一种双层微流控芯片的制作方法

[0001]
本实用新型属于病毒检测技术领域，涉及一种用于病毒核酸检测的双层微流控芯片。


背景技术：

[0002]
冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒以及中东呼吸综合征（mers）和严重急性呼吸综合征（sars）等较严重疾病。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株。新型冠状病毒的确诊需通过核酸检测，呈阳性才能确诊。目前使用实时荧光定量pcr方法检测核酸呈现较高的假阴性率，会使很多已经感染的患者误以为还没有感染，进而造成更大范围的人传人感染。
[0003]
现有的病毒检测试剂盒在检测中存在准确率低，假阳性和假阴性率高等问题，并且检测过程耗时，不能满足快速检测的需要。


技术实现要素：

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本实用新型的目的是提供一种能够快速、简便、准确的检测病毒的微流控芯片。
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本实用新型解决其技术问题提供了一种双层微流控芯片，该芯片包括加样层和检测层，所述加样层上设有至少两个加样口；所述检测层上设有检测腔、出样口；所述检测腔与所述加样口通过进样微流道连接；所述出样口与所述检测腔通过出样微流道连接。
[0006]
作为本实用新型的一种优选方式，每个加样口与检测腔之间连接一条进样微流道。
[0007]
进一步优选地，所述双层微流控芯片设置10-50个检测单元。
[0008]
本实用新型的有益效果是：本实用新型采用了封闭的双层微流控芯片检测体系，不同的物品或试剂从不同的加样口加入，减少交叉污染，能减少外界核酸带来的污染干扰。本实用新型的试剂盒采用纳米技术与微流控技术相结合，对新型冠状病毒（2019-ncov）进行检测，能够在1小时内获得检测结果，特异性强，灵敏度高。本实用新型将含有rdrp基因及e基因荧光探针的检测溶液、待测样本、阳离子溶液、冲洗液在一个检测单元中进行检测，过程一步完成，反应过程完全封闭，既能减少实验操作步骤，节省时间，同时还避免了开盖操作可能带来的样本污染。
[0009]
本实用新型所使用的探针为3’端cy3标记的荧光探针，即单链时荧光基团发出的荧光被纳米材料吸收；但待测物出现与探针发生杂交反应后报告基团就可释放出荧光，被荧光计检测到。因此本实用新型不仅可用于简单的定性检测，亦可用做样本具体含量的定量检测。
附图说明
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图1为本实用新型实施例的核酸检测双层微流控芯片的结构示意图；
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图2为图1的分解图；
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图3为本实用新型实施例的核酸检测双层微流控芯片的结构正视图；
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图4为加样层结构示意图；
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图5为检测层结构示意图。
具体实施方式
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为了便于理解本实用新型，下面结合附图和具体实施例，对本实用新型进行更详细的说明。附图中给出了本实用新型的较佳的实施例。但是，本实用新型可以以许多不同的形式来实现，并不限于本说明书所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本实用新型的公开内容的理解更加透彻全面。
[0016]
本实用新型的提供的实施例是：一种双层微流控芯片，如图1-3所示，该芯片由加样层1和检测层2组成。加样层1主要作用是用来加入dna探针、待测样品和其他试剂；检测层2主要是用来提供反应容器、及反应后检测反应物的荧光信号。
[0017]
如图1所示，在一个双层微流控芯片上设有12个检测单元，其中，如图4所示，每一个检测单元包括：加样层1上设有3个加样口，分别为第一加样口3、第二加样口5和第三加样口7。每个加样口分别连接一条进样微流道，分别是第一微流道4、第二微流道6和第三微流道8。这3条微流道之间相互独立，通过各自的加样口加入样本，可以避免交叉污染。
[0018]
如图5所示，在检测层2上设有检测腔9、出样口12和出样微流道11。加样层1上的3条微流道均与检测腔9连接。通过3个加样口及相应的微流道，可将检测试剂、样本注入到检测腔9中。
[0019]
如图1-3所示，每一个检测单元的出样微流道11与出样主流道10连接，主出样主流道10再与出样口12连接。
[0020]
本实施例的双层微流控芯片，制做材料为聚二甲基硅氧烷（pdms）和与之配对的固化剂，按照10：1比例混合，制备而成。
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本实施例的双层微流控芯片的工作原理为：首先从第二进样口5，第三进样口7和第二流道6、第三微流道8分别注入cy3修饰的dna探针（激发波长在532 nm，发绿光）、纳米材料溶液到检测腔9中，此时dna探针已经被纳米材料吸附，荧光淬灭。
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5分钟后，从第一进样口3和第一微流道4注入5μl待检测样本，使其进入到检测腔9。
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将芯片置于60℃孵育30分钟后，用光谱仪532 nm激发波长对微流控芯片的荧光信号进行检测。
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检测完成后可通过出样主流道、出样微流道11和出样口12对检测腔9进行冲洗，达到检测腔9反复使用的目的。
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需要说明的是，本实施例中，加样层1上的加样口至少要有2个，一个用来加入待测样本，另一个用来加入检测试剂，例如：dna探针溶液、纳米材料或其他试剂等。可以增加一个加样口作为备用加样口。