，优于阳性对照药物卡马西平。这表明lx-c-14预处理小鼠的癫痫发作敏感性显著降低。说明吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮母核是保持化合物活性的重要结构。
[0026]
因此，本发明提供了一种吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮母类化合物，该化合物具有如化学式(i)所示的结构：
[0027][0028]
其中，r1优选自c1
–
c6烷基、一个或多个取代的苯基或芳香杂环；r2优选一个或多个取代的苯基、取代的芳香杂环；r3优选自氢、c1
–
c6烷基；x优选自-(ch2)n-(n＝0，1，2，3)。
[0029]
本发明还提供了化学式(i)所示的吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮母类化合物在制备治疗癫痫、自闭症等中枢神经系统疾病的药物中的应用。
[0030][0031]
图1
[0032]
反应试剂与反应条件：(a)原甲酸三甲酯或r3cho，50
–
150℃；(b)r2b(oh)2，各类不同价态的钯催化剂，各种无机碱或有机胺，60
–
150℃。本发明的方法可以具有但不限于以下有益效果：
[0033]
本发明化合物显示出了明显的抑制癫痫痉挛活性，优于阳性对照药物卡马西平，使本发明化合物预处理小鼠的癫痫发作敏感性显著降低。
附图说明
[0034]
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
[0035]
图1示出了本发明试验例1体内抗癫痫活性测试结果；其中图1a示出了ka注射后不同时间的行为评分；图1b示出了4级及以上全身性癫痫发作的百分比。
具体实施方式
[0036]
下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
[0037]
本部分对本发明试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，在上下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。
[0038]
以下实施例中使用的试剂和仪器如下：
[0039]
试剂：
[0040]
各种取代的苯硼酸或芳杂环硼酸，原甲酸三甲酯，各种取代的芳胺，k2co3，pd(pph3)4，pd(pph3)2cl2，四氢呋喃(thf)，硅藻土，石油醚(pe)，乙酸乙酯(ea)，tmsn3，cui，dmf，甲醇(meoh)，购自北京市通广精细化工公司、萨恩化学技术(上海)有限公司、百灵威科
技有限公司；
[0041]
硅胶柱色谱硅胶200～300目，购自青岛海洋化工厂
[0042]
仪器：
[0043]
核磁共振仪，购自bruker、型号bruker avance iii 400型核磁共振波谱仪；
[0044]
质谱仪，购自bruker apex iv ftms型质谱仪。
[0045]
熔点仪：buchi m-560手动控制型熔点仪，温度计未经校正。
[0046]
部分中间体结构：
[0047][0048][0049]
中间体合成方法：
[0050]
合成中间体1a
[0051]
[0052]
将化合物2-氨基-5-溴烟酸(2.16克,10mmol)与二氯亚砜(10毫升)置于30毫升甲苯中，110℃条件下反应2小时,然后减压蒸馏除去剩余溶剂，然后将剩余固体化合物溶于40毫升thf中，冰浴下缓慢加入2-氯-6-甲基苯胺(3.186克,22.6mmol)，将反应体系置于90℃条件下反应4小时。冷却到室温后，加入20毫升饱和碳酸钾溶液，然后用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，经饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液旋干、拌样，硅胶柱色谱(硅胶200
–
300目)(pe:ea＝8:1)分离，得白色固体1.36克，收率40.0％，熔点：248.3
–
249.7℃.1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ(ppm)10.09(s,1h),8.36(s,1h),8.25(d,j＝2.1hz,1h),7.40(dd,j＝7.3,1.9hz,1h),7.32
–
7.23(m,4h),2.23(s,3h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ(ppm)165.8,158.3,152.6,139.2,139.1,133.9,132.7,129.5,128.7,127.5,110.4,104.4,18.7.ms(esi
+
)m/z:342.
[0053]
合成中间体2a
[0054][0055]
将化合物1a(2.18克,6.4mmol)置于70毫升原甲酸三甲酯中，于100℃条件下反应15h，用ea和饱和nacl溶液萃取，合并ea层，用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液旋干、拌样，硅胶柱色谱(硅胶200
–
300目)(pe:ea＝4:1)分离，得到白色固体1.98g，收率88.4％，熔点：79.3
–
80.5℃.1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ(ppm)9.18(d,j＝2.5hz,1h,),8.78(d,j＝2.5hz,1h),8.63(s,1h),7.61(d,j＝7.1hz,1h),7.54(d,j＝7.7hz,1h),7.49(t,j＝7.3hz,1h),2.18(s,3h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ(ppm)158.7,157.2,156.4,150.7,138.6,137.9,133.1,131.6,131.2,130.0,127.7,118.4,118.4,17.7。hrms(esi
+
)m/z calcd.for c
14
h
10
brcln3o[m+h]
+
349.9690；found 349.9691。
[0056]
合成中间体2b
[0057][0058]
合成方法同中间体2a，其区别仅在于原料为2-氨基-5-溴-n-(苯基)-烟酰胺。
[0059]
白色固体856毫克，收率56.7％，熔点：233.4
–
234.5℃.1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ(ppm)9.11(d,j＝2.5hz,1h),8.70(d,j＝2.5hz,1h),8.62(s,1h),7.72
–
7.30(m,5h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ(ppm)160.2,157.0,156.9,151.3,138.1,137.5,129.8,129.6,127.8,119.2,118.3。ms(esi+)m/z:302。
[0060]
合成中间体2c
[0061][0062]
合成方法同中间体2a，其区别仅在于原料为2-氨基-5-溴-n-(2-氯苯基)-烟酰胺。
[0063]
收率55.4％，1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ(ppm)9.16(d,j＝2.6hz,1h),8.75(d,j＝2.6hz,1h),8.64(s,1h),7.84
–
7.69(m,2h),7.70
–
7.50(m,2h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ(ppm)159.6,157.5,156.9,151.2,138.2,134.8,132.0,131.7,131.0,130.6,129.0,118.9,118.7。ms(esi
+
)m/z:338。
[0064]
合成中间体2d
[0065][0066]
合成方法同中间体2a，其区别仅在于原料为2-氨基-5-溴-n-(2-甲基苯基)-烟酰胺。
[0067]
收率56.1％，1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ(ppm)9.13(d,j＝2.6hz,1h),8.72(d,j＝2.6hz,1h),8.56(s,1h),7.54
–
7.34(m,4h),2.13(s,3h).3c nmr(101mhz,dmso-d6):δ(ppm)159.8,157.1,157.0,151.5,138.2,136.6,135.9,131.4,130.1,128.7,127.6,119.1,118.4,17.6.ms(esi
+
)m/z:316。
[0068]
合成中间体2e
[0069][0070]
将化合物2a(3.5克,10mmol),tms acetylene(2克,20mmol),pd(pph3)2cl2(0.702克,1mmol.),cui(0.952克,0.5mmol.),三乙胺(3.05克,30mmol)和25毫升乙腈加入封管中，氩气保护下于50℃搅拌反应1.5h，然后回流3小时。反应结束后，将体系冷却至室温，抽滤。将滤饼溶于甲醇(28毫升),然后加入k2co3(0.621克,4.5mmol)，继续在室温下反应1h.滤液浓缩后滤液浓缩后进行硅胶柱色谱(硅胶200
–
300目)(pe：ea＝2:1)得到中间体2e.
[0071]
收率(1.63克):48％.黄色固体，熔点：136.2
–
136.3℃.1h nmr(400mhz,cdcl3)δ(ppm)9.10(d,j＝1.9hz,1h),8.76(d,j＝2.2hz,1h),8.10(s,1h),7.47(d,j＝7.7hz,1h),7.40(t,j＝7.8hz,1h),7.33(d,j＝7.5hz,1h),3.37(s,1h),2.22(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ159.4,158.7,157.3,149.9,139.8,138.3,133.3,132.6,131.1,129.8,128.2,118.8,117.3,82.4,79.2,18.3。ms(esi
+
)m/z:296。
[0072]
实施例1
[0073]
本实施例用于说明制备3-(2-氯-6-甲基苯基)-6-(4-氟苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮(lx-c-4)。
[0074][0075]
将化合物2a(140毫克，0.4mmol)，4-氟苯硼酸(77毫克，0.6mmol)，k2co3(83毫克，0.6mmol)，pd(pph3)4(13毫克，0.015mmol)和thf(8毫升)依次加入35毫升封管中，氩气保护下于90℃搅拌反应24h。反应结束后加入50毫升乙酸乙酯，硅藻土过滤，滤液浓缩后进行硅
胶柱色谱(硅胶200
–
300目)(pe：ea＝4：1)分离，得到lx-c-4。
[0076]
收率(52毫克)：47.4％。白色固体，熔点：204.1
–
205.6℃。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ(ppm)9.27(d,j＝2.5hz,1h),8.83(d,j＝2.5hz,1h),8.132(s,1h),7.70(dd,j＝8.7,5.2hz,2h),7.48(d,j＝7.8hz,1h),7.41(t,j＝7.8hz,1h),7.35(d,j＝7.4hz,1h,),7.24(t,j＝8.6hz,2h),2.25(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3):δ(ppm)163.3(d,j＝249.2hz),160.3,157.2,154.8,149.2,138.4,135.3,134.0,133.5,132.7,132.3(d,j＝3.3hz),131.0,129.8,129.1(d,j＝8.3hz),128.2,117.7,116.6(d,j＝21.8hz),18.3。高分辨质谱(esi
+
)m/z c
20
h
14
clfn3o[m+h]
+
理论值：366.0804，实际测量值：366.0808。
[0077]
实施例2
[0078]
本实施例用于说明制备3-(2-氯-6-甲基苯基)-6-(3-氟苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮(lx-c-10)。
[0079][0080]
合成方法同实施例1化合物lx-c-4，其区别仅在于以3-氟苯硼酸替代4-氟苯硼酸。
[0081]
收率(45毫克)：61.5％。白色固体，熔点：112.4
–
113.9℃。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ(ppm)9.29(d,j＝2.5hz,1h),8.86(d,j＝2.6hz,1h),8.12(s,1h),7.54
–
7.45(m,3h),7.41(t,j＝7.9hz,2h),7.35(d,j＝7.5hz,1h),7.21
–
7.12(m,1h),2.25(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3):δ(ppm)164.6,162.1,158.9(d,j＝260.5hz),154.8,149.4,138.3(d,j＝6.1hz),135.0(d,j＝2.4hz),134.4,133.5,132.7,131.1,131.0,129.8,128.2,123.0(d,j＝2.9hz),117.7,115.8(d,j＝21.1hz),114.3(d,j＝22.6hz),18.3。高分辨质谱(esi
+
)m/z calcd.for c
20
h
14
clfn3o[m+h]
+
理论值：366.0804,实际测量值：366.0808。
[0082]
实施例3
[0083]
本实施例用于说明制备3-(2-氯-6-甲基苯基)-6-(2-氟苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮(lx-c-11)。
[0084][0085]
合成方法同实施例1化合物lx-c-4，其区别仅在于以2-氟苯硼酸替代4-氟苯硼酸。
[0086]
收率(46毫克)：62.8％。白色固体，熔点：92.1
–
93.2℃。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ(ppm)9.26(s,1h),8.87(s,1h),8.13(s,1h),7.57(td,j＝7.7,1.5hz,1h),7.52
–
7.37(m,3h),7.32(dd,j＝14.3,6.9hz,2h),7.24(d,j＝8.5hz,1h),2.25(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3):δ(ppm)160.1,159.9(d,j＝249.4hz),157.3,156.4,149.5,138.4,136.3(d,j＝2.9hz),133.5,132.7,131.3,131.0,130.8(d,j＝8.3hz),130.6,129.8,128.2,125.0(d,j＝3.8hz),124.2(d,j＝13.5hz),117.6,116.5(d,j＝22.1hz),18.3。高分辨质谱(esi
+
)m/z calcd.for c
20
h
14
clfn3o[m+h]
+
理论值：366.0804,实际测量值：366.0802。
[0087]
实施例4
[0088]
本实施例用于说明制备4-(3-(2-氯-6-甲基苯基)-4-氧杂-3,4-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯甲腈(lx-c-21)。
[0089][0090]
合成方法同实施例1化合物lx-c-4，其区别仅在于4-氰基苯硼酸。
[0091]
收率(93毫克)：62.3％。白色固体，熔点：215.3
–
216.1℃。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ(ppm)9.32(d,j＝2.6hz,1h),8.91(d,j＝2.6hz,1h),8.16(s,1h),7.85(s,4h),7.48(dd,j＝8.0,1.0hz,1h),7.42(t,j＝7.8hz,1h),7.39
–
7.32(m,1h),2.25(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3):δ(ppm)161.1,160.0,158.0,154.7,149.9,140.6,138.3,134.8,134.1,133.3,133.2,132.6,131.1,129.8,128.2,128.0,118.3,117.8,112.6,18.3。高分辨质谱(esi
+
)m/z calcd.for c
21
h
14
cln4o[m+h]
+
理论值：373.0851，实际测量值：373.0852。
[0092]
实施例5
[0093]
本实施例用于说明制备3-(2-氯-6-甲基苯基)-6-(4-(三氟甲基)苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮(lx-c-17)。
[0094][0095]
合成方法同实施例1化合物lx-c-4，其区别仅在于以4-三氟甲基苯硼酸替代4-氟苯硼酸。
[0096]
收率(94毫克)：75.3％。白色固体，熔点：194.3
–
195.7℃。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ(ppm)9.32(d,j＝2.4hz,1h),8.91(d,j＝2.4hz,1h),8.14(s,1h),7.83(dd,j＝19.8,8.3hz,4h),7.48(d,j＝6.9hz,1h),7.41(t,j＝7.8hz,1h),7.35(d,j＝7.4hz,1h),2.25(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3):δ(ppm)160.1,157.8,154.9,149.6,139.7,138.3,134.7,133.4,132.7,131.0,129.8,128.2,127.7,126.4(dd,j＝7.4,3.7hz),125.3,117.8,110.0,18.3。高分辨质谱(esi
+
)m/z calcd.for c
21
h
14
clf3n3o[m+h]
+
理论值：416.0772，实际测量值：416.0766。
[0097]
实施例6
[0098]
本实施例用于说明制备3-(2-氯-6-甲基苯基)-6-(4-氯苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮(lx-c-2)。
[0099][0100]
合成方法同实施例1化合物lx-c-4，其区别仅在于以4-氯苯硼酸替代4-氟苯硼酸。
[0101]
收率(42毫克)：54.9％。白色固体，熔点：246.5
–
248.2℃。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ(ppm)9.28(d,j＝2.6hz,1h),8.85(d,j＝2.6hz,1h),8.12(s,1h),7.73
–
7.61(m,2h),7.56
–
7.50(m,2h),7.48(dd,j＝8.0,1.0hz,1h),7.41(t,j＝7.8hz,1h),7.36
–
7.32(m,1h),2.25(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3):δ(ppm)160.2,157.4,154.7,149.3,138.3,135.2,135.0,134.6,134.1,133.5,132.7,131.0,129.8,129.7,128.6,128.2,117.7,18.3。高分辨质谱(esi
+
)m/z calcd.for c
20
h
14
cl2n3o[m+h]
+
理论值：382.0508,实际测量值：382.0510。
[0102]
实施例7
[0103]
本实施例用于说明制备3-(2-氯-6-甲基苯基)-6-苯基吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮(lx-c-1)。
[0104][0105]
合成方法同实施例1化合物lx-c-4，其区别仅在于以苯硼酸替代4-氟苯硼酸。
[0106]
收率(40毫克)：57.6％。白色固体，熔点：105.5
–
107.3℃。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ(ppm)9.32(d,j＝2.6hz,1h),8.88(d,j＝2.6hz,1h),8.11(s,1h),7.57
–
7.51(m,2h),7.50
–
7.44(m,2h),7.41(t,j＝7.8hz,1h),7.34(dd,j＝7.6,0.7hz,1h),2.25(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3):δ(ppm)160.3,157.2,155.0,149.1,138.4,136.3,136.1,134.2,133.5,132.7,131.0,129.8,129.4,128.9,128.2,127.3,117.7,18.3。高分辨质谱(esi
+
)m/z calcd.for c
20
h
15
cln3o[m+h]
+
理论值：348.0898,实际测量值：348.0900。
[0107]
实施例8
[0108]
本实施例用于说明制备3-(2-氯-6-甲基苯基)-6-(4-甲基苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮(lx-c-3)。
[0109][0110]
合成方法同实施例1化合物lx-c-4，其区别仅在于以4-甲基苯硼酸替代4-氟苯硼酸。
[0111]
收率(48毫克):44.2％.白色固体,熔点：199.7
–
201.3℃.1h nmr(400mhz,cdcl3):δ(ppm)9.30(d,j＝2.5hz,1h),8.85(d,j＝2.5hz,1h),8.10(s,1h),8.09(s,1h),7.63(d,j＝8.0hz,2h),7.47(d,j＝7.8hz,1h),7.40(t,j＝7.8hz,1h),7.34(d,j＝7.7hz,3h),2.44(s,3h),2.25(s,3h,).
13
c nmr(101mhz,cdcl3):δ(ppm)160.4,157.0,154.9,148.9,139.0,138.4,136.2,133.7,133.6,133.2,132.7,131.0,130.1,129.8,128.2,127.1,117.7,21.3,18.3。高分辨质谱(esi
+
)m/z calcd.for c
21
h
17
cln3o[m+h]
+
理论值：362.1055,实际测量值：362.1056。
[0112]
实施例9
[0113]
本实施例用于说明制备3-(2-氯-6-甲基苯基)-6-(4-氟-3-甲基苯基)吡啶并[2,
3-d]嘧啶-4(3h)-酮(lx-c-9)。
[0114][0115]
合成方法同实施例1化合物lx-c-4，其区别仅在于以4-氟-3-甲基苯硼酸替代4-氟苯硼酸。
[0116]
收率(68毫克)：38.3％。白色固体，熔点：134.6
–
135.7℃。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ(ppm)9.26(d,j＝2.6hz,1h),8.82(d,j＝2.6hz,1h),8.10(s,1h),7.57
–
7.45(m,3h),7.41(t,j＝7.8hz,1h),7.34(d,j＝7.6hz,1h),7.16(t,j＝8.9hz,1h),2.39(d,j＝1.6hz,3h),2.25(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3):δ(ppm)161.9(d,j＝247.9hz),160.3,157.1,154.8,149.1,138.4,135.5,133.9,133.5,132.7,132.0(d,j＝3.7hz),131.0,130.5(d,j＝5.5hz),129.8,128.2,126.3(d,j＝8.4hz),126.1(d,j＝17.9hz),117.7,116.0(d,j＝22.8hz),110.0,18.3,14.7(d,j＝3.5hz)。高分辨质谱(esi
+
)m/z calcd.for c
21
h
16
clfn3o[m+h]
+
理论值：380.0960,实际测量值：380.0963。
[0117]
实施例10
[0118]
本实施例用于说明制备3-(2-氯-6-甲基苯基)-6-(4-氟-2-甲基苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮(lx-c-14)。
[0119][0120]
合成方法同实施例1化合物lx-c-4，其区别仅在于以4-氟-2-甲基苯硼酸替代4-氟苯硼酸。
[0121]
收率(83毫克)：72.8％。白色固体，熔点：189.6
–
190.0℃。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ(ppm)9.02(d,j＝2.5hz,1h),8.63(d,j＝2.5hz,1h),8.13(s,1h),7.48(dd,j＝7.9,1.0hz,1h),7.41(t,j＝7.8hz,1h),7.34(d,j＝7.6hz,1h),7.31
–
7.24(m,1h),7.04(ddd,j＝10.9,9.0,2.6hz,2h),2.35(s,3h),2.26(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3):δ(ppm)162.8(d,j＝248.1hz),160.2,157.0,156.8,149.3,138.4,138.3(d,j＝8.1hz),136.4,136.3,133.5,132.7,132.5(d,j＝3.2hz),131.7(d,j＝8.6hz),131.0,129.8,128.2,117.5(d,j＝21.3hz),117.3,113.4(d,j＝21.3hz),20.6,18.3。高分辨质谱(esi
+
)m/z calcd.for c
21
h
16
clfn3o[m+h]
+
理论值：380.0960,实际测量值：380.0965。
[0122]
实施例11
[0123]
本实施例用于说明制备6-(3-氯-4-氟苯基)-3-(2-氯-6-甲基苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮(lx-c-15)。
[0124][0125]
合成方法同实施例1化合物lx-c-4，其区别仅在于以3-氯-4-氟苯硼酸替代4-氟苯硼酸。
[0126]
收率(92毫克)：77.5％。白色固体，熔点：187.8
–
188.2℃。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ(ppm)9.25(d,j＝2.4hz,1h),8.82(d,j＝2.4hz,1h),8.13(s,1h),7.77(dd,j＝6.8,2.1hz,1h),7.60(ddd,j＝8.1,4.2,2.2hz,1h),7.47(d,j＝7.7hz,1h),7.41(t,j＝7.8hz,1h),7.35(d,j＝7.0hz,1h),7.33
–
7.27(m,1h),2.25(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3):δ(ppm)160.1,158.6(d,j＝252.0hz),157.5,154.6,149.5,138.3,134.2,134.0,133.4(d,j＝3.5hz),132.6,131.0,129.8,129.5,128.2,127.1(d,j＝7.5hz),122.3(d,j＝18.1hz),117.7(d,j＝18.1hz),117.5,18.3。高分辨质谱(esi
+
)m/z calcd.for c
20
h
13
cl2fn3o[m+h]
+
理论值：400.0414,实际测量值：400.0407。
[0127]
实施例12
[0128]
本实施例用于说明制备6-(2-氯-4-氟苯基)-3-(2-氯-6-甲基苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮(lx-c-16)。
[0129][0130]
合成方法同实施例1化合物lx-c-4，其区别仅在于以2-氯-4-氟苯硼酸替代4-氟苯硼酸。
[0131]
收率(87毫克)：72.5％。白色固体，熔点：224.6
–
225.3℃。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ(ppm)9.14(d,j＝2.4hz,1h),8.74(d,j＝2.5hz,1h),8.14(s,1h),7.52
–
7.37(m,3h),7.37
–
7.29(m,2h),7.15(td,j＝8.3,2.6hz,1h),2.26(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3):δ(ppm)162.6(d,j＝252.3hz),160.1,157.4,156.9,149.6,138.4,137.0,133.7(d,j＝10.6hz),133.5(d,j＝8.9hz),132.7,132.6,132.5,131.8(d,j＝3.6hz),131.0,129.8,128.2,117.8(d,j＝24.8hz),117.3,114.9(d,j＝21.4hz),18.3。高分辨质谱(esi
+
)m/z calcd.for c
20
h
13
cl2fn3o[m+h]
+
理论值：400.0414,实际测量值：400.0421。
[0132]
实施例13
[0133]
本实施例用于说明制备3-(2-氯-6-甲基苯基)-6-(2,4-二氟苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮(lx-c-20)。
[0134][0135]
合成方法同实施例1化合物lx-c-4，其区别仅在于以2,4-二氟苯硼酸替代4-氟苯
硼酸。
[0136]
收率(89毫克)：57.9％。白色固体，熔点：235.6
–
236.5℃。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ(ppm)9.22(s,1h),8.82(d,j＝1.5hz,1h),8.14(s,1h),7.55(dd,j＝14.9,8.6hz,1h),7.48(d,j＝7.7hz,1h),7.41(t,j＝7.8hz,1h),7.35(d,j＝7.4hz,1h),7.13
–
6.96(m,2h),2.25(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3):δ(ppm)163.3(dd,j＝252.0,11.7hz),160.1,160.04(dd,j＝252.1,11.9hz),157.4,156.18(d,j＝4.2hz),149.6,138.4,136.2(d,j＝2.6hz),133.5,132.7,131.48(dd,j＝9.8,4.3hz),131.0,130.47(d,j＝1.5hz),129.8,128.2,120.53(dd,j＝13.5,3.9hz),117.6,112.46(dd,j＝21.5,3.8hz),104.98(t,j＝25.8hz),18.3。高分辨质谱(esi
+
)m/z calcd.for c
20
h
13
clf2n3o[m+h]
+
理论值：384.0710,实际测量值：384.0714。
[0137]
实施例14
[0138]
本实施例用于说明制备3-(2-氯-6-甲基苯基)-6-(4-氟-2-甲氧基苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮(lx-c-30)。
[0139][0140]
合成方法同实施例1化合物lx-c-4，其区别仅在于以4-氟-2-甲氧基苯硼酸替代4-氟苯硼酸。
[0141]
收率(98毫克)：49.5％。白色固体，熔点：190.5
–
191.8℃。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ(ppm)9.20(s,1h),8.78(d,j＝2.2hz,1h),8.11(s,1h),7.46(d,j＝7.8hz,1h),7.39(t,j＝7.6hz,2h),7.33(d,j＝7.5hz,1h),6.90
–
6.68(m,2h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3):δ(ppm)164.0(d,j＝248.5hz),160.3,157.9(d,j＝10.0hz),157.1,156.8,149.0,138.4,136.3,133.6,133.2,132.7,131.6(d,j＝10.1hz),130.9,129.7,128.1,121.5(d,j＝3.3hz),117.3,107.8(d,j＝21.5hz),99.8(d,j＝26.0hz),55.9,18.3。高分辨质谱(esi
+
)m/z calcd.for c
21
h
16
clfn3o2[m+h]
+
理论值：396.0910,实际测量值：396.0896。
[0142]
实施例15
[0143]
本实施例用于说明制备6-(4-氟-2-甲基苯基)-3-苯基吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮(lx-c-27)。
[0144][0145]
合成方法同实施例1化合物lx-c-4，其区别仅在于以原料2b替代2a,4-氟-2-甲基苯硼酸替代4-氟苯硼酸。
[0146]
收率(95毫克)：57.4％。白色固体，熔点：161.8
–
162.8℃。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ(ppm)8.99(s,1h),8.62(d,j＝2.3hz,1h),8.40(s,1h),7.56(dq,j＝14.4,7.2hz,3h),7.45(d,j＝7.5hz,2h),7.32
–
7.23(m,1h),7.11
–
6.96(m,2h),2.32(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3):δ(ppm)162.8(d,j＝248.1hz),161.1,156.8,156.7,149.3,138.3(d,j＝8.1hz),
136.9,136.4,136.2,132.6(d,j＝3.2hz),131.6(d,j＝8.6hz),129.9,129.6,126.9 117.5(d,j＝21.3hz),117.2,113.4(d,j＝21.3hz),20.6。高分辨质谱(esi
+
)m/z calcd.for c
20
h
15
fn3o[m+h]
+
理论值：332.1194,实际测量值：332.1190。
[0147]
实施例16
[0148]
本实施例用于说明制备3-(2-氯苯基)-6-(4-氟-2-甲基苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮(lx-c-28)。
[0149][0150]
合成方法同实施例1化合物lx-c-4，其区别仅在于以原料2c替代2a,4-氟-2-甲基苯硼酸替代4-氟苯硼酸。
[0151]
收率(131毫克)：71.6％。黄色固体，熔点：158.3
–
159.6℃。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ(ppm)8.99(s,1h),8.62(d,j＝2.3hz,1h),8.40(s,1h),7.56(dq,j＝14.4,7.2hz,3h),7.45(d,j＝7.5hz,2h),7.32
–
7.23(m,1h),7.11
–
6.96(m,2h),2.32(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3):δ(ppm)162.8(d,j＝248.1hz),161.1,156.8,156.7,149.3,138.3(d,j＝8.1hz),136.9,136.4,136.2,132.6(d,j＝3.2hz),131.6(d,j＝8.6hz),129.9,129.6,126.9 117.5(d,j＝21.3hz),117.2,113.4(d,j＝21.3hz),20.6。高分辨质谱(esi
+
)m/z calcd.for c
20
h
14
clfn3o[m+h]
+
理论值：366.0804,实际测量值：366.0793。
[0152]
实施例17
[0153]
本实施例用于说明制备6-(4-氯-2-甲基苯基)-3-(2-甲基苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮(lx-c-29)。
[0154][0155]
合成方法同实施例1化合物lx-c-4，其区别仅在于以原料2d替代2a,4-氟-2-甲基苯硼酸替代4-氟苯硼酸。
[0156]
收率(118毫克)：68.4％。白色固体，熔点：140.3
–
141.9℃。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ(ppm)9.00(d,j＝2.2hz,1h),8.62(d,j＝2.4hz,1h),8.27(s,1h),7.51
–
7.36(m,3h),7.27(d,j＝14.0hz,3h),7.09
–
6.98(m,2h),2.33(s,3h),2.24(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3):δ(ppm)162.8(d,j＝247.9hz),160.8,157.0,156.7,149.6,138.3(d,j＝8.1hz),136.4,136.2,136.1 135.7,132.6(d,j＝3.1hz),131.7,131.6(d,j＝8.6hz),130.2,127.7,127.6,117.5(d,j＝21.3hz),117.2,113.4(d,j＝21.4hz),20.6,17.8。hrms(esi
+
)m/z calcd.for c
21
h
17
on3f[m+h]
+
理论值：346.1347,实际测量值：346.1350。
[0157]
实施例18
[0158]
本实施例用于说明制备3-(2-氯-6-甲基苯基)-6-(2-萘基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮(lx-c-23)。
[0159][0160]
合成方法同实施例1化合物lx-c-4，其区别仅在于以2-萘基硼酸替代4-氟苯硼酸。
[0161]
收率(129毫克)：81.0％.白色固体，熔点：180.5
–
181.5℃。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ(ppm)9.44(s,1h),9.00(d,j＝2.2hz,1h),8.19(s,1h),8.12(s,1h),8.00(d,j＝8.5hz,1h),7.98
–
7.92(m,1h),7.92
–
7.87(m,1h),7.83(d,j＝8.4hz,1h),7.64
–
7.51(m,2h),7.47(d,j＝7.5hz,1h),7.40(t,j＝7.8hz,1h),7.34(d,j＝7.4hz,1h),2.26(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3):δ(ppm)160.4,157.3,155.2,149.1,138.4,136.2,134.3,133.6,133.4,133.2,132.7,131.0,129.8,129.3,128.4,128.2,127.8,126.9,126.9,126.7,124.7,117.8,110.0,18.3。高分辨质谱(esi
+
)m/z calcd.for c
24
h
17
cln3o[m+h]
+
理论值：398.1055,实际测量值：398.1049。
[0162]
实施例19
[0163]
本实施例用于说明制备3-(2-氯-6-甲基苯基)-6-(3-噻吩基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮(lx-c-18)。
[0164][0165]
合成方法同实施例1化合物lx-c-4，其区别仅在于以3-噻吩硼酸替代4-氟苯硼酸。
[0166]
收率(71毫克)：66.9％。白色固体，熔点：136.7
–
179.2℃。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ(ppm)9.33(d,j＝2.6hz,1h),8.84(d,j＝2.6hz,1h),8.08(s,1h),7.72(dd,j＝2.8,1.5hz,1h),7.52(qd,j＝5.1,2.2hz,2h),7.47(d,j＝8.0hz,1h),7.40(t,j＝7.8hz,1h),7.34(d,j＝7.6hz,1h),2.24(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3):δ(ppm)160.3,156.9,154.4,148.8,138.4,137.2,133.6,132.9,132.7,131.2,130.9,129.8,128.2,127.6,125.8,122.7,117.8,18.3。高分辨质谱(esi
+
)m/z calcd.for c
18
h
13
cln3os[m+h]
+
理论值：354.0462,实际测量值：354.0453。
[0167]
实施例20
[0168]
本实施例用于说明制备3-(2-氯-6-甲基苯基)-6-(3-呋喃基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮(lx-c-19)。
[0169][0170]
合成方法同实施例1化合物lx-c-4，其区别仅在于以3-呋喃硼酸替代4-氟苯硼酸。
[0171]
收率(64毫克)：63.1％.白色固体,熔点：164.7
–
165.6℃。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ(ppm)9.21(d,j＝2.5hz,1h),8.72(d,j＝2.5hz,1h),8.08(s,1h),7.96(s,1h),7.57(t,j＝
1.6hz,1h),7.47(d,j＝7.9hz,1h),7.40(t,j＝7.8hz,1h),7.34(d,j＝7.6hz,1h),6.87
–
6.83(m,1h),2.24(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3):δ(ppm)160.2,156.9,153.9,148.7,144.6,139.8,138.4,133.6,132.7,132.3,130.9,129.7,128.3,128.2,122.3,117.8,108.4,18.3。高分辨质谱(esi
+
)m/z calcd.for c
18
h
13
cln3o2[m+h]
+
理论值：338.0691,实际测量值：338.0699。
[0172]
实施例21
[0173]
本实施例用于说明制备3-(2-氯-6-甲基苯基)-6-(3-吡啶基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮(lx-c-22)。
[0174][0175]
合成方法同实施例1化合物lx-c-4，其区别仅在于以3-吡啶硼酸替代4-氟苯硼酸。
[0176]
收率(23毫克)：16.5％。白色固体，熔点：196.6
–
199.8℃。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ(ppm)9.31(d,j＝2.2hz,1h),9.00(s,1h),8.90(d,j＝2.5hz,1h),8.74(s,1h),8.15(s,1h),8.05(d,j＝7.9hz,1h),7.49(dd,j＝10.5,5.8hz,2h),7.42(t,j＝7.8hz,1h),7.35(d,j＝7.5hz,1h),2.25(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3):δ(ppm)160.1,157.8,154.7,149.8,149.7,148.1,138.3,134.7,134.6,133.4,133.0,132.7,132.1,131.1,129.8,128.2,124.1,117.8,18.3。hrms(esi+)m/z calcd.for c
19
h
14
on4cl[m+h]
+
hrms(esi
+
)m/z calcd.for c
19
h
14
on4cl[m+h]
+
理论值：349.0846,实际测量值：349.0851。
[0177]
实施例22
[0178]
本实施例用于说明制备3-(2-氯-6-甲基苯基)-6-(4-吡啶基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮(lx-c-24)。
[0179][0180]
合成方法同实施例1化合物lx-c-4，其区别仅在于以4-吡啶硼酸替代4-氟苯硼酸。
[0181]
收率(100毫克)：63.0％.白色固体，熔点：216.7
–
218.6℃。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ(ppm)9.35(d,j＝2.6hz,1h),8.95(d,j＝2.6hz,1h),8.80(d,j＝3.1hz,2h),8.16(s,1h),7.67(d,j＝5.9hz,2h),7.49(d,j＝7.2hz,1h),7.42(t,j＝7.8hz,1h),7.36(d,j＝7.5hz,1h),2.25(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3):δ(ppm)160.0,158.4,154.6,150.7,150.0,143.6,138.3,134.8,133.3,133.2,132.6,131.1,129.8,128.3,121.6,117.8,18.3。高分辨质谱(esi
+
)m/z calcd.for c
19
h
14
cln4o[m+h]
+
理论值：349.0851,实际测量值：349.0845。
[0182]
实施例23
[0183]
本实施例用于说明制备3-(2-氯-6-甲基苯基)-6-(2-呋喃基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮(lx-c-26)。
[0184][0185]
合成方法同实施例1化合物lx-c-4，其区别仅在于以2-呋喃硼酸替代4-氟苯硼酸。
[0186]
收率(125毫克)：74.6％。白色固体，熔点：112.3
–
114.0℃。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ(ppm)9.37(d,j＝2.4hz,1h),8.87(d,j＝2.4hz,1h),8.07(s,1h),7.60(d,j＝1.3hz,1h),7.47(d,j＝7.4hz,1h),7.40(t,j＝7.8hz,1h),7.34(d,j＝7.5hz,1h),6.93(d,j＝3.4hz,1h),6.57(dd,j＝3.4,1.8hz,1h),2.24(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3):δ(ppm)160.1,156.8,152.0,149.9,148.8,143.9,138.4,133.5,132.7,130.9,130.3,129.8,128.2,126.4,117.8,112.3,108.2,18.3。高分辨质谱(esi
+
)m/z calcd.for c
18
h
13
cln3o2[m+h]
+
理论值：338.0691,实际测量值：338.0689。
[0187]
实施例24
[0188]
本实施例用于说明制备3-(2-氯-6-甲基苯基)-6-(1h-1,2,3-三氮唑-4-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮(wjj-a17)。
[0189][0190]
将化合物2e(147.8毫克,0.5mmol),tmsn3(0.1ml,0.75mmol)和cui(4.76毫克,0.025mmol)将入干燥的封管中，然后加入dmf/meoh(4:1,2毫升)，将反应体系用氩气保护后置于100℃反应16个小时。反应结束后，将体系冷却，并置于真空中除去溶剂。然后滤液浓缩后进行硅胶柱色谱(硅胶200
–
300目)分离提纯(ch2cl2:meoh＝1:50)得到化合物wjj-a17。
[0191]
收率(61毫克)：36％。白色固体，熔点：242.6
–
242.9℃。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ(ppm)15.36(s,1h),9.58(d,j＝2.5hz,1h),8.99(d,j＝2.5hz,1h),8.75(s,1h),8.57(s,1h),7.66
–
7.42(m,3h),2.19(s,3h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ(ppm)167.6,159.7,157.2,153.5,150.2,149.8,146.7,138.6,133.4,131.7,131.7,131.1,130.0,127.7,117.2,17.7。高分辨质谱(esi
+
)m/z calcd.for c
16
h
12
on6cl[m+h]
+
理论值：339.0755,实际测量值：338.0756。
[0192]
试验例1
[0193]
本试验例用于本发明化合物的体外活性。
[0194]
体外活性测试方法：
[0195]
1、细胞培养与质粒转染
[0196]
人源胚胎肾细胞(human embryonic kidney 293cells，hek293t)采用dmem基础培养液(gibco,carlsbad,ca,usa)加入10％胎牛血清，置于37℃含5％co2的恒温培养箱中静置培养。转染前一天将hek293t细胞接种于35mm培养皿中，密度约为2
×
106个。采用将lipofectamine tm2000转染试剂(invitrogen,carlsbad,ca,usa)将0.8μg质粒转染至细胞中，16h后将细胞接种于预先用多聚赖氨酸包被的8
×
8(mm)玻片，转染后24-28h用于电生理记录。
[0197]
2、全细胞膜片钳记录
[0198]
使用全细胞膜片钳记录模式，记录转染后22-30h细胞的内向瞬时钠电流。记录时将细胞置于细胞外液中。细胞外液的配方为(mm):nacl 140，kcl 3，hepes 10，glucose 10，mgcl
2 1，cacl
2 1，用naoh调ph值至7.3。电流记录使用epc-10放大器(heka electronic,lambrecht,germany)，采样频率为50khz，信号过滤频率为5khz。记录所用的玻璃电极由经拉制仪(model pc-10puller，narishige，japan)拉制而成，灌注电极内液后与电极丝连接进行记录。电极内液的配方为(mm):csf 140，hepes 10，egta 1，nacl 10，用csoh调ph值至7.3。电极注入内液后阻值为4-6mω，串联电阻补偿70～80％。na
v
1.2通道抑制剂筛选采用的记录程序为：-100mv 100ms后接-20mv 50ms后回到钳制膜电位-90mv。胞外采用重力给药，给药时间为1～2min。所有记录均在室温下进行(23～25℃)。
[0199]
结果如表1所示：
[0200]
表1本发明化合物na
v
1.2体外抑制活性
[0201]
[0202][0203]
nd：未测定。
[0204]
3、体内抗癫痫活性测试
[0205]
c57bl/6雄性小鼠(6-8周，18-23g)从charles river实验室(中国北京)购买。将小鼠随机分为对照组(0.5％羧甲基纤维素钠盐水溶液)、低剂量组(20mg/kg lx-c-14)、高剂量组(50mg/kg lx-c-14)和阳性药组(50mg/kg卡马西平)。在灌胃给药0.75h后，红藻氨酸30mg/kg(sigma-aldrich，st louis，mo，usa)经腹腔注射产生5级癫痫发作。为评价lx-c-14的抗惊厥活性，采用racine评分法记录癫痫发作的严重程度：1级：静止，面部阵挛；2级：点头；3级：单侧前肢、后肢痉挛；4级：双侧前肢阵挛和站立；5级：跳跃和跌倒。自红藻氨酸诱导后每隔5min对癫痫状态进行评分。癫痫状态持续1h后，腹腔注射戊巴比妥钠(30mg/kg；sigma-aldrich)进行终止。化合物lx-c-14预给药的小鼠(20mg/kg和50mg/kg)表现出明显的较慢的痉挛进展，这表明lx-c-14预处理小鼠的癫痫发作敏感性显著降低。在对照组中，
8/10小鼠(80％)出现4级及以上全身性癫痫发作，而lx-c-14治疗组(20mg/kg)中只有4/10小鼠(40％)出现全身性癫痫发作。
[0206]
表2:小鼠体内抗癫痫的活性评价
[0207][0208]
+代表抑制率为20
–
40％，++代表40
–
60％，
[0209]
+++代表60
–
80％，++++代表80
–
100％。
[0210]
尽管本发明已进行了一定程度的描述，明显地，在不脱离本发明的精神和范围的条件下，可进行各个条件的适当变化。可以理解，本发明不限于所述实施方案，而归于权利要求的范围，其包括所述每个因素的等同替换。