一种控制中药注射液类过敏反应的穿心莲内酯磺化物的制备方法与流程

1.本发明涉及中药领域，特别涉及一种控制中药注射液类过敏反应的穿心莲内酯磺化物的制备方法。


背景技术：

2.cn1349986a公开了水溶性穿心莲内酯磺化工艺，其中涉及回收乙醇及抽滤步骤；在生产实践过程中，发现穿心莲内酯磺化物制备过程中加入活性炭煮沸、趁热抽滤对去除反应未完全的原料穿心莲内酯效果不好，均一性不强，对穿心莲内酯磺化物存在类过敏反应的风险，影响产品的安全性。


技术实现要素：

3.为了克服现有技术的不足，本发明提供了一种控制中药注射液类过敏反应的穿心莲内酯磺化物的制备方法，该方法简单易行、科学、合理，明显提升由穿心莲内酯磺化物制成的中药注射剂产品的安全性，为产品的安全提供了可靠的保证。
4.本发明提供一种控制中药注射液类过敏反应的穿心莲内酯磺化物的制备方法，该方法包括以下步骤：
5.(1)浓缩1：将中间体过滤液浓缩、回收乙醇；
6.(2)水沉：在步骤(1)所得浓缩液中加入水和活性炭，搅匀、煮沸，保温一定时间后停止加热，得混合液；
7.(3)冷却：向步骤(2)所得混合液加入水，搅匀，冷却，静置，得水沉液；
8.(4)冷藏：将步骤(3)所得水沉液冷藏，得冷藏液；
9.(5)过滤：将步骤(4)冷藏液用活性炭过滤，得冷藏滤液；
10.(6)浓缩2：将步骤(5)冷藏滤液加热浓缩，浓缩至稠膏，得浓缩液；
11.(7)萃取、浓缩：将步骤(6)浓缩液中加入水，有机溶剂萃取，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至稠膏，得穿心莲内酯磺化物浓缩液；
12.(8)干燥：将步骤(7)穿心莲内酯磺化物浓缩液进行真空干燥；
13.所述的中间体过滤液是由穿心莲内酯粉通过磺化工艺、中和反应、过滤之后得到的。
14.优选的，步骤(1)中，回收乙醇至浓缩液密度为1.26～1.40，优选1.28～1.32。
15.优选的，步骤(2)中，所述一定时间为30分钟。
16.优选的，步骤(2)中，所述水为注射用水；和/或，水的加入方式可分多次。(如2次)；和/或，水的加入量是中间体过滤液重量的0.1～0.3倍(优选0.2～0.3倍)；和/或，活性炭的加入量是大于中间体过滤液重量的0.5
‰
(优选1.0～2.0
‰
)。
17.优选的，步骤(3)中，所述水为注射用水；和/或，水的加入量是中间体过滤液重量0.25～0.75倍，优选0.5～0.75倍。
18.优选的，步骤(4)中，所述冷藏的温度为-15～15℃，优选-10～0℃；和/或，所述冷藏的时间24～96小时，优选24～48小时。
19.优选的步骤(6)中，所述浓缩液的密度为1.30～1.45，优选1.30～1.35。
20.优选的，步骤(7)中，所述水为注射用水；和/或，加入的水为中间体过滤液重量0.1～1.0倍，优选0.1～0.4倍，更优选0.1～0.25倍；和/或，所述有机溶剂包括叔丁基甲基醚、乙酸乙酯、乙醚、异丙醚、二氯甲烷、氯仿、石油醚中任一种或多种；和/或，萃取次数为3～5次；和/或，萃取水层浓缩至密度为1.30～1.45(优选1.35～1.45，更优选1.40)。
21.发明效果：该技术方案提供了一种优质的控制中药注射液类过敏反应的穿心莲内酯磺化物的制备方法，发明人通过特定工艺操作、采用特定工艺参数保证了工艺的技术可行性以及进步性，明显提升由穿心莲内酯磺化物制成的中药注射剂产品的安全性。
具体实施方式
22.以下实施例仅用于对技术方案进行阐述说明，但并不限制技术方案的保护范围。
23.实施例1 中间体过滤液制备
24.1)磺化：取无水乙醇100克置于不锈钢桶内，在温度为10℃-15℃的冷水浴上分次加入化学纯比重为1.84的浓硫酸60ml，加完后冷却至室温，一次加入经研磨过40目筛的穿心莲内酯粉100克，充分搅匀，在室温下放置；
25.2)中和：放置24小时后，加入95％乙醇100ml搅匀，在冷水浴上控温60℃左右，用50％氢氧化钠液约130ml中和至ph值至7；
26.3)过滤：再加入95％乙醇600ml，搅匀，静置2小时后过滤，滤渣用95％乙醇洗涤到洗液几乎无色，合并滤液与洗液，即得中间体过滤液。
27.实施例2 cn1349986a中穿心莲内酯磺化物干燥品制备
28.1)磺化：取无水乙醇100克置于不锈钢桶内，在温度为10℃-15℃的冷水浴上分次加入化学纯比重为1.84的浓硫酸60ml，加完后冷却至室温，一次加入经研磨过40目筛的穿心莲内酯粉100克，充分搅匀，在室温下放置；
29.2)中和：放置24小时后，加入95％乙醇100ml搅匀，在冷水浴上控温60℃左右，用50％氢氧化钠液约130ml中和至ph值至7；
30.3)过滤：再加入95％乙醇600ml，搅匀，静置2小时后过滤，滤渣用95％乙醇洗涤到洗液几乎无色，合并滤液与洗液，即得中间体过滤液；
31.4)回收乙醇：回收乙醇并浓缩至体积约200ml,隔水加热挥发乙醇至尽然后冷却；
32.5)抽滤：将磺化液按体积1％加入活性炭，在水浴上煮沸25分钟，乘热抽滤，滤液冷藏12小时，过滤，得滤液；
33.6)浓缩干燥：将上述滤液浓缩，放入真空干燥机中干燥，即得穿心莲内酯总磺化物干燥品。
34.实施例3-31：控制中药注射液类过敏反应的穿心莲内酯磺化物的制备方法
35.实施例3
36.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.24。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.5
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中
间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍叔丁基甲基醚萃取3次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
37.实施例4
38.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.28。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.5
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍乙酸乙酯萃取3次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
39.实施例5
40.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.32。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.5
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍乙醚萃取3次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
41.实施例6
42.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.40。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.5
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍二氯甲烷萃取3次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心
莲内酯磺化物干燥品。
43.实施例7
44.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.1倍的注射用水，称取中间体过滤液重量2.0
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.25倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍氯仿萃取3次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
45.实施例8
46.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.2倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.5
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.5倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍氯仿萃取3次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
47.实施例9
48.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.0
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～5℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍氯仿萃取3次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
49.实施例10
50.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.4倍的注射用水，称取中间体过滤液重量0.5
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的1.0倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液
抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍氯仿萃取3次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
51.实施例11
52.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.0
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏8小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍氯仿萃取3次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
53.实施例12
54.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.0
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏24小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍氯仿萃取3次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
55.实施例13
56.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.0
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍氯仿萃取3次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
57.实施例14
58.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.5
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏96小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍氯仿萃取3次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
59.实施例15
60.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.0
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍氯仿萃取3次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
61.实施例16
62.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.0
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.35，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍氯仿萃取3次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
63.实施例17
64.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.0
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净
的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.40，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍氯仿萃取3次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
65.实施例18
66.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.0
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.45，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍氯仿萃取3次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
67.实施例19
68.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.0
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍叔丁基甲基醚萃取1次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
69.实施例20
70.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.0
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍氯仿萃取1次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
71.实施例21
72.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.0
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍石油醚萃取1次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
73.实施例22
74.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.0
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍叔丁基甲基醚萃取3次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
75.实施例23
76.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.0
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍氯仿萃取3次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
77.实施例24
78.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.0
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加
热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍石油醚萃取3次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
79.实施例25
80.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.0
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍叔丁基甲基醚萃取5次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
81.实施例26
82.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.0
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍氯仿萃取5次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
83.实施例27
84.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.0
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍石油醚萃取5次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
85.实施例28
86.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至
1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.0
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍氯仿萃取3次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.30，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
87.实施例29
88.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.0
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍氯仿萃取3次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.35，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
89.实施例30
90.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.0
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍氯仿萃取3次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.40，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
91.实施例31
92.取实施例1的中间体过滤液浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味时，监测浓缩液密度至1.30(45℃)。分2次加入中间体过滤液重量0.3倍的注射用水，称取中间体过滤液重量1.0
‰
的活性炭，适量注射用水润湿后加入，搅匀、煮沸，保温30分钟后停止加热。补充注射用水至总量中间体过滤液的0.75倍，搅匀，关闭搅拌器通冷却水冷却，静置，即得水沉液。将水沉液抽入冷藏罐内，夹套通入冷冻液(温度为-10～0℃)，冷藏48小时。用活性炭作滤床，用洁净的板框压滤机过滤，滤液装入药液中转罐内。滤液加热浓缩，浓缩至为密度为1.30，停止加热。加入中间体过滤液重量0.25倍的注射用水，加入中间体过滤液重量0.25倍氯仿萃取3
次，萃取有机溶剂层回收溶剂，萃取水层加热浓缩至密度为1.45，停止加热，得穿心莲内酯磺化物浓缩液，将穿心莲内酯磺化物浓缩液装入不锈钢托盘内放入真空干燥机中，干燥即得穿心莲内酯磺化物干燥品。
93.实施例32
94.为了提供一种优质的控制穿心莲内酯磺化物发生类过敏反应的方法，发明人以穿心莲内酯含量、类过敏反应为评价指标对本发明方法的关键工艺参数进行了考察。以下是发明人所做的考察及结果：
95.1.材料与仪器
96.1.1 材料：本发明中涉及的主要材料：穿心莲内酯：批号：20190416，含量99.1％，来源：江西青峰药业有限公司；硫酸：批号：18110191a，药用级，来源：江西锦汉药用辅料有限公司；无水乙醇：批号：190929246b，药用级，来源：江西锦汉药用辅料有限公司；活性炭：批号：1883114，药用级，来源：上海兴长活性炭有限公司；甲醇，级别：hplc，厂家：默克股份有限公司；水为milli-q制备的超纯水。叔丁基甲基醚：ar，厂家：广东光华科技股份有限公司；乙酸乙酯：ar，厂家：广东光华科技股份有限公司；乙醚：ar，厂家：广东光华科技股份有限公司；异丙醚：ar，厂家：广东光华科技股份有限公司；二氯甲烷：ar，厂家：广东光华科技股份有限公司；氯仿：ar，厂家：广东光华科技股份有限公司；石油醚：ar，厂家：广东光华科技股份有限公司。小鼠：品种：icr，性别：雄性，来源：北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证编号：scxk(京)2012－0001。
97.1.2 仪器：本发明中涉及的主要仪器：高效液相色谱仪，型号：e2695型，厂家：waters；电子天平，型号：ml204t，厂家：梅特勒-托利多科技有限公司。
98.1.3 方法
99.1.3.1 穿心莲内酯含量测定
100.色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(60∶40)为流动相；检测波长为225nm。理论塔板数按穿心莲内酯峰计算应不低于5000。
101.对照品溶液的制备取穿心莲内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
102.供试品溶液的制备取各实施例干燥品25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
103.测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，按干燥品计算含量，即得。
104.测定结果如下：
[0105][0106]
1.3.2 类过敏反应检测
[0107]
类过敏反应：耳廓蓝染取各实施例干燥品适量，用0.8％伊文思蓝溶液(以注射用生理盐水或5％葡萄糖注射液为溶剂)溶解至12.5mg/ml，即得供试品溶液。
[0108]
测定法在温度22～24℃、相对湿度在40％～70％条件下，取雄性icr小鼠或雄性昆明小鼠，重量23g～26g，spf级，适应性饲养1～2天，随机分为供试品组、对照组，每组10只。用电热加热器距离小鼠笼约30cm加热2分钟后，将动物轻柔地固定在小鼠静脉注射固定器上，露出尾巴，用75％酒精棉球轻轻擦拭尾部，使血管扩张可见；用灭菌注射器(1ml，带有5号针头)吸取供试品溶液，注射体积为20ml/kg，针头以一定角度准确刺入尾静脉，以30～40秒的速度注入，注射完毕后，立即用棉球按住注射部位30～60秒；观察30分钟内动物的耳廓蓝染情况，记录每组出现耳廓蓝染的动物数和耳廓蓝染面积比例，按下表进行评分。对照组耳廓蓝染出现可疑阳性及以上反应程度级别的动物数不得大于2只，供试品组出现弱阳性及以上反应程度级别的动物数不得大于3只。
[0109]
表1蓝染面积占耳廓面积比例评分参照表
[0110][0111][0112]
检测结果如下：
[0113][0114]
2.结果分析
[0115]
2.1 工艺流程
[0116][0117]
2.2 cn1349986a专利工艺稳定性均一性考察
[0118]
采用实施例2工艺连续制备10个批次穿心莲内酯磺化物干燥品(样1～样10)，并对比本发明各实施例情况，考察其内酯含量情况，结果见下表：
[0119][0120][0121]
结果表明：由cn1349986a专利工艺得到的10个批次穿心莲内酯磺化物样品中，穿心莲内酯含量rsd为61.83％，本发明实施例4-8、27-31所得10个批次穿心莲内酯磺化物样品中穿心莲内酯含量rsd降低为35.14％，其产品稳定均一性得到明显提升。
[0122]
2.3 中间体过滤滤液浓缩密度考察
[0123]
考察结果如表2所示。
[0124]
表2：中间体过滤滤液浓缩密度对穿心莲内酯含量和类过敏反应的影响
[0125][0126]
结果表明：随着中间体过滤液浓缩密度增大，穿心莲内酯含量呈下降趋势，当浓缩密度在1.24以下、穿心莲内酯含量至0.50％以上时，类过敏检测存在可疑阳性，且浓缩密度至1.32以上时，浓缩液较粘稠，粘壁损失严重，因此中间体过滤液浓缩密度宜控制在1.28～1.32。
[0127]
2.4 水沉加水倍量及炭用量考察
[0128]
分别对步骤(2)加水倍量为中间体过滤液重量的0.1～0.4倍及步骤(3)用水倍量为中间体过滤液重量的0.25～1.0倍及活性炭用量为中间体过滤液重量的0.5
‰
～2.0
‰
范围内进行了考察，结果如表3所示：
[0129]
表3：加水量、用水倍量及活性炭用量对穿心莲内酯含量和类过敏反应的影响
[0130][0131]
结果表明：随着加水倍量的增加，穿心莲内酯含量呈现上升的趋势，以步骤(2)为0.4倍、步骤(3)至1.0倍时，穿心莲内酯含量在0.5％左右，呈现类过敏疑是阳性的现象，且步骤(2)为0.2倍、步骤(3)至0.5倍时，穿心莲内酯含量基本稳定，故加水量以步骤(2)为0.2倍、步骤(3)至0.5倍时为最佳。随活性炭用量增加，穿心莲内酯含量呈下降趋势。当活性炭用量为0.5
‰
时，穿心莲内酯含量过高，类过敏反应呈疑是阳性；当活性炭用量至0.5
‰
以上时，类过敏反应均呈阴性，且穿心莲内酯含量均基本稳定，故活性炭用量1.0
‰
～2.0
‰
即可。
[0132]
2.5 冷藏时间考察
[0133]
考察结果如表4所示。
[0134]
表4：冷藏时间对穿心莲内酯含量及类过敏的影响
[0135][0136]
结果表明：随着冷藏时间增加，穿心莲内酯含量在逐步降低，冷藏24h后基本稳定，且类过敏均呈阴性，冷藏时间过短，类过敏反应存在疑是阳性，从时间成本来考虑，冷藏24h～48h较优。
[0137]
2.6 冷藏滤液浓缩密度考察
[0138]
考察结果表5所示。
[0139]
表5：冷藏滤液的浓缩密度对穿心莲内酯含量和类过敏反应的影响
[0140][0141]
结果表明：在浓缩密度为1.30～1.45范围内，穿心莲内酯含量无差异，类过敏检测均呈阴性，然而浓缩至密度1.35以上时，浓缩液过粘稠，粘壁损失严重，因此浓缩至1.30较优。
[0142]
2.7 萃取溶剂次数考察
[0143]
考察结果如表6所示。
[0144]
表6：溶剂萃取次数对穿心莲内酯含量和类过敏反应的影响
[0145][0146]
结果表明：根据各溶剂萃取次数考察结果来看，以上溶剂萃取1次时，穿心莲内酯含量处于较高水平，且类过敏检测存在疑是阳性结果；萃取3次以上时，穿心莲内酯含量处于较低水平且基本无明显差异，且类过敏检测均呈阴性；因此以上溶剂萃取3次，能较好的控制穿心莲内酯的含量。
[0147]
2.8 萃取水层浓缩密度考察
[0148]
考察结果如表7所示。
[0149]
表7：萃取水层浓缩密度都穿心莲内酯含量和类过敏反应的影响
[0150][0151]
结果表明：随着浓缩程度增加，穿心莲内酯含量无差异，类过敏检测均呈阴性，然而浓缩至密度为1.35以下时，浓缩液在干燥过程中过稀，呈蓬松状，不利于干燥，因此萃取水层浓缩至密度为1.40较优。