本发明涉及药物化学领域；具体地说，本发明涉及一类新型含有三环杂芳基的衍生物，其合成方法及其作为一种sos1抑制剂在制备药物用于治疗肿瘤等相关多种疾病中的应用。
背景技术：
ras(ratsarcomaviraloncogenehomolog)蛋白在癌症发生发展中起着重要的作用，20％-30％的人类肿瘤中都存在ras突变，尤其在肺癌，结肠癌和胰腺癌等癌症种类中，ras突变是促进癌症发生的关键因子。目前已知的ras基因有三种，hras、nras和kras，其中kras基因编码两种异构体蛋白，分别为kras-4a和kras4b。ras起着分子开关的作用，通过结合gtp(guanosinetriphosphate)或gdp(guanosinediphosphate)，在细胞中分别表现出激活(开)或失活(关)的状态，以此调控下游的信号通路。ras家族蛋白在gtp结合域是高度保守的，c端差异比较大。ras蛋白本身有比较微弱的gtp酶水解功能和较慢的核苷酸交换速率，结合gtp酶激活蛋白(gtpaseactivatingproteins,gap),如nf1、rasa1-3等，可以增强ras蛋白的gtp水解功能。sos1(sonofsevenless1)是一类鸟嘌呤核苷酸交换因子(guaninenucleotideexchangefactors，gef)。sos1和ras结合，促进ras蛋白释放gdp，结合gtp。在gtp结合状态下，ras蛋白处于激活状态，招募下游效应蛋白，激活raf-mek-erk和pi3k-akt-mtor等信号通路，从而促进细胞的生长、增殖、存活、代谢以及血管生成等。
正常生理状态下，ras的活性受上游生长因子信号的调控，如受体酪氨酸激酶、整合素、g蛋白偶联受体等。当ras发生突变时，其固有或gap诱导的gtp酶活性受到抑制，ras一直处于gtp结合状态，分子开关持续开放，进而导致下游的多种信号通路处于持续性激活状态，细胞异常增殖和生长。kras突变(g12、g13、q61、和a146等)发生频率比较高，多见于肺癌、结肠癌和胰腺癌等，hras突变(g12、g13和q61等)和nras突变(g12、g13、q61、和a146等)频率相对较低，主要发生于黑色素瘤、白血病和甲状腺癌等癌症种类中。另外，ras蛋白的异常激活(如基因突变、扩增和过表达等)和一些抗肿瘤药物的耐药性也紧密相关，如egfr单抗和egfr小分子抑制剂等。因此，ras相关信号通路成为重要的抗肿瘤靶标。
ras家族的鸟嘌呤核苷酸交换因子主要有三类，sos蛋白(sos1和sos2)、ras鸟嘌呤核苷酸释放蛋白(ras-grp1-4)和ras鸟嘌呤核苷酸释放因子(ras-grf1和ras-grf2)。sos在人体各组织中广泛表达，受生长因子的招募和激活。ras-gpr主要在神经系统中表达，参与钙离子依赖性的ras激活。grf主要在造血细胞中表达，参与非受体酪氨酸激酶信号通路。参与癌症相关的信号通路的鸟嘌呤核苷酸交换因子主要为sos蛋白，尤其是sos1，降低sos1的表达可以显著抑制kras突变的癌细胞的增殖和存活。除此之外，sos1参与激活的信号通路在其他突变类型的癌症中也起着重要的作用。sos1可以和接头蛋白grb2相互作用，形成sos1/grb2复合体，结合到活化的受体酪氨酸激酶上(如egfr、her2、erbb4、trka、trkb、trkc、ret和axl等)。sos1也可以被招募到磷酸化的细胞表面受体上，如t细胞受体、b细胞受体和单核细胞集落刺激因子受体等。sos1在细胞膜上的定位使得sos1可以更好的促进ras家族蛋白活化，激活下游信号通路。sos1还参与了其他gtp水解酶的活化，如rac1等。rac1也和多种人类癌症和其他疾病的发病机制有关。另外，sos1突变存在于肺癌、胚胎性横纹肌肉瘤和皮肤颗粒细胞肿瘤等癌症类型中，sos1的过表达存在于膀胱癌和前列腺癌等癌症类型中。除癌症以外，遗传性的sos1突变也和ras病变的发病机制相关，包括努南氏综合征、心-面-皮肤综合征以及一型遗传性牙龈纤维瘤等。
基于以上背景，我们开发了一类结构新颖的sos1抑制剂。抑制剂结合到sos1的催化位点上，阻断sos1和ras蛋白的相互结合，抑制sos1对ras蛋白的活化。化合物应用范围包括多种癌症类型，如ras家族信号通路改变(基因突变、扩增和过表达等)的癌症，受体酪氨酸激酶异常激活癌症类型和sos1异常活化的癌症种类等。另外，基于sos1在rac1激活中发挥的重要作用，依赖rac1的癌症类型对此类化合物也会比较敏感。其他和sos1相关的疾病如上述提到的努南氏综合征、心-面-皮肤综合征以及一型遗传性牙龈纤维瘤等也可以从此类抑制剂中受益。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一类新型的sos1抑制剂，如下式(i)所示结构的化合物，或其光学异构体，药学上可接受的盐，前药，氘代衍生物，水合物，溶剂合物：
式(i)中：
r1、r2、和r3各自独立地选自下组：氢、氘、卤素、c1-6烷基、c1-6卤代烷基、c2-6烯基、c2-6卤代烯基、c2-6炔基、c2-6卤代炔基、c1-6烷氧基、c1-4卤代烷氧基、c1-4卤代烷氧基c1-4烷基、c1-4烷氧基c1-4卤代烷基、c3-6环烷基c1-4卤代烷基、或c3-6环烷基-o-c1-4卤代烷基、nriri；其中，所述的环烷基可任选地被选自下组的取代基取代：卤素、c1-4烷基、c1-4卤代烷基、c1-4烷氧基、或羟基；各个ri各自独立为氢、或c1-4烷基；
r4选自下组：氢、c1-4烷基、c1-4卤代烷基、c1-4烷氧基、c1-4卤代烷氧基、c2-4烯基、c2-4卤代烯基、c2-4炔基、c3-6环烷基、c3-6环烷基c1-4烷基、或4-至8-元杂环基；所述的环烷基或杂环基任选地被一个或多个选自下组的取代基取代：卤素、c1-4烷基、c1-4卤代烷基、c1-4烷氧基、或“＝m”，其中m选自o或crjrk；其中，rj和rk各自独立地选自下组：氢、卤素、或c1-4烷基；
z选自下组：o、nh、nch3；
u选自下组：键、crerf、nrg；其中，re和rf各自独立地选自氢或c1-4烷基；或re和rf与其相连的碳原子共同形成c＝o；rg选自氢、c1-4烷基、c1-4卤代烷基、c3-6环烷基、4-至8-元杂环基、芳基、或杂芳基、c(o)rt；
a选自下组：氢、c1-4烷基、c1-4卤代烷基、饱和或不饱和c3-10环烷基、或饱和或不饱和4-至12-元的杂环基；所述的环烷基或杂环基可任选地被0-4个r5取代；当u为键，a为饱和或不饱和含有n原子的4-至12-元的杂环基时，a可任选地与式(i)结构其它部分通过n-n键连接；
各个r5各自独立地选自下组：氢、卤素、c1-4烷基、c1-4卤代烷基、c2-4烯基、c2-4卤代烯基、c2-4炔基、c2-4卤代炔基、c3-6环烷基、4-至8-元杂环基、芳基、杂芳基、cn、no2、orh、srh、nrhrh、c(o)rt、c(o)orh、oc(o)rt、c(o)nrhrh、nrhc(o)rt、s(o)2rt、nrhs(o)2rt、或nrhs(o)2nrhrh；所述的烷基可任选地被选自下组的取代基取代：cn、no2、orh、srh、nrhrh、c(o)rt、c(o)orh、oc(o)rt、c(o)nrhrh、nrhc(o)rt、s(o)2rt、nrhs(o)2rt、或nrhs(o)2nrhrh；其中，各个rh各自独立为氢、或c1-4烷基；或两个rh与其连接的氮原子一起形成3-至-8元杂环基，此杂环基含有1或2个n原子以及0或1个选自o、s的杂原子；rt为c1-4烷基、c2-4烯基、c2-4炔基、c3-8环烷基、4-至8-元杂环基、芳基、或杂芳基；
或两个r5与其相连的碳原子共同形成c＝m，其中，m选自o或crarb；其中，ra和rb各自独立地选自下组：氢、氘、卤素、或c1-4烷基；其中，所述的烷基可任选地被0到多个选自下组的基团取代：卤素、c1-4烷基、c1-4卤代烷基、c1-4烷氧基、c1-4卤代烷氧基、nrcrd、c3-6环烷基、3-至8-元杂环基、芳基、或杂芳基；或ra和rb与其连接的碳原子一起形成3-至-6元的环烷基，或4-至8-元的杂环基，此杂环基含有1或2个选自n、o、s的杂原子；其中，rc和rd各自独立地选自下组：氢、c1-4烷基、c3-6环烷基、4-至8-元杂环基；
其中，各个上述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基任选地且各自独立地被1-3个各自独立地选自下组的取代基取代：卤素、c1-4烷基、c1-4卤代烷基、c2-4烯基、c2-4炔基、c3-8环烷基、3-至8-元杂环基、芳基、杂芳基、cn、no2、orh、srh、nrhrh、c(o)rt、c(o)orh、c(o)nrhrh、nrhc(o)rt、nrhs(o)2rt、或s(o)2rt，前提条件是所形成的化学结构是稳定的和有意义的；其中，rh和rt的定义如上所述；
除非特别说明，上述的芳基为含有6-12个碳原子的芳香基团；杂芳基为5-至15-元(优选为5-至12-元)杂芳香基团；环状结构为饱和的或不饱和的、含杂原子或不含杂原子的环状基团。
所述的式(i)化合物选自下组：
具体实施方式
本发明人经过长期而深入的研究，意外地发现了一类结构新颖的含有三环芳基化合物的sos1抑制剂，以及它们的制备方法和应用。本发明化合物可以应用于与所述激酶的活性相关的各种疾病的治疗。基于上述发现，发明人完成了本发明。
术语
除特别说明之处，本文中提到的“或”具有与“和/或”相同的意义(指“或”以及“和”)。
除特别说明之处，本发明的所有化合物之中，各手性碳原子(手性中心)可以任选地为r构型或s构型，或r构型和s构型的混合物。
如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“烷基”指只含碳原子的直链(即，无支链)或支链饱和烃基，或直链和支链组合的基团。当烷基前具有碳原子数限定(如c1-10)时，指所述的烷基含有1-10个碳原子。例如，c1-8烷基指含有1-8个碳原子的烷基，包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、或类似基团。
如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“烯基”是指直链或支链，具有至少一个碳-碳双键的碳链基团。烯基可以是取代的或未取代的。当烯基前具有碳原子数限定(如c2-8)时，指所述的烯基含有2-8个碳原子。例如，c2-8烯基指含有2-8个碳原子烯基，包括乙烯基、丙烯基、1,2-丁烯基、2,3-丁烯基、丁二烯基、或类似基团。
如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“炔基”是指具有至少一个碳-碳三键的脂肪族碳氢基团。所述的炔基可以是直链或支链的，或其组合。当炔基前具有碳原子数限定(如c2-8炔基)时，指所述的炔基含有2-8个碳原子。例如，术语“c2-8炔基”指具有2-8个碳原子的直链或支链炔基，包括乙炔基、丙炔基、异丙炔基、丁炔基、异丁炔基、仲丁炔基、叔丁炔基、或类似基团。
如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“环烷基”指具有饱和的或部分不饱和的单元环，二环或多环(稠环、桥环或螺环)环系基团。当某个环烷基前具有碳原子数限定(如c3-10)时，指所述的环烷基含有3-10个碳原子。在一些优选实施例中，术语“c3-8环烷基”指具有3-8个碳原子的饱和或部分饱和的单环或二环烷基，包括环丙基、环丁基、环戊基、环庚基、或类似基团。“螺环烷基”指单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的二环或多环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。“稠环烷基”指系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳二环或多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。“桥环烷基”指任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。所述环烷基所含原子全部为碳原子。如下是环烷基的一些例子，本发明并不仅局限下述的环烷基。
除非有相反陈述，否则下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义。“芳基”指具有共轭的π电子体系的全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，例如苯基和萘基。所述芳基环可以稠合于其它环状基团(包括饱和和不饱和环)，但不能含有杂原子如氮，氧，或硫，同时连接母体的点必须在具有共轭的π电子体系的环上的碳原子上。芳基可以是取代的或未取代的。如下是芳基的一些例子，本发明并不仅局限下述的芳基。
“杂芳基”指包含一个到多个杂原子(任选自氮、氧和硫)的具有芳香性的单环或多环基团，或者包含杂环基(含一个到多个杂原子任选自氮、氧和硫)与芳基稠合形成的多环基团，且连接位点位于芳基上。杂芳基可以是任选取代的或未取代的。如下是杂芳基的一些例子，本发明并不仅局限下述的杂芳基。
“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其中一个或多个环原子选自氮、氧或硫，其余环原子为碳。单环杂环基的非限制性实施例包含吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基。多环杂环基指包括螺环、稠环和桥环的杂环基。“螺环杂环基”指系统中的每个环与体系中的其他环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子选自氮、氧或硫，其余环原子为碳。“稠环杂环基”指系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，而且其中一个或多个环原子选自氮、氧或硫，其余环原子为碳。“桥环杂环基”指任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，而且其中一个或多个环原子选自氮、氧或硫，其余环原子为碳。如果杂环基里同时有饱和环和芳环存在(比如说饱和环和芳环稠合在一起)，连接到母体的点一定是在饱和的环上。注：当连接到母体的点在芳环上时，称为杂芳基，不称为杂环基。如下是杂环基的一些例子，本发明并不仅局限下述的杂环基。
如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“卤素”指f、cl、br和i。
如本文所用，术语“取代”(在有或无“任意地”修饰时)指特定的基团上的一个或多个氢原子被特定的取代基所取代。特定的取代基为在前文中相应描述的取代基，或各实施例中所出现的取代基。除非特别说明，某个任意取代的基团可以在该基团的任何可取代的位点上具有一个选自特定组的取代基，所述的取代基在各个位置上可以是相同或不同的。环状取代基，例如杂环基，可以与另一个环相连，例如环烷基，从而形成螺二环系，即两个环具有一个共用碳原子。本领域技术人员应理解，本发明所预期的取代基的组合是那些稳定的或化学上可实现的组合。所述取代基例如(但并不限于)：c1-8烷基、c2-8烯基、c2-8炔基、c3-8环烷基、3-至12-元杂环基，芳基、杂芳基、卤素、羟基、羧基(-cooh)、c1-8醛基、c2-10酰基、c2-10酯基、氨基。
为了方便以及符合常规理解，术语“任意取代”或“任选取代”只适用于能够被取代基所取代的位点，而不包括那些化学上不能实现的取代。
如本文所用，除非特别说明，术语“药学上可接受的盐”指适合与对象(例如，人)的组织接触，而不会产生不适度的副作用的盐。在一些实施例中，本发明的某一化合物的药学上可接受的盐包括具有酸性基团的本发明的化合物的盐(例如，钾盐，钠盐，镁盐，钙盐)或具有碱性基团的本发明的化合物的盐(例如，硫酸盐，盐酸盐，磷酸盐，硝酸盐，碳酸盐)。
用途：
本发明提供了一类式(i)化合物，或它们的氘代衍生物、它们的盐、异构体(对映异构体或非对映异构体，如果存在的情况下)、水合物、可药用载体或赋形剂用于抑制sos1的用途。
本发明化合物可用作一种sos1抑制剂。
本发明是sos1的单一抑制剂，通过调节sos1的酶活性达到预防、缓解或治愈疾病的目的。所指疾病包括非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、胰腺癌、结肠癌、甲状腺癌、胚胎性横纹肌肉瘤、皮肤颗粒细胞肿瘤、黑色素瘤、肝癌、直肠癌、膀胱癌、咽喉癌、乳腺癌、前列腺癌、神经胶质细胞瘤、卵巢癌、头颈部鳞癌、宫颈癌、食管癌、肾癌、皮肤癌、淋巴瘤、胃癌、急性髓系白血病、骨髓纤维化、b细胞淋巴瘤、单核细胞白血病、脾大性红细胞增多、嗜酸性白细胞增多综合征多发性、骨髓癌等多种实体瘤和血液瘤，以及和sos1遗传性突变相关的各类疾病，包括但不限于一型神经纤维瘤、努南氏综合征、多发雀斑样恁型努南氏综合征、毛细血管畸形—动静脉畸形综合征、心-面-皮肤综合征、克斯提洛氏综合征、雷吉士综合征以及一型遗传性牙龈纤维瘤等。
可将本发明化合物及其氘代衍生物，以及药学上可接受的盐或其异构体(如果存在的情况下)或其水合物和/或组合物与药学上可接受的赋形剂或载体配制在一起，得到的组合物可在体内给予哺乳动物，例如男人、妇女和动物，用于治疗病症、症状和疾病。组合物可以是：片剂、丸剂、混悬剂、溶液剂、乳剂、胶囊、气雾剂、无菌注射液。无菌粉末等。一些实施例中，药学上可接受的赋形剂包括微晶纤维素、乳糖、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸氢钙、甘露醇、羟丙基-β-环糊精、β-环糊精(增加)、甘氨酸、崩解剂(如淀粉、交联羧甲基纤维素钠、复合硅酸盐和高分子聚乙二醇)，造粒粘合剂(如聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、明胶和阿拉伯胶)和润滑剂(如硬脂酸镁、甘油和滑石粉)。在优选的实施方式中，所述药物组合物是适于口服的剂型，包括但不限于片剂、溶液剂、混悬液、胶囊剂、颗粒剂、粉剂。向患者施用本发明化合物或药物组合物的量不固定，通常按药用有效量给药。同时，实际给予的化合物的量可由医师根据实际情况决定，包括治疗的病症、选择的给药途径、给予的实际化合物、患者的个体情况等。本发明化合物的剂量取决于治疗的具体用途、给药方式、患者状态、医师判断。本发明化合物在药物组合物中的比例或浓度取决于多种因素，包括剂量、理化性质、给药途径等。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。
化合物的通用合成方法
本发明的式(i)化合物可以通过以下方法制备得到：
反应式1:
在惰性溶剂中，化合物i-a在碱性条件下水解得到i-b，化合物i-b与化合物i-c采用合适的缩合方法得到化合物i-d，接下来在酸性条件下关环得到目标化合物i。
反应式1中的r1、r2、r3、r4、u和a与权利要求1中的表述相同。
本发明的式(viii)化合物可以通过以下方法制备得到：
反应式2:
在惰性溶剂中，化合物viii-a与丙二酸二乙酯在碱性条件下关环得到viii-b，化合物viii-b在三氯氧磷和n,n-二甲基甲酰胺的混合物中经历取代和酰化反应得到化合物viii-c，用乙二醇保护醛基得到化合物viii-d，接下来与丙二酸二甲酯发生取代反应得到化合物viii-e，加热脱去一个羧酸甲酯得到化合物viii-f，与取代胺发生取代反应得到中间体viii-g，中间体viii-g在碱性条件下水解得到化合物viii-h，接下来经过缩合反应和关环反应得到目标化合物viii。
反应式2中的r1、r2、r3、r10、t、q、u和a与权利要求10中的表述相同。
上述各式中，各基团的定义如上文中所述。各步骤的试剂和条件可以选用本领域进行该类制备方法常规的试剂或条件，在本发明的化合物结构公开后，上述选择可以由本领域技术人员根据本领域知识进行。
该方法的条件，例如反应物、溶剂、碱、酸、所用化合物的量、反应温度、反应所需时间等不限于下面的解释。本发明化合物还可以任选将在本说明书中描述的或本领域已知的各种合成方法组合起来而方便的制得，这样的组合可由本发明所属领域的技术人员容易地进行。
药物组合物和施用方法
由于本发明化合物具有优异的对一系列蛋白激酶的抑制活性，因此本发明化合物及其各种晶型，药学上可接受的无机或有机盐，水合物或溶剂合物，以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于治疗、预防以及缓解与sos1活性或表达量相关的疾病。
本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物或其药理上可接受的盐及药理上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg本发明化合物/剂，更佳地，含有5-200mg本发明化合物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。
“药学上可以接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如
本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。
固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。
除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。
除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。
本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。
使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选5～500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
本发明的主要优点包括：
1.提供了一种如式i所示的化合物。
2.提供了一种结构新颖的sos1抑制剂，及其制备和应用，所述的抑制剂在极低浓度下即可抑制sos1的活性。
3.提供了一类治疗与sos1活性相关疾病的药物组合物。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
实施例1:化合物1的制备
化合物1a采用专利wo2019122129中的方法合成。
将化合物1a(14mg,0.03mmol)溶于乙腈(1.5ml)和水(3滴)的混合液中，然后加入氢氧化钠(6mg,0.15mmol)。反应混合液在室温下搅拌过夜。待反应完毕后，反应混合液直接经无水硫酸钠干燥后过滤，得到含有化合物1b的滤液。所得滤液直接用于下一步反应。
向含有化合物1b(理论质量：13mg,0.03mmol)的乙腈(1.5ml)混合液中依次加入化合物1c(4mg,0.04mmol)、n,n,n′,n′-四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(19mg,0.05mmol)和二异丙基乙基胺(13mg,0.09mmol)。反应混合液在氮气保护下室温搅拌30分钟。待反应完毕，反应液经减压浓缩得到粗品。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝20:1)得到无色油状化合物1d(12mg,收率71％)。msm/z494.5[m+h]+。
将化合物1d(12mg,0.02mmol)溶于异丙醇(2ml)中，再加入浓盐酸(2滴)。反应混合液在60摄氏度下搅拌3小时。待反应完毕后，反应液冷却至室温。向反应液中加入适量氨水调节ph至7左右，然后混合液减压浓缩。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷：甲醇＝15:1,2％氨水)得到淡黄色固体化合物1(5mg,收率49％)。1hnmr(500mhz,cd3od)δ9.22(s,1h),7.60(t,j＝7.0hz,1h),7.50(t,j＝7.0hz,1h),7.26(t,j＝7.7hz,1h),7.00(t,j＝54.8hz,1h),6.35(s,1h),5.86-5.75(m,1h),3.92-3.68(m,2h),3.24-2.98(m,2h),2.29(s,3h),1.91-1.70(m,4h),1.65(d,j＝7.0hz,3h),1.61-1.38(m,2h)ppm。msm/z432.6[m+h]+。
实施例2:化合物2的制备
将叔丁醇钾(1.10g,9.74mmol)溶于dmf(10ml)中，冷却至-50～-40℃，氮气氛围下滴加化合物2a(1.00g,5.41mmol)和化合物2b(940mg,4.87mmol)的dmf(10ml)混合溶液，该温度下继续搅拌0.5小时。将反应混合物升温至0℃，加入饱和氯化铵溶液(5ml)，6m盐酸(10ml)，室温搅拌3小时。tlc监测反应完毕。混合物经乙酸乙酯萃取(3x50ml)。合并的有机相经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)得到白色固体化合物2c(384mg,收率32％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ4.79(br,1h),4.23(br,1h),3.13-2.99(m,2h),2.60-2.48(m,2h),1.44(s,9h)ppm。19fnmr(470mhz,cdcl3)δ-95.03(s)ppm。
将化合物2c(50mg,0.23mmol)溶于二氯甲烷(3ml)中，再加入盐酸二氧六环溶液(4m,1ml)。反应混合液在室温下搅拌过夜。待反应完毕后，将反应混合物过滤，滤饼即为白色固体产物2d(14mg,收率40％)直接用于下一步反应。
采用实施例1中的方法由化合物1a(22mg,0.05mmol)得到含有化合物1b的反应液直接用于下一步反应。
采用实施例2中的方法由上述化合物1b反应液、化合物2d(16mg,0.10mmol)、n,n,n′,n′-四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(29mg,0.08mmol)和二异丙基乙基胺(20mg,0.15mmol)得白色固体化合物2e(9mg,收率34％)。msm/z513.4[m+h]+。
采用实施例1中的方法由化合物2e(9mg,0.02mmol)得淡黄色固体化合物2(7mg,收率88％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ9.36(s,1h),9.04(s,1h),7.53(t,j＝7.0hz,1h),7.41(t,j＝7.0hz,1h),7.08(t,j＝7.7hz,1h),6.85(t,j＝55.0hz,1h),6.40(s,1h),5.88-5.84(m,1h),5.51-5.45(m,1h),3.23-3.06(m,2h),3.06-2.94(m,2h),2.39(s,3h),1.60(d,j＝7.0hz,3h)ppm。msm/z451.6[m+h]+。
实施例3:化合物3的制备
采用实施例2中的方法由化合物3a(300mg,1.62mmol)、化合物2b(281mg,1.49mmol)和叔丁醇钾(327mg,2.92mmol)得到白色固体化合物3b(134mg,收率38％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ5.01(br,1h),4.54(d,j＝24.5hz,1h),1.44(s,9h),0.98-0.90(m,2h)ppm。19fnmr(470mhz,cdcl3)δ(-85.98)-(-86.11)(m,1f),-86.68(d,j＝40.0hz,1f)ppm。
采用实施例2中的方法由化合物3b(134mg,0.05mmol)得到白色固体化合物3c(60mg,收率63％)。
采用实施例1中的方法由化合物1a(24mg,0.06mmol)得到含有化合物1b的反应液直接用于下一步反应。
采用实施例1中的方法由化合物1b反应液、化合物3c(19mg,0.12mmol)、n,n,n′,n′-四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(34mg,0.09mmol)和二异丙基乙基胺(23mg,0.18mmol)得白色固体化合物3d(8mg,收率34％)。msm/z513.4[m+h]+。
采用实施例1中的方法由化合物3d(8mg,0.02mmol)得淡黄色固体化合物3(4mg,收率57％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.76(s,1h),7.60(t,j＝7.0hz,1h),7.49(t,j＝7.0hz,1h),7.19(t,j＝7.7hz,1h),6.89(t,j＝55.0hz,1h),6.46(s,1h),5.84(dd,j＝13.9,6.9hz,1h),4.95(dd,j＝25.0,1.0hz,1h),2.39(s,3h),1.71(d,j＝7.0hz,3h),1.48-1.32(m,4h)ppm。msm/z451.6[m+h]+。
实施例4:化合物4的制备
采用实施例2中的方法由化合物4a(1.00g,4.69mmol)、化合物2b(815mg,4.22mmol)、叔丁醇钾(946mg,8.44mmol)得到白色固体化合物4b(878mg,收率76％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ4.42(br,1h),3.53(br,1h),2.49-2.37(m,2h),2.05-1.96(m,2h),1.94-1.84(m,2h),1.45(s,9h),1.25-1.12(m,2h)ppm。
采用实施例2中的方法由化合物4b(200mg,0.05mmol)得到白色固体化合物4c(92mg,收率62％)。
采用实施例1中的方法由化合物1a(18mg,0.04mmol)得到含有化合物1b的反应液直接用于下一步反应。
采用实施例1中的方法由化合物1b反应液、化合物4c(15mg,0.08mmol)、n,n,n′,n′-四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(23mg,0.06mmol)和二异丙基乙基胺(16mg,0.12mmol)得白色固体化合物4d(8mg,收率34％)。msm/z541.7[m+h]+。
采用实施例1中的方法由化合物4d(8mg,0.015mmol)得淡黄色固体化合物4(2mg,收率30％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.99(s,1h),8.43(s,1h),7.57(t,j＝7.0hz,1h),7.44(t,j＝7.0hz,1h),7.12(t,j＝7.7hz,1h),6.87(t,j＝55.0hz,1h),6.45(s,1h),5.85(q,j＝7.0hz,1h),5.19-5.08(m,1h),2.56-2.43(m,2h),2.39(s,3h),2.04-1.91(m,4h),1.69-1.64(m,2h),1.64(d,j＝7.0hz,3h)ppm。msm/z479.4[m+h]+。
实施例5:化合物5的制备
采用实施例2中的方法由化合物5a(100mg,0.47mmol)、化合物2b(82mg,0.42mmol)、叔丁醇钾(95mg,0.85mmol)得到白色固体化合物5b(62mg,收率53％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ4.72(br,1h),4.43(br,1h),2.32-2.22(m,1h),2.00-1.90(m,1h),1.86-1.77(m,1h),1.75-1.66(m,1h),1.66-1.51(m,3h),1.45(s,9h),1.41-1.31(m,1h)ppm。
将化合物5b(62mg,0.25mmol)溶于二氯甲烷(3ml)中，再加入盐酸二氧六环溶液(4m,1ml)。反应混合液在室温下搅拌过夜。待反应完毕后，将反应混合物减压蒸馏得粗品白色固体产物5c(46mg,收率100％)直接用于下一步反应。
采用实施例1中的方法由化合物1a(21mg,0.05mmol)得到含有化合物1b的反应液直接用于下一步反应。
采用实施例1中的方法由化合物1b反应液、化合物5c(18mg,0.10mmol)、n,n,n′,n′-四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(30mg,0.08mmol)和二异丙基乙基胺(19mg,0.15mmol)得白色固体化合物5d(11mg,收率41％)。msm/z541.7[m+h]+。
采用实施例1中的方法由化合物5d(11mg,0.02mmol)得淡黄色固体化合物5(8mg,收率82％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.88(br,1h),7.65-7.55(m,1h),7.50(t,j＝7.0hz,1h),7.16(t,j＝7.6hz,1h),6.88(t,j＝55.0hz,1h),6.48(s,1h),5.90-5.79(m,1h),5.66-5.56(m,1h),2.53-2.44(m,1h),2.39(d,j＝7.0hz,3h),2.18-2.03(m,2h),1.98-1.89(m,1h),1.82-1.73(m,1h),1.72-1.66(m,1h),1.67(t,j＝7.0hz,3h),1.58-1.49(m,1h),1.41-1.32(m,1h)ppm。msm/z479.7[m+h]+。
实施例6:化合物6的制备
采用实施例2中的方法由化合物6a(100mg,0.50mmol)、化合物2b(87mg,0.45mmol)、叔丁醇钾(101mg,0.90mmol)得到白色固体化合物6b(75mg，收率64％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ4.49(br,1h),4.04(br,1h),2.71-2.60(m,1h),2.41-2.25(m,2h),2.16-2.06(m,1h),2.04-1.96(m,1h),1.64-1.55(m,1h),1.45(s,9h)ppm。
将化合物6b(75mg,0.32mmol)溶于二氯甲烷(3ml)中，再加入盐酸二氧六环溶液(4m,1ml)。反应混合液在室温下搅拌过夜。待反应完毕后，将反应混合物减压蒸馏得粗品白色固体产物6c(54mg,收率100％)。
采用实施例1中的方法由化合物1a(27mg,0.06mmol)得到含有化合物1b的反应液直接用于下一步反应。
采用实施例1中的方法由化合物1b反应液、化合物6c(20mg,0.12mmol)、n,n,n′,n′-四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(34mg,0.09mmol)和二异丙基乙基胺(23mg,0.18mmol)得白色固体化合物6d(14mg,收率42％)。msm/z527.7[m+h]+。
采用实施例1中的方法由化合物6d(14mg,0.03mmol)得淡黄色固体化合物6(10mg,收率81％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ9.03(br,1h),8.31(br,1h),7.65-7.53(m,1h),7.51-7.42(m,1h),7.16-7.11(m,1h),6.87(dt,j＝55.0,5.7hz,1h),6.46(s,1h),5.91-5.83(m,1h),5.48-5.40(m,1h),2.90-2.79(m,1h),2.56-2.45(m,1h),2.41(d,j＝1.5hz,3h),2.38-2.29(m,2h),2.26-2.14(m,1h),2.14-1.97(m,1h),1.66(d,j＝7.0hz,3h)ppm。msm/z465.6[m+h]+。
实施例7:化合物7的制备
将化合物7a(550mg,2.5mmol)溶于甲苯(2ml)置于封管中，加入三苯基膦(655mg,2.5mmol)，升温至80℃搅拌16小时。将反应混合液冷却至室温，过滤，并用少量石油醚洗涤固体。将所得滤饼干燥得到粗产品7b(900mg)直接用于下一步反应。
将粗品7b(486mg,1.0mmol)置于四氢呋喃(5ml)中，冷却至0℃，缓慢滴加n-buli(2.5minhexane,0.4ml)溶液，待固体全部溶解后滴加化合物7c(213mg,1.0mmol)的四氢呋喃(2ml)溶液，搅拌16小时。将混合物倒入冰块中淬灭反应，并用乙酸乙酯(2×5ml)萃取，合并的有机相经饱和碳酸氢钠，饱和食盐水洗涤、用无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩。所得粗品通过过柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝85:15)得到无色液状化合物7d(120mg,收率40％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ5.16(t,j＝7.5hz,1h),4.44(s,1h),3.65(m,1h),2.8-2.69(m,2h),2.48(m,1h),2.28(m,1h),2.17(m,1h),2.04(m,2h),1.94(m,1h),1.46(s,9h),1.28-1.22(m,2h)ppm。
将化合物7d(30mg,0.24mmol)溶于二氯甲烷(3ml)中，再加入氯化氢的1,4-二氧六环溶液(4m,1ml)。反应混合液在室温下搅拌过夜。待反应完毕后，反应液直接减压浓缩得到白色固体产物7e(22mg,收率100％)。1hnmr(500mhz,cd3od)δ5.27(t,j＝7.4hz,1h),3.30-3.25(m,1h),3.00-2.86(m,2h),2.75-2.69(m,1h),2.43-2.37(m,1h),2.28-2.19(m,1h),2.16-2.08(m,2h),2.01-1.92(m,1h),1.48-1.33(m,2h)ppm。
向含有化合物1b(13mg,0.03mmol)的乙腈(1.5ml)混合液中依次加入化合物7e(12mg,0.05mmol)、n,n,n′,n′-四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(19mg,0.05mmol)和二异丙基乙基胺(13mg,0.10mmol)。反应混合液在氮气保护下室温搅拌30分钟。待反应完毕，反应液经减压浓缩得到粗品。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝15:1)得到白色固体化合物7f(10mg,收率49％)。msm/z587.5[m+h]+。
将化合物7f(10mg,0.02mmol)溶于异丙醇(2ml)中，再加入浓盐酸(3滴)。反应混合液在60摄氏度下搅拌2.5小时。待反应完毕后，反应液冷却至室温。向反应液中加入适量氨水调节ph至7左右，然后混合液减压浓缩。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝15:1)得到淡黄色固体化合物7(7.5mg,收率84％)。1hnmr(500mhz,cd3od)δ9.06(s,1h),7.59(t,j＝7.5hz,1h),7.50(t,j＝7.0hz,1h),7.26(t,j＝7.5hz,1h),7.00(t,j＝55.0hz,1h),6.40(s,1h),5.81(q,j＝7.0hz,1h),5.32(t,j＝7.5hz,1h),5.29-5.19(m,1h),3.06-2.91(m,2h),2.88-2.85(m,1h),2.57-2.51(m,1h),2.44-2.39(m,1h),2.29(s,3h),2.17-2.08(m,3h),1.96-1.87(m,1h),1.84-1.77(m,1h),1.66(d,j＝7.0hz,3h)ppm。msm/z525.4[m+h]+。
实施例8:化合物8的制备
将化合物8a(100mg,0.54mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，再加入苄胺(64mg,0.59mmol)、氰基硼氢化钠(68mg,1.08mmol)和乙酸(1滴)。反应混合物室温搅拌3小时。tlc监测反应完毕。混合物以水淬灭，经二氯甲烷萃取(3x20ml)。合并的有机相经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)得到化合物8b(85mg,收率57％)。
将化合物8b(85mg,0.31mmol)溶于甲醇(5ml)中，再加入钯碳(10％,20mg)。反应混合物在氢气氛围下60℃加热搅拌过夜。tlc监测反应完毕。将反应混合物过滤，滤液减压浓缩，所得粗品化合物8c直接用于下一步反应。
将化合物8c(57mg,0.31mmol)溶于二氯甲烷(5ml)，加入二异丙基乙胺(120mg,0.93mmol)，再在冰浴下滴加甲磺酰氯(52mg,0.46mmol)。反应混合物冰浴搅拌1小时。tlc监测反应完毕。将混合物以水淬灭，经二氯甲烷萃取(3×20ml)。合并的有机相经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)得到化合物8d(50mg,收率62％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ3.22(s,2h),2.95(s,3h),1.44(s,9h),0.90-0.83(m,4h)ppm。
将化合物8d(50mg,0.19mmol)溶于二氯甲烷(3ml)中，再滴加盐酸甲醇溶液(4m，0.5ml)，反应混合物室温搅拌过夜。tlc监测反应完毕。将反应混合物减压浓缩，所得粗品化合物8e直接用于下一步反应。
将化合物1a(34mg,0.08mmol)溶于乙腈(3ml)和水(3滴)的混合液中，然后加入氢氧化钠(16mg,0.4mmol)。反应混合液在室温下搅拌过夜。待反应完毕后，反应混合液直接经无水硫酸钠干燥后过滤，得到含有化合物1b的滤液。所得滤液直接用于下一步反应。
向含有化合物1b(理论质量：16mg,0.04mmol)的乙腈(1.5ml)混合液中依次加入化合物8e(8mg,0.05mmol)、n,n,n′,n′-四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(23mg,0.06mmol)和二异丙基乙基胺(15mg,0.12mmol)。反应混合液在氮气保护下室温搅拌30分钟。待反应完毕，反应液经减压浓缩得到粗品。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝15:1)得到无色油状化合物8f(13mg,收率63％)。msm/z558.6[m+h]+。
将化合物8f(13mg,0.02mmol)溶于异丙醇(2ml)中，再加入浓盐酸(2滴)。反应混合液在60摄氏度下搅拌3小时。待反应完毕后，反应液冷却至室温。向反应液中加入适量氨水调节ph至7左右，然后混合液减压浓缩。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝15:1,2％氨水)得到淡黄色固体化合物8(4.71mg,收率41％)。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ9.18(s,1h),7.68(t,j＝7.2hz,1h),7.53(t,j＝7.1hz,1h),7.33(d,j＝7.9hz,1h),7.27(t,j＝6.4hz,1h),7.17(t,j＝54.3hz,1h),6.06(s,1h),5.86-5.79(m,1h),3.33(s,2h)2.81(s,3h),2.23(s,3h),1.61(d,j＝7.0hz,3h),1.30-1.22(m,4h)ppm。msm/z496.4[m+h]+。
实施例9:化合物9的制备
冰水浴下，将化合物9a(cas:871014-19-6,37mg,0.20mmol)和三乙胺(60mg,0.60mmol)溶于四氢呋喃(2ml)中，再缓慢滴加甲磺酰氯9b(34mg,0.30mmol)的四氢呋喃溶液。反应混合液在室温下搅拌1小时。待反应完毕后，反应液用水淬灭。混合液经二氯甲烷萃取(3×15ml)。合并的有机相经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:乙酸乙酯＝3:1)得到白色固体化合物9c(48mg,收率91％)。1hnmr(500mhz,cd3od)δ4.05-3.96(m,2h),2.88(s,3h),2.36-2.26(m,4h),1.43(s,9h)ppm。
将化合物9c(46mg,0.17mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，再加入氯化氢的1,4-二氧六环溶液(4m,1ml)。反应混合液在室温下搅拌过夜。待反应完毕后，反应液直接减压浓缩得到白色固体产物9d(37mg,收率100％)。1hnmr(500mhz,cd3od)δ4.25-4.16(m,1h),3.85-3.79(m,1h),2.91(s,3h),2.57-2.47(m,4h)ppm。
将化合物1a(29mg,0.07mmol)溶于乙腈(1.5ml)和水(3滴)的混合液中，然后加入氢氧化钠(8mg,0.20mmol)。反应混合液在室温下搅拌过夜。待反应完毕后，反应混合液直接经无水硫酸钠干燥后过滤，得到含有化合物1b的滤液。所得滤液直接用于下一步反应。
向含有化合物1b(理论质量：28mg,0.07mmol)的乙腈(1.5ml)混合液中依次加入化合物9d(20mg,0.10mmol)、n,n,n′,n′-四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(39mg,0.10mmol)和二异丙基乙基胺(26mg,0.20mmol)。反应混合液在氮气保护下室温搅拌30分钟。待反应完毕，反应液经减压浓缩得到粗品。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝12:1)得到无色油状化合物9e(37mg,收率97％)。msm/z558.6[m+h]+。
将化合物9e(37mg,0.07mmol)溶于异丙醇(2ml)中，再加入浓盐酸(3滴)。反应混合液在60摄氏度下搅拌3小时。待反应完毕后，反应液冷却至室温。向反应液中加入适量氨水调节ph至7左右，然后混合液减压浓缩。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1,2％氨水)得到淡黄色固体化合物9(20mg,收率61％)。1hnmr(500mhz,cd3od)δ9.14(s,1h),7.63(t,j＝7.0hz,1h),7.50(t,j＝7.0hz,1h),7.27(t,j＝7.7hz,1h),7.01(t,j＝54.8hz,1h),6.35(s,1h),5.88-5.82(m,1h),5.41-5.33(m,1h),4.18-4.11(m,1h),2.96(s,3h),2.94-2.88(m,2h),2.78-2.70(m,2h),2.31(s,3h),1.69(d,j＝7.0hz,3h)ppm。msm/z496.5[m+h]+。
实施例10:化合物10的制备
将化合物10a(100mg,0.53mmol)溶于二氯甲烷(3ml)中，再加入盐酸二氧六环溶液(4m,1ml)。反应混合液在室温下搅拌过夜。待反应完毕后，将反应混合物减压蒸馏得粗品白色固体产物10b(66mg,收率100％)。
采用实施例1中的方法由化合物1a(25mg,0.06mmol)得到含有化合物1b的反应液直接用于下一步反应。
采用实施例1中的方法由化合物1b反应液、化合物10b(15mg,0.12mmol)，n,n,n′,n′-四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(34mg,0.09mmol)和二异丙基乙基胺(23mg,0.18mmol)得白色固体化合物10c(23mg,收率76％)。msm/z481.4[m+h]+。
采用实施例1中的方法由化合物10c(23mg,0.05mmol)得淡黄色固体化合物10(12mg,收率60％)。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ9.13(s,1h),8.90(s,1h),7.66(t,j＝7.0hz,1h),7.52(t,j＝7.0hz,1h),7.33(d,j＝7.5hz,1h),7.22(t,j＝46.8hz,1h),6.04(s,1h),5.84-5.72(m,1h),5.02(t,j＝5.0hz,1h),3.75-3.51(m,2h),2.18(s,3h),1.58(d,j＝7.0hz,3h),1.18-1.05(m,4h)ppm。msm/z419.3[m+h]+。
实施例11:化合物11的制备
将化合物10(9mg,0.02mmol)溶于二氯甲烷(2ml)，滴加二异丙基乙基胺(8mg,0.06mmol)，再在冰浴下滴加三氟乙酸酐(6mg,0.03mmol)。反应液于冰浴下搅拌1小时。tlc监测反应完毕。将反应液以甲醇淬灭，混合物减压浓缩，经制备型薄层板分离纯化得白色固体化合物11(1mg,收率9％)。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ9.17(s,1h),7.72(t,j＝7.2hz,1h),7.54(t,j＝6.9hz,1h),7.37-7.34(m,1h),7.23(t,j＝52.7hz,1h),6.18(s,1h),5.80-5.72(m,1h),5.05(t,j＝5.7hz,1h),3.67-3.52(m,2h),1.62(d,j＝7.1hz,3h),1.24(s,3h),1.17-1.07(m,4h)ppm。msm/z515.5[m+h]+。
实施例12:化合物12的制备
将化合物1a(25mg,0.06mmol)溶于乙腈(1.5ml)和水(3滴)的混合液中，然后加入氢氧化钠(8mg,0.20mmol)。反应混合液在室温下搅拌过夜。待反应完毕后，反应混合液直接经无水硫酸钠干燥后过滤，得到含有化合物1b的滤液。所得滤液直接用于下一步反应。
向含有化合物1b的乙腈混合液中依次加入化合物12a(14mg,0.12mmol)、n,n,n′,n′-四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(34mg,0.09mmol)和二异丙基乙基胺(23mg,0.18mmol)。反应混合液在氮气保护下室温搅拌30分钟。待反应完毕，反应液经减压浓缩得到粗品。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝12:1)得到无色油状化合物12b(9mg,收率32％)。msm/z479.3[m+h]+。
将化合物12b(37mg,0.07mmol)溶于异丙醇(2ml)中，再加入浓盐酸(3滴)。反应混合液在60摄氏度下搅拌3小时。待反应完毕后，反应液冷却至室温。向反应液中加入适量氨水调节ph至7左右，然后混合液减压浓缩。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1,2％氨水)得到淡黄色固体化合物12(1.41mg,收率17％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ10.08(s,1h),7.77(t,j＝7.0hz,1h),7.43(t,j＝7.0hz,1h),7.13(t,j＝7.7hz,1h),6.86(t,j＝55.0hz,1h),6.49(s,1h),6.03(q,j＝7.0hz,1h),5.44-5.36(m,1h),3.91-3.80(m,2h),3.56-3.45(m,2h),2.50(s,3h),1.79(d,j＝7.0hz,3h)ppm。msm/z417.6[m+h]+。
实施例13:化合物13的制备
将化合物13a(1.0g,2.5mmol)和40％二甲胺水溶液(281mg,2.5mmol)在封管中于60℃下搅拌4小时。反应混合液冷却至室温，加少量水(2ml)，并用二氯甲烷异丙醇(3:1,v:v)混合液(3×20ml)萃取，合并的有机相经饱和食盐水洗涤、用无水硫酸镁干燥、减压浓缩。所得粗品13b(600mg)直接用于下一步反应。lcms:m/z334.2[m+h]+。
将粗品13b(600mg,1.4mmol)和化合物13c(310mg,1.4mmol)溶于四氢呋喃(10ml)中，冷却至0℃，加入叔丁醇钾(191mg，1.68mmol)的thf(5ml)溶液，化合物在0℃反应2小时。加水(5ml)将反应淬灭，并用乙酸乙酯(2×15ml)萃取，合并的有机相经饱和碳酸氢钠，饱和食盐水洗涤、用无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩。所得粗品通过过柱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝85:15,2％氨水)得到淡黄色液状化合物13d(50mg,收率13％)。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ6.69(d,j＝7.0hz,1h),5.13(t,j＝7.0hz,1h),3.45-3.33(m,1h),2.80(d,j＝7.0hz,2h),2.19-1.99(m,9h),1.79-1.75(m,3h),1.37(s,9h),1.24-1.20(m,2h)ppm。
将化合物13d(10mg,0.04mmol)溶于二氯甲烷(3ml)中，再加入氯化氢的1,4-二氧六环溶液(4m,0.5ml)。反应混合液在室温下搅拌过夜。待反应完毕后，反应液直接减压浓缩得到黄色固体产物13e(11mg,收率100％)。
向含有化合物1b(12mg,0.03mmol)的乙腈(1.5ml)混合液中依次加入化合物13e(11mg,0.04mmol)、n,n,n′,n′-四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(16mg,0.04mmol)和二异丙基乙基胺(11mg,0.08mmol)。反应混合液在氮气保护下室温搅拌30分钟。待反应完毕，反应液经减压浓缩得到粗品。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝15:1,2％氨水)得到白色固体化合物13f(15mg,收率96％)。msm/z562.5[m+h]+。
将化合物13f(15mg,0.03mmol)溶于异丙醇(2ml)中，再加入浓盐酸(3滴)。反应混合液在60摄氏度下搅拌2.5小时。待反应完毕后，反应液冷却至室温。向反应液中加入适量氨水调节ph至7左右，然后混合液减压浓缩。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1,2％氨水)得到淡黄色固体化合物13(7.23mg,收率54％)。1hnmr(500mhz,cd3od)δ9.47(d,j＝4.5hz,1h),7.76(t,j＝7.0hz,1h),7.54(t,j＝7.0hz,1h),7.34-7.28(m,1h),7.00(t,j＝54.8hz,1h),6.30(s,1h),6.04-5.97(m,1h),5.72(s,1h),5.24-5.15(m,1h),2.93(s,6h),2.55-2.48(m,4h),2.46(d,j＝2.0hz,3h),2.44-2.30(m,3h),2.09-2.02(m,1h),1.75(d,j＝7.0hz,3h),1.37-1.30(m,2h)ppm。msm/z500.5[m+h]+。
实施例14:化合物14的制备
在氮气保护下，将磷酰乙酸三乙酯(1.68g,7.5mmol)溶于四氢呋喃(20ml)中，冷却至0℃，加入叔丁醇钾(1.12g，10mmol)的四氢呋喃(20ml)溶液，反应至有大量固体析出。加入化合物14a(1.05g,5mmol)的四氢呋喃(5ml)溶液，在0℃下反应3小时。加水(5ml)将反应淬灭，并用乙酸乙酯(2×30ml)萃取，合并的有机相经饱和碳酸氢钠，饱和食盐水洗涤、用无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩。所得粗品通过过柱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝85:15,2％氨水)得到无色液状化合物14b(900mg,收率75％)。所得化合物直接用于下一步反应。
在氮气保护下，将化合14b(400mg,1.4mmol)溶于四氢呋喃(5ml)中，冷却至0℃，加入四氢铝锂(119mg，3.22mmol)，反应混合物缓慢升温至室温并反应3小时。加入30％naoh水溶液(0.5g)淬灭，搅拌至有大量固体析出。加入无水硫酸镁干燥浓缩得到粗产品，粗产品直接用于下一步反应。所得粗品通过过柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝85:15)得到无色液状化合物14c(300mg,收率85％)。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ6.77(d,j＝8.0hz,1h),5.21(t,j＝6.5hz,1h),4.46(t,j＝5.0hz,1h),3.92-3.88(m,2h),3.45-3.38(m,1h),2.19-2.11(m,1h),2.04-1.97(m,2h),1.77-1.72(m,3h),1.37(s,9h),1.23-1.21(m,2h)ppm。
在封管中加入化合物14c(100mg,0.4mmol)、无水乙腈(2ml)、氧化银(462mg,2mmol)和碘甲烷(564mg,4mmol)，加热至40℃反应16小时。过滤除去固体，减压浓缩得到的粗产品过柱纯化得到化合物14d(50mg,收率45％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ5.26(t,j＝6.7hz,1h),4.42-4.39(m,1h),3.85-3.82(m,2h),3.59-3.51(m,1h),3.24(s,3h),2.49-2.47(m,1h),2.19-2.16(m,1h),2.10-2.08(m,1h),1.96-1.85(m,3h),1.37(s,9h),1.19-1.10(m,2h)ppm。
将化合物14d(17mg,0.07mmol)溶于二氯甲烷(3ml)中，再加入氯化氢的1,4-二氧六环溶液(4m,1ml)。反应混合液在室温下搅拌过夜。待反应完毕后，反应液直接减压浓缩得到白色固体产物14e。
向含有化合物1b(15mg,0.03mmol)的乙腈(1.5ml)混合液中依次加入化合物14e(10mg,0.05mmol)、n,n,n′,n′-四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(19mg,0.05mmol)和二异丙基乙基胺(13mg,0.10mmol)。反应混合液在氮气保护下室温搅拌30分钟。待反应完毕，反应液经减压浓缩得到粗品。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝20:1)得到白色固体化合物14f(11mg,收率58％)。msm/z549.7[m+h]+。
将化合物14f(11mg,0.02mmol)溶于异丙醇(2ml)中，再加入浓盐酸(3滴)。反应混合液在60摄氏度下搅拌2小时。待反应完毕后，反应液冷却至室温。向反应液中加入适量氨水调节ph至7左右，然后混合液减压浓缩。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝20:1)得到淡黄色固体化合物14(4.0mg,收率41％)。1hnmr(500mhz,cd3od)δ9.08(s,1h),7.60(t,j＝7.0hz,1h),7.50(t,j＝7.0hz,1h),7.26(t,j＝7.7hz,1h),7.00(t,j＝54.9hz,1h),6.39(s,1h),5.85-5.78(m,1h),5.46(t,j＝6.9hz,1h),5.28-5.19(m,1h),4.06-3.94(m,2h),3.35(s,3h),2.91(d,j＝13.9hz,1h),2.51-2.46(m,1h),2.44-2.36(m,1h),2.30(s,3h),2.14-1.98(m,3h),1.94-1.86(m,1h),1.86-1.79(m,1h),1.66(d,j＝7.0hz,3h)ppm。msm/z487.5[m+h]+。
实施例15:化合物15的制备
将化合物1a(20mg,0.05mmol)溶于乙腈(1.5ml)和水(2滴)的混合液中，然后加入氢氧化钠(10mg,0.25mmol)。反应混合液在室温下搅拌过夜。待反应完毕后，反应混合液直接经无水硫酸钠干燥后过滤，得到含有化合物1b的滤液。所得滤液直接用于下一步反应。
向含有化合物1b(理论质量：19mg,0.04mmol)的乙腈(1.5ml)混合液中依次加入化合物15a(8mg,0.06mmol)、n,n,n′,n′-四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(23mg,0.06mmol)和二异丙基乙基胺(15mg,0.12mmol)。反应混合液在氮气保护下室温搅拌30分钟。待反应完毕，反应液经减压浓缩得到粗品。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝15:1)得到无色油状化合物15b(14mg,收率63％)。msm/z509.6[m+h]+。
将化合物15b(14mg,0.03mmol)溶于异丙醇(2ml)中，再加入浓盐酸(2滴)。反应混合液在60摄氏度下搅拌3小时。待反应完毕后，反应液冷却至室温。向反应液中加入适量氨水调节ph至7左右，然后混合液减压浓缩。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1,2％氨水)得到淡黄色固体化合物15(8.60mg,收率70％)。1hnmr(500mhz,cd3od)δ9.20(s,1h),7.60(t,j＝7.0hz,1h),7.50(t,j＝7.0hz,1h),7.26(t,j＝7.7hz,1h),7.00(t,j＝54.8hz,1h),6.34(s,1h),5.84-5.77(m,1h),4.24-3.93(m,2h),3.24-2.99(m,2h),2.96-2.71(m,2h),2.68-2.46(m,2h),2.36(s,3h),2.29(s,3h),1.65(d,j＝7.0hz,3h)ppm。msm/z447.4[m+h]+。
实施例16:化合物16的制备
将化合物1a(40mg,0.09mmol)溶于乙腈(1.5ml)和水(2滴)的混合液中，然后加入氢氧化钠(19mg,0.47mmol)。反应混合液在室温下搅拌过夜。待反应完毕后，反应混合液直接经无水硫酸钠干燥后过滤，得到含有化合物1b的滤液。所得滤液直接用于下一步反应。
向含有化合物1b(理论质量：19mg,0.04mmol)的乙腈(1.5ml)混合液中依次加入化合物16a(7mg,0.06mmol)、n,n,n′,n′-四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(23mg,0.06mmol)和二异丙基乙基胺(15mg,0.12mmol)。反应混合液在氮气保护下室温搅拌30分钟。待反应完毕，反应液经减压浓缩得到粗品。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝15:1)得到无色油状化合物16b(8mg,收率37％)。msm/z496.5[m+h]+。
将化合物16b(8mg,0.02mmol)溶于异丙醇(2ml)中，再加入浓盐酸(2滴)。反应混合液在60摄氏度下搅拌3小时。待反应完毕后，反应液冷却至室温。向反应液中加入适量氨水调节ph至7左右，然后混合液减压浓缩。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1,2％氨水)得到淡黄色固体化合物16(4.56mg,收率65％)。1hnmr(500mhz,cd3od)δ9.24(s,1h),7.61(t,j＝7.0hz,1h),7.50(t,j＝7.0hz,1h),7.26(t,j＝7.7hz,1h),7.00(t,j＝54.8hz,1h),6.35(s,1h),5.87-5.76(m,1h),4.14-3.47(m,8h),2.30(s,3h),1.65(d,j＝7.0hz,3h).ppm。msm/z434.5[m+h]+。
实施例17:化合物17的制备
将化合物17a(200mg，1.27mmol)溶于水(3ml)中，再加入氢氧化钠溶液(2m，0.70ml)室温搅拌一小时，冰浴下向反应混合物中分批加入亚硝酸钠(175mg，2.54mmol)和醋酸溶液(0.1ml)再室温搅拌2小时。反应完成后，用饱和碳酸氢钠溶液萃灭，二氯甲烷萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干后，经硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝4:1)得淡黄色固体化合物17b(190mg，收率94％)。msm/z151.4[m+h]+。
将化合物17b(50mg，0.33mmol)溶于四氢呋喃(1ml)溶液中，冰浴下缓慢加入氢化铝锂(22mg，0.58mmol)加热回流一小时，冷却至室温，冰浴下滴加水(1滴)，再加热回流半小时，反应完成后，用饱和碳酸氢钠溶液淬灭，二氯甲烷萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干后，经硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)得化合物17c(10mg，收率22％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ2.85-2.66(m,4h),2.64-2.28(br,2h),2.14-2.00(m,4h)ppm。
向含有化合物1b(理论质量：18mg,0.04mmol)的乙腈(2ml)混合液中依次加入化合物17c(9mg,0.06mmol)、n,n,n′,n′-四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(23mg,0.06mmol)和二异丙基乙基胺(15mg,0.12mmol)。反应混合液在氮气保护下室温搅拌30分钟。待反应完毕，反应液经减压浓缩得到粗品。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝25:1)得到无色油状化合物17d(3mg，收率14％)。msm/z530.5[m+h]+。
将化合物17d(3mg,0.01mmol)溶于异丙醇(2ml)中，再加入浓盐酸(2滴)。反应混合液在60摄氏度下搅拌3小时。待反应完毕后，反应液冷却至室温。向反应液中加入适量氨水调节ph至7左右，然后混合液减压浓缩。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝15:1,2％氨水)得到淡黄色固体化合物17(1.40mg,收率55％)。1hnmr(500mhz,cd3od)δ9.25(s,1h),7.61(t,j＝7.0hz,1h),7.50(t,j＝7.0hz,1h),7.26(t,j＝7.7hz,1h),7.00(t,j＝54.8hz,1h),6.35(s,1h),5.85-5.77(m,1h),4.13-3.83(m,2h),3.28-3.10(m,2h),2.29(s,3h),2.28-2.05(m,4h),1.65(d,j＝7.1hz,3h)ppm。msm/z468.6[m+h]+。
实施例18:化合物18的制备
将化合物18a(3g，23.16mmol)溶于水(10ml)中，冰浴下向反应混合物中分批加入亚硝酸钠(3.2g，46.32mmol)和乙酸(2.27ml)，在室温搅拌2小时。反应完成后，将反应液过滤得固体化合物18b(2.8g，收率100％)。
将化合物18b(200mg，1.64mmol)溶于甲醇(1ml)和乙酸(0.3ml)的混合溶液中，冰浴下缓慢加入锌粉(1.07g，16.38mmol)室温下反应5小时，反应完成后，反应液经制备薄层层析硅胶板分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝8:1)后，含产品的组分中加入4m氯化氢甲醇溶液(0.5ml)室温搅拌5分钟，减压浓缩得白色固体化合物18c(70mg，收率40％)。
向含有化合物1b(理论质量：15mg,0.03mmol)的乙腈(2ml)混合液中依次加入化合物18c(6mg,0.04mmol)、n,n,n′,n′-四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(23mg,0.06mmol)和二异丙基乙基胺(12mg,0.09mmol)。反应混合液在氮气保护下室温搅拌30分钟。待反应完毕，反应液经减压浓缩得到粗品。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝25:1)得到无色油状化合物18d(12mg，收率69％)。msm/z502.6[m+h]+。
将化合物18d(12mg,0.02mmol)溶于异丙醇(2ml)中，再加入浓盐酸(2滴)。反应混合液在60摄氏度下搅拌3小时。待反应完毕后，反应液冷却至室温。向反应液中加入适量氨水调节ph至7左右，然后混合液减压浓缩。所得粗品经制备薄层色谱板分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝15:1,2％氨水)得到淡黄色固体化合物18(4.40mg,收率42％)。1hnmr(500mhz,cd3od)δ9.15(s,1h),7.59(t,j＝7.3hz,1h),7.49(t,j＝7.0hz,1h),7.25(t,j＝7.7hz,1h),7.00(t,j＝54.8hz,1h),6.36(s,1h),5.84-5.75(m,1h),4.79(t,j＝12.1hz,4h),2.30(s,3h),1.64(d,j＝7.1hz,3h)ppm。msm/z440.5[m+h]+。
实施例19:化合物19的制备
将化合物19a(10mmol,2.16g)溶于氯化亚砜(10ml)，加入催化量dmf,混合物加热回流反应4小时。待反应结束后，减压浓缩除去氯化亚砜溶剂，残留物溶于乙腈(10ml),加入2m三甲基硅基重氮甲烷的己烷溶液(10ml),置于室温下反应16小时。待反应结束后，用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，水相用乙酸乙酯萃取，合并后的有机相用饱和食盐水洗涤后用无水硫酸钠干燥，粗产品经硅胶色谱柱纯化得到化合物19b(1.5g，产率63％)。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ7.94-7.91(m,1h),7.75(t,j＝6.8hz,1h),7.30(t,j＝7.9hz,1h),6.66(s,1h)ppm。
将化合物19b(720mg,3mmol)溶于甲苯(5ml)，加入三氟甲磺酸铟(300mg),反应液室温下搅拌4小时。用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，有机相用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤后用无水硫酸钠干燥、减压浓缩，粗产品经硅胶色谱柱纯化得到纯品19c(420mg，收率60％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.91-7.88(m,1h),7.78-7.75(m,1h),7.17(t,j＝7.9hz,1h),4.64(d,j＝3.6hz,2h),3.52(s,3h)ppm。
将化合物19c(200mg,0.74mmol)溶于二乙胺基三氟化硫(2ml)，加入催化量甲醇后反应于50℃下搅拌16小时。反应液缓慢滴加入冰块中，乙酸乙酯萃取，有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤、用饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥后浓缩得到粗品。粗品经硅胶色谱柱纯化(乙酸乙酯:石油醚＝10:90)得到产物19d(140mg,收率65％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.67-7.64(m,1h),7.56-7.48(m,1h),7.11(t,j＝7.9hz,1h),3.95(td,j＝13.3,1.2hz,2h)ppm。
将pd(pph3)2cl2(105mg,0.16mmol)、化合物19d(140mg,0.52mmol)溶于1,4-二氧六环中(3ml)，在氮气保护下加入三乙胺(150mg,1.5mmol)和19e(273mg,0.77mmol)，反应液于100℃下搅拌16小时。待反应液冷却后，滴加4m氯化氢水溶液(2ml)搅拌，tlc监控直至中间体完全转化为目标产物反应，滴加饱和氟化钾水溶液和饱和碳酸钠水溶液的等比混合液，至有大量固体析出，用硅藻土滤去固体，加乙酸乙酯萃取，有机层用饱和碳酸氢钠溶液中和、饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥、减压浓缩得到粗品。粗品经硅胶柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝85:15)得到产品(100mg，收率82％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.96(m,1h),7.75(m,1h),7.31(t,j＝7.8hz,1h),3.98(t,j＝13.2hz,2h),3.44(s,3h),2.67(d,j＝5.2hz,3h)ppm。
将化合物19f(100mg,0.43mmol)和(r)-(+)-叔丁基亚磺酰胺(78mg,0.65mmol)溶于四氢呋喃(2ml)中，加入钛酸四乙酯(269mg,1.30mmol)，加热至70℃反应16小时。待反应液冷却后，滴加饱和食盐水至有大量固体析出，加入乙酸乙酯(30ml)稀释混合物，用硅藻土滤去固体，有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤、饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥浓缩得到粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝50:50)纯化得到产物19g(100mg，收率70％)。msm/z336.2[m+h]+。
将化合物19g(100mg,0.30mmol)溶于四氢呋喃(1ml)中，冷却至-70℃后加入三仲丁基硼氢化锂(1m己烷溶液,0.6ml)，此温度下继续搅拌2小时。加入饱和氯化铵水溶液淬灭反应，水相用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥、减压浓缩得到粗品。粗品经制备薄层板(二氯甲烷:甲醇＝90:10)纯化得到产物19h(80mg，收率80％)。msm/z338.2[m+h]+。
将化合物19h(150mg,0.3mmol)溶于4m氯化氢的甲醇溶液(2ml)中，室温下反应1小时。加1m氢氧化钠溶液调节至ph＝7，用乙酸乙酯稀释后分去水层，有机层经无水硫酸钠干燥、减压浓缩得到粗品。粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝85:15，v:v)纯化得到产物19i(65mg，产率63％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.57(t,j＝6.9hz,1h),7.48–7.42(m,1h),7.20(t,j＝7.7hz,1h),4.46(q,j＝6.7hz,1h),3.96(td,j＝13.5,0.9hz,2h),3.44(s,3h),1.42(d,j＝6.7hz,3h)ppm。
将化合物19i(30mg,0.13mmol)和化合物19j(35mg,0.13mmol)溶于二甲亚砜(0.2ml)中，再加入n,n-二异丙基乙胺(50mg,0.39mmol)。反应混合液在100℃下搅拌3小时。待冷却至室温，反应混合液经乙酸乙酯萃取(15ml)。合并的有机相经饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥、过滤后减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝20:1)得到黄色油状产物19k(31mg,收率51％)。msm/z470.4[m+h]+。
将化合物19k(15mg,0.03mmol)溶于乙腈(2ml)和水(3滴)的混合液中，再加入氢氧化钠(4mg,0.09mmol)。反应混合液在室温下搅拌过夜。待反应完毕后，反应混合液直接经无水硫酸钠干燥后过滤，得到含有产物19l的混合液。所得混合液直接用于下一步反应。msm/z456.6[m+h]+。
向含有化合物19l(理论产量：15mg,0.03mmol)的乙腈(1.5ml)混合液中依次加入化合物19m(8mg,0.05mmol)、n,n,n′,n′-四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(19mg,0.05mmol)和n,n-二异丙基乙胺(12mg,0.09mmol)。反应混合液在氮气保护下室温搅拌1小时。待反应完毕，反应液经减压浓缩得到粗品。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝20:1)得到黄色固体化合物19n(7mg,纯度50％,两步收率20％)。msm/z545.4[m+h]+。
将化合物19n(7mg,纯度50％,0.006mmol)溶于异丙醇(2.5ml)中，再加入浓盐酸(3滴)。反应混合液在60摄氏度下搅拌1小时。待反应完毕后，反应液冷却至室温。向反应液中加入适量氨水调节ph至7左右，然后混合液减压浓缩。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝20:1)得到黄色固体化合物19(1.57mg,收率51％)。1hnmr(500mhz,cd3od)δ9.22(s,1h),7.59(t,j＝7.2hz,1h),7.49-7.45(m,1h),7.24(t,j＝7.8hz,1h),6.34(s,1h),6.25(t,j＝57.5hz,1h),5.87-5.81(m,1h),3.96(t,j＝13.5hz,2h),3.37(s,3h),2.31(s,3h),1.66(d,j＝7.1hz,3h),1.61-1.57(m,2h),1.47-1.41(m,2h)ppm。msm/z483.4[m+h]+。
实施例20:化合物20的制备
化合物20i参照实施例19的方法合成。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.56(t,j＝7.1hz,1h),7.50-7.40(m,1h),7.20(t,j＝7.7hz,1h),4.47(q,j＝6.7hz,1h),4.05(t,j＝13.7hz,2h),3.45-3.42(m,1h),2.60(s,2h),1.45(d,j＝6.7hz,3h),0.57-0.55(m,2h),0.48-0.45(m,2h)ppm。
将化合物20i(31mg,0.12mmol)和化合物20j(33mg,0.12mmol)溶于二甲亚砜(0.2ml)中，再加入n,n-二异丙基乙胺(47mg,0.36mmol)。反应混合液在100℃下搅拌3小时。待冷却至室温，反应混合液经乙酸乙酯萃取(3x15ml)。合并的有机相经饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥、过滤后减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝20:1)得到黄色油状产物20k(13mg,收率22％)。msm/z496.5[m+h]+。
将化合物20k(13mg,0.03mmol)溶于乙腈(2ml)和水(3滴)的混合液中，再加入氢氧化钠(3mg,0.08mmol)。反应混合液在室温下搅拌过夜。待反应完毕后，反应混合液直接经无水硫酸钠干燥后过滤，得到含有产物20l的混合液。所得混合液直接用于下一步反应。msm/z482.6[m+h]+。
向含有化合物20l(理论产量：13mg,0.03mmol)的乙腈(1.5ml)混合液中依次加入化合物20m(8mg,0.05mmol)、n,n,n′,n′-四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(19mg,0.05mmol)和n,n-二异丙基乙胺(12mg,0.09mmol)。反应混合液在氮气保护下室温搅拌30分钟。待反应完毕，反应液经减压浓缩得到粗品。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝20:1)得到黄色固体化合物20n(6mg,纯度60％,收率24％)。msm/z571.4[m+h]+。
将化合物20n(6mg,纯度60％,0.006mmol)溶于异丙醇(2ml)中，再加入浓盐酸(3滴)。反应混合液在60摄氏度下搅拌1小时。待反应完毕后，反应液冷却至室温。向反应液中加入适量氨水调节ph至7左右，然后混合液减压浓缩。所得粗品经制备型薄层色谱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝20:1)得到黄色固体化合物20(1.53mg,收率48％)。1hnmr(500mhz,cd3od)δ9.23(s,1h),7.59(t,j＝6.8hz,1h),7.48-7.43(m,1h),7.24(t,j＝7.8hz,1h),6.34(s,1h),6.25(t,j＝57.5hz,1h),5.86-5.80(m,1h),4.06(t,j＝13.6hz,2h),3.41-3.37(m,1h),2.31(s,3h),1.67(d,j＝7.1hz,3h),1.62-1.57(m,2h),1.47-1.41(m,2h),0.43-0.39(m,4h)ppm。msm/z509.5[m+h]+。
实施例21：化合物21的合成
在0℃条件下向n,n-二甲基甲酰胺(192mg，2.63mmol)中滴加三氯氧磷(880mg，5.74mmol)并在此温度下继续搅拌1小时。然后在0℃分批次加入化合物21a(200mg，1.31mmol；采用专利wo2011/58478中描述的方法合成)。反应液自然升至室温并搅拌过夜。将反应液升温至回流并搅拌16小时。反应液冷却至室温后倒入冰水中，用二氯甲烷萃取(40ml)。有机层经无水硫酸钠干燥、减压浓缩得到棕色固体化合物21b(168mg，收率59％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ10.40(s,1h),2.32-2.27(m,1h),1.34-1.27(m,4h)ppm。
将化合物21b(93mg，0.43mmol)、对甲苯磺酸(7.9mg，0.04mmol)、乙二醇(34mg，0.55mmol)和苯(2ml)的混合物加热回流3小时。浓缩反应液后残留物用乙酸乙酯(20ml)稀释，用水(5ml)和饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤、无水硫酸钠干燥、减压浓缩得到粗品。粗品经硅胶柱层析纯化得到白色固体化合物21c(80mg，收率71％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ6.35(s,1h),4.43-4.32(m,2h),4.11-4.10(m,2h),2.25-2.21(m,1h),1.28-1.14(m,4h)ppm。
将化合物21c(100mg，0.38mmol)、丙二酸二甲酯(73mg，0.55mmol)、碳酸铯(300mg，0.92mmol)和二甲基亚砜(5ml)的混合物加热至80℃反应8小时。反应液降至室温并用乙酸乙酯(50ml)分散，用水(5ml)和饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤、无水硫酸钠干燥、减压浓缩得到粗品。粗品经硅胶柱层析纯化得到白色固体化合物21d(108mg，收率79％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ6.08(s,1h),5.29(s,1h),4.19-4.16(m,2h),4.01-3.99(m,2h),3.76(s,6h),2.24-2.19(m,1h),1.18-1.07(m,4h)ppm。msm/z357.3[m+h]+。
将化合物21d(100mg，0.28mmol)、氯化锂(64mg，1.51mmol)、二甲基亚砜(1ml)的混合物升温至120℃反应2小时。反应液冷却至室温并用乙酸乙酯(20ml)分散，用饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤、无水硫酸钠干燥、减压浓缩得到粗品。粗品经硅胶柱层析纯化(石油醚:丙酮＝3:1)得到白色固体化合物21e(36mg，收率43％)。
将化合物21e(30mg，0.10mmol)、化合物21f(22.5mg，0.12mmol，购买而得)、n,n-二异丙基乙胺(40mg，0.31mmol)和二甲基亚砜(0.1ml)的混合物升温至110℃反应3小时。反应液降至室温并用乙酸乙酯(50ml)分散，用水(5ml)和饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤、无水硫酸钠干燥、减压浓缩得到粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化得到黄色固体化合物21g(21mg，收率46.5％)。msm/z452.4[m+h]+。
采用实施例16中的方法由化合物21g(15mg,0.03mmol)得到含有化合物21h的反应液直接用于下一步反应。
采用实施例16中的方法，由化合物21h的反应液、化合物21i(10mg,0.07mmol；采用专利wo2019122129中的方法合成)、n,n,n′,n′-四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(19mg,0.05mmol)和二异丙基乙基胺(13mg,0.10mmol)得白色固体化合物21j(7mg,收率40％)。msm/z527.3[m+h]+。
采用实施例16中的方法由化合物21j(7mg,0.01mmol)制备得到淡黄色固体化合物21(3mg,收率49％)。msm/z465.4[m+h]+。
实施例22:化合物22的制备
将化合物22a(1g，5.24mmol)、二氟氯乙酸钠(2.39g，15.71mmol)和碳酸铯(5.07g，15.71mmol)溶于dmf(10ml)，化合物加热至100℃反应2小时。待反应结束后，加水淬灭，用乙酸乙酯萃取两次，合并的有机相用饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥减压浓缩得到粗品22b(1.26g，收率100％)。msm/z241.0
[m+h]+。
由22b采用实施例19中的方法得到化合物22f。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.31-7.27(m,1h),7.15-7.08(m,2h),6.54(t,j＝73.6hz,1h),4.43(q,j＝6.7hz,1h),2.20-1.80(brs,2h),1.43(d,j＝6.7hz,3h)ppm。
将22f(40mg,0.19mmol)、22g(53mg，0.19mmol)、n,n-二异丙基乙胺(43mg,0.39mmol)溶于二甲基亚砜(0.3ml)中，加热至100℃，反应2.5小时。待原料大部分反应结束后，加水淬灭，水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相、用饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥减压浓缩得到粗品。粗品经硅胶色谱柱纯化得到产物22h(40mg，收率46％)。msm/z442.2[m+h]+。
采用实施例16中的方法由化合物22h(17mg,0.04mmol)得到含有化合物22i的反应液直接用于下一步反应。msm/z428.3[m+h]+。
采用实施例16中的方法，由化合物22i的反应液、化合物21i(11mg,0.08mmol)、n,n,n′,n′-四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(22mg,0.06mmol)和二异丙基乙基胺(15mg,0.12mmol)得白色固体化合物22j(12mg,收率60％)。msm/z517.5[m+h]+。
采用实施例16中的方法由化合物22j(12mg,0.02mmol)得淡黄色固体化合物22(6mg,收率57％)。1hnmr(500mhz,cd3od)δ9.21(s,1h),7.33-7.28(m,1h),7.22-7.12(m,2h),6.83(t,j＝73.5hz,1h),6.34(s,1h),6.25(t,j＝57.6hz,1h),5.82(q,j＝7.1hz,1h),2.31(s,3h),1.66(d,j＝7.1hz,3h),1.62-1.57(m,2h),1.48-1.40(m,2h)。msm/z455.4[m+h]+。
实施例23:化合物sos1活性抑制的研究
用100％dmso将阳性药和待测化合物(10mm储液)3倍梯度稀释，使用分液器echo转移0.1ul化合物到384孔板。加入5ultag2-krasg12d>p到384孔板中，1000rpm离心1min。加入5ultag1–sos1到384孔板中，1000rpm离心1min。在25℃条件下孵育15min，加入10ulanti-tag1-tb和anti-tag2-xl665混合物到384孔板中，1000rpm离心1min，4℃孵育3h。使用envision读取665nm和615nm数值。以浓度的log值作为x轴，665nm/615nm作为y轴，采用分析软件graphpadprism8的y＝bottom+(top-bottom)/(1+10^((logic50-x)*hillslope))拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶活性的ic50值。部分代表性化合物的活性如表1所示。
表1：化合物sos1活性抑制结果
实施例24:大鼠体内的药物动力学研究
仪器：waters生产的xevotq-s液质联用仪，所有的测定数据由masslynxv4.1软件采集并处理，用microsoftexcel计算和处理数据。用winnonlin8.0软件，采用统计矩法进行药代动学参数计算。主要包括动力学参数tmax、t1/2、cmax、auclast等。色谱柱：acquityuplcbehc18(2.1mm×50mm，1.7μm)；柱温40℃；流动相a为水(0.1％甲酸)，流动相b为乙腈，流速为0.350毫升/分钟，采用梯度洗脱，洗脱梯度为0.50min：10％b；1.50min：10％b；2.30min：95％b；2.31min：10％b；3.00min：stop。进样量：5μl。
动物：sd雄性大鼠3只，体重范围200-220g，购入后在实验动物中心实验室饲养2天后使用，给药前12小时及给药后4小时内禁食，试验期间自由饮水。大鼠灌胃后按既定的时间内点取血样。
溶媒：0.5％methycellulose(含0.4％tween80和1％乙醇的水溶液)。灌胃给药溶液的配制：精密称量化合物，加入溶媒中，常温下超声5分钟使药品完全溶解，配制成0.3毫克/毫升的药液。
药物样品：本发明专利式(i)所示结构的代表性化合物，一般采取多个结构类似的样品(分子量相差在2个单位以上)，准确称量，一起给药(cassettepk)。这样可以同时筛选多个化合物，比较它们的口服吸收率。也采用单一给药来研究药物样品在大鼠体内的药物动力学。
灌胃给药后分别于0.25、0.5、1、2、4、9、12和24小时眼眶取血，置于肝素钠处理的试管中，离心后取上清液血浆用于lc-ms/ms分析。
准确称量化合物配制成不同的浓度，在质谱上进行定量分析，从而建立起标准曲线，然后测试上述血浆里化合物的浓度，得出不同时间点的化合物浓度。所有的测定数据由相关的软件采集并处理，采用统计矩法进行药代动学参数计算(主要包括动力学参数tmax、t1/2、cmax、auclast等)。部分代表性化合物的动力学参数如表2所示。
表2大鼠体内的药物动力学参数