一种临床再生抗体自体血液免疫细胞的制备方法及应用与流程

1.本发明涉及组织工程技术领域，具体涉及一种临床再生抗体自体血液免疫细胞的制备方法及应用。


背景技术：

2.人体外周血免疫细胞是具有复制和多向分化潜能的原始细胞，代表肌体抗体的起源细胞，是对人体各种组织器官病毒感染炎症修复的原始再生临床医学细胞，在一定条件下，对肌体所有器官亚健康产生的病厉抗体，医学界称其“多能细胞”。免疫细胞再生医学治疗是把健康的活细胞移植到亚健康或需免疫力提升人的体内，以达到修复病变细胞或重建功能正常细胞和组织的目的性。自体外周血免疫细胞再生修复疗法内示给肌体注入新的活力，是从根本上修复众多亚健康疾病的有效方法。


技术实现要素：

3.因此，基于以上背景，本发明提供一种临床再生抗体自体血液免疫细胞的制备方法及应用，通过自体再生免疫细胞可以解决现有技术中采用异体免疫细胞存在排异反应及其他临床中远期无法去评估或难以预测的不良效果等问题。至今本发明已经于临床上应用并成功修复各类亚建康疾病近2千例，并进行10年形体追踪观察，结果均是相溶，稳定性、疗效显著，安全可靠。
4.本发明的技术方案为：
5.一种临床再生抗体自体血液免疫细胞的制备方法，其制备步骤如下：
6.1)在无菌室采集患者自体外周血样本：采用含有肝素钠的抗凝管采集外周血；
7.2)将步骤1)采集的外周血转入离心管中并进行离心分离细胞；
8.3)将步骤2)离心后的血清转入另外的离心管内；
9.4)将步骤3)血清转出后的外周血样加入等量的磷酸盐缓冲液稀释；
10.5)将步骤4)稀释后的外周血样缓慢地悬入另外加有人体淋巴分离液的离心管，并进行离心；
11.6)将步骤5)离心后的外周血样上方的液体去除，取下部的细胞样；
12.7)将步骤6)的细胞样加入生理盐水或磷酸盐缓冲液后吹匀后进行离心；
13.8)将步骤7)离心后的细胞样的上清去除，下部细胞样再加入生理盐水或磷酸盐缓冲液清洗后离心；
14.9)将步骤8)离心后的细胞样加入培养液后吹匀后，转入175培养瓶内；对细胞进行计数后补充液加入重组人白介素2、人源化抗体cd3单克隆抗体、ifn
‑
r干扰素；
15.10)将步骤9)细胞样送入培养箱进行培养，每两天观察细胞生长情况，根据细胞生长情况计数补液扩增，即可制得再生抗体自体血液免疫细胞。
16.进一步地，步骤2)离心机的控制参数为：2500r，5min，
↑8↓
2；步骤5)离心机的控制参数为：2500r，25min，
↑8↓
2；步骤7)离心机的控制参数为：2000r，5min，
↑8↓
6；步骤8)离心机
的控制参数为：1800r，5min，
↑8↓
6。
17.进一步地，步骤8)和步骤9)中所补充的液体为培养基kbm
‑
581或x
‑
vivo15、aly
‑
505n的其中一种。
18.进一步地，上述所制备的临床再生抗体自体血液免疫细胞应用于制备修复亚健康疾病药物，所用药物包括有效量的再生抗体自体血液免疫细胞，所述药物的受众为制备再生抗体自体血液免疫细胞外周血原料的采集患者。
19.本发明与现有技术相比的优点在于：
20.本发明制备的再生抗体血液免疫细胞可回输至患者自身，可针对亚健康疾病进行有效的修复，且本发明的再生抗体血液免疫细胞无需进行配型，无排异风险，简单易行，安全可靠。
附图说明
21.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
22.图1：实施1所培养后细胞表型图。
具体实施方式
23.下面结合实施例对本发明一种治疗咽炎的配方作进一步的详细说明。
24.实施例1：一种临床再生抗体自体血液免疫细胞的制备方法，其制备步骤如下：
25.1)在疾控达标的无菌室采集患者自体外周血样本50ml左右：采用含有肝素钠的抗凝管采集外周血；
26.2)将步骤1)采集的外周血转入离心管中并进行离心分离细胞；
27.此步骤离心机的控制参数为：2500r，5min，
↑8↓
2。
28.3)将步骤2)离心后的血清转入另外的离心管内；接下来包括步骤2)至步骤10)的操作所用仪器设备等均为无菌，应在生物柜内完成。
29.4)将步骤3)血清转出后的外周血样加入等量的磷酸盐缓冲液稀释；
30.5)将步骤4)稀释后的外周血样缓慢地悬入另外加有人体淋巴分离液的离心管，并进行离心；
31.此步骤离心机的控制参数为：2500r，25min，
↑8↓
2。
32.6)将步骤5)离心后的外周血样上方的液体去除，取下部的细胞样；
33.在取细胞样时，即是取出中间灰白色的白膜层,即单个核细胞，通过吸取取出单个核细胞是一定要尽量吸尽，又要避免吸取过多的分层液或血浆，以免混入其他细胞成分。
34.7)将步骤6)的细胞样加入生理盐水或磷酸盐缓冲液后吹匀后进行离心；
35.此步骤离心机的控制参数为：2000r，5min，
↑8↓
6。
36.8)将步骤7)离心后的细胞样的上清去除，下部细胞样再加入生理盐水或磷酸盐缓冲液清洗后离心；
37.此步骤离心机的控制参数为：2000r，5min，
↑8↓
6。
38.9)将步骤8)离心后的细胞样加入培养液后吹匀后，转入175培养瓶内；对细胞进行计数后补充液加入重组人白介素2、人源化抗体cd3单克隆抗体、ifn
‑
r干扰素；
39.10)将步骤9)细胞样送入培养箱进行培养，每两天观察细胞生长情况，根据细胞生长情况计数补液扩增。
40.对步骤10)培养的细胞进行表征，其细胞表型图，见图1。
41.本发明所制备的临床再生抗体自体血液免疫细胞可通过静脉回输至患者自身体内，不仅可有效的对亚健康疾病进行修复，且不会产生排异反应，安全可靠。
42.以上对本发明及其实施方式进行了描述，这种描述没有限制性。总而言之如果本领域的普通技术人员受其启示，在不脱离本发明创造宗旨的情况下，不经创造性的设计出与该技术方案相似的结构方式及实施例，均应属于本发明的保护范围。