一种索马鲁肽侧链中间体的固相合成方法与流程

1.本发明属于有机合成技术领域，尤其涉及一种索马鲁肽侧链中间体的固相合成方法。


背景技术：

2.索马鲁肽(semaglutide)可用于治疗成人2型糖尿病。为glp
‑
1受体激动剂，刺激胰岛 素分泌，降低高血糖素分泌，可以改善成人2型糖尿病患者的血糖控制。
3.索马鲁肽的肽序为：
[0004][0005]
索马鲁肽侧链的结构为：
[0006][0007]
在索马鲁肽合成过程中一般20位lys侧链采用特殊基团保护起来，将主链合成结束之 后，再脱除20位lys的侧链保护基，再将索马鲁肽侧链上的aeea，γ
‑
glu
‑
oh，odda逐 步或者分段或整段引入索马鲁肽的主链上。该方法合成的索马鲁肽，会引入更多的难以去除 杂质肽，收率较低。
[0008]
先将索马鲁肽合成至20位lys，再将索马鲁肽侧链上的aeea，γ
‑
glu
‑
oh，odda逐 步或者分段或整段引入索马鲁肽的主链上。脱除lys主链上的氨基保护基，继续连接剩余的 主链部分。此方法同样会会引入更多的难以去除杂质肽，收率较低。
[0009]
用常规的液相法合成fmoc
‑
lys[odda
‑
(otbu)
‑
γ
‑
glu
‑
(otbu)
‑
aeea
‑
aeea]
‑
oh， 再将fmoc
‑
lys[odda
‑
(otbu)
‑
γ
‑
glu
‑
(otbu)
‑
aeea
‑
aeea]
‑
oh当成一个氨基酸原料接 入索马鲁肽主链中。即选用dcc+hosu或者dic+dmap作为缩合体系(优选dcc+hosu)， 将索马鲁肽侧链中间体的氨基酸原料先转化为活泼酯，再与其它氨基酸原料连接，经过反应、 过滤、浓缩、析出等步骤，得到各步反应的中间体以及最终的索马鲁肽侧链中间体。该方法 合成的索马鲁肽收率较高，但是制备索马鲁肽侧链中间体时，成本较高，且周期较长。


技术实现要素：

[0010]
为解决上述技术问题，本发明通过使用原料alloc
‑
lys(fmoc)
‑
oh，用固相法制备索马 鲁肽侧链中间体。选用2
‑
ctc resin为反应的起始树脂载体。将alloc
‑
lys(fmoc)
‑
oh与 2
‑
ctc resin偶联。脱除赖氨酸侧链保护基，逐步偶联aeea，aeea，γ
‑
glu
‑
otbu， odda
‑
otbu。再脱除主链保护基，与fmoc
‑
osu偶联反应，得到fmoc
‑
lys[odda
‑
(otbu)
ꢀ‑
γ
‑
glu
‑
(otbu)
‑
aeea
‑
aeea]
‑
ctc resin。经过全保护裂解，抽滤，旋蒸得到索马鲁肽侧 链中间体。本发明运用固相多肽合成技术，具有反应条件温和，合成周期短，操作简单的特 点，有着较好的前景。
[0011]
本发明的第一个目的是提供了一种索马鲁肽侧链中间体的固相合成方法，包括如下步 骤：
[0012]
s1、制备alloc
‑
lys(fmoc)
‑
ctc resin：向溶胀后的2
‑
ctc resin中加入alloc
‑
lys(fmoc)
ꢀ‑
oh，在有机碱催化下进行反应，得到alloc
‑
lys(fmoc)
‑
ctc resin；
[0013]
s2、制备alloc
‑
lys[odda
‑
(otbu)
‑
γ
‑
glu
‑
(otbu)
‑
aeea
‑
aeea]
‑
ctc resin：脱除 alloc
‑
lys(fmoc)
‑
ctc resin上的fmoc保护基，采用缩合试剂依次将fmoc
‑
aeea、 fmoc
‑
aeea、fmoc
‑
glu
‑
otbu和odda
‑
otbu偶联到alloc
‑
lys
‑
ctc resin上，得到 alloc
‑
lys[odda
‑
(otbu)
‑
γ
‑
glu
‑
(otbu)
‑
aeea
‑
aeea]
‑
ctc resin；
[0014]
s3、制备fmoc
‑
lys[odda
‑
(otbu)
‑
γ
‑
glu
‑
(otbu)
‑
aeea
‑
aeea]
‑
ctc resin：脱除 alloc
‑
lys[odda
‑
(otbu)
‑
γ
‑
glu
‑
(otbu)
‑
aeea
‑
aeea]
‑
ctc resin上的alloc保护基， 加入fmoc
‑
osu，在有机碱催化下进行反应，反应后收缩肽树脂，得到fmoc
‑
lys[odda
‑
(otbu)
ꢀ‑
γ
‑
glu
‑
(otbu)
‑
aeea
‑
aeea]
‑
ctc resin全保护肽；
[0015]
s4、制备fmoc
‑
lys[odda
‑
(otbu)
‑
γ
‑
glu
‑
(otbu)
‑
aeea
‑
aeea]
‑
oh：采用裂解液 裂解全保护肽，得到所述的索马鲁肽侧链中间体fmoc
‑
lys[odda
‑
(otbu)
‑
γ
‑
glu
‑
(otbu)
ꢀ‑
aeea
‑
aeea]
‑
oh。
[0016]
进一步地，在s1步骤中，alloc
‑
lys(fmoc)
‑
oh：有机碱：2
‑
ctc resin的反应摩尔比 为1～3:3～5:1。
[0017]
进一步地，所述的有机碱为n,n
‑
二异丙基乙胺(dipea)。
[0018]
进一步地，s1步骤的反应时间为1
‑
4h。
[0019]
进一步地，在s2步骤中，所述的缩合试剂为dic和hobt混合而成。
[0020]
进一步地，氨基酸原料：hobt：dic＝1：(3～5)：(3～5)，所述的氨基酸原料为fmoc
‑
aeea、 fmoc
‑
glu
‑
otbu或odda
‑
otbu。
[0021]
进一步地，在s2步骤中，偶联反应的时间为1.5～5h。
[0022]
进一步地，在s2步骤中，偶联反应是在溶剂中进行，反应后需要采用溶剂进行洗涤； 所述的溶剂为dmf，dcm，dmso中的一种。
[0023]
进一步地，在s3步骤中，采用苯硅烷和四(三苯基膦)钯脱除alloc保护基。
[0024]
进一步地，在s3步骤中，苯硅烷、四(三苯基膦)钯、fmoc
‑
osu、n,n
‑
二异丙基乙胺 与alloc
‑
lys[odda
‑
(otbu)
‑
γ
‑
glu
‑
(otbu)
‑
aeea
‑
aeea]
‑
ctc resin的摩尔比为(0.1～0.8)： (5～15)：(3～5)：(3～10)：1。
[0025]
进一步地，在s4步骤中，裂解液为体积比tfe:dcm＝1:3～5混合制备而成，裂解液与全 保护肽的体积质量比为6～12ml裂解液：1g全保护肽。
[0026]
借由上述方案，本发明至少具有以下优点：
[0027]
本发明通过使用原料alloc
‑
lys(fmoc)
‑
oh，用固相法制备索马鲁肽侧链中间体。选用 2
‑
ctc resin为反应的起始树脂载体。将alloc
‑
lys(fmoc)
‑
oh与2
‑
ctc resin偶联。脱除 赖氨酸侧链保护基，逐步偶联aeea，aeea，γ
‑
glu
‑
otbu，odda
‑
otbu。再脱除主链保护 基，与fmoc
‑
osu偶联反应，得到fmoc
‑
lys[odda
‑
(otbu)
‑
γ
‑
glu
‑
(otbu)
‑
aeea
‑
aeea]
‑
ctcresin。经过全保护裂解，抽滤，旋蒸得到索马鲁肽侧链中间体。本发明运用固相多肽合成技 术，具有反应条件温和，合成周期短，操作简单的特点，有着较好的前景。
[0028]
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依 照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合详细附图说明如后。
附图说明
[0029]
图1为索马鲁肽侧链中间体的hplc图；
[0030]
图2为索马鲁肽侧链中间体的ms图。
具体实施方式
[0031]
下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本 发明，但不用来限制本发明的范围。
[0032]
alloc
‑
lys(fmoc)
‑
oh的结构为：
[0033][0034]
制备索马鲁肽侧链中间体的合成路线为：
[0035]
[0036]
[0037]
[0038]
[0039][0040]
实施例1：
[0041]
本实施例包括以下步骤：
[0042]
步骤一：
[0043]
制备alloc
‑
lys(fmoc)
‑
ctc resin
[0044]
称取10g2
‑
ctc resin于反应柱中，用dmf溶胀30min。称取2.72galloc
‑
lys(fmoc)
‑
oh 投入反应柱中，加入适量dmf溶解，再向反应柱中加入3.4mldipea，搅拌均匀。反应1
‑
2h。 抽掉反应液，用dcm:meoh:dipea＝80：15：5的混合液，封闭未反应完的树脂(100ml*2)， 每次10min。dmf洗涤树脂(100ml*3)。
[0045]
步骤二：
[0046]
制备alloc
‑
lys[odda
‑
(otbu)
‑
γ
‑
glu
‑
(otbu)
‑
aeea
‑
aeea]
‑
ctc resin
[0047]
用dblk(dmf:pip＝4：1)与alloc
‑
lys(fmoc)
‑
ctc resin反应(100ml*2)20min。 dmf洗涤(100ml*5)。取样用茚三酮试剂检测为阳性。称取3.85gfmoc
‑
aeea，1.62ghobt 投入反应柱中，加入100mldmf，再加入1.9mldic，反应2h，茚三酮试剂检测为阴性。抽 掉反应液，用dmf洗涤(100ml*3)。
[0048]
用dblk与肽树脂反应(100ml*2)20min。dmf洗涤(100ml*5)。取样用茚三酮试 剂检测为阳性。称取3.85gfmoc
‑
aeea，1.62ghobt投入反应柱中，加入100ml dmf，再加 入1.9mldic，反应2h，茚三酮试剂检测为阴性。抽掉反应液，用dmf洗涤(100ml*3)。
[0049]
用dblk与肽树脂反应(100ml*2)20min。dmf洗涤(100ml*5)。取样用茚三酮试 剂检测为阳性。称取4.25gfmoc
‑
glu
‑
otbu，1.62ghobt投入反应柱中，加入100ml dmf， 再加入1.9mldic，反应2h，茚三酮试剂检测为阴性。抽掉反应液，用dmf洗涤(100ml*3)。
[0050]
用dblk与肽树脂反应(100ml*2)20min。dmf洗涤(100ml*5)。取样用茚三酮试 剂检测为阳性。称取3.70godda
‑
otbu，1.62ghobt投入反应柱中，加入100ml dmf，再加 入
1.9mldic，反应2h，茚三酮试剂检测为阴性。抽掉反应液，用dmf洗涤(100ml*3)。
[0051]
步骤三：
[0052]
制备fmoc
‑
lys[odda
‑
(otbu)
‑
γ
‑
glu
‑
(otbu)
‑
aeea
‑
aeea]
‑
ctc resin
[0053]
称取0.58g四(三苯基膦)钯投入反应柱中，加入100ml dcm，再加入3ml苯硅烷， 反应30min。用dmf洗涤(100ml*5)。称取3.37gfmoc
‑
osu，投入反应柱中，加入100ml dmf， 加入3.4ml dipea。反应3h，茚三酮试剂检测为阴性。抽掉反应液，用dmf洗涤(100ml*3)。 用100ml meoh收缩3次，每次10min，抽干。得肽树脂16.0g
[0054]
步骤四：
[0055]
制备fmoc
‑
lys[odda
‑
(otbu)
‑
γ
‑
glu
‑
(otbu)
‑
aeea
‑
aeea]
‑
oh
[0056]
量取32ml tfe和128ml dcm混合均匀，将肽树脂加入其中，搅拌反应2h。过滤。低 温减压旋蒸滤液，最后得胶状的索马鲁肽侧链中间体。
[0057]
经过hplc检测，其粗肽纯度为97.78％，图谱如图1所示。
[0058]
经ms检测分子量为1196.0，与理论值1196.1相符，图谱如图2所示。
[0059]
以上仅是本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，应当指出，对于本技术领域的 普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些 改进和变型也应视为本发明的保护范围。