技术特征：
1.一种马铃薯全株微生物样品一次性制备和分离纯化方法,其特征在于，包括以下步骤：步骤一：取样部位划分,先剪取马铃薯植株不同部位的叶片和茎段，将其放入已编号的无菌容器中，用于制备叶际和茎围微生物样品；随后将马铃薯植株地上部分切去，切口用胶纸封死，完整挖取地下部分，将须根和马铃薯块茎分别放入已编号的无菌塑料袋中，用于制备根和薯块微生物样品；步骤二：样品运输,将取定的样品按照叶片、茎段、根、块茎分类放入储藏盒，在冰盒条件下随即运回实验室待用；步骤三：叶际和茎围微生物样品制备,取叶片和茎段各10
‑
20g，置入40ml无菌pbs缓冲液中，摇床200r/min震荡30min，再用超声波处理两次，每次30s，静置5
‑
10min，去除叶片和茎段后1500r/min离心1min，将上清液转移到另一个离心管，12000r/min离心10分钟得到菌体。留取10ml上清液后涡旋30s，分装至2ml或更大体积的ep管或冻存管中，用于叶际和茎围微生物dna和rna制备；步骤四：根区微生物样品制备,在实验桌上铺上已编号的无菌纸，将对应编号的根部泥土用力抖落在纸上，直到肉眼看不见根上有明显的泥土,将抖落的泥土称取10
‑
25g，过2mm孔径无菌筛，多点样本均匀混合，分装至2ml或更大体积的ep管或冻存管中，用于根区微生物dna和rna制备；步骤五：根际微生物样品制备,准备含40ml无菌pbs缓冲液的无菌离心管2
‑
3个。将步骤三中抖落泥土后的根放入离心管中，用力震荡2
‑
3min，静置5
‑
10min，待土粒自然沉降后，取出根系放入另一离心管并重复此步骤1
‑
2次。收集含沉降土粒的洗涤液，12000r/min离心10min，留取10ml上清液后涡旋30s，分装至2ml或更大体积的ep管或冻存管中，用于根际微生物dna和rna制备；步骤六：根表微生物样品制备,将洗涤后的根系放入10ml无菌pbs缓冲液的无菌离心管中，用超声波处理2
‑
3次，超声频率为50
‑
60hz,每次30s，分装至2ml ep管或冻存管中，用于根表微生物dna和rna制备；步骤七：根内微生物样品制备,将上述根样品取出，用无菌水洗涤，75％乙醇进行表面消毒30s，2.5％次氯酸钠消毒10min,再用无菌水充分洗涤；取5
‑
10g已消毒的根，放40ml无菌pbs缓冲液中，用破碎机处理5min，静置10min，收集洗涤液12000g离心10min，留取10ml上清液后涡旋30s，分装至2ml或更大体积的ep管或冻存管中，用于根内微生物dna和rna制备；步骤八：块茎附生微生物样品制备,将马铃薯薯块表面泥土用力抖落后，用浸有无菌生理盐水的棉拭子在薯块表面来回滚动涂擦整个面积，涂擦完后剪断棉拭子的手持端，并将棉拭子放入2ml装有无菌pbs缓冲液的ep管中，涡旋震荡30s两次，充分洗脱下棉拭子上的微生物后去掉棉拭子，剩余物用于块茎附生微生物dna和rna制备；步骤九：将步骤三至步骤八中不同部位收集制备的样品备份用无菌水进行10
–2–
10
–7稀释，取不同样品的各个稀释度100μl，并涂布在不同培养基平板上。分离土壤源微生物可采用甲醇提取物培养基、tsb培养基、tyg培养基、yem培养基、m715培养基、twye培养基，分离叶际和茎围微生物可采用myx培养基、mm+meoh培养基、r2a培养基；步骤十：选择25℃、30℃、35℃这3个温度梯度培养2
–
10d,每天记录平板上出现的菌落数和菌落特征；
步骤十一：将平板上直径不小于200μm的单菌落直接挑取放入1ml保存液中，
‑
80℃保存待用；步骤十二：对于平板上分离效果不好的菌落和小于200μm的单菌落，将它们分别划线在原用的培养基上，使用同样的培养条件，直至获得单菌落。2.根据权利要求1所述的一种马铃薯全株微生物样品一次性制备和分离纯化方法，其特征在于：选取马铃薯植株间的空隙处取样，作为对照样品。3.根据权利要求1所述的一种马铃薯全株微生物样品一次性制备和分离纯化方法，其特征在于：如果马铃薯已有块茎形成，那么在步骤二开始时，首先将块茎摘下，然后按步骤八的操作方法制备块茎附着微生物样品，制作时保证块茎皮不被碰破。4.根据权利要求1所述的一种马铃薯全株微生物样品一次性制备和分离纯化方法，其特征在于：在步骤四和步骤五中取完微生物样品后，余下的部分，也就是土壤颗粒和沉淀物还用于制作土壤提取物培养基。5.根据权利要求1所述的一种马铃薯全株微生物样品一次性制备和分离纯化方法，其特征在于：在步骤三和步骤七中，取完微生物样品后，余下的部分，也就是超声液体和根沉淀物还用于制作马铃薯叶和根提取物培养基。6.根据权利要求1所述的一种马铃薯全株微生物样品一次性制备和分离纯化方法，其特征在于：步骤三至步骤八中收集的7种微生物样品可直接提取dna和rna，用于细菌16s rrna基因、真菌its扩增子鉴定或宏基因组、宏转录组序列测定。7.根据权利要求1所述的一种马铃薯全株微生物样品一次性制备和分离纯化方法，其特征在于：步骤九至十二中根据不同样品培养物结果可进一步进行基因组序列测定和分析。根据基因组序列分析结果，如果纯培养物是一个新种，即可按照常规方法对其进行形态和各种生化反应鉴定。