念珠藻素抗癌剂的生物催化合成

念珠藻素抗癌剂的生物催化合成1.政府利益声明2.本发明是在美国国家卫生研究院(nationalinstitutesofhealth)授予的gm076477和gm118101的政府支持下完成的。政府拥有本发明的某些权利。
技术领域：
：3.本公开整体涉及天然存在的化合物的类似物及其用途，诸如在治疗癌症(诸如结肠直肠癌)、降低癌症风险或改善癌症症状的方法中。
背景技术：
：：4.聚酮化合物合酶(pks)、非核糖体肽合成酶(nrps)及其杂化体(pks/nrps)是生成众多复杂天然产物的模块化蛋白。这些蛋白质选择一组相对简单的化学建构单元(丙二酸酯、丙二酸酯衍生物和/或氨基酸)并构建多种具有广泛生物活性的支架。1-2作为这些天然产物中的一个大类，大环化合物3含有受约束的环结构，所述环结构既将它们锁定在它们的生物活性构象中，又可以保护肽键不被降解。4这些重要分子的生物合成通常通过硫酯酶(te)结构域终止，其为利用丝氨酸、组氨酸、天冬氨酸催化三联体来实现区域特异性和立体特异性环化的α,β-水解酶。4-5人们对这些酶控制选择性以及组织线性底物进行有效大环化而不是水解的分子机制知之甚少，这限制了我们预测并最终调整这些酶来用作广泛范围生物催化剂的能力。在扩展现有合成工具箱以进行药物化学探索的方法的不断追求中，利用这些离散酶将具有无可比拟的价值。6-85.在pks和nrpste上的开创性工作，包括结构研究和体外生物化学分析，对介导环化的复杂催化机制提供了重要见解。在nrps衍生的短杆菌酪肽(tyrocidine)和达托霉素te系统中，使用固相肽合成产生一系列非天然链延长中间体，所述中间体提供具有不同生物活性的新型大环类似物。9-11这种底物耐受性归因于能够实现底物预组织的氢键网络。因此，假设除了对于用作分子内亲核试剂的氨基酸之外，te施加极小的影响，这似乎对有效的催化至关重要。12对来自表面活性素和丰原素生物合成途径的nrpste的结构研究进一步支持了这一点。各自具有大的碗状活性位点，所述活性位点主要由非极性和芳香族氨基酸组成，其中特异性相互作用主要发生在线性nrps底物的含羟基c末端。13-146.对红霉素(debs)和苦霉素(pik)途径中的pkste的研究也受益于结构和生物化学检查。这项工作已表明，在更具通道形状的活性位点中观察到的特异性官能团相互作用和疏水堆积的复杂相互影响对于有效环化是必要的。15-17尽管在debs和pikte中存在一些必要的限制，但已经观察到非必需元件具有一定的灵活性，正如通过能够产生新的大环产物的对接和合成底物的组合所展示的那样。16,18-19利用合理的工程改造，产生了单一活性位点突变，其改变了pikte的潜在催化机制，促进了先前不可及(inaccessible)的12元大环内酯的有效大环化。20这些引人注目的研究继续揭示各种系统中大环化的复杂性。有必要对pks、nrps和pks/nrps杂化te进行进一步研究，以扩大我们对在广泛范围内控制大环化的因素的了解。利用这些知识已经促进了扩大te底物灵活性的蛋白质工程改造工作，并且沿着这些方向继续努力有望促进更具活性且药理学相关的小分子文库的产生。7.念珠藻素是一类由混合的pks/nrps生物合成系统生成的缩肽类天然产物。21-22它们首先在念珠藻属(nostoc)物种atcc53789中作为强效抗真菌剂被鉴定出来，23随后在念珠藻属物种gsv224中作为最有效的抗增殖性微管结合剂之一再次发现。24最初的药物化学筛选工作表明，β-环氧化物官能团是最大活性所必需的，并且大多数修饰对于效力是不利的。在单元c中含有偕二甲基官能团的合成类似物念珠藻素52(图1)进入了治疗铂耐药卵巢癌的临床试验。25-27尽管表现出显著的疾病稳定性和总体积极的结果，但由于剂量限制性周围神经病变和缺乏广泛的体内功效，试验被中止。25,28尽管念珠藻素52临床试验已终止，但这类代谢物仍然是进一步先导化合物优化的有力支架，因为它对难以治疗的耐药性癌症特别有效。29近来，已作为抗体药物缀合物(以及其它直接靶向剂，包括与rgd肽30和叶酸31缀合)的潜在有效负载对念珠藻素进行了广泛研究，因为这可以规避使用这些化合物观察到的全身毒性。32-36尽管人们对念珠藻素作为抗癌剂仍有很大的兴趣，但在先导化合物优化方面的挑战以及其生产的昂贵合成工作阻碍了探索。基于crpte的强大功能的先前迹象21，我们有动力扩展我们的化学酶促方法，以继续进行类似物生成和生物学评价，特别是在念珠藻素支架的未充分探索区域。8.念珠藻素生物合成的最后一步是通过crpte对链延长中间体进行大环化。21我们已证明，切除的crpte能够在不同程度上催化天然和修饰底物的轻松环化，以产生念珠藻素3、51(图1)和在单元a中含有末端烯烃的非天然念珠藻素，其最初在elililly作为ly404291合成。37此外，crpte还通过与上游nrps模块crpd-m2进一步反式操作而展示了在念珠藻素24和51的产生中的实用性。22这些研究证明了crpte独特、固有的灵活性及其作为产生具有药用重要性的新型念珠藻素类似物的多功能生物催化剂的潜力。为此，我们着手于生成一系列新型念珠藻素链延长中间体的工作，旨在探测crpte底物耐受性，并产生可解决在临床试验中发现的局限性(剂量限制性周围神经病变和广泛的体内功效)的类似物。25,289.鉴于上述观察，显然本领域仍然存在对可用于合成和使用化合物类似物诸如念珠藻素类似物来治疗癌症诸如结肠直肠癌、降低发展癌症的风险或改善与癌症相关的症状的方法和底物的需要。技术实现要素：10.本公开提供了式i化合物：[0011][0012]其中ar为具有1至3个选自n、o和s的环杂原子的5至7元杂环芳基，并且任选地被1-3个独立地选自c1-5烷基和l-r6的取代基取代；r1为氯、溴或碘；r2为oh或oc(o)ch2nhr；或r1和r2一起(1)表示它们所连接的碳之间的双键或(2)与它们所连接的碳形成β-环氧化物环；r3和r4中的每一个独立地为h、c1-6烷基、c0-6亚烷基-oh或c0-6亚烷基-nh(r)；或r3和r4与它们所连接的碳原子一起形成螺c3-5环烷基或具有一个氮环原子的螺3至5元杂环烷基；r5为c1-6烷基、c0-6亚烷基-oh或c0-6亚烷基-nh(r)；并且r为h、c1-6烷基或l-r6；l为接头；r6为反应性化学基团；并且x为o、nh或nme，前提条件是所述化合物或盐包含0或1个l-r6。[0013]在一些实施方案中，ar包括吡啶基、吡嗪基、咪唑基或噁唑基，任选地被1-3个选自甲基和异丙基的取代基取代。[0014]在各种实施方案中，(1)ar为r3为ch3，并且r4为h；(2)ar为r3为ch3，并且r4为h或ch3；(3)ar为r3为ch3，并且r4为h或ch3；(4)ar为r3为ch3，并且r4为h；(5)ar为r3为ch3，并且r4为h；(6d)ar为r3为ch3，并且r4为h；(7)ar为r3为ch3，并且r4为h或ch3；(8)ar为r3为ch3，并且r4为h或ch3；(9)ar为r3为ch3，并且r4为h；或(10)其中ar为r3为ch3，并且r4为h。[0015]本文还提供了产生本文所述的化合物和盐的方法，其包括使开环(seco)念珠藻素中间体与念珠藻素硫酯酶在适合于大环化的条件下接触以形成化合物或盐。[0016]本文还提供了包含本文所述的化合物或盐以及肽、蛋白质或抗体的缀合物。在一些情况下，抗体和化合物或盐通过化合物或盐的反应性化学基团和抗体上的互补反应性基团共价连接。[0017]本公开的其他方面包括包含如本文所公开的化合物的药物组合物，用于制备用于治疗或预防受试者的癌症的药物的如本文所公开的化合物，以及如本文所公开的化合物在治疗受试者的癌症的方法中的用途。[0018]从以下包括附图的详细描述中，本公开的其它特征和优点将变得显而易见。然而，应当理解的是，具体实施方式和具体示例虽然指示了实施方案，但仅是为了说明而提供的，因为根据具体实施方式，在本公开的精神和范围内的各种改变和修改对于本领域技术人员将变得显而易见。附图说明[0019]图1.呈现了选择的念珠藻素类似物的结构。[0020]图2.类似物23a-m的分析规模crpte环化反应的tof-lcms分析，其中起始材料峰为黑色，产物峰为蓝色，并且水解副产物为绿色。[0021]图3.a)单元a片段的合成示意图。b)示意性地示出单元a两步合成反应。[0022]图4.单元b片段的合成示意图。[0023]图5.单元ab片段的合成示意图。[0024]图6.a)单元cd片段的合成示意图。b)示意性地示出单元cd合成反应。[0025]图7.开环念珠藻素中间体的加工(elaboration)的示意图。[0026]图8.crpte反应的转化百分比、分离收率和环化与水解分析。[0027]图9.念珠藻素类似物在hct-116人类结肠直肠癌中的ic50值。具体实施方式[0028]念珠藻素是大环缩肽类家族，其对难以治疗的耐药性癌症表现出异常有效的抗增殖活性。近来，这些分子作为抗体药物缀合物中的潜在有效负载持续受到关注，凸显了对替代性合成策略以及用以促进这些微管蛋白结合剂与适当的生物分子的连接的类似物的持续需要。这一复杂群组的分子的合成和衍生化所面临的独特挑战促使我们研究了化学酶促合成，旨在获得更有前景的类似物。[0029]念珠藻素硫酯酶(crpte)是一种多功能酶，其催化20多种天然念珠藻素代谢物的大环化，这使得我们设想了涉及将其用作产生非天然衍生物的独立生物催化剂的药物开发策略。为此，我们开发了12种新单元a-b-c-d线性链延长中间体的可扩展合成，所述中间体含有杂环芳香族基团作为天然单元a苄基的替代物。使用野生型的切除的crpte评估每种中间体的n-乙酰半胱胺活化形式向大环产物的转换，这证明了这种酶出色的灵活性。进行了半制备规模反应，以用于分离、结构表征和进一步生物学评价，揭示了具有低皮摩尔效力的desβ-环氧化物类似物。[0030]本文公开的工作能够实现迄今为止所产生的最有效的念珠藻素类似物中的一种的鉴定和生物学评价，所述类似物含有苯乙烯官能团并且不需要环氧基团来实现低pm效力。本研究中关于crpte对非天然底物的选择性和特异性的宝贵见解将crpte确立为稳健且范围更广的催化剂，其既可以在独立环境中使用，也可以作为更大的酶促级联的一部分用于在更广泛的范围内产生生物活性分子。[0031]更具体地，基于现有技术，探索了crpte对非天然底物的选择性。37在天然链延长中间体与含有末端烯烃的底物之间观察到的环化与水解比表明，芳基环是最佳环化所必需的。然而，尚不清楚具有不同的大小和官能团取代的芳基环是否将被良好地耐受。37选择该位点进行操纵是因为它代表了念珠藻素构-效关系研究(sar)中未充分探索的领域，并且是使用可以增加水溶性以导致更好的体内功效以及潜在降低的毒性的策略性生物电子等排体的绝佳位置。26,28因此，利用crpte产生这些新型念珠藻素将能够生成重要的新类似物，并且还可以对酶在并入非天然起始单元(starterunit)的灵活性方面提供独特的见解。更好地了解这些酶的选择性中所利用的识别因子将进一步扩大我们设计用于在有助于药物发现过程的生物催化平台中使用的具有可调整的底物耐受性的te的能力。[0032]本文公开了化合物，以及这些化合物在癌症治疗中的用途。本公开的一个方面整体涉及本文所述的化合物或药学上可接受的盐、或包含这种化合物或其药学上可接受的盐的药学上可接受的组合物用于治疗患者的癌症的用途，所述癌症诸如结肠癌、乳腺癌、白血病、前列腺癌、卵巢癌、中枢神经系统癌或非小细胞肺癌。[0033]本公开的化合物[0034]本公开提供了式(i)化合物、或其药学上可接受的盐：[0035][0036]其中[0037]ar为具有1至3个选自n、o和s的环杂原子的5至7元杂环芳基，并且任选地被1-3个独立地选自c1-5烷基和l-r6的取代基取代；[0038]r1为氯、溴或碘；[0039]r2为oh或oc(o)ch2nhr；或[0040]r1和r2一起(1)表示它们所连接的碳之间的双键或(2)与它们所连接的碳形成β-环氧化物环；[0041]r3和r4中的每一个独立地为h、c1-6烷基、c0-6亚烷基-oh或c0-6亚烷基-nh(r)；或[0042]r3和r4与它们所连接的碳原子一起形成螺c3-5环烷基或具有一个氮环原子的螺3至5元杂环烷基；[0043]r5为c1-6烷基、c0-6亚烷基-oh或c0-6亚烷基-nh(r)；并且[0044]r为h、c1-6烷基或l-r6；[0045]l为接头；[0046]r6为反应性化学基团；并且[0047]x为o、nh或nme，[0048]前提条件是化合物或盐包含0或1个l-r6。[0049]ar为具有1至3个选自n、o和s的环杂原子的5至7元杂环芳基，并且任选地被1-3个独立地选自c1-5烷基和l-r6的取代基取代。如本文所用，术语“杂环芳基”是指具有5至7个总环原子并且在芳香族环中含有一至三个选自氮、氧和硫原子的杂原子的单环芳香族环。除非另有说明，否则杂环芳基可以是未取代的或被一个或多个，特别是一至三个取代基取代。在一些情况下，杂环芳基被如本文所讨论的c1-5烷基或l-r6部分取代。杂环芳基的示例包括但不限于噻吩基、呋喃基、吡啶基、吡咯基、噁唑基、三嗪基、三唑基、异噻唑基、异噁唑基、咪唑基、吡嗪基、嘧啶基、噻唑基和噻二唑基。在一些情况下，杂环芳基(ar)包括任选地被1-3个选自甲基和异丙基的取代基取代的吡啶基、吡嗪基、咪唑基或噁唑基。在一些情况下，ar被l-r6取代。[0050]如本文所用，术语“烷基”是指含有一至三十个碳原子，例如一至二十个碳原子或一至十个碳原子的直链和支链饱和烃基。术语cn意指烷基具有“n”个碳原子。例如，c4烷基是指具有4个碳原子的烷基。c1-c6烷基是指具有涵盖整个范围(例如，1至6个碳原子)以及所有亚组(例如，1-6、2-5、1-5、3-6、1、2、3、4、5和6个碳原子)的碳原子数的烷基。烷基的非限制性示例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基(2-甲基丙基)、叔丁基(1,1-二甲基乙基)、3,3-二甲基戊基和2-乙基己基。除非另有说明，否则烷基可以是未取代的烷基或取代的烷基。[0051]本文所用的术语“亚烷基”是指具有取代基的烷基。例如，术语“亚烷基-oh”是指被羟基取代的烷基。例如，亚烷基可以是-ch2ch2-或-ch2-。术语cn意指亚烷基具有“n”个碳原子。例如，c1-6亚烷基是指具有涵盖整个范围以及所有亚组的碳原子数的亚烷基。术语c0表示直接键–c0亚烷基-oh表示oh取代基。除非另有说明，否则亚烷基可以是未取代的亚烷基或取代的亚烷基。[0052]如本文所用，术语“环烷基”是指含有三至十二个碳原子(例如，3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个碳原子)的脂肪族环状烃基。术语cn意指环烷基具有“n”个碳原子。例如，c5环烷基是指在环中具有5个碳原子的环烷基。c3-c5环烷基是指具有涵盖整个范围(例如，3至5个碳原子)以及所有亚组(例如，3-4、4-5、2、4和5个碳原子)的碳原子数的环烷基。环烷基的非限制性示例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。除非另有说明，否则环烷基可以是未取代的环烷基或取代的环烷基。本文所述的环烷基可以是分离的、螺环，或与另一个环烷基、杂环烷基、芳基和/或杂芳基稠合。当环烷基与另一个环烷基稠合时，除非另有说明，否则每个环烷基可以含有三至十二个碳原子。除非另有说明，否则环烷基可以是未取代的或取代的。[0053]如本文所使用的，术语“杂环烷基”与环烷基类似地定义，不同之处在于，环含有一个到三个独立地选自氧、氮和硫的杂原子。特别地，术语“杂环烷基”是指含有总共三至十个原子(例如，三至五个，或五至十个)的环，其中那些原子中的1、2、3或三个是独立地选自由氧、氮和硫组成的组的杂原子，并且环中的其余原子是碳原子。在一些情况下，杂环烷基是具有一个氮环原子的螺3至5元环。杂环烷基的非限制性示例包括氮杂环丁烷、氮杂环丙烷、吡咯烷、哌啶、吡唑烷、四氢呋喃、四氢吡喃、二氢呋喃、吗啉等。在一些情况下，杂环烷基包括氮杂环丁烷、氮杂环丙烷或吡咯烷。杂环烷基可以是取代的或未取代的。[0054]如本文所用，术语“取代的”，当用于修饰化学官能团时，是指官能团上的至少一个氢自由基被取代基替代。取代基可以包括但不限于烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、杂环烷基、芳基、杂芳基、羟基、氧基、烷氧基、杂烷氧基、酯、硫酯、羧基、氰基、硝基、氨基、酰氨基、乙酰胺和卤基(例如，氟基、氯基、溴基或碘基)。当化学官能团包括一个以上的取代基时，这些取代基可键合至同一个碳原子或键合至两个或更多个不同的碳原子。[0055]如本文所用，术语“接头”是指连接分子(例如，本文所述的化合物及其盐)的两个部分的部分。接头的非限制性示例包括具有1至10个氨基酸的肽、具有1至15个乙二醇单体的聚乙二醇以及β-葡糖醛酸。在一些情况下，l包括具有1至10个氨基酸的肽。在一些情况下，氨基酸选自由以下各项组成的组：丙氨酸(ala)、瓜氨酸(cit)、谷氨酰胺(gln)、甘氨酸(gly)、赖氨酸(lys)、乙酰赖氨酸(aclys)、脯氨酸(pro)、苯丙氨酸(phe)和缬氨酸(val)。在一些情况下，l包括具有1至15个(例如，5至15个、3至10个、3至15个、5至10个)乙二醇单体的聚乙二醇。在一些情况下，l包括β-葡糖醛酸。在一些情况下，β-葡糖醛酸包含呋喃糖。在一些情况下，β-葡糖醛酸包含吡喃糖。[0056]在一些情况下，l具有结构[0057]在一些情况下，l通过单键(即，直接共价键)、酯键、酰胺键、硫键、二硫键、对氨基苄基(pab)基团或通过对氨基苄氧羰基(pabc)基团与式(i)化合物连接。在一些情况下，l通过单键连接。在一些情况下，l通过酯键连接。在一些情况下，l通过酰胺键连接。在一些情况下，l通过对氨基苄基(pab)基团连接。[0058]如本文所用，术语“反应性化学基团”是指可以与另一互补官能团反应以形成共价键的化学官能团。反应性基团可以是胺，使得在存在互补官能团(例如，羧酸、酰氯等)的情况下，可以形成酰胺官能团。反应性化学基团的一些具体的非限制性示例是马来酰亚胺基、马来酰亚胺己酰基、马来酰亚胺peg基团、溴乙酰胺基团、n-羟基琥珀酰亚胺酯和o-烷基羟胺。在一些情况下，r6包括马来酰亚胺基。在一些情况下，r6包括马来酰亚胺己酰基。在一些情况下，r6包括马来酰亚胺peg基团。在一些情况下，r6包括n-羟基琥珀酰亚胺酯。在一些情况下，r6包括o-烷基羟胺。[0059]在一些情况下，(1)ar为r3为ch3，并且r4为h；(2)ar为r3为ch3，并且r4为h或ch3；(3)ar为r3为ch3，并且r4为h或ch3；(4)ar为r3为ch3，并且r4为h；(5)ar为r3为ch3，并且r4为h；(6)ar为r3为ch3，并且r4为h；(7)ar为r3为ch3，并且r4为h或ch3；(8)ar为r3为ch3，并且r4为h或ch3；(9)ar为r3为ch3，并且r4为h；或(10)ar为r3为ch3，并且r4为h。在一些情况下，ar为r3为ch3，并且r4为h。在一些情况下，ar为r3为ch3，并且r4为h或ch3。在一些情况下，ar为r3为ch3，并且r4为h或ch3。在一些情况下，ar为r3为ch3，并且r4为h。在一些情况下，ar为r3为ch3，并且r4为h。在一些情况下，ar为r3为ch3，并且r4为h。在一些情况下，ar为r3为ch3，并且r4为h或ch3。在一些情况下，ar为r3为ch3，并且r4为h或ch3。在一些情况下，ar为r3为ch3，并且r4为h。在一些情况下，ar为r3为ch3，并且r4为h。[0060]在一些情况下，r1和r2一起表示它们所连接的碳之间的双键。在一些情况下，r1和r2与它们所连接的碳一起形成β-环氧化物环。在一些情况下，r1为cl并且r2为oh。在一些情况下，r1为cl并且r2为oc(o)ch2nh2。[0061]在一些情况下，(1)ar为r3为ch3，r4为h或ch3，并且r5为ch(ch3)2；(2)ar为r3为ch3，r4为h或ch3，并且r5为ch(ch3)2；或(3)ar为r3为ch3，r4为h或ch3，并且r5为ch(ch3)2。在一些情况下，ar为r3为ch3，r4为h或ch3，并且r5为ch(ch3)2。在一些情况下，ar为r3为ch3，r4为h或ch3，并且r5为ch(ch3)2。在一些情况下，ar为r3为ch3，r4为h或ch3，并且r5为ch(ch3)2。[0062]在一些情况下，r3为nh2、nhme、ch2-nh2或ch2-nhme。在一些情况下，r3为nh2。在一些情况下，r3为nhme。在一些情况下，r3为ch2-nh2。在一些情况下，r3为ch2-nhme。在一些情况下，r3为oh或ch2-oh。在一些情况下，r3为oh。在一些情况下，r3为ch2-oh。[0063]在一些情况下，r5为nh2、nhme、(ch)ch3nh2或(ch)ch3nhme。在一些情况下，r5为nh2。在一些情况下，r5为nhme。在一些情况下，r5为(ch)ch3nh2。在一些情况下，r5为(ch)ch3nhme。[0064]在一些情况下，x为o。在一些情况下，x为nh或nme。在一些情况下，x为nh。在一些情况下，x为nme。[0065]在一些情况下，所述化合物选自由以下各项组成的组[0066][0067]在一些情况下，ar为在一些情况下，r2为oc(o)ch2nhl(r6)并且r1为cl。[0068]在一些情况下，r3为nh-lr6，并且r4为h。在一些情况下，(1)ar为r1和r2一起表示双键或β-环氧化物，并且r5为ch(ch3)2；(2)ar为r1和r2一起表示双键或β-环氧化物，并且r5为ch(ch3)2；或(3)ar为r1和r2一起表示双键或β-环氧化物，并且r5为ch(ch3)2、ch(ch3)2。在一些情况下，ar为r1和r2一起表示双键或β-环氧化物，并且r5为ch(ch3)2。在一些情况下，ar为r1和r2一起表示双键或β-环氧化物，并且r5为ch(ch3)2。在一些情况下，ar为r1和r2一起表示双键或β-环氧化物，并且r5为ch(ch3)2、ch(ch3)2。[0069]在一些情况下，r5为nh-lr6。在一些情况下，(1)ar为r1和r2一起表示双键或β-环氧化物，r3为ch3，并且r4为h或ch3；(2)ar为r1和r2一起表示双键或β-环氧化物，r3为ch3，并且r4为h或ch3；或(3)ar为r1和r2一起表示双键或β-环氧化物，r3为ch3，并且r4为h或ch3。在一些情况下，ar为r1和r2一起表示双键或β-环氧化物，r3为ch3，并且r4为h或ch3。在一些情况下，ar为r1和r2一起表示双键或β-环氧化物，r3为ch3，并且r4为h或ch3。在一些情况下，ar为r1和r2一起表示双键或β-环氧化物，r3为ch3，并且r4为h或ch3。[0070]本文所公开的化合物可以呈药学上可接受的盐的形式。如本文所使用的，术语“药学上可接受的盐”是指在合理的医学判断范围内适合用于与人和低等动物的组织接触而没有过度毒性、刺激、过敏反应等，并与合理的利益/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐是本领域熟知的。例如，s.m.berge等人在j.pharmaceuticalsciences,1977,66,1-19中详细描述了药学上可接受的盐，该文献以引用方式并入本文。本发明的化合物的药学上可接受的盐包含衍生自合适的无机和有机酸以及碱的盐。药学上可接受的无毒酸加成盐的示例是与无机酸(如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸)或有机酸(、如乙酸、三氟乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸)或通过使用本领域中使用的其他方法(如离子交换)形成的氨基盐。其他药学上可接受的盐包含己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘化物、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐(lactobionate)、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。含有羧酸或其他酸性官能团的化合物的盐可以通过与合适的碱反应来制备。此类盐包含但不限于碱金属、碱土金属、铝盐、铵、n+(c1-4烷基)4盐以及有机碱(如三甲胺、三乙胺、吗啉、吡啶、哌啶、甲基吡啶、二环己胺、n,n'-二苄基乙二胺、2-羟乙基胺、双-(2-羟乙基)胺、三-(2-羟乙基)胺、普鲁卡因、二苄基哌啶、脱氢松香胺、n,n'-双脱氢松香胺、葡糖胺、n-甲基葡糖胺、可力丁、奎宁、喹啉)和碱性氨基酸(如赖氨酸和精氨酸)的盐。本发明还预想了本文所公开的化合物的任何碱性含氮基团的季铵化。通过这种季铵化可以获得水溶性或油溶性或分散性产物。代表性碱或碱土金属盐包含钠、锂、钾、钙、镁等。另外的药学上可接受的盐包含在适当时使用抗衡离子(如卤化物、氢氧化物、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、低级烷基磺酸盐和芳基磺酸盐)形成的无毒铵、季铵和胺阳离子。[0071]本文还提供了包含本文所述的化合物或盐以及肽、蛋白质或抗体的缀合物。在一些情况下，缀合物包含本文所述的化合物或盐和抗体。在一些情况下，抗体和化合物或盐通过化合物或盐的反应性化学基团和抗体上的互补反应性基团共价连接。在一些情况下，抗体上的互补反应性基团包括胺。在一些情况下，胺是抗体上的赖氨酸的ε-胺。[0072]在一些情况下，抗体是单克隆抗体或纳米抗体。在一些情况下，抗体是单克隆抗体。在一些情况下，抗体是纳米抗体。在一些情况下，单克隆抗体是本妥昔单抗(brentuximab)、西妥昔单抗(cetuximab)、吉妥珠单抗(gemtuzumab)、帕尼单抗(panitumumab)、奥法木单抗(ofatumumab)、利妥昔单抗(rituximab)或曲妥珠单抗(trastuzumab)。在一些情况下，纳米抗体是单结构域抗体或骆驼抗体。[0073]本公开化合物的合成[0074]可以使用商业上可获得的起始材料、文献中已知或来自容易制备的中间体的化合物，通过采用本领域技术人员已知的或鉴于本文教导的标准合成方法和步骤，以各种方式来制备本文所公开化合物。用于有机分子制备以及官能团转化和操控的标准合成方法和程序可以从相关科学文献或从本领域中的标准教科书中获得。尽管不限于任何一个或若干个来源，但是经典文本(如smith,m.b.,march,j.,march'sadvancedorganicchemistry:reactions,mechanisms,andstructure,第5版,johnwiley&sons:newyork,2001；以及greene,t.w.,wuts,p.g.m.,protectivegroupsinorganicsynthesis,第3版,johnwiley&sons:newyork,1999)是本领域技术人员已知的有用和公认的有机合成参考教科书。例如，本文所公开的化合物可以通过固相合成技术来合成，所述固相合成技术包括在以下文献中所描述的那些：merrifield,j.am.chem.soc.1963；85:2149；davis等人,biochem.intl.1985；10:394-414；larsen等人,j.am.chem.soc.1993；115:6247；smith等人,j.peptideproteinres.1994；44:183；o'donnell等人,j.am.chem.soc.1996；118:6070；stewart和young,solidphasepeptidesynthesis,freeman(1969)；finn等人,theproteins,第3版,第2卷,第105-253页(1976)；以及erickson等人,theproteins,第3版,第2卷,第257-527页(1976)。以下对合成方法的描述旨在说明但不限制用于制备本公开的化合物的一般程序。[0075]本文所公开的合成方法可以容许各种各样的官能团；因此可以使用各种被取代的起始材料。所述方法在整个过程结束时或接近结束时基本上提供所期望的最终化合物，但是在一些情况下可能需要进一步使所述化合物转化成其药学上可接受的盐、酯或前体药物。[0076]还提供了产生本文所述的化合物或盐的方法，其包括使开环念珠藻素中间体与念珠藻素硫酯酶在适合于大环化的条件下接触以形成化合物或盐。在一些情况下，其中大环化是大环内酯化。[0077]在一些情况下，念珠藻素硫酯酶衍生自聚酮化合物合酶蛋白质复合物、非核糖体蛋白合成酶蛋白质复合物，或杂化聚酮化合物合酶/非核糖体肽合成酶蛋白质复合物。在一些情况下，念珠藻素硫酯酶衍生自杂化聚酮化合物合酶/非核糖体肽合成酶蛋白质复合物。[0078]在一些情况下，所述方法还包括使开环念珠藻素与念珠藻素p450接触，以在r1、r2与它们所连接的碳之间形成β环氧化物环。在一些情况下，念珠藻素p450是念珠藻素环氧酶。[0079]药物组合物、给药和施用途径[0080]还提供了药物组合物(有时在本文互换地称为调配物)，其包含如本文所述的化合物(例如，式i化合物或所述化合物的药学上可接受的盐)以及药学上可接受的赋形剂。如本文所用，术语“药学上可接受的”是指参考物质(诸如本公开的化合物、或含有所述化合物的组合物或特定的赋形剂)是安全的并且适于施用于患者或受试者。术语“药学上可接受的赋形剂”是指不干扰一种或多种活性成分的生物学活性的效力并且对所施用的宿主无毒的介质。赋形剂可以是除活性药物成分(api)之外的任何药学上可接受的添加剂、载体、稀释剂、佐剂或其它成分。[0081]可以以治疗有效量(例如，足以预防或减轻癌症症状的量)将本文所述的化合物施用于受试者。这些化合物可以单独施用或作为药学上可接受的组合物或调配物的一部分施用。另外，化合物可一次、多次全部给予或在一段时间内大体上均匀地递送。还应注意，化合物的剂量可以随时间变化。[0082]针对特定受试者的特定施用方案将部分地取决于化合物、所施用化合物的量、施用途径以及任何副作用的原因和程度。根据本公开的施用于受试者(例如，哺乳动物，如人)的化合物的量应该足以在合理的时间范围内影响期望的反应。“治疗有效量”是指改善、减轻或消除特定疾病或病状(例如，癌症)的一种或多种症状或预防或延迟特定疾病或病状的一种或多种症状的发作的化合物或治疗活性化合物(例如，本文所述的化合物及其盐)的组合的量。剂量通常取决于施用的途径、时间和频率。因此，临床医生滴定剂量并改变施用途径以获得最佳治疗效果，并且常规的测距技术是本领域普通技术人员已知的。[0083]仅仅借助于说明，方法包括视上文所提及的因素而施用例如约0.1mg/kg高达约100mg/kg的化合物或更多。在其他实施方案中，剂量范围为从1mg/kg至约100mg/kg；或5mg/kg至约100mg/kg；或10mg/kg至约100mg/kg。一些病症需要延长治疗，这可能会或可能不会导致多次施用后施用较低剂量的化合物。如果需要的话，所述化合物的剂量可以在一天中以适当的间隔分别以两个、三个、四个、五个、六个或更多个亚剂量施用，任选地以单位剂型施用。治疗时段将取决于患者的特定病状和疾病类型，并且可持续一天到几个月。[0084]施用生理学上可接受的组合物(诸如包括本文所公开的化合物(例如，式i化合物)的药物组合物)的合适方法是本领域众所周知的。尽管可以使用一种以上的途径来施用化合物，但是特定的途径可以比另一种途径提供更直接和更有效的反应。根据情况，将包含所述化合物的药物组合物施用或滴入体腔中，通过皮肤或粘膜吸收，摄入、吸入和/或引入循环中。举例来说，在某些情形中，期望将包括药剂的药物组合物经口递送，通过静脉内、腹膜内、脑内(实质内)、脑室内、肌肉内、眼内、动脉内、门静脉内、病灶内、髓内、鞘内、心室内、经皮、皮下、腹膜内、鼻内、经肠、局部、舌下、尿道、阴道或直肠方式经过注射递送，通过持续释放系统或通过植入装置递送。如果需要，则化合物经由鞘内施用、脑内(实质内)施用、脑室内施用或动脉内或静脉内施用区域性地施用，从而馈入所关注区域。可替代地，组合物经由植入膜、海绵体或已将所需化合物吸收或囊封于其上的另一适当材料来局部地施用。当使用植入装置时，在一个方面，将装置植入到任何合适组织或器官中，且所需化合物的递送例如经由扩散、定时释放大丸剂或连续施用。[0085]为了促进施用，在各个方面，将化合物调配成包含载体(例如，媒介物、佐剂或稀释剂)的生理学上可接受的组合物。所采用的特定载体受化学-物理考虑因素(诸如溶解性和与化合物的反应性不足)以及施用途径限制。生理学上可接受的载体是本领域熟知的。适用于注射用途的说明性药物形式包含无菌水溶液或分散液以及用于临时制备无菌注射溶液或分散液的无菌粉末(例如，参见美国专利号5,466,468)。可注射的调配物在以下文献中进一步描述：例如pharmaceuticsandpharmacypractice,j.b.lippincottco.,philadelphia.pa.,banker和chalmers编,第238-250页(1982)以及ashphandbookoninjectabledrugs,toissel,第4版,第622-630页(1986))。在一方面，将包含所述化合物的药物组合物与包装材料一起放置在容器内，所述包装材料提供有关此类药物组合物的用途的说明书。通常，此类说明书包括描述试剂浓度的有形表达，以及在某些实施方案中重构药物组合物可能需要的赋形剂成分或稀释剂(例如，水、盐水或pbs)的相对量。[0086]适合于肠胃外注射的组合物可以包含生理上可接受的无菌水性或非水性溶液、分散体、悬浮液或乳液，以及用于重构为无菌注射溶液或分散体的无菌粉末。合适的水性和非水性载体、稀释剂、溶剂或媒介物的示例包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等)、其合适的混合物、植物油(诸如橄榄油)和可注射的有机酯(诸如油酸乙酯)。例如，通过使用包衣(诸如卵磷脂)，通过在分散体的情况下保持所需的粒度，以及通过使用表面活性剂，可以保持适当的流动性。[0087]这些组合物还可以含有诸如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂等佐剂。通过添加各种抗细菌和抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯、氯代丁醇、苯酚、山梨酸等)，可以防止微生物污染。还可能希望包含等渗剂，例如糖、氯化钠等。通过使用延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸铝和明胶)，可以延长可注射药物组合物的吸收。[0088]用于口服施用的固体剂型包含胶囊、片剂、粉末和颗粒剂。在此类固体剂型中，将活性化合物与以下混合：至少一种惰性惯用赋形剂(或载剂)，如柠檬酸钠或磷酸二钙或(a)填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如羧甲纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如甘油；(d)崩解剂，例如琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯木薯淀粉、海藻酸、某些复杂的硅酸盐和碳酸钠；(a)溶液缓凝剂，例如石蜡；(f)吸收促进剂，例如季铵化合物；(g)湿润剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如高岭土和膨润土；以及(i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠或其混合物。在胶囊和片剂的情况下，剂型也可以包含缓冲剂。类似类型的固体组合物也可以用作使用如乳糖或乳糖以及高分子量聚乙二醇等赋形剂的软和硬填充明胶胶囊中的填充剂。[0089]诸如片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂等固体剂型可制备有包衣和壳，诸如肠溶衣和本领域熟知的其他包衣。固体剂型也可含有遮光剂。此外，固体剂型可以是包埋组合物，使得其以延迟的方式在肠道的特定部分释放一种或多种所述活性化合物。可以使用的包埋组合物的示例是聚合物质和蜡。活性化合物也可以是微胶囊形式，任选地含有一种或多种赋形剂。[0090]口服液体剂型包含药学上可接受的乳剂、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了活性化合物之外，液体剂型可以含有本领域常用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，如例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油，具体地为棉籽油、花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨醇的脂肪酸酯，或这些物质的混合物，等等。[0091]除了这种惰性稀释剂之外，所述组合物还可以包含辅助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和加香剂。除了活性化合物之外，悬浮液可以含有悬浮剂，如例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶，或这些物质的混合物等。[0092]用于直肠给药的组合物优选为栓剂，其可通过将本公开的化合物与合适的非刺激性赋形剂或载体(如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡)混合来制备，所述赋形剂或载体在常温下为固体，但在体温下为液体，因此在直肠或阴道腔中熔化并释放活性成分。[0093]可以将本发明方法中使用的组合物调配成胶束或脂质体。这种调配物包括空间稳定胶束或脂质体和空间稳定混合胶束或脂质体。这类调配物可有助于细胞内递送，因为已知脂质体和胶束的脂质双层与细胞的质膜融合且将所截留内含物递送到细胞内隔室中。[0094]在调配后，将以与剂量调配物相容的方式并以治疗上有效的量施用溶液。可以以各种剂型(如可注射溶液、药物释放胶囊等)容易地施用调配物。例如，对于在水溶液中的肠胃外施用，如果需要，所述溶液应当被适当地缓冲，并且液体稀释剂首先用足够的生理盐水或葡萄糖进行等渗。这些特定的水溶液特别适合于静脉内、肌肉内、皮下和腹膜内施用。[0095]给药频率将取决于药剂的药物动力学参数和施用途径。根据施用途径和所需的剂量，本领域技术人员将确定最优药物调配物。参见例如remington’spharmaceuticalsciences,第18版(1990)mackpublishingco.,easton,pa,第1435-1712页，其以引用方式并入本文。此类调配物可能影响所给予的药剂的物理状态、稳定性、活体内释放速率和活体内清除速率。取决于施用途径，可以根据体重、体表面积或器官大小计算合适的剂量。本领域的一般技术人员在无需过度实验的情况下即可常规地进行对确定适当治疗剂量所需的计算的进一步优化，尤其根据本文所公开的剂量信息和分析，以及在动物或人类临床试验中观察到的药物动力学数据。[0096]待使用的精确剂量取决于若干因素，包括宿主(不管是在兽医学或人类医学中)、所治疗的病症(例如疾病或病症)的性质和严重程度、施用模式和所使用的特定活性物质。化合物可以通过任何常规途径，确切地说经肠，并且在一个方面，以片剂或胶囊形式口服进行施用。所施用的化合物可以视情况而定呈游离形式或药学上可接受的盐形式，以用作药物，特别是用于预防性或治疗性地治疗目标疾病。这些措施将减缓疾病病况的进展速率并辅助身体以自然方式逆转进展方向。[0097]应了解，本发明的药物组合物和治疗方法可用于人类医学和兽医学领域。因此，在一个方面，待治疗的受试者为哺乳动物。在另一个方面，哺乳动物是人类。[0098]在禁止对在人体上实践的方法授予专利权的权限中，将组合物“施用”于人类受试者的含义应限于开出一种人类受试者将通过任何技术(例如，口服、吸入、局部施用、注射、插入等)自我施用的受控物质。旨在与定义可获专利的主题的法律或法规相一致的最广泛的合理解释。在不禁止对在人体上实践的方法申请专利的司法管辖区，组合物的“施用”包含在人体上实施的方法和前述活动。[0099]使用方法biophotometer测量光密度(od600)。[0112]除非另有说明，否则所有反应均在干燥氮气的气氛下在火焰干燥的玻璃器皿中进行。在升高的温度下进行的反应通过ikaretcontrolvisc(型号rs232c)控制，反应在室温(rt)下进行，所述室温为约21-23℃，在低于室温的温度下进行的反应在冰浴(0℃)、干冰/丙酮(-78℃)或异丙醇/thermoneslab(型号cc100)中进行，持续延长的时间，和/或在其他温度下进行。除非另有说明，否则可商购获得的起始材料和试剂按原样使用。二氯甲烷作为hplc级从fisher购买并直接使用。四氢呋喃、n,n二甲基甲酰胺和吡啶以无水且不稳定的形式购买(emdmilliporedrisolv)。在用于反应之前，将丙酮在na2so4上干燥。二异丙胺和三甲胺在使用前直接从氢化钙中蒸馏出来。[0113]在varian600nmrsystem(600mhz)或varian400-mr(400mhz)光谱仪上记录1hnmr光谱。已使用溶剂共振作为内标(cdcl37.26和cd3od3.31ppm)以百万分之一(ppm)为单位报告了化学位移。数据报告如下：化学位移、多重性(s＝单峰，d＝双重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，p＝五重峰，h＝六重峰)、耦合常数(hz)和积分。在varian600nmrsystem(150mhz)或varian400-mr(100mhz)光谱仪上记录质子去耦13cnmr光谱。已使用相对于残留溶剂峰(cdcl3，77.0ppm或cd3od49.0)以ppm为单位报告了化学位移。在agilenttechnologies6500或6545q-toflc/ms上获得高分辨率质谱。通过与6230toflc/ms联用的agilent1290infinityiihplc模块(在254nm下监测)评估分析性反应。[0114]分析性薄层色谱在emdmillipore0.25mm硅胶f254板上进行。通过254nm紫外灯和高锰酸钾(kmno4)、钼酸铈铵(cam)或对茴香醛的组合实现可视化。使用emdmilliporesilicagel60(40-63um)或biotageisoleraone-flash纯化系统通过强制空气快速色谱进行纯化。与biotageisoleraone纯化系统一起使用的柱包括biotagesnapultra、siliasep、siliasephp和siliasep胺管柱。[0115]实施例2[0116]化学合成[0117]1.单元a合成[0118]如图3b所示，化合物2由可商购获得的s1经两步合成。所有光谱均与先前的文献报道一致。1,2[0119](r)-4-苄基-3-((2r,3s)-3-羟基-5-((4-甲氧基苄基)氧基)-2乙烯基戊酰基)噁唑烷-2-酮(s3)。[0120]向具有内部温度探针的三颈烧瓶中添加1(7.502g，30.58mmol，1当量)在ch2cl2(305ml，0.1m)中的溶液并冷却至-78℃。将其用三氟甲磺酸二丁基硼(1m，在dcm中，33.64ml，33.64mmol，1.1当量)和et3n(6.02ml，42.8mmol，1.4当量)处理。在-78℃下1小时后，将反应物升温至0℃并搅拌30分钟。将溶液重新冷却至-78℃并用醛2(8.31g，42.81mmol，1.4当量)在ch2cl2(25ml)中的溶液处理并搅拌1小时，升温至0℃。在0℃下1小时后，添加磷酸钠缓冲液(ph7，500mm，30ml)，然后添加甲醇(30ml)。20分钟后，添加30％h2o2(30ml)，保持温度低于10℃并将混合物在0℃下搅拌1小时。减压去除有机物并且用乙酸乙酯(etoac)(3x100ml)萃取剩余的水层。合并的有机物用1nhcl、5％nahco3水溶液、盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩。通过快速色谱(33％etoac/己烷)纯化残余物，得到为透明无色油状物的3(11.98g，89％收率)：rf＝0.2(33％etoac/己烷)；1hnmr(600mhz,cdcl3)δ7.31(ddd,j＝7.4,6.4,1.3hz,2h),7.28–7.25(m,2h),7.24–7.21(m,2h),7.20–7.15(m,2h),6.04(dddd,j＝17.6,10.0,9.0,1.1hz,1h),5.39–5.36(m,1h),5.36–5.34(m,1h),4.68(ddt,j＝11.4,6.3,3.0hz,1h),4.58–4.51(m,1h),4.42(s,2h),4.25–4.19(m,1h),4.18–4.11(m,2h),3.78(d,j＝1.1hz,3h),3.69–3.64(m,1h),3.64–3.56(m,1h),3.28–3.17(m,1h),2.74(dd,j＝13.4,9.5hz,1h),1.93–1.78(m,1h),1.74(dt,j＝14.5,7.0hz,1h),1.55(s,2h)；13cnmr(150mhz,cdcl3)δ173.46,159.19,152.90,135.04,131.67,130.14,129.42,129.30,128.91,127.35,121.00,113.78,72.87,70.54,67.74,65.95,55.25,55.17,52.53,37.58,33.87；hrms(es)c25h29no6[m+na]计算值462.1887,实测值462.1885[0121](r)-4-苄基-3-((2r,3s)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-((4-甲氧基苄基)氧基)-2-乙烯基戊酰基)噁唑烷-2-酮(3)。[0122]向s3(17.56g，39.95mmol，1当量)和2,6-二甲基吡啶(46.28ml，79.91mmol，2当量)在ch2cl2(135ml，0.3m)中的溶液中添加叔丁基甲硅烷基三氟甲烷磺酸酯(11.6ml，59.9mmol，1.5当量)并搅拌。在室温下18小时后，添加h2o(100ml)，搅拌30分钟，分离有机层并用ch2cl2(2x100ml)萃取水层。合并的有机物用1nhcl、饱和nahco3水溶液、盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩。通过快速色谱(20％etoac/己烷)纯化残余物，得到为淡黄色油状物的3(18.08g，84％收率)：rf＝0.6(33％etoac/己烷)；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.33–7.26(m,3h),7.25(d,j＝8.8hz,2h),7.18(d,j＝6.9hz,2h),6.85(d,j＝8.6hz,2h),6.00(ddd,j＝9,9.3,18.2hz,1h),5.27(d,j＝10.2hz,1h),5.26(d,j＝18.1hz,1h),4.58(dd,j＝6.6hz,8.8hz,1h),4.56–4.52(m,1h),4.41(d,j＝11.4hz,1h),4.36(d,j＝11.5hz,1h),4.21(td,j＝5.2hz,6.4hz,1h),4.05(dd,j＝2hz,9.2hz,1h),3.86(t,j＝8.2hz,1h),3.78(s,3h),3.59(td,j＝6.5,9.2hz,1h),3.48(dt,j＝6.2,9.4hz,1h),3.23(dd,j＝3.0,13.4hz,1h),2.70(dd,j＝9.7,13.4hz,1h),1.95–1.85(m,2h),0.86(s,9h),0.02(s,3h),0.01(s,3h)；13cnmr(100mhz,cdcl3)δ172.62,159.24,153.02,135.58,134.24,130.86,129.68,129.49,129.10,127.48,119.70,113.86,72.77,71.29,66.03,65.94,55.66,55.48,53.39,37.73,35.47,26.02,18.22,-4.23,-4.38；hrms(es)c31h43no6si[m+na]计算值576.2752,实测值576.2767。[0123](2s,3s)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-((4-甲氧基苄基)氧基)-2-乙烯基戊-1-醇(4)。[0124]向冷却至0℃的3(17.22g，31.14mmol，1当量)在四氢呋喃(thf)(625ml，0.05m)中的溶液中添加nabh4(5.891g，155.7mmol，5当量)在h2o(240ml)中的溶液。在0℃下10分钟后，将溶液升温至室温，并搅拌5小时。通过添加饱和nh4cl水溶液(200ml)淬灭反应并将混合物在室温下搅拌1小时。减压去除thf并用etoac(3x75ml)萃取水层，合并有机物，用盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩。通过快速色谱(18％etoac/己烷)纯化残余物，得到为无色油状物的4(10.04g，85％收率)；rf＝0.25(20％etoac/己烷)；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.25(d,j＝8.8hz,2h),6.88(d,j＝8.6hz,2h),5.71(ddd,j＝17.3,10.4,8.6hz,1h),5.17(d,j＝10.4hz,1h),5.10(d,j＝17.4hz,1h),4.43(d,j＝11.5hz,1h),4.38(d,j＝11.5hz,1h),4.04–3.94(m,1h),3.80(s,3h),3.75(dt,j＝10.8,6.6hz,1h),3.61(ddd,j＝11.0,7.0,5.0hz,1h),3.46(t,j＝6.3hz,2h),2.43(qd,j＝7.6,2.7hz,1h),2.15(t,j＝5.7hz,1h),1.88–1.68(m,2h),0.88(s,9h),0.09(s,3h),0.06(s,3h)。13cnmr(100mhz,cdcl3)δ159.28,135.60,130.61,129.41,118.67,113.89,72.72,71.06,66.63,63.67,55.43,51.34,34.11,25.98,18.14,-4.41,-4.42；hrms(es)c21h36o4si[m+na]计算值403.2275,实测值403.2271。[0125](5s,6s)-5-(2-((4-甲氧基苄基)氧基)乙基)-2,2,3,3,9,9,10,10-八甲基-6-乙烯基-4,8-二氧杂-3,9-二硅杂十一烷(5)。3,4[0126]向冷却至0℃的4(9.81g，25.8mmol，1当量)在无水吡啶(250ml，0.1m)中的经搅拌溶液中添加对甲苯磺酰氯(7.372g，38.66mmol，1.5当量)。将混合物搅拌30分钟并升温至室温。4小时后，将混合物重新冷却至0℃并缓慢添加0.5nhcl(300ml)。用二乙醚(3x200ml)萃取水层，将有机物合并，用1mhcl、盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩。使用色谱塞(18％etoac/己烷)纯化残余物，得到为无色油状物的5(11.67g，84％收率)：rf＝0.4(20％etoac/己烷)；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.75(d,j＝8.4hz,2h),7.30(d,j＝8.4hz,2h),7.21(d,j＝8.4hz,2h),6.86(d,j＝8.4hz,2h),5.58(ddd,j＝8.7,10.3,17.3hz,1h),5.12(dd,j＝1.2,9.2hz,1h),5.04(d,j＝17.2hz,1h),4.39(d,j＝11.6hz,1h),4.33(d,j＝11.6hz,1h),4.08(dd,j＝6.6,9.4hz,1h),3.94(dd,j＝7.4,9.4hz,1h),3.93–3.89(m,1h),3.79(s,3h),3.35(t,j＝6.4hz,2h),2.46–2.42(m,1h),2.42(s,3h),1.74–1.57(m,2h),0.78(s,9h),-0.01(s,3h),-0.05(s,3h)；13cnmr(100mhz,cdcl3)δ159.30,144.80,133.44,133.15,130.53,129.91,129.39,128.14,119.79,113.92,72.73,70.54,68.83,66.36,55.43,48.61,34.64,25.91,21.77,18.11,-4.25,-4.69；hrms(es)c28h42o6ssi[m+na]计算值557.2364,实测值557.2370。[0127]叔丁基(((3s,4r)-1-((4-甲氧基苄基)氧基)-4-甲基己-5-烯-3-基)氧基)二甲基硅烷(6)。5[0128]经10分钟向冷却至0℃的5(3.72g，6.96mmol，1当量)在无水thf(70ml，0.1m)中的溶液中添加三乙基硼氢化锂(1m，在thf中，17.39ml，17.39mmol，2.5当量)。将反应物在0℃搅拌，升温至室温并再搅拌2小时。将反应物冷却至0℃，通过缓慢添加水(15ml)、3nnaoh(15ml)、30％h2o2(15ml)淬灭，并搅拌30分钟。减压去除有机物并用etoac(3x50ml)萃取水层。合并的有机物用盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩。通过快速色谱(10％etoac/己烷)纯化残余物，得到为透明无色油状物的6(1.87g，74％收率)：rf＝0.5(10％etoac/己烷)；1hnmr(600mhz,cdcl3)δ7.25(d,j＝8.3hz,2h),6.87(d,j＝8.2hz,2h),5.76(ddd,j＝17.4,10.1,7.3hz,1h),4.99(d,j＝9.8hz,1h),4.98(d,j＝18.1hz,1h),4.43(d,j＝11.5hz,1h),4.38(d,j＝11.5hz,1h),3.80(s,3h),3.76(dt,j＝8.0,4.2hz,1h),3.52–3.42(m,2h),2.29(td,j＝7.1,3.9hz,1h),1.74–1.60(m,2h),0.99(d,j＝6.9hz,3h),0.88(s,9h),0.05(s,3h),0.03(s,3h)。13cnmr(100mhz,cdcl3)δ159.23,140.84,130.85,129.39,114.67,113.87,72.68,72.65,67.24,55.43,43.58,33.36,26.05,18.27,14.68,-4.26,-4.39；hrms(es)c21h36o3si[m+h]计算值364.2434,实测值364.2439。[0129](叔丁基(((3s,4r,e)-1-((4-甲氧基苄基)氧基)-4-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)己-5-烯-3-基)氧基)二甲基硅烷(7)。6[0130]在n2下，将hoveydagrubbsii(0.10g，0.16mmol，0.05当量)在无水ch2cl2(15ml，0.2m)中的溶液添加到配备有回流冷凝器的双颈烧瓶中。向其中添加烯烃6(1.15g，3.15mmol，1当量)，然后添加乙烯基硼酸频哪醇酯(1.07ml，6.31mmol，3当量，在使用前立即使其通过sio2塞，使用10％etoac/hex作为洗脱剂去除稳定剂)，并将反应物在回流下加热18小时。将反应物冷却、浓缩并通过快速色谱(5％etoac/己烷)直接纯化，得到为淡黄色油状物的7(1.10g，74％收率)：rf＝0.35(5％etoac/己烷)；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.25(d,j＝8.1hz,2h),6.87(d,j＝8.0hz,2h),6.56(dd,j＝18.1,6.6hz,1h),5.43(d,j＝18.1hz,1h),4.41(d,j＝18.0hz,1h),4.38(d,j＝17.9hz,1h),3.87–3.75(m,1h),3.80(d,j＝0.8hz,3h),3.55–3.38(m,2h),2.40(q,j＝6.2hz,1h),1.66(q,j＝6.7hz,2h),1.26(s,12h),1.00(d,j＝6.9hz,3h),0.87(d,j＝0.8hz,9h),0.03(s,3h),0.02(s,3h)；13cnmr(100mhz,cdcl3)δ159.31,156.21,130.88,129.52,113.96,83.26,72.77,72.45,67.42,55.50,45.53,32.93,26.12,25.06,24.96,18.32,13.32,-4.20,-4.42；hrms(es)c27h47bo5si[m+h]计算值491.3359,实测值491.3350。[0131](3s,4r,e)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-4-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)己-5-烯-1-醇(s4)。[0132]在室温下向7(1.90g，3.87mmol，1当量)在ch2cl2(25ml，0.15m)和水(1.49ml)中的溶液中添加ddq(1.32g，5.81mmol，1.5当量)并将混合物搅拌1小时。将反应物用饱和nahco3淬灭，搅拌10分钟并用水稀释。分离有机层并用ch2cl2(2x50ml)萃取水层，合并有机物，经na2so4干燥，过滤并浓缩。通过快速色谱(12％etoac/己烷)纯化残余物，得到为无色油状物的s4(1.21g，83％收率)：rf＝0.15(10％etoac/己烷)；1hnmr(600mhz,cdcl3)δ6.54(dd,j＝18.1,6.6hz,1h),5.46(dd,j＝18.1,1.5hz,1h),3.87(ddd,j＝7.9,5.0,3.8hz,1h),3.77–3.67(m,2h),2.49(pdd,j＝6.8,5.0,1.5hz,1h),2.03(t,j＝5.4hz,1h),1.71–1.63(m,2h),1.26(d,j＝1.7hz,12h),1.01(d,j＝6.8hz,3h),0.89(s,9h),0.08(s,3h),0.07(s,3h)；13cnmr(150mhz,cdcl3)δ155.72,83.07,74.24,60.63,44.92,34.15,25.84,24.80,24.71,17.98,12.81,-4.41,-4.69；hrms(es)c19h39bo4si[m+h]计算值371.2783,实测值371.2778。[0133](3s,4r,e)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-4-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)己-5-烯醛(8)。[0134]向开口圆底烧瓶中添加在ch2cl2(41ml，0.1m)中的醇s4(1.00g，4.09mmol，1当量)并用nahco3(1.72g，20.45mmol，5当量)和戴斯-马丁高碘烷(desmartinperiodinane)(2.08g，4.91mmol，1.2当量)处理。将反应物在室温搅拌1小时，用10％na2s2o3溶液(50ml)淬灭，并搅拌直到两层澄清。分离有机物并用ch2cl2(2x50ml)萃取水层。合并的有机物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过快速色谱(10％etoac/己烷)纯化残余物，得到为无色油状物的8(0.768g，77％收率)：rf＝0.5(10％etoac/己烷)；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.75(dd,j＝2.1,1.1hz,1h),6.50(dd,j＝18.1,6.6hz,1h),5.46(d,j＝18.0hz,1h),4.22(dt,j＝8.1,4.2hz,1h),2.54–2.42(m,2h),2.41–2.33(m,1h),1.25(s,12h),1.01(dd,j＝6.9,0.9hz,3h),0.85(d,j＝0.8hz,9h),0.05(s,3h),0.02(s,3h)；13cnmr(100mhz,cdcl3)δ202.47,154.68,83.36,70.89,47.17,45.54,29.86,25.92,24.98,24.88,18.16,13.03,-4.33,-4.56；hrms(es)c19h37bo4si[m+h]计算值368.2554,实测值368.2550。[0135]2.单元b合成[0136]s5是由可商购获得的9分三个步骤合成的，如图4所示并如先前所报道的那样。7[0137](r)-3-(3-氯-4-甲氧基苯基)-2-(2-(二乙氧基磷酰基)乙酰氨基)丙酸甲酯(12)。[0138]向开口烧瓶中添加s5(1.10g，3.20mmol，1当量)和4mhcl/二噁烷(20ml)。将混合物剧烈搅拌30分钟并减压浓缩。所得的白色固体10直接使用。2,7-二烯酰氨基)-3-(3-氯-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(14a)。[0146]根据一般suzuki程序进行反应，并使用快速色谱系统(sio2，20-50％etoac/己烷)纯化，得到为淡黄色油状物的14a(0.086g，93％收率)：rf＝0.35(25％etoac/己烷)；1hnmr(400mhz,cd3od)δ7.33(d,j＝7.5hz,2h),7.27(t,j＝7.6hz,2h),7.21(d,j＝2.2hz,1h),7.18(t,j＝7.2hz,1h),7.10(dd,j＝8.4,2.2hz,1h),6.96(d,j＝8.4hz,1h),6.78(dt,j＝15.2,7.5hz,1h),6.38(d,j＝16.0hz,1h),6.19(dd,j＝16.0,8.2hz,1h),5.96(d,j＝15.4hz,1h),4.69(dd,j＝8.9,5.6hz,1h),3.83(s,3h),3.80(q,1h),3.70(s,3h),3.11(dd,j＝14.0,5.6hz,1h),2.90(dd,j＝14.0,9.0hz,1h),2.44(q,j＝6.5hz,1h),2.37(t,j＝6.9hz,2h),1.11(d,j＝6.9hz,3h),0.90(s,9h),0.06(s,3h),0.05(s,3h)；13cnmr(100mhz,cd3od)173.28,168.03,155.41,143.50,139.03,133.10,131.82,131.73,131.33,129.67,129.50,128.04,127.06,126.17,123.18,113.33,76.54,56.53,55.15,52.72,44.11,38.62,37.27,26.44,18.98,16.80,-4.01,-4.32.；hrms(es)c32h44clno5si[m+h]计算值586.2750,实测值586.2754。[0147](r)-2-((2e,5s,6r,7e)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6-甲基-8-(吡啶-2-基)辛-2,7-二烯酰氨基)-3-(3-氯-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(14b)。[0148]根据一般suzuki程序进行反应，并通过快速色谱(si-nh2，20-50％etoac/己烷)纯化，得到为淡黄色油状物的14b(0.078g，45％收率)：rf＝0.15(50％etoac/己烷)；1hnmr(400mhz,cd3od)δ8.44(d,j＝4.0hz,1h),7.76(td,j＝7.8,1.8hz,1h),7.46(d,j＝8.0hz,1h),7.24(dd,j＝7.8,5.2hz,1h),7.21(d,j＝2.1hz,1h),7.10(dd,j＝8.5,2.2hz,1h),6.96(d,j＝8.3hz,1h),6.77(dt,j＝15.3,7.4hz,1h),6.64(dd,j＝16.0,8.2hz,1h),6.49(d,j＝16.0hz,1h),5.98(d,j＝15.4hz,1h),4.70(dd,j＝9.0,5.5hz,1h),3.87–3.84(m,1h),3.83(m,3h),3.70(s,3h),3.11(dd,j＝14.0,5.5hz,1h),2.90(dd,j＝14.0,9.0hz,1h),2.51(h,j＝6.8hz,1h),2.38(t,j＝6.8hz,2h),1.14(d,j＝6.8hz,3h),0.90(s,9h),0.06(s,3h),0.05(s,3h)。13cnmr(100mhz,cd3od)δ173.27,167.95,157.17,155.41,149.74,143.24,139.05,138.66,131.83,131.34,131.12,129.70,126.38,123.38,123.17,122.34,113.34,76.26,56.53,55.15,52.73,44.06,38.62,37.31,26.43,18.97,16.47,-4.04,-4.34。hrms(es)c31h43cln2o5si[m+h]计算值587.2703,实测值587.2705。[0149](r)-2-((2e,5s,6r,7e)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6-甲基-8-(吡啶-3-基)辛-2,7-二烯酰氨基)-3-(3-氯-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(14c)。[0150]根据一般suzuki程序进行反应，并通过快速色谱系统(si-nh2，16-60％etoac/己烷)纯化，得到为淡黄色油状物的14c(0.049g，72％收率)：rf＝0.15(50％etoac/己烷)；1hnmr(600mhz,cd3od)δ8.49(d,j＝2.1hz,1h),8.35(dd,j＝4.9,1.5hz,1h),7.85(d,j＝8.0hz,1h),7.37(dd,j＝8.0,4.8hz,1h),7.21(d,j＝2.1hz,1h),7.10(dd,j＝8.4,2.2hz,1h),6.96(d,j＝8.5hz,1h),6.78(dt,j＝15.2,7.5hz,1h),6.43(d,j＝16.1hz,1h),6.36(dd,j＝16.1,7.9hz,1h),5.97(dt,j＝15.3,1.4hz,1h),4.70(dd,j＝8.9,5.6hz,1h),3.85–3.79(m,1h),3.83(s,3h),3.70(s,3h),3.11(dd,j＝14.0,5.6hz,1h),2.91(dd,j＝14.0,9.0hz,1h),2.49(td,j＝7.2,4.7hz,1h),2.38(ddd,j＝7.4,5.8,1.4hz,2h),1.13(d,j＝6.9hz,3h),0.90(s,9h),0.06(s,3h),0.05(s,3h)；13cnmr(150mhz,cd3od)δ173.27,167.97,155.43,148.28,148.13,143.21,136.88,135.48,134.71,131.82,131.35,129.68,127.66,126.31,125.28,123.20,113.39,76.32,56.56,55.15,52.72,44.24,38.69,37.29,26.42,18.96,16.65,-4.00,-4.34；hrms(es)c31h43cln2o5si[m+h]计算值587.2703,实测值587.2702。[0151](r)-2-((2e,5s,6r,7e)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6-甲基-8-(吡啶-4-基)辛-2,7-二烯酰氨基)-3-(3-氯-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(14d)。[0152]根据一般suzuki程序进行反应，并通过快速色谱系统(si-nh2，15-55％etoac/己烷)纯化，得到为淡黄色油状物的14d(0.062g，71％收率)：rf＝0.25(50％etoac/己烷)；1hnmr(600mhz,cd3od)δδ8.42(d,j＝5.9hz,2h),7.37(d,j＝6.3hz,2h),7.21(d,j＝2.1hz,1h),7.10(dd,j＝8.5,2.1hz,1h),6.97(d,j＝8.4hz,1h),6.78(dt,j＝15.2,7.5hz,1h),6.56(dd,j＝16.0,8.2hz,1h),6.41(d,j＝16.0hz,1h),5.97(d,j＝15.3hz,1h),4.69(dd,j＝9.0,5.5hz,1h),3.86–3.81(m,1h),3.83(s,3h),3.70(s,3h),3.11(dd,j＝14.1,5.6hz,1h),2.91(dd,j＝14.1,9.0hz,1h),2.51(td,j＝13.3,6.5hz,1h),2.38(t,j＝6.9hz,2h),1.13(d,j＝6.8hz,3h),0.90(s,9h),0.06(s,3h),0.06(s,3h)。13cnmr(150mhz,cd3od)13cnmr(150mhz,cd3od)δ173.28,167.96,155.44,150.23,147.68,143.05,139.96,131.83,131.36,129.67,129.19,126.37,123.20,122.32,113.40,76.19,56.56,55.14,52.73,44.24,38.75,37.28,26.41,18.96,16.56,-4.02,-4.36；hrms(es)c31h43cln2o5si[m+h]计算值587.2703,实测值587.2699。[0153](r)-2-((2e,5s,6r,7e)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6-甲基-8-(吡嗪-2-基)辛-2,7-二烯酰氨基)-3-(3-氯-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(14e)。[0154]根据一般suzuki程序进行反应，并通过快速色谱系统(si-nh2，20-55％etoac/己烷)纯化，得到为淡黄色油状物的14e(0.115g，65％收率)：rf＝0.2(50％etoac/己烷)；1hnmr(600mhz,cd3od)δ8.57(d,j＝1.5hz,1h),8.51(s,1h),8.39(d,j＝2.6hz,1h),7.21(d,j＝2.2hz,1h),7.10(dd,j＝8.4,2.2hz,1h),6.96(d,j＝8.5hz,1h),6.90(dd,j＝15.9,8.3hz,1h),6.78(dt,j＝15.2,7.5hz,1h),6.54(d,j＝16.0hz,1h),5.98(d,j＝15.4hz,1h),4.70(dd,j＝8.9,5.5hz,1h),3.86–3.84(m,1h),3.83(s,3h),3.70(s,3h),3.11(dd,j＝14.0,5.6hz,1h),2.91(dd,j＝14.0,9.0hz,1h),2.55(q,j＝6.9hz,1h),2.41–2.33(m,2h),1.15(d,j＝6.8hz,3h),0.89(s,9h),0.06(s,3h),0.05(s,3h)；13cnmr(150mhz,cd3od)δ173.27,167.93,155.42,152.99,145.49,143.89,143.49,143.07,141.77,131.82,131.34,129.69,127.88,126.41,123.19,113.38,76.20,56.56,55.15,52.73,44.13,38.74,37.30,26.42,18.97,16.46,-4.01,-4.36；hrms(es)c30h42cln3o5si[m+h]计算值588.2655,实测值588.2659。[0155](r)-2-((2e,5s,6r,7e)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6-甲基-8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)辛-2,7-二烯酰氨基)-3-(3-氯-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(14f)。[0156]根据一般suzuki程序进行反应，并通过快速色谱系统(si-nh2，20-70％etoac/己烷)纯化，得到为淡黄色油状物的14f(0.044g，63％收率)：rf＝0.1(50％etoac/己烷)；1hnmr(600mhz,cd3od)δ7.34(d,j＝2.0hz,1h),7.20(d,j＝2.2hz,1h),7.10(dd,j＝8.4,2.2hz,1h),6.96(d,j＝8.4hz,1h),6.78(dt,j＝15.2,7.5hz,1h),6.38(d,j＝15.9hz,1h),6.33(d,j＝2.1hz,1h),6.21(dd,j＝15.9,8.3hz,1h),5.97(dt,j＝15.4,1.3hz,1h),4.69(dd,j＝8.9,5.6hz,1h),3.82(s,3h),3.81–3.79(m,1h),3.80(s,3h),3.70(s,3h),3.11(dd,j＝14.0,5.6hz,1h),2.91(dd,j＝14.0,8.9hz,1h),2.48(h,j＝6.9hz,1h),2.38(t,j＝6.5hz,2h),1.12(d,j＝6.9hz,3h),0.89(s,9h),0.06(s,3h),0.05(s,3h)。13cnmr(150mhz,cd3od)δ173.28,167.98,155.44,143.09,142.83,139.14,138.52,131.81,131.36,129.67,126.33,123.21,118.11,113.41,103.42,76.23,56.57,55.17,52.72,44.20,38.79,37.28,36.45,26.42,18.97,16.77,-3.99,-4.36；hrms(es)c30h44cln3o5si[m+h]计算值590.2812,实测值590.2811。[0157](r)-2-((2e,5s,6r,7e)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6-甲基-8-(1-甲基-1h-吡唑-3-基)辛-2,7-二烯酰氨基)-3-(3-氯-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(14g)。[0158]根据一般suzuki程序进行反应，并通过快速色谱(si-nh2，16-55％etoac/己烷)纯化，得到为淡黄色油状物的14g(0.065g，71％收率)：rf＝0.25(50％etoac/己烷)；1hnmr(600mhz,cd3od)δ7.46(d,j＝2.3hz,1h),7.21(d,j＝2.2hz,1h),7.10(dd,j＝8.5,2.2hz,1h),6.96(d,j＝8.4hz,1h),6.75(dt,j＝15.2,7.5hz,1h),6.30(d,j＝2.3hz,1h),6.17(dd,j＝16.2,8.1hz,1h),5.96(d,j＝15.4hz,1h),4.69(dd,j＝9.0,5.6hz,1h),3.84(s,3h),3.83(s,3h),3.78(q,j＝5.6hz,1h),3.70(s,3h),3.11(dd,j＝14.1,5.6hz,1h),2.91(dd,j＝14.0,9.0hz,1h),2.42(p,j＝6.7hz,1h),2.38–2.30(m,2h),1.09(d,j＝6.8hz,3h),0.90(s,9h),0.06(s,3h),0.04(s,3h)；13cnmr(150mhz,cd3od)δ173.29,167.99,155.43,152.12,143.43,134.95,133.03,131.82,131.37,129.71,126.28,123.29,123.22,113.38,103.22,76.44,56.55,55.16,52.71,43.95,38.60,38.52,37.33,26.44,18.98,16.48,-4.04,-4.32；hrms(es)c30h44cln3o5si[m+h]计算值590.2812,实测值590.2809。[0159](r)-2-((2e,5s,6r,7e)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6-甲基-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)辛-2,7-二烯酰氨基)-3-(3-氯-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(14h)。[0160]根据一般suzuki程序进行反应，并通过快速色谱系统(si-nh2，16-60％etoac/己烷)纯化，得到为淡黄色油状物的14h(0.085g，92％收率)：rf＝0.2(50％etoac/己烷)；1hnmr(400mhz,cd3od)δ7.53(s,1h),7.47(s,1h),7.21(d,j＝2.2hz,1h),7.10(dd,j＝8.4,2.2hz,1h),6.96(d,j＝8.4hz,1h),6.77(dt,j＝15.2,7.5hz,1h),6.18(d,j＝16.0hz,1h),5.95(d,j＝15.4hz,1h),5.89(dd,j＝16.1,8.2hz,1h),4.69(dd,j＝8.9,5.6hz,1h),3.84(s,3h),3.83(s,3h),3.75(q,j＝5.5hz,1h),3.70(s,3h),3.11(dd,j＝14.0,5.6hz,1h),2.90(dd,j＝14.0,9.0hz,1h),2.41–2.27(m,3h),1.06(d,j＝6.8hz,3h),0.89(s,9h),0.05(s,3h),0.03(s,3h)。13cnmr(150mhz,cd3od)δ173.29,168.03,155.42,143.67,137.61,131.83,131.58,131.35,129.68,129.33,126.10,123.18,122.45,121.24,113.36,76.60,56.55,55.15,52.72,44.16,38.72,38.32,37.28,26.44,18.98,16.45,-4.05,-4.31；hrms(es)c30h44cln3o5si[m+h]计算值590.2812,实测值590.2813。[0161](r)-2-((2e,5s,6r,7e)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-8-(1-异丙基-1h-吡唑-4-基)-6-甲基辛-2,7-二烯酰氨基)-3-(3-氯-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(14i)。[0162]根据一般suzuki程序进行反应，并通过快速色谱(胺柱，20-50％etoac/己烷)纯化，得到为淡黄色油状物的14i(0.056g，83％收率)：rf＝0.35(50％etoac/己烷)；1hnmr(600mhz,cd3od)δ1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.61(s,1h),7.48(s,1h),7.21(d,j＝2.2hz,1h),7.10(dd,j＝8.4,2.2hz,1h),6.96(d,j＝8.4hz,1h),6.77(dt,j＝15.2,7.5hz,1h),6.20(d,j＝16.1hz,1h),5.95(d,j＝15.3hz,1h),5.90(dd,j＝16.1,8.1hz,1h),4.69(dd,j＝8.9,5.6hz,1h),4.46(hept,j＝7.0hz,1h),3.83(s,3h),3.75(q,j＝5.4hz,1h),3.70(s,3h),3.11(dd,j＝14.0,5.6hz,1h),2.91(dd,j＝14.0,8.9hz,1h),2.46–2.29(m,3h),1.46(d,j＝6.7hz,6h),1.07(d,j＝6.9hz,3h),0.90(s,9h),0.06(s,3h),0.03(s,3h)。13cnmr(150mhz,cd3od)δ13cnmr(101mhz,cd3od)δ173.29,168.04,155.42,143.72,137.18,131.83,131.35,129.68,126.09,123.19,121.88,121.43,113.36,76.65,56.55,55.16,54.99,52.72,44.16,38.27,37.28,26.44,23.07,18.99,16.38,-4.04,-4.32；hrms(es)c32h48cln3o5si[m+h]计算值618.3125,实测值618.3129。[0163](r)-2-((2e,5s,6r,7e)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-8-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)-6-甲基辛-2,7-二烯酰氨基)-3-(3-氯-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(14j)。[0164]根据一般suzuki程序进行反应，并通过快速色谱(胺柱，10-50％etoac/己烷)纯化，得到为淡黄色油状物的14j(0.057g，85％收率)：rf＝0.35(33％etoac/己烷)；1hnmr:(400mhz,cd3od)δ7.20(d,j＝2.2hz,1h),7.10(dd,j＝8.3,2.2hz,1h),6.96(d,j＝8.4hz,1h),6.76(dt,j＝15.2,7.6hz,1h),6.11(d,j＝16.3hz,1h),5.96(d,j＝15.4hz,1h),5.90(dd,j＝16.4,8.5hz,1h),4.68(dd,j＝9.0,5.5hz,1h),3.84(s,3h),3.83–3.77(m,1h),3.70(s,3h),3.12(dd,j＝14.0,5.5hz,1h),2.90(dd,j＝14.0,9.0hz,1h),2.46–2.33(m,3h),2.38(s,3h)2.26(s,3h),1.11(d,j＝6.9hz,3h),0.90(s,9h),0.07(s,3h),0.06(s,3h)。13cnmr:(100mhz,cd3od)δ173.27,167.98,166.46,159.59,155.42,143.21,135.80,131.81,131.33,129.67,126.21,123.17,119.01,114.23,113.36,76.35,56.54,55.17,52.73,44.65,39.15,37.26,26.42,18.97,17.68,11.50,11.40,-3.95,-4.38；hrms(es)c31h45cln2o6si[m+h]计算值605.2808,实测值605.2801。[0165]5.单元c/d表征[0166][0167]19和20由可商购获得的15合成，如图6b所示。所有光谱均与已公开的文献一致。8-11[0168](s)-1-((2-乙酰氨基乙基)硫代)-4-甲基-1-氧代戊-2-基(r)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-2-甲基丙酸酯(21)。[0169]向19在dmf(0.1m)中的溶液中添加edchcl(1.5当量)和hobt(1.2当量)，并将反应物搅拌30分钟。添加nac并搅拌10分钟，然后添加催化性dmap(0.05当量)。将反应物搅拌12小时，用水和etoac稀释，萃取水层(2x40ml)，将有机物合并，用饱和nh4cl(2x100ml)洗涤，并用硫酸钠干燥。减压去除有机物并用快速色谱系统(1-10％甲醇/dcm)纯化剩余的残余物，得到为白色固体的21。光谱与已公开的文献一致。12[0170](s)-1-((2-乙酰氨基乙基)硫代)-4-甲基-1-氧代戊-2-基3-((叔丁氧羰基)氨基)-2,2-二甲基丙酸酯(22)。[0171]向20在dmf(0.1m)中的溶液中添加edchcl(1.5当量)和hobt(1.2当量)并将反应物搅拌30分钟。添加nac并搅拌10分钟，然后添加催化性dmap(0.05当量)。将反应物搅拌12小时，用水和etoac稀释，萃取水层(2x40ml)，将有机物合并，用饱和nh4cl(2x100ml)洗涤，并用硫酸钠干燥。减压去除有机物并用本文公开的快速色谱系统(1-10％甲醇/dcm)纯化剩余的残余物，得到为白色固体的22。光谱与已公开的文献一致。12[0172]6.开环念珠藻素合成和类似物表征[0173]一般肽偶联程序。[0174]将14a-m(1当量)悬浮于1,2二氯乙烷(0.2m)中，用三甲基氢氧化锡(4当量)处理，并加热至80℃持续4小时。将反应物冷却，用dcm稀释并用1nhcl(2x)洗涤。粗酸直接使用。[0175]同时将21或22(1.1当量)悬浮在4mhcl/二噁烷(5ml)中并在室温下搅拌1小时，浓缩并直接使用。[0176]将14a-m酸悬浮在dcm中，冷却至0℃，并用hatu(1.1当量)处理。将21或22胺盐悬浮在dcm中并用dipea(2.5当量)处理，冷却至0℃，并添加到混合物中。将反应物搅拌过夜，升温至室温。用半饱和的碳酸氢钠稀释混合物，用dcm(3x10ml)萃取水层，将有机物合并，用盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤，浓缩，并如本文所指出的那样进行纯化。当用于分析性分析时，在去保护之前使用20-80％水/乙腈梯度，以3ml/min的流速在hydrorpc18(250x10.0mm，4微米)上进行进一步hplc纯化，以去除偶联程序期间产生的任何非对映异构体。在用本文公开的快速色谱系统纯化后，直接使用中间体进行半制备反应。[0177]一般去保护程序。[0178]将粗偶联产物悬浮于开口聚丙烯小瓶中的乙腈(0.1m)中。将其用33％hf(2当量)水溶液处理并搅拌直到反应完成，如通过tlc所监测的。将反应物用dcm稀释，并通过缓慢添加饱和nahco3淬灭，直到水层呈碱性。然后将水层用dcm(3x10ml)萃取，将有机物合并，用盐水洗涤，经na2so4干燥、过滤、浓缩，并如本文所指出的那样进行纯化。如通过nmr所见，报告了非对映异构体比率(dr)。[0179](s)-1-((2-乙酰氨基乙基)硫代)-4-甲基-1-氧代戊-2-基(r)-3-((r)-3-(3-氯-4-甲氧基苯基)-2-((2e,5s,6r,7e)-5-羟基-6-甲基-8-苯基辛-2,7-二烯酰氨基)丙酰氨基)-2-甲基丙酸酯(23a)。[0180]按照一般偶联程序进行反应并用快速色谱系统(1-10％甲醇/dcm)纯化，rf＝0.5(5％甲醇/dcm)。然后按照一般去保护程序将其去保护并通过快速色谱系统(2-14％甲醇/dcm)纯化，得到为透明无色油状物的23a(0.051g，3步收率42％，10:1dr)：rf＝0.35(10％甲醇/dcm)。1hnmr:(600mhz,cd3od)δ7.37(d,j＝7.0hz,2h),7.27(t,j＝7.9hz,2h),7.25(d,j＝2.2hz,1h),7.18(t,j＝7.3hz,1h),7.14(dd,j＝8.4,2.2hz,1h),6.97(d,j＝8.4hz,1h),6.81(dt,j＝15.1,7.3hz,1h),6.41(d,j＝15.9hz,1h),6.23(dd,j＝15.9,8.5hz,1h),6.01(d,j＝15.4hz,1h),5.21(dd,j＝9.6,4.0hz,1h),4.58(dd,j＝8.1,7.0hz,1h),3.83(s,3h),3.65(dt,j＝8.7,4.6hz,1h),3.48(dd,j＝13.5,6.6hz,1h),3.34–3.27(m,2h),3.19(dd,j＝13.5,7.0hz,1h),3.06–2.97(m,3h),2.85(dd,j＝13.7,8.1hz,1h),2.70(h,j＝7.0hz,1h),2.44–2.35(m,2h),2.35–2.28(m,1h),1.91(s,3h),1.80–1.74(m,1h),1.74–1.69(m,1h),1.66–1.59(m,1h),1.15(d,j＝6.9hz,3h),1.10(d,j＝7.1hz,3h),0.94(d,j＝6.5hz,3h),0.91(d,j＝6.5hz,3h)。13cnmr:(150mhz,cd3od)200.34,175.06,173.49,173.42,168.07,155.40,143.51,139.05,132.50,132.09,131.91,131.50,129.84,129.48,128.05,127.14,126.08,123.20,113.35,78.63,75.34,56.57,56.24,44.21,42.73,41.95,40.57,39.85,38.82,38.07,28.58,25.74,23.48,22.54,21.97,17.53,14.87；hrms(es)c39h52cln3o8s[m+h]计算值758.3236,实测值758.3238。[0181](s)-1-((2-乙酰氨基乙基)硫代)-4-甲基-1-氧代戊-2-基(r)-3-((r)-3-(3-氯-4-甲氧基苯基)-2-((2e,5s,6r,7e)-5-羟基-6-甲基-8-(吡啶-2-基)辛-2,7-二烯酰氨基)丙酰氨基)-2-甲基丙酸酯(23b)。[0182]按照一般偶联程序进行反应并通过快速色谱系统(1-10％甲醇/dcm)纯化，rf＝0.65(10％甲醇/dcm)。然后按照一般去保护程序对其进行去保护并通过快速色谱系统(2-15％甲醇/dcm)纯化，得到为透明无色油状物的23b(0.025g，3步收率38％，7:1dr)：rf＝0.25(10％甲醇/dcm)；1hnmr:(600mhz,cd3od)δ8.44(d,j＝4.1hz,1h),7.76(td,j＝7.7,1.9hz,1h),7.51(d,j＝8.1hz,1h),7.26(d,j＝2.3hz,1h),7.25–7.22(m,1h),7.14(dd,j＝8.4,2.2hz,1h),6.97(d,j＝8.4hz,1h),6.81(dt,j＝15.0,7.3hz,1h),6.67(dd,j＝16.0,8.4hz,1h),6.52(d,j＝16.0hz,1h),6.02(d,j＝15.4hz,1h),5.21(dd,j＝9.5,4.0hz,1h),4.58(dd,j＝8.1,6.9hz,1h),3.84(s,3h),3.68(dt,j＝8.7,4.7hz,1h),3.48(dd,j＝13.5,6.6hz,1h),3.33–3.30(s,2h),3.21(dd,j＝13.5,7.0hz,1h),3.05–2.99(m,3h),2.85(dd,j＝13.8,8.1hz,1h),2.71(h,j＝7.0hz,1h),2.51–2.44(m,1h),2.44–2.37(m,1h),2.37–2.29(m,1h),1.91(s,3h),1.81–1.69(m,2h),1.67–1.59(m,1h),1.18(d,j＝6.9hz,3h),1.11(d,j＝7.2hz,3h),0.95(d,j＝6.5hz,3h),0.92(d,j＝6.5hz,3h)。13cnmr(150mhz,cd3od)δ200.34,175.09,173.49,173.42,168.05,157.30,155.43,149.71,143.29,138.74,138.61,131.92,131.56,131.35,129.85,126.27,123.36,122.32,113.42,111.43,78.67,75.12,56.61,56.25,44.08,42.75,41.97,40.60,39.87,38.75,38.09,28.61,25.76,23.46,22.54,21.99,17.10,14.86；hrms(es)c38h51cln4o8s[m+h]计算值759.3189,实测值759.3184。[0183](s)-1-((2-乙酰氨基乙基)硫代)-4-甲基-1-氧代戊-2-基(r)-3-((r)-3-(3-氯-4-甲氧基苯基)-2-((2e,5s,6r,7e)-5-羟基-6-甲基-8-(吡啶-3-基)辛-2,7-二烯酰氨基)丙酰氨基)-2-甲基丙酸酯(23c)。[0184]按照一般偶联程序进行反应并通过快速色谱系统(1-10％甲醇/dcm)纯化，rf＝0.65(10％甲醇/dcm)。然后按照一般去保护程序对其进行去保护并通过快速色谱系统(2-15％甲醇/dcm，7:1)纯化，得到为透明无色油状物的最终产物23c(0.037g，3步收率51％，7:1dr)：rf＝0.25(10％甲醇/dcm)；1hnmr(600mhz,cd3od)δ8.52(d,j＝2.2hz,1h),8.36(dd,j＝4.9,1.6hz,1h),7.89(dt,j＝8.1,1.9hz,1h),7.37(ddd,j＝8.0,4.9,0.9hz,1h),7.26(d,j＝2.2hz,1h),7.14(dd,j＝8.4,2.3hz,1h),6.97(d,j＝8.5hz,1h),6.81(dt,j＝15.2,7.3hz,1h),6.46(d,j＝16.1hz,1h),6.41(dd,j＝16.0,7.9hz,1h),6.02(d,j＝15.4hz,1h),5.21(dd,j＝9.5,4.0hz,1h),4.59(dd,j＝8.0,6.8hz,1h),3.84(s,3h),3.67(dt,j＝8.0,4.6hz,1h),3.48(dd,j＝13.5,6.6hz,1h),3.33–3.30(m,2h)3.20(dd,j＝13.5,6.9hz,1h),3.04–3.00(m,3h)2.85(dd,j＝13.7,8.1hz,1h)2.70(h,j＝7.0hz,1h),2.51–2.36(m,2h),2.36–2.28(m,1h),1.91(s,3h),1.83–1.68(m,2h),1.65–1.61(m,1h),1.17(d,j＝6.9hz,3h),1.10(d,j＝7.1hz,3h),0.95(d,j＝6.5hz,3h),0.92(d,j＝6.5hz,3h)；13cnmr(150mhz,cd3od)δ200.34,175.08,173.48,173.42,168.04,155.42,148.27,148.22,143.30,136.34,135.52,134.79,131.91,131.53,129.85,127.95,126.19,125.24,123.23,113.41,78.66,75.16,56.60,56.24,44.33,42.75,41.97,40.59,39.86,38.87,38.08,28.60,25.76,23.47,22.54,21.99,17.34,14.86；hrms(es)c38h51cln4o8s[m+h]计算值759.3189,实测值759.3192。[0185](s)-1-((2-乙酰氨基乙基)硫代)-4-甲基-1-氧代戊-2-基(r)-3-((r)-3-(3-氯-4-甲氧基苯基)-2-((2e,5s,6r,7e)-5-羟基-6-甲基-8-(吡啶-4-基)辛-2,7-二烯酰氨基)丙酰氨基)-2-甲基丙酸酯(23e)。[0186]按照一般偶联程序进行反应并通过快速色谱系统(1-10％甲醇/dcm)纯化，rf＝0.65(10％甲醇/dcm)。然后按照一般去保护程序对其进行去保护并通过快速色谱系统(2-15％甲醇/dcm)纯化，得到为透明无色油状物的最终产物23e(0.048g，3步收率49％，11:1dr)：rf＝0.25(10％甲醇/dcm)；1hnmr(600mhz,cd3od)δ8.42(d,j＝6.3hz,1h),7.40(d,j＝6.3hz,1h),7.25(d,j＝2.2hz,1h),7.14(dd,j＝8.5,2.2hz,1h),6.97(d,j＝8.4hz,1h),6.80(dt,j＝15.0,7.3hz,1h),6.61(dd,j＝16.0,8.5hz,1h),6.44(d,j＝15.9hz,1h),6.01(d,j＝15.4hz,1h),5.21(dd,j＝9.5,4.0hz,1h),4.58(dd,j＝8.1,6.9hz,1h),3.84(s,3h),3.67(dt,j＝7.9,4.7hz,1h),3.48(dd,j＝13.5,6.6hz,1h),3.33–3.30(m,2h)3.20(dd,j＝13.5,7.0hz,1h),3.04–3.00(m,3h),2.85(dd,j＝13.8,8.1hz,1h),2.70(h,j＝6.9hz,1h),2.51–2.42(m,1h),2.42–2.25(m,2h),1.91(s,3h),1.82–1.68(m,2h),1.63(ddd,j＝13.1,8.1,4.0hz,1h),1.17(d,j＝6.8hz,3h),1.10(d,j＝7.1hz,3h),0.94(d,j＝6.5hz,3h),0.92(d,j＝6.5hz,3h)。13cnmr(150mhz,cd3od)δ200.34,175.08,173.48,173.42,168.02,155.43,150.20,147.73,143.18,139.50,131.92,131.53,129.84,129.42,126.25,123.24,122.39,113.42,78.67,75.03,56.61,56.23,44.30,42.75,41.97,40.60,39.87,38.90,38.09,28.61,25.76,23.46,22.54,21.99,17.19,14.86.；hrms(es)c38h51cln4o8s[m+h]计算值759.3189,实测值759.3187。[0187](s)-1-((2-乙酰氨基乙基)硫代)-4-甲基-1-氧代戊-2-基(r)-3-((r)-3-(3-氯-4-甲氧基苯基)-2-((2e,5s,6r,7e)-5-羟基-6-甲基-8-(吡嗪-2-基)辛-2,7-二烯酰氨基)丙酰氨基)-2-甲基丙酸酯(23g)。[0188]按照一般偶联程序进行反应并通过快速色谱系统(1-10％甲醇/dcm)纯化，rf＝0.65(10％甲醇/dcm)。然后按照一般去保护程序对其进行去保护并通过快速色谱系统(2-15％甲醇/dcm)纯化，得到为透明无色油状物的最终产物23g(0.021g，3步收率25％，9:1dr)：rf＝0.25(10％甲醇/dcm)；1hnmr(400mhz,cd3od)δ8.62(s,1h),8.51(s,1h),8.39(d,j＝2.6hz,1h),7.26(d,j＝2.0hz,1h),7.14(dd,j＝8.5,2.1hz,1h),6.97(d,j＝8.4hz,1h),6.93(dd,j＝15.9,8.5hz,1h),6.81(dt,j＝14.9,7.3hz,1h),6.57(d,j＝16.0hz,1h),6.02(d,j＝15.4hz,1h),5.21(dd,j＝9.4,3.9hz,1h),4.58(t,j＝7.5hz,1h),3.69(dt,j＝9.0,4.7hz,1h),3.48(dd,j＝13.4,6.6hz,1h),3.37–3.24(m,2h),3.20(dd,j＝13.5,7.1hz,1h),3.07–2.97(m,1h),3.03(t,j＝6.8hz,2h),2.85(dd,j＝13.7,8.2hz,1h),2.70(h,j＝6.9hz,1h),2.56–2.42(m,1h),2.41–2.25(m,2h)1.91(s,3h),1.82–1.68(m,2h),1.62(ddd,j＝13.1,8.1,3.9hz,1h),1.19(d,j＝6.8hz,3h),1.10(d,j＝7.0hz,3h),0.95(d,j＝6.3hz,3h),0.92(d,j＝6.3hz,3h)。13cnmr(151mhz,cd3od)δ200.34,175.08,173.47,173.42,168.03,155.42,153.09,145.39,143.89,143.46,143.20,141.38,131.91,131.54,129.86,128.22,126.28,123.24,113.42,78.67,75.01,56.62,56.24,44.21,42.75,41.97,40.60,39.86,38.80,38.09,28.61,25.76,23.46,22.54,21.99,16.99,14.86。hrms(es)c37h50cln5o8s[m+h]计算值760.3141,实测值760.3143。[0189](s)-1-((2-乙酰氨基乙基)硫代)-4-甲基-1-氧代戊-2-基(r)-3-((r)-3-(3-氯-4-甲氧基苯基)-2-((2e,5s,6r,7e)-5-羟基-6-甲基-8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)辛-2,7-二烯酰氨基)丙酰氨基)-2-甲基丙酸酯(23h)。[0190]按照一般偶联程序进行反应并通过快速色谱系统(1-10％甲醇/dcm)纯化，rf＝0.65(10％甲醇/dcm)。然后按照一般去保护程序对其进行去保护并通过快速色谱系统(2-15％甲醇/dcm)纯化，得到为透明无色油状物的最终产物23h(0.022，3步收率29％，9:1dr)：rf＝0.25(10％甲醇/dcm)；1hnmr(600mhz,cd3od)δ7.34(d,j＝2.2hz,1h),7.25(d,j＝2.2hz,1h),7.14(dd,j＝8.4,2.2hz,1h),6.97(d,j＝8.5hz,1h),6.81(dt,j＝15.0,7.3hz,1h),6.42(d,j＝15.9hz,1h),6.38(d,j＝2.1hz,1h),6.25(dd,j＝15.9,8.6hz,1h),6.01(dd,j＝15.4,1.5hz,1h),5.21(dd,j＝9.5,3.9hz,1h),4.58(dd,j＝8.1,7.0hz,1h),3.84(s,3h),3.82(s,3h),3.65(dt,j＝8.0,4.6hz,1h),3.48(dd,j＝13.5,6.6hz,1h),3.33–3.30(m,2h)3.20(dd,j＝13.5,7.0hz,1h),3.03(td,j＝6.6,1.8hz,2h),3.03–3.00(m,1h)2.85(dd,j＝13.8,8.1hz,1h),2.70(h,j＝6.9hz,1h),2.50–2.36(m,2h),2.36–2.28(m,1h),1.91(s,3h),1.82–1.68(m,2h),1.63(ddd,j＝13.2,8.1,3.9hz,1h),1.15(d,j＝6.9hz,3h),1.10(d,j＝7.1hz,3h),0.95(d,j＝6.4hz,3h),0.92(d,j＝6.5hz,3h)。13cnmr:(150mhz,cd3od)δ200.34,175.07,173.47,173.41,168.03,155.41,143.25,142.84,139.10,137.95,131.90,131.51,129.84,126.20,123.21,118.41,113.40,103.56,78.66,75.00,56.60,56.24,44.34,42.74,41.96,40.59,39.86,38.86,38.09,28.60,25.75,23.47,22.54,21.99,17.31,14.87；hrms(es)c37h52cln5o8s[m+h]计算值762.3298,实测值762.3295。[0191](s)-1-((2-乙酰氨基乙基)硫代)-4-甲基-1-氧代戊-2-基(r)-3-((r)-3-(3-氯-4-甲氧基苯基)-2-((2e,5s,6r,7e)-5-羟基-6-甲基-8-(1-甲基-1h-吡唑-3-基)辛-2,7-二烯酰氨基)丙酰氨基)-2-甲基丙酸酯(23i)。[0192]按照一般偶联程序进行反应并通过快速色谱(1-10％甲醇/dcm)纯化，rf＝0.65(10％甲醇/dcm)。然后按照一般去保护程序对其进行去保护并通过快速色谱(2-15％甲醇/dcm)纯化，得到为透明无色油状物的最终产物23i(0.019g，3步收率34％，11:1dr)：rf＝0.25(10％甲醇/dcm)；1hnmr(600mhz,cd3od)δ7.46(d,j＝2.3hz,1h),7.26(d,j＝2.1hz,1h),7.14(dd,j＝8.5,2.2hz,1h),6.97(d,j＝8.4hz,1h),6.79(dt,j＝15.1,7.3hz,1h),6.34(d,j＝2.4hz,1h),6.32(d,j＝16.6hz,1h),6.21(dd,j＝16.1,8.4hz,1h),6.01(d,j＝15.4hz,1h),5.21(dd,j＝9.5,4.0hz,1h),4.58(dd,j＝8.1,7.0hz,1h),3.84(s,6h),3.63(dt,j＝8.7,4.6hz,1h),3.48(dd,j＝13.5,6.6hz,1h),3.33–3.29(m,2h),3.20(dd,j＝13.5,7.0hz,1h),3.05–2.99(m,3h),2.85(dd,j＝13.7,8.1hz,1h),2.70(h,j＝7.0hz,1h),2.41–2.33(m,2h),2.30(dt,j＝15.4,7.8hz,1h),1.91(s,3h),1.82–1.68(m,2h),1.63(ddd,j＝13.2,8.1,3.9hz,1h),1.13(d,j＝6.9hz,3h),1.10(d,j＝7.2hz,3h),0.95(d,j＝6.5hz,3h),0.92(d,j＝6.4hz,3h)。13cnmr:(150mhz,cd3od)δ200.35,175.08,173.50,173.43,168.07,155.42,152.17,143.44,134.45,133.02,131.91,131.54,129.87,126.17,123.62,123.23,113.39,103.27,78.65,75.19,56.59,56.27,44.02,42.75,41.97,40.59,39.86,38.72,38.60,38.09,28.59,25.76,23.47,22.54,21.98,17.24,14.86。hrms(es)c37h52cln5o8s[m+h]计算值762.3298,实测值762.3295。[0193](s)-1-((2-乙酰氨基乙基)硫代)-4-甲基-1-氧代戊-2-基(r)-3-((r)-3-(3-氯-4-甲氧基苯基)-2-((2e,5s,6r,7e)-5-羟基-6-甲基-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)辛-2,7-二烯酰氨基)丙酰氨基)-2-甲基丙酸酯(23j)。[0194]按照一般偶联程序进行反应并通过快速色谱系统(1-10％甲醇/dcm)纯化，rf＝0.65(10％甲醇/dcm)。然后按照一般去保护程序对其进行去保护并通过快速色谱系统(2-15％甲醇/dcm)纯化，得到为透明无色油状物的最终产物23j(0.065g，3步收率48％，11:1dr)：rf＝0.25(10％甲醇/dcm)；1hnmr(600mhz,cd3od)δ7.54(s,1h),7.50(s,1h),7.25(d,j＝2.1hz,1h),7.13(dd,j＝8.2,2.1hz,1h),6.97(d,j＝8.3hz,1h),6.80(dt,j＝15.0,7.3hz,1h),6.22(d,j＝16.0hz,1h),6.00(d,j＝16.1,1h),5.94(dd,j＝16.0,8.4hz,1h),5.21(dd,j＝9.5,4.0hz,1h),4.58(t,j＝7.5hz,1h),3.84(s,3h),3.84(s,3h),3.60(dt,j＝8.5,4.5hz,1h),3.48(dd,j＝13.5,6.6hz,1h),3.33–3.30(m,2h),3.20(dd,j＝13.5,6.9hz,1h),3.03(t,j＝5.8hz,2h),3.03–3.00(m,1h),2.85(dd,j＝13.7,8.2hz,1h),2.70(h,j＝7.0hz,1h),2.40–2.23(m,3h),1.91(s,3h),1.81–1.68(m,2h),1.63(td,j＝9.2,8.6,4.4hz,1h),1.10(d,j＝7.0hz,6h),0.95(d,j＝6.3hz,3h),0.92(d,j＝6.3hz,3h)。13cnmr(150mhz,cd3od)δ200.35,175.08,173.49,173.42,168.10,155.43,143.57,137.72,131.92,131.54,130.89,129.84,129.39,126.05,123.24,122.47,121.60,113.42,78.67,75.39,56.61,56.24,44.14,42.75,41.97,40.60,39.86,38.71,38.65,38.08,28.60,25.76,23.46,22.54,21.99,17.38,14.86。hrms(es)c37h52cln5o8s[m+h]计算值762.3298,实测值762.3294。[0195](s)-1-((2-乙酰氨基乙基)硫代)-4-甲基-1-氧代戊-2-基(r)-3-((r)-3-(3-氯-4-甲氧基苯基)-2-((2e,5s,6r,7e)-5-羟基-8-(1-异丙基-1h-吡唑-4-基)-6-甲基辛-2,7-二烯酰氨基)丙酰氨基)-2-甲基丙酸酯(23l)。[0196]按照一般偶联程序进行反应并通过快速色谱(1-10％甲醇/dcm)纯化，rf＝0.65(10％甲醇/dcm)。然后按照一般去保护程序对其进行去保护并通过快速色谱(2-15％甲醇/dcm)纯化，得到为透明无色油状物的最终产物23l(0.025，3步收率38％，9:1dr)：rf＝0.25(10％甲醇/dcm)；1hnmr(600mhz,cd3od)δ7.64(s,1h),7.51(s,1h),7.25(d,j＝2.2hz,1h),7.14(dd,j＝8.4,2.2hz,1h),6.97(d,j＝8.4hz,1h),6.80(dt,j＝15.0,7.3hz,1h),6.23(d,j＝16.0hz,1h),6.00(d,j＝15.4hz,1h),5.94(dd,j＝16.0,8.5hz,1h),5.21(dd,j＝9.5,4.0hz,1h),4.58(t,j＝7.5hz,1h),4.46(hept,j＝6.6hz,1h),3.84(s,3h),3.61(dt,j＝8.6,4.5hz,1h),3.48(dd,j＝13.5,6.6hz,1h),3.33–3.30(m,2h),3.20(dd,j＝13.5,7.0hz,1h),3.03(t,j＝6.6hz,2h),3.03–3.00(m,1h),2.85(dd,j＝13.8,8.1hz,1h),2.70(h,j＝6.9hz,1h),2.43–2.23(m,3h),1.91(s,3h),1.82–1.69(m,2h),1.63(ddd,j＝13.2,8.1,3.9hz,1h),1.47(d,j＝6.7hz,6h),1.11(d,j＝6.9hz,3h),1.10(d,j＝7.1hz,3h),0.95(d,j＝6.4hz,3h),0.92(d,j＝6.4hz,3h)。13cnmr(150mhz,cd3od)δ200.36,175.08,173.49,173.44,168.11,155.42,143.59,137.30,131.92,131.52,130.64,129.85,126.04(2),123.22,121.90,121.82,113.39,78.65,75.41,56.59,56.24,54.99,44.15,42.74,41.97,40.59,39.86,38.67,38.07,28.59,25.76,23.48,23.08,22.54,21.97,17.44,14.86。hrms(esi)c39h56cln5o8s[m+h]计算值790.3611,实测值790.3608。[0197](s)-1-((2-乙酰氨基乙基)硫代)-4-甲基-1-氧代戊-2-基(r)-3-((r)-3-(3-氯-4-甲氧基苯基)-2-((2e,5s,6r,7e)-8-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)-5-羟基-6-甲基辛-2,7-二烯酰氨基)丙酰氨基)-2-甲基丙酸酯(23m)。[0198]按照一般偶联程序进行反应并通过快速色谱(1-10％甲醇/dcm)纯化，rf＝0.65(10％甲醇/dcm)。然后按照一般去保护程序对其进行去保护并通过快速色谱(2-15％甲醇/dcm)纯化，得到为透明无色油状物的最终产物23m(0.015g，3步收率43％，8:1dr)：rf＝0.25(10％甲醇/dcm)；1hnmr(600mhz,cd3od)δ7.25(d,j＝2.1hz,1h),7.14(dd,j＝8.4,2.2hz,1h),6.97(d,j＝8.4hz,1h),6.81(dt,j＝15.0,7.3hz,1h),6.14(d,j＝16.3hz,1h),6.01(d,j＝15.4hz,1h),5.93(dd,j＝16.3,8.5hz,1h),5.21(dd,j＝9.5,4.0hz,1h),4.57(t,j＝7.5hz,1h),3.84(s,3h),3.63(dt,j＝8.5,4.7hz,1h),3.48(dd,j＝13.5,6.6hz,1h),3.33–3.30(m,2h)3.20(dd,j＝13.5,7.0hz,1h),3.03(t,j＝6.8hz,2h),3.02–2.99(m,1h)2.85(dd,j＝13.7,8.1hz,1h),2.70(h,j＝7.0hz,1h),2.39(s,3h),2.38–2.30(m,3h),2.28(s,3h),1.91(s,3h),1.82–1.67(m,2h),1.63(ddd,j＝12.6,8.2,3.9hz,1h),1.14(d,j＝6.8hz,3h),1.10(d,j＝7.1hz,3h),0.95(d,j＝6.4hz,3h),0.92(d,j＝6.4hz,3h)。13cnmr(150mhz,cd3od)δ200.36,175.08,173.49,173.44,168.04,166.54,159.73,155.42,143.35,135.53,131.90,131.50,129.85,126.13,123.22,119.18,114.25,113.38,78.65,75.09,56.59,56.26,44.85,42.74,41.97,40.59,39.86,38.94,38.09,28.59,25.76,23.48,22.53,21.97,17.69,14.86,11.47,11.29。hrms(es)c38h53cln4o9s[m+h]计算值777.3295,实测值777.3293。[0199]7.偕二甲基开环念珠藻素[0200](s)-1-((2-乙酰氨基乙基)硫代)-4-甲基-1-氧代戊-2-基3-((r)-3-(3-氯-4-甲氧基苯基)-2-((2e,5s,6r,7e)-5-羟基-6-甲基-8-(吡啶-3-基)辛-2,7-二烯酰氨基)丙酰氨基)-2,2-二甲基丙酸酯(23d)。[0201]按照一般偶联程序进行反应并通过快速色谱系统(1-10％甲醇/dcm)纯化，rf＝0.65(10％甲醇/dcm)。然后按照一般去保护程序对其进行去保护并通过快速色谱系统(2-15％甲醇/dcm)纯化，得到为透明无色油状物的最终产物23d(0.019g，3步收率51％，10:1dr)：rf＝0.25(10％甲醇/dcm)；1hnmr(600mhz,cd3od)δ8.52(d,j＝2.3hz,1h),8.35(dd,j＝4.8,1.6hz,1h),7.89(dt,j＝8.0,2.0hz,1h),7.37(dd,j＝8.0,4.9hz,1h),7.28(d,j＝2.2hz,1h),7.15(dd,j＝8.4,2.3hz,1h),6.96(d,j＝8.5hz,1h),6.80(dt,j＝15.0,7.3hz,1h),6.46(d,j＝16.1hz,1h),6.40(dd,j＝16.0,7.9hz,1h),6.01(d,j＝15.4hz,1h),5.20(dd,j＝9.5,3.8hz,1h),4.65(dd,j＝8.5,6.5hz,1h),3.92(p,j＝6.2hz,2h),3.83(s,3h),3.66(dt,j＝8.7,4.6hz,1h),3.44–3.36(m,2h),3.33–3.29(m,2h),3.11–3.00(m,3h),2.85(dd,j＝13.9,8.5hz,1h),2.44(td,j＝7.2,4.3hz,1h),2.39(dt,j＝13.0,6.4hz,1h),2.32(dt,j＝14.9,7.6hz,1h),1.91(s,3h),1.83–1.69(m,2h),1.64(ddd,j＝13.4,8.4,3.9hz,1h),1.14(s,3h)1.14(d,3h),1.13(d,3h),0.95(d,j＝6.5hz,3h),0.92(d,j＝6.4hz,3h)。13cnmr(150mhz,cd3od)δ200.53,176.86,173.76,173.42,168.17,155.38,148.26,148.21,143.36,136.35,135.52,134.80,131.89,131.69,129.82,127.96,126.16,125.25,123.23,113.41,78.81,75.15,64.74,56.61,56.39,47.89,44.69,44.31,41.94,39.86,38.88,37.86,28.73,25.87,25.26,23.49,23.26,23.18,22.59,21.95,17.35。hrms(es)c39h53cln4o8s[m+h]计算值773.3345,实测值773.3353。[0202](s)-1-((2-乙酰氨基乙基)硫代)-4-甲基-1-氧代戊-2-基3-((r)-3-(3-氯-4-甲氧基苯基)-2-((2e,5s,6r,7e)-5-羟基-6-甲基-8-(吡啶-4-基)辛-2,7-二烯酰氨基)丙酰氨基)-2,2-二甲基丙酸酯(23f)。[0203]按照一般偶联程序进行反应并通过快速色谱系统(1-10％甲醇/dcm)纯化，rf＝0.65(10％甲醇/dcm)。然后按照一般去保护程序对其进行去保护并通过快速色谱系统(2-15％甲醇/dcm)纯化，得到为透明无色油状物的最终产物23f(0.039g，3步收率45％，12:1dr)：rf＝0.25(10％甲醇/dcm)；1hnmr(600mhz,cd3od)δ8.41(d,j＝6.1hz,1h),7.40(d,j＝6.1hz,1h),7.27(d,j＝1.9hz,1h),7.15(dd,j＝8.5,2.2hz,1h),6.96(dd,j＝8.5,1.0hz,1h),6.79(dt,j＝14.5,7.1hz,1h),6.61(dd,j＝16.0,8.5hz,1h),6.43(d,j＝16.0hz,1h),6.00(d,j＝15.4hz,1h),5.20(dd,j＝9.5,3.8hz,1h),4.65(dd,j＝8.4,6.6hz,1h),3.83(s,3h),3.66(dt,j＝8.5,4.4hz,1h),3.40(d,j＝13.6hz,1h),3.36(d,j＝12.9hz,1h),3.32–3.29(m,2h),3.12–2.99(m,3h),2.85(dd,j＝14.0,8.5hz,1h),2.51–2.42(m,1h),2.41–2.34(m,1h),2.35–2.27(m,1h),1.90(s,3h),1.81–1.68(m,2h),1.68–1.60(m,1h),1.16(s,6h),1.15(d,j＝5.1hz,3h),0.95(d,j＝6.5hz,3h),0.92(d,j＝6.5hz,3h)。13cnmr(150mhz,cd3od)δ200.53,176.86,173.67,173.42,168.14,155.38,150.15,147.78,143.23,139.54,131.90,131.68,129.81,129.42,126.21,123.24,122.41,113.43,78.81,75.01,56.61,56.33,47.78,44.69,44.28,41.94,39.86,38.92,37.86,28.73,25.87,23.49,23.26,23.18,22.59,21.95,17.20.；hrms(es)c39h53cln4o8s[m+h]计算值773.3345,实测值773.3353。[0204](s)-1-((2-乙酰氨基乙基)硫代)-4-甲基-1-氧代戊-2-基3-((r)-3-(3-氯-4-甲氧基苯基)-2-((2e,5s,6r,7e)-5-羟基-6-甲基-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)辛-2,7-二烯酰氨基)丙酰氨基)-2,2-二甲基丙酸酯(23k)。[0205]按照一般偶联程序进行反应并通过快速色谱系统(1-10％甲醇/dcm)纯化，rf＝0.65(10％甲醇/dcm)。然后按照一般去保护程序对其进行去保护并通过快速色谱系统(2-15％甲醇/dcm)纯化，得到为透明无色油状物的最终产物23k(0.060，3步收率41％，10:1)：rf＝0.25(10％甲醇/dcm)；1hnmr(600mhz,cd3od)δ7.55(s,1h),7.50(s,1h),7.28(d,j＝2.1hz,1h),7.15(dd,j＝8.5,2.2hz,1h),6.96(d,j＝8.5hz,1h),6.79(dt,j＝14.9,7.3hz,1h),6.21(d,j＝16.1hz,1h),5.99(d,j＝15.4hz,1h),5.93(dd,j＝16.0,8.4hz,1h),5.20(dd,j＝9.6,3.9hz,1h),4.65(dd,j＝8.6,6.5hz,1h),3.84(s,3h),3.83(s,3h),3.60(dt,j＝8.8,4.6hz,1h),3.40(d,j＝13.5hz,1h),3.35(d,j＝13.9hz,1h),3.33–3.29(m,2h),3.12–2.98(m,3h),2.85(dd,j＝13.9,8.6hz,1h),2.32(m,3h),1.91(s,3h),1.83–1.68(m,2h),1.64(ddd,j＝12.8,8.4,3.8hz,1h),1.16(s,6h),1.10(d,j＝6.9hz,3h),0.96(d,j＝6.5hz,3h),0.92(d,j＝6.5hz,3h)。13cnmr(150mhz,cd3od)δ200.54,176.85,173.68,173.44,168.22,155.38,143.62,137.71,131.90,131.68,130.86,129.81,129.39,126.00,123.23,122.47,121.60,113.40,78.80,75.37,56.60,56.35,47.77,44.68,44.12,41.94,39.86,38.72,38.67,37.85,28.73,25.87,23.49,23.25,23.17,22.59,21.94,17.40。hrms(es)c38h54cln5o8s[m+h]计算值776.3454,实测值776.3457。[0206]8.生物催化念珠藻素合成和类似物表征[0207]一般程序分析规模反应。[0208]向1.5mleppendorf管中添加磷酸盐缓冲液(ph＝7.2，100mm，300μl)、dmso(5％)和悬浮在dmso中的开环底物(50μm)。然后将其用crpte酶(在磷酸盐缓冲液中，ph＝7.2，100mm，0.5μm)处理并在30℃下振荡12小时。反应完成后，用0.300ml乙酸乙酯萃取水层，取出150μl，直接干燥到hplc小瓶中，并重悬于70μl甲醇中。这用于在tof-ms上进行分析。[0209]一般程序半制备规模反应。[0210]向250mlerlenmeyer烧瓶中添加dmso(5％)，并将底物(75μm)悬浮于dmso中。在用crpte酶(0.5μm)处理之前，将其用磷酸盐缓冲液(ph＝7.2，100mm)稀释并升温至30℃持续20分钟。使反应物在30℃下以100rpm振荡12小时，然后用丙酮1:1v/v稀释，并且在冰箱中冷却至-20℃。沉淀的蛋白质通过硅藻土过滤，用丙酮洗涤，减压去除有机物，并且用dcm3x20ml萃取剩余的水层。将有机物合并，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。使用hydrorpc18(250x10.0mm，4微米)，使用20-80％水/乙腈梯度以3ml/分钟的流速纯化反应物。[0211](3s,6r,10r,16s,e)-10-(3-氯-4-甲氧基苄基)-3-异丁基-6-甲基-16-((r,e)-4-(吡啶-2-基)丁-3-烯-2-基)-1,4-二氧杂-8,11-二氮杂环十六碳-13-烯-2,5,9,12-四酮(25b)。[0212]按照半制备规模反应的一般程序进行反应并纯化。1hnmr(600mhz,cd3od)δ8.46(dd,j＝5.0,0.9hz,1h),7.78(td,j＝7.7,1.8hz,1h),7.48(d,j＝7.9hz,1h),7.28(d,j＝2.2hz,1h),7.26(ddd,j＝7.5,5.0,1.1hz,1h),7.17(dd,j＝8.5,2.2hz,1h),6.98(d,j＝8.5hz,1h),6.71(ddd,j＝15.1,11.1,3.9hz,1h),6.61–6.57(m,2h),5.93(dd,j＝15.1,1.9hz,1h),5.09(ddd,j＝11.3,6.9,1.9hz,1h),4.93(dd,j＝9.9,3.6hz,1h),4.52(dd,j＝11.3,3.9hz,1h),3.84(s,3h),3.58(dd,j＝13.8,3.3hz,1h),3.27(dd,j＝13.8,3.0hz,1h),3.18(dd,j＝14.5,3.9hz,1h),2.80–2.73(m,2h),2.73–2.65(m,2h),2.39(dt,j＝14.5,11.2hz,1h),1.69–1.52(m,2h),1.34(ddd,j＝14.1,8.8,3.6hz,1h),1.18(d,j＝7.1hz,6h),0.74(d,j＝6.5hz,3h),0.71(d,j＝6.6hz,3h)。13cnmr(151mhz,cd3od)δ177.53,174.04,172.22,168.33,156.60,155.36,149.99,143.41,138.74,137.58,132.23,132.10,131.49,129.28,125.62,123.71,123.27,122.82,113.50,78.48,72.86,57.35,56.60,43.46,41.19,40.88,38.98,37.99,36.36,5.62,23.20,21.66,17.53,15.06。hrms(es)c34h42cln3o7[m+h]计算值640.2784,实测值640.2788。[0213](3s,6r,10r,16s,e)-10-(3-氯-4-甲氧基苄基)-3-异丁基-6-甲基-16-((r,e)-4-(吡啶-3-基)丁-3-烯-2-基)-1,4-二氧杂-8,11-二氮杂环十六碳-13-烯-2,5,9,12-四酮(25c)。[0214]按照半制备规模反应的一般程序进行反应并纯化。1hnmr(600mhz,cd3od)δ8.53(d,j＝2.2hz,1h),8.38(dd,j＝4.8,1.6hz,1h),7.92(d,j＝8.0hz,1h),7.40(dd,j＝8.0,4.9hz,1h),7.28(d,j＝2.2hz,1h),7.17(dd,j＝8.4,2.2hz,1h),6.98(d,j＝8.4hz,1h),6.71(ddd,j＝15.1,11.2,3.9hz,1h),6.53(d,j＝15.9hz,1h),6.30(dd,j＝15.9,8.9hz,1h),5.93(dd,j＝15.2,1.9hz,1h),5.08(ddd,j＝11.2,7.2,1.9hz,1h),4.93(dd,j＝9.9,3.7hz,1h),4.52(dd,j＝11.2,3.9hz,1h),3.84(s,3h),3.58(dd,j＝13.8,3.3hz,1h),3.27(dd,j＝13.8,3.0hz,1h),3.18(dd,j＝14.5,3.9hz,1h),2.80–2.63(m,4h),2.37(dt,j＝14.4,11.1hz,1h),1.69–1.55(m,2h),1.31(ddd,j＝14.1,8.9,3.7hz,1h),1.19(d,j＝3.5hz,3h),1.18(d,j＝2.9hz,3h),0.74(d,j＝6.5hz,3h),0.70(d,j＝6.5hz,3h)。13cnmr(150mhz,cd3od)δ180.30,177.53,174.03,172.21,168.33,155.36,148.71,148.40,143.42,135.55,134.96,134.86,132.21,131.49,129.28,128.77,125.62,125.40,113.49,78.47,72.80,57.36,56.60,43.75,41.18,40.94,38.97,37.88,36.35,25.60,23.18,21.69,17.50,15.06。hrms(es)c34h42cln3o7[m+h]计算值640.2784,实测值640.2789[0215](3s,10r,16s,e)-10-(3-氯-4-甲氧基苄基)-3-异丁基-6,6-二甲基-16-((r,e)-4-(吡啶-3-基)丁-3-烯-2-基)-1,4-二氧杂-8,11-二氮杂环十六碳-13-烯-2,5,9,12-四酮(25d)。[0216]按照半制备规模反应的一般程序进行反应并纯化。1hnmr(600mhz,cd3od)δ8.53(s,1h),8.38(d,j＝4.7hz,1h),7.92(dt,j＝8.0,1.9hz,1h),7.40(dd,j＝8.0,4.8hz,1h),7.28(d,j＝2.2hz,1h),7.17(dd,j＝8.4,2.2hz,1h),6.98(d,j＝8.4hz,1h),6.72(ddd,j＝15.2,11.2,3.9hz,1h),6.53(d,j＝15.9hz,1h),6.30(dd,j＝16.0,8.9hz,1h),5.92(dd,j＝15.1,1.9hz,1h),5.07(ddd,j＝11.1,7.2,1.8hz,2h),4.96(dd,j＝9.9,3.4hz,1h),4.51(dd,j＝11.3,3.8hz,1h),3.84(s,3h),3.46(d,j＝13.6hz,1h),3.18(dd,j＝14.5,3.8hz,1h),3.08(d,j＝13.7hz,1h),2.74(dd,j＝14.5,11.4hz,1h),2.74–2.62(m,2h),2.36(dt,j＝14.4,11.2hz,1h),1.66–1.55(m,2h),1.37–1.26(m,3h),1.20(s,3h),1.18(d,j＝6.9hz,3h),1.16(s,3h),0.74(d,j＝6.4hz,3h),0.70(d,j＝6.4hz,3h)。13cnmr(150mhz,cd3od)δ180.03,178.94,173.68,172.01,168.22,155.37,148.71,148.40,143.63,135.55,134.85,132.17,131.46,129.26,128.78,125.43,123.28,113.50,78.43,72.58,57.48,56.60,47.39,44.02,43.75,40.92,37.92,36.48,31.64,25.85,23.32,23.29,23.22,21.65,17.49。hrms(es)c35h44cln3o7[m+h]计算值654.2941,实测值654.2940。[0217](3s,6r,10r,16s,e)-10-(3-氯-4-甲氧基苄基)-3-异丁基-6-甲基-16-((r,e)-4-(吡啶-4-基)丁-3-烯-2-基)-1,4-二氧杂-8,11-二氮杂环十六碳-13-烯-2,5,9,12-四酮(25e)。[0218]按照半制备规模反应的一般程序进行反应并纯化。1hnmr(600mhz,cd3od)δ8.43(d,j＝6.2hz,2h),7.42(d,j＝6.3hz,2h),7.27(d,j＝2.1hz,1h),7.15(dd,j＝8.5,2.1hz,1h),6.96(d,j＝8.4hz,1h),6.69(ddd,j＝15.1,11.1,3.9hz,1h),6.50–6.47(m,2h),5.91(dd,j＝15.2,1.8hz,1h),5.08(dd,j＝10.7,8.3hz,1h),4.90(dd,j＝9.9,3.6hz,1h),4.51(dd,j＝11.2,3.9hz,1h),3.82(s,3h),3.56(dd,j＝13.8,3.3hz,1h),3.25(dd,j＝13.8,2.9hz,1h),3.16(dd,j＝14.5,3.9hz,1h),2.77–2.62(m,4h),2.34(dt,j＝14.7,11.2hz,1h),1.67–1.51(m,2h),1.28(ddd,j＝12.9,8.7,3.5hz,1h),1.17(d,j＝2.6hz,3h),1.16(d,j＝2.0hz,3h),0.72(d,j＝6.4hz,3h),0.68(d,j＝6.5hz,3h)。13cnmr(150mhz,cd3od)δ177.55,174.02,172.17,168.31,155.36,150.42,147.12,143.33,138.63,132.21,131.49,130.23,129.28,125.66,123.27,122.49,113.49,78.35,72.78,57.36,56.60,43.67,41.17,40.91,38.96,37.88,36.35,25.60,23.15,21.66,17.35,15.06。hrms(es)c34h42cln3o7[m+h]计算值640.2784,实测值640.2787。[0219](3s,10r,16s,e)-10-(3-氯-4-甲氧基苄基)-3-异丁基-6,6-二甲基-16-((r,e)-4-(吡啶-4-基)丁-3-烯-2-基)-1,4-二氧杂-8,11-二氮杂环十六碳-13-烯-2,5,9,12-四酮(25f)。[0220]按照半制备规模反应的一般程序进行反应并纯化。1hnmr(600mhz,cd3od)δ8.45(d,j＝5.7hz,2h),7.44(d,j＝6.3hz,2h),7.28(d,j＝2.2hz,1h),7.17(dd,j＝8.4,2.2hz,1h),6.98(d,j＝8.5hz,1h),6.72(ddd,j＝15.1,11.2,3.9hz,1h),6.51(s,1h),6.50(d,j＝4.6hz,1h),5.92(dd,j＝15.1,1.9hz,1h),5.09(ddd,j＝11.3,7.2,1.9hz,1h),4.95(dd,j＝9.9,3.3hz,1h),4.51(dd,j＝11.3,3.7hz,1h),3.84(s,3h),3.46(d,j＝13.6hz,1h),3.18(dd,j＝14.6,3.8hz,1h),3.08(d,j＝13.6hz,1h),2.74(dd,j＝14.5,11.3hz,1h),2.74–2.66(m,2h),2.35(dt,j＝14.5,11.2hz,1h),1.67–1.54(m,2h),1.37–1.24(m,1h),1.19(s,3h),1.18(d,j＝6.9hz,3h),1.16(s,3h),0.74(d,j＝6.3hz,3h),0.71(d,j＝6.4hz,3h)。13cnmr(150mhz,cd3od)δ177.59,174.05,172.32,168.36,155.34,143.63,137.86,132.21,131.48,130.26,129.63,129.28,125.50,123.24,122.46,121.98,113.46,78.68,72.91,57.37,56.58,43.68,41.18,40.87,38.95,38.75,37.84,36.36,25.64,23.18,21.67,17.75,15.07。hrms(es)c35h44cln3o7[m+h]计算值654.2941,实测值654.2947。[0221](3s,6r,10r,16s,e)-10-(3-氯-4-甲氧基苄基)-3-异丁基-6-甲基-16-((r,e)-4-(吡嗪-2-基)丁-3-烯-2-基)-1,4-二氧杂-8,11-二氮杂环十六碳-13-烯-2,5,9,12-四酮(25g)。[0222]按照半制备规模反应的一般程序进行反应并纯化。1hnmr(600mhz,cd3od)δ8.61(d,j＝1.5hz,1h),8.54(dd,j＝2.6,1.5hz,1h),8.42(d,j＝2.6hz1h),7.28(d,j＝2.2hz,1h),7.17(dd,j＝8.4,2.2hz,1h),6.98(d,j＝8.5hz,1h),6.84(dd,j＝15.7,8.9hz,1h),6.71(ddd,j＝15.2,11.2,3.9hz,1h),6.64(d,j＝15.7hz,1h),5.93(dd,j＝15.1,1.9hz,1h),5.11(ddd,j＝11.3,6.8,2.0hz,1h),4.94(dd,j＝9.7,3.7hz,1h),4.53(dd,j＝11.2,3.9hz,1h),3.84(s,3h),3.58(dd,j＝13.8,3.4hz,1h),3.27(dd,j＝13.7,3.0hz,1h),3.18(dd,j＝14.5,3.9hz,1h),2.81–2.72(m,3h),2.69(ddt,j＝14.2,3.7,1.9hz,1h),2.38(dt,j＝14.6,11.2hz,1h),1.70–1.57(m,2h),1.36(ddd,j＝14.1,8.7,3.7hz,1h),1.19(d,j＝6.9hz,3h),1.19(d,j＝7.5hz,3h),0.76(d,j＝6.5hz,3h),0.73(d,j＝6.5hz,3h)。13cnmr(150mhz,cd3od)δ177.53,174.03,172.18,168.32,155.36,152.52,145.69,144.15,143.92,143.33,140.15,132.22,131.48,129.28,128.83,125.65,123.27,113.50,78.45,72.83,57.35,56.60,43.37,41.19,40.91,38.98,38.03,36.35,25.65,23.23,21.74,17.37,15.07。hrms(es)[m+h]计算值641.2737,实测值641.2742。[0223](3s,6r,10r,16s,e)-10-(3-氯-4-甲氧基苄基)-3-异丁基-6-甲基-16-((r,e)-4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)丁-3-烯-2-基)-1,4-二氧杂-8,11-二氮杂环十六碳-13-烯-2,5,9,12-四酮(25h)。[0224]按照半制备规模反应的一般程序进行反应并纯化。1hnmr(600mhz,cd3od)δ7.36(d,j＝2.1hz,1h),7.28(d,j＝2.2hz,1h),7.17(dd,j＝8.5,2.2hz,1h),6.98(d,j＝8.4hz,1h),6.71(ddd,j＝15.1,11.2,3.9hz,1h),6.52(d,j＝15.8hz,1h),6.42(d,j＝2.1hz,1h),6.14(dd,j＝15.8,9.0hz,1h),5.93(dd,j＝15.1,1.9hz,1h),5.07(ddd,j＝11.3,6.9,1.9hz,1h),4.93(dd,j＝9.8,3.6hz,1h),4.52(dd,j＝11.3,3.9hz,1h),3.84(s,6h),3.59(dd,j＝13.8,3.3hz,1h),3.27(dd,j＝13.8,3.0hz,1h),3.18(dd,j＝14.5,3.9hz,1h),2.79–2.73(m,2h),2.73–2.62(m,2h),2.35(dt,j＝14.6,11.2hz,1h),1.71–1.57(m,2h),1.35(ddd,j＝14.0,8.6,3.5hz,1h),1.19(d,j＝7.4hz,3h),1.17(d,j＝6.9hz,3h),0.77(d,j＝6.4hz,6h)。13cnmr:(150mhz,cd3od)δ177.58,174.04,172.22,168.32,155.35,143.40,142.29,139.27,136.81,132.20,131.48,129.28,125.61,123.24,119.18,113.46,103.68,78.39,72.84,57.39,56.58,43.68,41.16,40.96,38.96,37.96,36.51,36.36,25.69,23.25,21.76,17.53,15.08。hrms(es)c33h43cln4o7[m+h]计算值643.2893,实测值643.2890。[0225](3s,6r,10r,16s,e)-10-(3-氯-4-甲氧基苄基)-3-异丁基-6-甲基-16-((r,e)-4-(1-甲基-1h-吡唑-3-基)丁-3-烯-2-基)-1,4-二氧杂-8,11-二氮杂环十六碳-13-烯-2,5,9,12-四酮(25i)。[0226]按照半制备规模反应的一般程序进行反应并纯化。1hnmr(600mhz,cd3od)δ7.47(d,j＝2.3hz,1h),7.26(d,j＝2.2hz,1h),7.15(dd,j＝8.4,2.2hz,1h),6.96(d,j＝8.5hz,1h),6.68(ddd,j＝15.1,11.1,3.9hz,1h),6.36(d,j＝16.0hz,1h),6.33(d,j＝2.3hz,1h),6.05(dd,j＝16.0,9.0hz,1h),5.90(dd,j＝15.2,1.9hz,1h),5.00(ddd,j＝11.3,7.1,2.0hz,1h),4.90(dd,j＝10.0,3.6hz,1h),4.50(dd,j＝11.2,3.9hz,1h),3.56(dd,j＝13.8,3.3hz,1h),3.25(dd,j＝13.8,3.0hz,1h),3.16(dd,j＝14.5,3.9hz,1h),2.77–2.71(m,2h),2.65(ddt,j＝14.5,4.1,2.1hz,1h),2.61–2.51(m,1h),2.34(dt,j＝14.6,11.2hz,1h),1.68–1.61(m,1h),1.57(ddd,j＝14.8,10.0,5.0hz,1h),1.35(ddd,j＝14.2,9.0,3.6hz,1h),1.17(d,j＝7.4hz,3h),1.12(d,j＝6.8hz,3h),0.76(d,j＝6.5hz,3h),0.74(d,j＝6.6hz,3h)。13cnmr(150mhz,cd3od)δ177.56,174.05,172.28,168.35,155.35,151.52,143.52,133.58,133.15,132.23,131.49,129.28,125.57,124.52,123.26,113.49,103.64,78.52,72.93,57.36,56.60,43.57,41.19,40.83,38.97,38.65,37.89,36.36,25.68,23.16,21.62,17.61,15.06。hrms(es)c35h47cln4o7[m+h]计算值671.3206,实测值671.3025。[0227](3s,6r,10r,16s,e)-10-(3-氯-4-甲氧基苄基)-3-异丁基-6-甲基-16-((r,e)-4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)丁-3-烯-2-基)-1,4-二氧杂-8,11-二氮杂环十六碳-13-烯-2,5,9,12-四酮(25j)。[0228]按照半制备规模反应的一般程序进行反应并纯化。1hnmr(600mhz,cd3od)δ7.61(s,1h),7.51(s,1h),7.28(d,j＝2.2hz,1h),7.17(dd,j＝8.4,2.2hz,1h),6.98(d,j＝8.4hz,1h),6.70(ddd,j＝15.2,11.2,3.9hz,1h),6.27(d,j＝15.9hz,1h),5.92(dd,j＝15.2,1.9hz,1h),5.80(dd,j＝15.9,8.9hz,1h),4.99(ddd,j＝11.3,7.1,1.9hz,1h),4.92(dd,j＝10.0,3.6hz,1h),4.52(dd,j＝11.3,3.8hz,1h),3.84(d,j＝1.8hz,6h),3.58(dd,j＝13.8,3.3hz,1h),3.27(dd,j＝13.8,2.9hz,1h),3.18(dd,j＝14.5,3.8hz,1h),2.81–2.70(m,2h),2.69–2.60(m,1h),2.50(p,j＝7.1hz,1h),2.33(dt,j＝14.5,11.2hz,1h),1.71–1.56(m,2h),1.38(ddd,j＝13.2,9.0,3.6hz,1h),1.18(d,j＝7.5hz,3h),1.11(d,j＝6.8hz,3h),0.78(d,j＝6.5hz,3h),0.76(d,j＝6.6hz,3h)。13cnmr(150mhz,cd3od)δ177.59,174.05,172.32,168.36,155.34,143.63,137.86,132.21,131.48,130.26,129.63,129.28,125.50,123.24,122.46,121.98,113.46,78.68,72.91,57.37,56.58,43.68,41.18,40.87,38.95,38.75,37.84,36.36,25.64,23.18,21.67,17.75,15.07。hrms(es)c33h43cln4o7[m+h]计算值643.2893,实测值643.2890。[0229](3s,10r,16s,e)-10-(3-氯-4-甲氧基苄基)-3-异丁基-6,6-二甲基-16-((r,e)-4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)丁-3-烯-2-基)-1,4-二氧杂-8,11-二氮杂环十六碳-13-烯-2,5,9,12-四酮。[0230]按照半制备规模反应的一般程序进行反应并纯化。1hnmr(600mhz,cd3od)7.60(s,1h),7.51(s,1h),7.27(d,j＝2.1hz,1h),7.16(dd,j＝8.5,2.2hz,1h),6.97(d,j＝8.5hz,1h),6.70(ddd,j＝15.2,11.2,3.9hz,1h),6.27(d,j＝15.9hz,1h),5.90(dd,j＝15.1,1.9hz,1h),5.79(dd,j＝15.9,8.9hz,1h),4.97(ddd,j＝11.3,7.1,1.6hz,1h),4.94(dd,j＝9.9,3.4hz,1h),4.50(dd,j＝11.4,3.7hz,1h),3.83(s,3h),3.83(s,3h),3.45(d,j＝13.6hz,1h),3.17(dd,j＝14.5,3.7hz,1h),3.07(d,j＝13.6hz,1h),2.73(dd,j＝14.5,11.4hz,1h),2.65(dt,j＝14.7,2.4hz,1h),2.50(h,j＝7.2hz,1h),2.32(dt,j＝14.4,11.2hz,1h),1.68–1.57(m,2h),1.43–1.36(m,1h),1.19(s,3h),1.15(s,3h),1.11(d,j＝6.9hz,3h),0.77(t,j＝6.7hz,6h)。13cnmr(150mhz,cd3od)δ178.97,173.70,172.12,168.25,155.37,143.83,137.86,132.17,131.46,130.26,129.63,129.26,125.33,123.27,122.48,121.98,113.49,78.65,72.69,57.47,56.59,47.40,44.01,43.68,40.85,38.75,37.88,36.49,25.90,23.32,23.28,23.20,21.64,17.74。hrms(es)c34h45cln4o7[m+h]计算值656.2977,实测值656.2973。[0231](3s,6r,10r,16s,e)-10-(3-氯-4-甲氧基苄基)-3-异丁基-16-((r,e)-4-(1-异丙基-1h-吡唑-4-基)丁-3-烯-2-基)-6-甲基-1,4-二氧杂-8,11-二氮杂环十六碳-13-烯-2,5,9,12-四酮(25l)。[0232]按照半制备规模反应的一般程序进行反应并纯化。1hnmr(600mhz,cd3od)δ7.70(s,1h),7.53(s,1h),7.28(d,j＝2.2hz,1h),7.17(dd,j＝8.4,2.2hz,1h),6.98(d,j＝8.5hz,1h),6.70(ddd,j＝15.1,11.2,3.9hz,1h),6.28(d,j＝15.8hz,1h),5.92(dd,j＝15.2,1.9hz,1h),5.79(dd,j＝15.9,8.9hz,1h),4.98(ddd,j＝11.2,7.5,2.0hz,1h),4.91(dd,j＝10.0,3.5hz,1h),4.52(dd,j＝11.2,3.8hz,1h),4.47(p,j＝6.7hz,1h),3.84(s,3h),3.58(dd,j＝13.8,3.3hz,1h),3.27(dd,j＝13.7,3.0hz,1h),3.18(dd,j＝14.5,3.8hz,1h),2.79–2.71(m,2h),2.71–2.63(m,1h),2.50(h,j＝7.2hz,1h),2.33(dt,j＝14.5,11.2hz,1h),1.72–1.54(m,2h),1.46(d,j＝6.7hz,6h),1.37(ddd,j＝14.2,9.0,3.6hz,1h),1.18(d,j＝7.4hz,3h),1.12(d,j＝6.9hz,3h),0.77(d,j＝6.5hz,3h),0.74(d,j＝6.6hz,3h)。13cnmr(150mhz,cd3od)δ177.60,174.05,172.33,168.37,155.35,143.64,137.40,132.21,131.48,130.12,129.28,126.34,125.51,123.25,122.67,121.38,113.46,78.67,72.93,57.38,56.59,55.07,43.80,41.18,40.87,38.96,37.85,36.37,25.64,23.31,23.09,21.70,17.79,15.07。hrms(es)c35h47cln4o7[m+h]计算值671.3206,实测值671.3025。[0233](3s,6r,10r,16s,e)-10-(3-氯-4-甲氧基苄基)-16-((r,e)-4-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)丁-3-烯-2-基)-3-异丁基-6-甲基-1,4-二氧杂-8,11-二氮杂环十六碳-13-烯-2,5,9,12-四酮(25m)。[0234]按照半制备规模反应的一般程序进行反应并纯化。1hnmr(600mhz,cd3od)δ7.28(d,j＝2.2hz,1h),7.17(dd,j＝8.4,2.2hz,1h),6.98(d,j＝8.4hz,1h),6.69(ddd,j＝15.1,11.1,3.9hz,1h),6.23(d,j＝16.2hz,1h),5.93(dd,j＝15.1,1.9hz,1h),5.80(dd,j＝16.2,8.9hz,1h),5.06(ddd,j＝11.3,6.7,1.9hz,1h),4.93(dd,j＝9.7,3.8hz,1h),4.51(dd,j＝11.2,3.9hz,1h),3.84(s,3h),3.57(dd,j＝13.7,3.3hz,1h),3.27(dd,j＝13.8,3.0hz,1h),3.17(dd,j＝14.5,3.9hz,1h),2.80–2.71(m,2h),2.67(ddt,j＝14.6,4.0,2.0hz,1h),2.58(dt,j＝8.8,6.6hz,1h),2.40(s,3h),2.35(dt,j＝14.5,11.4hz,1h),2.28(s,3h),1.70–1.53(m,2h),1.33(ddd,j＝14.1,8.7,3.8hz,1h),1.18(d,j＝7.4hz,3h),1.15(d,j＝6.9hz,3h),0.79(d,j＝3.7hz,3h),0.78(d,j＝3.8hz,3h)。13cnmr(150mhz,cd3od)δ177.53,174.04,172.23,168.34,166.95,159.53,155.35,143.40,134.36,132.19,131.48,129.29,125.65,123.24,120.19,113.78,113.46,78.53,72.77,57.40,56.58,44.22,41.16,41.02,38.95,37.87,36.35,25.62,23.20,21.77,17.83,15.07,11.55,11.45。hrms(es)c34h44cln3o8[m+h]计算值658.2890,实测值658.2893。[0235]一般蛋白质表达和纯化程序[0236]使用修改后的方案培养和纯化蛋白质。12将pet-28b(+)-crpte构建体转化到bl21(de3)中并使其在补充有50μg/ml卡那霉素的lb琼脂板上在37℃下生长过夜。挑取菌落并使其在补充有50μg/ml卡那霉素的25mllb肉汤中于37℃生长过夜。向6升含有50μg/ml卡那霉素的tb表达培养基分别接种4ml过夜培养物并孵育(37℃，200rpm)约5小时，直到od600达到1.2。将烧瓶从振荡器中取出并在冰浴中冷却15分钟(温度为约20℃)。将烧瓶重新振荡，并且通过添加100μmiptg引发蛋白质表达，并在20℃进行18小时。通过以6,000xg离心30分钟收获细胞。[0237]然后将细胞沉淀重悬于裂解缓冲液(10ml/g细胞沉淀，100mm磷酸钠、20mm咪唑、300mmnacl，ph8)中并用1mgdna酶(sigma)处理。将溶液置于冰上并进行超声处理(12x10秒，停顿50秒)。然后将悬浮液在4℃以50,000xg离心30分钟。收集上清液并使其通过0.45μm过滤器，然后上样到10mlninta树脂柱上。用10倍柱体积的洗涤缓冲液(100mm磷酸钠缓冲液、50mm咪唑、300mmnacl，ph8)洗涤柱，并使用15ml洗脱缓冲液(100mm磷酸钠、300mm咪唑、300mmnacl，ph8)洗脱蛋白质。然后将洗脱液浓缩至2.5ml，使其通过pd-10缓冲液交换/脱盐柱(用储存缓冲液，100mm磷酸钠、150mmnacl，ph7.2预平衡)，用液氮快速冷冻，并置于-80℃储存。使样品在nupage4-12％bis-tris蛋白凝胶上跑样以检查纯度。[0238]实施例2的参考文献[0239]1.shankaraiah,g.；kumar,t.v.；reddy,g.v.；rao,j.m.；babu,k.s.stereoselectivesynthesisof(-)-pinidinone.helveticachimicaacta2013,96,990-996.[0240]2.gao,x.；han,h.；krische,m.j.directgenerationofacyclicpolypropionatestereopolyadsviadoublediastereo-andenantioselectiveirid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