用于检测塔卡里伯病毒和太米阿米病毒的引物探针组合、试剂盒及方法与流程

文档序号:24724297发布日期:2021-04-16 15:42阅读:来源:国知局

技术特征:
1.用于塔卡里伯病毒和太米阿米病毒的实时荧光定量rt

pcr检测的靶序列组合,其特征在于,其含有两条靶序列,所述靶序列具有如seq id no.7

8所示的核苷酸序列。2.用于塔卡里伯病毒和太米阿米病毒的实时荧光定量rt

pcr检测的引物探针组合,其特征在于,含有两对特异性引物和两条特异性探针,其中,所述特异性引物的序列如seq id no.1

4所示,所述特异性探针的序列如seq id no.5和6所示。3.根据权利要求2所述的引物探针组合,其特征在于,所述特异性探针分别标记产生不同荧光色的荧光基团,所述荧光基团包括荧光报告基团和荧光猝灭基团;所述荧光报告基团为选自fam、hex、texas red、cy5、tet、joe、cy3、tamra、rox、lc red640、lc red705中的任一种;所述荧光猝灭基团为选自bhq1、bhq2、bhq3、dabcyl中的任一种。4.根据权利要求2或3所述的引物探针组合,其特征在于,序列如seq id no.5所示的特异性探针的5’端标记fam荧光报告基团,3’端标记bhq 1荧光淬灭基团;序列如seq id no.6所示的特异性探针的5’端标记hex荧光报告基团,3’端标记bhq 1荧光淬灭基团。5.权利要求2~4任一项所述的引物探针组合在制备用于检测塔卡里伯病毒和太米阿米病毒的试剂盒中的应用。6.用于塔卡里伯病毒和太米阿米病毒检测的试剂盒,其特征在于,包含权利要求2~4任一项所述的引物探针组合。7.根据权利要求6所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒进行实时荧光定量rt

pcr检测时的反应程序为:50℃逆转录30min;95℃预变性10min,95℃变性15s、60℃退火60s运行40个循环。8.根据权利要求6或7所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒在进行实时荧光定量rt

pcr检测时的反应体系中,上游引物、下游引物和探针的摩尔比为2:2:1;优选地,所述试剂盒在进行实时荧光定量rt

pcr检测时的25μl反应体系为:2
×
缓冲液12.5μl,10μm上游引物0.5μl,10μm下游引物0.5μl,10μm探针0.25μl,酶1μl,模板5μl,用无rna水解酶的纯净水补足至25μl。9.一种利用实时荧光定量rt

pcr检测希塔卡里伯病毒和太米阿米病毒的方法,其特征在于,以待测样品的rna为检测模板,利用如seq id no.1

4所示的特异性引物和如seq id no.5

6所示的特异性探针进行实时荧光定量rt

pcr,根据扩增曲线判断待测样品中是否含有塔卡里伯病毒和太米阿米病毒。10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于,所述实时荧光定量rt

pcr的反应程序为50℃逆转录30min;95℃预变性10min,95℃变性15s、60℃退火60s运行40个循环;和/或,所述实时荧光定量rt

pcr的反应体系中,上游引物、下游引物和探针的摩尔比为2:2:1;优选地,所述实时荧光定量rt

pcr的25μl反应体系为:2
×
缓冲液12.5μl,10μm上游引物0.5μl,10μm下游引物0.5μl,10μm探针0.25μl,酶1μl,模板5μl,rnase free water补足至25μl。
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