技术特征：
1.一种源自疱疹病毒目的重组复制缺陷病毒，其中，所述病毒的特征在于编码icp27的基因或其功能等效基因的缺失，其中，所述缺失的长度至少为1,200bp，且留下不超过300bp、250bp、200bp、150bp、100bp、50bp、30bp、20bp、10bp、9bp、8bp、7bp、6bp、5bp、4bp、3bp、2bp、1bp或0bp的所述编码icp27的基因(seq id no:11)或其功能等效基因的最3
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末端。2.根据权利要求1所述的重组复制缺陷病毒，所述病毒为或源自非临床(或实验室)病毒株。3.根据权利要求1或2所述的重组复制缺陷病毒，其中，所述缺失包括所述编码icp27的基因或其功能等效基因的整个编码序列(或orf)。4.根据权利要求1至3中任一项所述的重组复制缺陷病毒，其中，所述缺失还包括所述编码icp27的基因或其功能等效基因的整个启动子区域，或所述启动子区域的一部份(例如最3’端的约400个核苷酸)。5.根据权利要求1至4中任一项所述的重组复制缺陷病毒，其中，所述编码icp27的基因具有seq id no:11的多核苷酸序列。6.根据权利要求1至5中任一项所述的重组复制缺陷病毒，其中，所述病毒源自异疱疹病毒科或软体动物疱疹病毒科。7.根据权利要求1至5中任一项所述的重组复制缺陷病毒，其中，所述病毒源自疱疹病毒科。8.根据权利要求7所述的重组复制缺陷病毒，其中，所述病毒源自甲型疱疹病毒亚科、乙型疱疹病毒亚科或丙型疱疹病毒亚科。9.根据权利要求8所述的重组复制缺陷病毒，其中，所述病毒源自hhv-1(单纯疱疹病毒-1或hsv-1)、hhv-2(单纯疱疹病毒-2或hsv-2)、hhv-3(水痘带状疱疹病毒或vzv)、hhv-4(eb病毒或ebv)、hhv-5(巨细胞病毒或cmv)、hhv-6a/hhv-6b(玫瑰疱疹病毒属，嗜淋巴疱疹病毒)、hhv-7或hhv-8(卡波西肉瘤相关疱疹病毒或kshv)。10.根据权利要求8所述的重组复制缺陷病毒，其中，所述病毒源自猕猴疱疹病毒-1(cehv-1)或鼠疱疹病毒68(mhv-68或muhv-4)。11.根据权利要求8所述的重组复制缺陷病毒，其中，所述病毒源自单纯疱疹病毒属，诸如侏猴疱疹病毒1型、蜘蛛猴疱疹病毒、猪疱疹病毒、牛疱疹病毒2型、猕猴疱疹病毒1型(疱疹b病毒)、果蝠α疱疹病毒1型、兔疱疹病毒4型、恒河猴疱疹病毒1型、小袋鼠疱疹病毒2型和狒狒疱疹病毒2型。12.根据权利要求8所述的重组复制缺陷病毒，其中，所述病毒源自水痘病毒属，诸如牛疱疹病毒1型、牛疱疹病毒5型、水牛疱疹病毒1型、山羊疱疹病毒1型、犬疱疹病毒1型、猕猴疱疹病毒9型、鹿疱疹病毒1型、鹿疱疹病毒2型、麋鹿疱疹病毒1型、马疱疹病毒1型、马疱疹病毒3型、马疱疹病毒4型、马疱疹病毒8型、马疱疹病毒9型、猫疱疹病毒1型和猪源疱疹病毒1型。13.根据权利要求8所述的重组复制缺陷病毒，其中，所述病毒源自马利克病毒属，诸如鸭疱疹病毒1型、鸽疱疹病毒1型、鸡疱疹病毒2型、鸡疱疹病毒3型(gahv-3或mdv-2)、火鸡疱疹病毒1型(hvt)和孔雀疱疹病毒1型。14.根据权利要求8所述的重组复制缺陷病毒，其中，所述病毒源自传染性喉气管炎病
毒属，诸如鸡疱疹病毒1型和鹦鹉疱疹病毒1型。15.根据权利要求8所述的重组复制缺陷病毒，其中，所述病毒源自爬行动物甲型疱疹病毒，诸如赤蠵龟疱疹病毒、海龟疱疹病毒1型、海龟疱疹病毒2型、海龟疱疹病毒3型、海龟疱疹病毒4型、绿蠵龟疱疹病毒、库伯疱疹病毒、水龟疱疹病毒1型、水龟疱疹病毒2型、纤维乳头状瘤相关疱疹病毒、盾蜥疱疹病毒1型、盾蜥疱疹病毒2型、盾蜥疱疹病毒3型、木雕龟疱疹病毒1型、木雕龟疱疹病毒2型、鬣蜥疱疹病毒1型、鬣蜥疱疹病毒2型、蠵龟口皮疱疹病毒、肺-眼-气管疱疹病毒、侧颈龟疱疹病毒1型、红耳龟疱疹病毒、箱龟疱疹病毒1型、箱龟疱疹病毒2型、陆龟疱疹病毒1型、陆龟疱疹病毒2型、陆龟疱疹病毒3型、陆龟疱疹病毒4型和巨蜥疱疹病毒1型。16.根据权利要求8所述的重组复制缺陷病毒，其中，所述病毒源自蛛猴疱疹病毒属，诸如狷羚疱疹病毒1型、狷羚疱疹病毒2型、侏猴疱疹病毒2型、牛疱疹病毒4型、猕猴疱疹病毒17型、马疱疹病毒2型、马疱疹病毒5型、马疱疹病毒7型、日本猕猴疱疹病毒、兔疱疹病毒1型和鼠疱疹病毒4型(鼠类丙型疱疹病毒-68或mhv-68)。17.根据权利要求9所述的重组复制缺陷病毒，其中，所述病毒为hsv-1株，诸如kos、kos 1.1、kos 1.1a、kos63、kos79、mckrae、第17株、f17或mcintyre。18.根据权利要求1至17中任一项所述的重组复制缺陷病毒，其中，所述其功能等效基因为kshv的orf57、ebv的mta/sm/eb2或人cmv的ul69。19.根据权利要求1至18中任一项所述的重组复制缺陷病毒，还包括aav rep和cap蛋白的编码序列和/或两侧为aav itr序列的目的基因(goi)。20.根据权利要求19所述的重组复制缺陷病毒，其中，所述aav rep和cap蛋白的编码序列和/或所述两侧为aav itr序列的目的基因(goi)整合到或替换病毒的非必需基因(例如无需用于病毒复制和无需用于病毒包装)。21.一种能够在宿主细胞中表达icp27或其功能等效物的重组载体，所述载体包括：(1)所述icp27或其功能等效物的编码序列，其可操作地连接至能够导向所述编码序列在宿主细胞中转录的启动子；(2)所述编码序列3’端的多腺苷酸化位点；和(3)任选地，一个或多个多克隆位点；其中，所述载体包含根据权利要求1至20中任一项所述的病毒的不超过300bp、250bp、200bp、150bp、100bp、50bp、30bp、20bp、10bp、9bp、8bp、7bp或6bp的连续核苷酸。22.根据权利要求21所述的重组载体，其中，所述icp27具有seq id no:10的氨基酸序列，或与seq id no:10至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％、99.2％、99.4％、99.6％或99.8％相同。23.根据权利要求21或22所述的重组载体，其中，所述启动子包括至少400个多核苷酸。24.根据权利要求23所述的重组载体，其中，所述启动子包括seq id no:11的第1至538位核苷酸、seq id no:11的第127至538位核苷酸、基因库登录号kt887224的第113,139至113,550位核苷酸或基因库登录号kt887224的第113,013至113,550位核苷酸。25.根据权利要求21至24中任一项所述的重组载体，其中，所述编码序列经过部分或完全密码子优化，以在哺乳动物宿主细胞中表达。26.根据权利要求25所述的重组载体，其中，所述编码序列的最3’端的300至350个核苷
乙酰葡糖胺糖苷酶，导致圣菲利波综合征或黏多糖贮积症iiib型(mps iiib))、磺酰胺酶或sgsh(导致黏多糖贮积症iiia型或mps iiia)、因子ix、因子viii、肌管蛋白1(mtm1)、运动神经元存活(smn，导致脊髓性肌萎缩或sma)、galnac转移酶galgt2、钙蛋白酶3(capn-3)、酸性α-葡糖苷酶(gaa，导致庞贝氏症)、α-半乳糖苷酶a或gla(导致法布里病)、葡糖脑苷脂酶、肌萎缩蛋白或微肌萎缩蛋白。42.根据权利要求41所述的方法，其中，所述目的基因为微肌萎缩蛋白基因。43.根据权利要求42所述的方法，其中，所述微肌萎缩蛋白基因为us7,906,111、us7,001,761、us7,510,867、us6,869,777、us8,501,920、us7,892,824、pct/us2016/013733或us10,166,272中所描述的一者。44.根据权利要求43所述的方法，其中，所述微肌萎缩蛋白基因包括全长肌萎缩蛋白的r16和r17血影蛋白样重复序列的编码序列(诸如us7,892,824中所描述的一者)。45.根据权利要求44所述的方法，其中，所述微肌萎缩蛋白基因包括全长肌萎缩蛋白的r1、r16、r17、r23和r24血影蛋白样重复序列的编码序列(诸如pct/us2016/013733所描述的微肌萎缩蛋白基因)。46.一种治疗有其需要的受试者的肌营养不良症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的编码微肌萎缩蛋白基因(诸如根据权利要求43至45中任一项所述的一者)的重组aav(raav)载体，其中，所述raav通过根据权利要求36至40中任一项所述的方法生产。47.根据权利要求46所述的方法，还包括在向所述受试者施用所述raav前，通过根据权利要求36至40中任一项所述的方法生产所述raav。48.一种制造源自疱疹病毒目的重组复制缺陷病毒的方法，其中，所述病毒的特征在于编码icp27的基因或其功能等效基因的缺失，其中所述缺失的长度至少为1,200bp，且留下不超过300bp、250bp、200bp、150bp、100bp、50bp、30bp、20bp、10bp、9bp、8bp、7bp、6bp、5bp、4bp、3bp、2bp、1bp或0bp的所述编码icp27的基因(例如seq id no:11)或其功能等效基因的最3
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末端，所述方法包括通过宿主细胞中的同源重组创造所述编码icp27的基因或其功能等效基因的所述缺失。49.根据权利要求48所述的方法，其中，所述同源重组通过使用细菌人工染色体(bac)进行，所述细菌人工染色体包含所述源自疱疹病毒目的病毒的基因组(例如hsv基因组)，其具有所述编码icp27的基因或其功能等效基因。50.根据权利要求48或49所述的方法，其中，所述宿主细胞为大肠杆菌或真核细胞，诸如昆虫细胞(例如sf9)或哺乳动物细胞(例如vero细胞、幼地鼠肾(bhk)细胞、hela细胞、人肺成纤维细胞mrc-5、人包皮成纤维细胞(hff)、人胚胎成纤维细胞(helf)、马-达二氏犬肾细胞(mdck)、马-达二氏牛肾细胞(mdbk)或其他)。
技术总结
本文描述的发明提供一种源自疱疹病毒目的重组复制缺陷病毒，其中所述病毒的特征在于编码ICP27的基因或其功能等效基因的完整缺失。本发明也提供所述重组复制缺陷病毒的生产细胞系，其中所述细胞系具有ICP27或其功能等效物的编码序列，且其中所述编码序列与所述特征在于编码ICP27的基因的完整缺失的病毒没有或具有最小的序列重叠。本发明也提供一种使用所述重组复制缺陷病毒和生产细胞系的方法。所述重组复制缺陷病毒和生产细胞系的方法。
技术研发人员：P
受保护的技术使用者：坚固生物科技公司
技术研发日：2020.06.01
技术公布日：2022/3/18