1.一种产5-酮果糖的氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌,其特征在于,所述氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌是通过将含有果糖脱氢酶基因fdh的重组载体转化氧化葡萄糖酸杆菌构建而成,所述果糖脱氢酶基因fdh的核苷酸序列如seqidno.1所示,所述氧化葡萄糖酸杆菌的保藏号为dsm2003。
2.根据权利要求1所述的产5-酮果糖的氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌,其特征在于,所述含有果糖脱氢酶基因fdh的重组载体的构建所采用的是pbbr1mcs5质粒。
3.根据权利要求1所述的产5-酮果糖的氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌,其特征在于,所述含有果糖脱氢酶基因fdh的重组载体的构建所采用的是tufb启动子。
4.一种根据权利要求1-3中任意一项所述的产5-酮果糖的氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)以保藏号为cgmcc1.15609日本葡萄糖酸杆菌的基因组dna为模板,pcr扩增获得如seqidno.1所示的果糖脱氢酶基因fdh;
2)将质粒pbbr1mcs5以saci、xbai酶切,然后与同样经过saci、xbai酶切的tufb启动子连接,得到重组表达质粒pbbr1mcs5-ptufb;
3)将所述扩增获得的果糖脱氢酶基因fdh以bamhi、ecori酶切,然后与同样经bamhi、ecori酶切的pbbr1mcs5-ptufb载体连接,得到重组表达质粒pbbr1mcs5-ptufb-fdh;
4)将所述重组表达质粒pbbr1mcs5-ptufb-fdh三亲本转化至保藏号为dsm2003的氧化葡萄糖酸杆菌中,获得所述氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌株。
5.一种采用根据权利要求1-3中任意一项所述的产5-酮果糖的氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌生产5-酮果糖的方法,其特征在于,所述方法包括:微生物发酵法和微生物细胞转化法。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,采用微生物发酵法时,将所述氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌按8%~12%的比例转接于发酵罐中,分批次投入底物果糖,使最终果糖的总投料量为350~450g/l,温度为28~32℃,压缩空气进气量恒定在7~9l/min,溶氧do设定为28~32%,通过所述氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌的发酵实现5-酮果糖的制备。
7.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,采用微生物细胞转化法时,包括以下步骤:a:以所述氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌为菌种制备静息细胞;b:制备含有果糖的转化液;c:向所述含有果糖的转化液中加入步骤a中制备的所述静息细胞进行转化,所述静息细胞的加入量为20~40g/l,反应过程中再补加一定量的果糖,使所述果糖的总投料量为550~600g/l,即通过所述氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌的转化实现5-酮果糖的制备。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,步骤a中,所述静息细胞的制备是将所述菌种通过发酵培养至对数末期,冷冻离心,pbs缓冲液洗涤两次,收集菌体,从而获得去除营养成分的静息细胞。
9.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,步骤c中,所述转化的温度为28~32℃,时间为58~62h。
10.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述果糖的总投料量为560~580g/l,所述静息细胞的加入量为28~32g/l。