一种肠膜明串珠菌及其应用的制作方法

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种肠膜明串珠菌及其应用。

背景技术：

2-甲基己酸(2-methylhexanoicacid，c7h14o2)，是发酵食品中的重要风味化合物之一，通常赋予奶酪、红酒、泡菜等发酵食品奶油、脂质香气。当其浓度达到0.9μg/kg时，可贡献发酵蔬菜在风味感官品质方面的特有香气，使得发酵蔬菜香气更为醇厚而协调。通常情况下蔬菜发酵过程中2-甲基己酸产量较低，在生产中，为达到增香目的，可通过外源添加来改善发酵蔬菜制品的风味。

但通过外源添加的方式实现的2-甲基己酸含量提升，由于外源添加物存在杂质风险而造成产品的安全性差且品质不稳定。因而限制了外源添加式2-甲基己酸在发酵食品风味改善方面的大规模生产应用。

技术实现要素：

有鉴于此，本申请提供一种肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)及其应用，该肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)为可用于食品的安全菌株，高产2-甲基己酸，可以改善发酵发酵食品的风味，适用于大规模生产应用。

为解决以上技术问题，本申请提供的技术方案是一种肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)，所述肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，邮编：510075，保藏编号为gdmccno.61344，保藏日期为2020年12月4日，命名为b-ms-pc-13。

上述肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)的16srdna如seqidno.1所示:

cgggcgttgcggcgtgctatacatgcaagtcgacgcacagcgaaaggtgcttgcacctttcaagtgagtggcgaacgggtgagtaacacgtggacaacctgcctcaaggctggggataacatttggaaacagatgctaataccgaataaaacttagtgtcgcatgacaaaaagttaaaaggcgcttcggcgtcacctagagatggatccgcggtgcattagttagttggtggggtaaaggcctaccaagacaatgatgcatagccgagttgagagactgatcggccacattgggactgagacacggcccaaactcctacgggaggctgcagtagggaatcttccacaatgggcgaaagcctgatggagcaacgccgcgtgtgtgatgaaggctttcgggtcgtaaagcactgttgtatgggaagaacagctagaataggaaatgattttagtttgacggtaccataccagaaagggacggctaaatacgtgccagcagccgcggtaatacgtatgtcccgagcgttatccggatttattgggcgtaaagcgagcgcagacggtttattaagtctgatgtgaaagcccggagctcaactccggaatggcattggaaactggttaacttgagtgcagtagaggtaagtggaactccatgtgtagcggtggaatgcgtagatatatggaagaacaccagtggcgaaggcggcttactggactgcaactgacgttgaggctcgaaagtgtgggtagcaaacaggattagataccctggtagtccacaccgtaaacgatgaacactaggtgttaggaggtttccgcctcttagtgccgaagctaacgcattaagtgttccgcctggggagtacgaccgcaaggttgaaactcaaaggaattgacggggacccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttaccaggtcttgacatcctttgaagcttttagagatagagtgttctcttcggagacaaagtgacaggtgtgcatggtcgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtc

本发明还提供了含权利要求1所述的肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)的的菌剂。

优选的，所述菌剂为发酵剂。

优选的，所述菌剂为直投式发酵剂。

优选的，所述菌剂所述肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)活菌浓度为10⁷～10⁹cfu/ml。

优选的，所述菌剂通过以下方法制备得到：将所述肠膜明串珠菌活化培养后经离心、缓冲液清洗、添加冻干保护剂，调整活菌浓度至10⁷～10⁹cfu/ml，然后冷冻干燥，即得。

本发明还提供了上述肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)或上述发酵剂在制备发酵食品中的应用。

优选的，所述发酵食品选择乳制品、豆制品和果蔬制品中的任意一种。

优选的，所述应用包括：赋予果蔬制品香味。

优选的，所述果蔬制品为发酵蔬菜或发酵蔬菜汁饮料。

本发明还提供了上述肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)或上述菌剂在生产2-甲基己酸中的应用。

本发明还提供了一种发酵食品的制备方法，包括：将含上述肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)的菌剂按2％～4％(m/v)的接种量接入待发酵食材进行发酵。

优选的，发酵蔬菜的制备方法，包括：

蔬菜盐卤水混合物的制备：预处理蔬菜和盐卤水混合，得到蔬菜盐卤水混合物；

发酵培养：将所述发酵剂接种蔬菜盐卤水混合物发酵培养，即得所述发酵蔬菜。

优选的，所述发酵蔬菜的制备方法具体包括：

蔬菜预处理：蔬菜整理去除杂质及不可食用部分，然后将蔬菜加工切成块状或条状，清洗，备用，得到预处理蔬菜；

盐卤水制备：所述盐卤水包括：辅料与水混合，加热煮沸后冷却，过滤得到盐卤水；所述辅料包括盐；

蔬菜盐卤水混合物的制备：预处理蔬菜和盐卤水混合，得到蔬菜盐卤水混合物；

发酵培养：将所述发酵剂接种蔬菜盐卤水混合物发酵培养，即得所述发酵蔬菜。

优选的，所述蔬菜预处理具体包括：蔬菜整理去除杂质及不可食用部分，然后将蔬菜加工切成块状或条状，蔬菜用消毒液消毒处理3～5min，控制蔬菜的微生物数量≤300cfu/g，再用清水冲洗3～5min，沥干备用，得到预处理蔬菜。

优选的，所述盐卤水制备具体包括：称取1％(m/v)八角，2％(m/v)花椒，2％(m/v)桂皮，3％(m/v)食盐，3％(m/v)葡萄糖，加入纯净水使其充分溶解，加热煮沸60min后，冷却至室温(15～30℃)，200目滤布过滤，得到盐卤水。

优选的，所述盐卤水制备具体包括：称取2％(m/v)老姜，3％(m/v)野山椒，1％％(m/v)桂皮，4％(m/v)食盐，4％(m/v)葡萄糖，加入纯净水使其充分溶解，加热煮沸45min后，冷却至室温(15～30℃)，300目滤布过滤得到泡菜卤水，即得到盐卤水。

优选的，所述蔬菜盐卤水混合物的制备过程具体包括：预处理蔬菜和盐卤水按1:2(m/v)比例混合，得到蔬菜盐卤水混合物。

优选的，所述发酵培养具体包括：将所述发酵剂按接种量3％～4％(m/v)接种蔬菜盐卤水混合物，25℃～30℃发酵发酵10天～14天培养，至总酸1.0％，即得所述发酵蔬菜。

优选的，发酵蔬菜饮料的制备方法，包括：

蔬菜浆液的制备：预处理蔬菜打浆，得到蔬菜浆液；

发酵基料的制备：所述发酵剂接入蔬菜浆液中进行发酵。

优选的，所述发酵蔬菜饮料的制备方法具体包括：

蔬菜预处理；

蔬菜浆液的制备：取10％(m/v)预处理蔬菜、6％(m/v)葡萄糖和水混合，打浆，得到蔬菜浆液；

发酵基料的制备：所述发酵剂按2％(m/v)的接种量接入蔬菜浆液中进行发酵，得到发酵基料；

发酵蔬菜汁的调配：蔗糖、水、发酵基料混合，调节ph值；

均质、杀菌：均质后杀菌，即得所述发酵蔬菜饮料。

优选的，所述蔬菜浆液的制备过程具体包括：称取10％(m/v)蔬菜和6％(m/v)的葡萄糖，加入纯净水，放入打浆机中打浆，得到蔬菜浆液。

优选的，所述发酵基料的制备过程具体包括：所述发酵剂按2％(m/v)的接种量接入蔬菜浆液中，25℃发酵发酵7天培养，至总酸1.0％，得到发酵基料。

优选的，所述发酵蔬菜汁的调配过程具体包括：取2％(m/v)的蔗糖，与80℃的纯净水混合，搅拌溶解30min，95℃灭菌10min并冷却至30℃；加入30％(m/v)的发酵基料，搅拌15min，并用柠檬酸盐调节ph值至4.0。

优选的，所述均质、杀菌过程具体包括：在30℃、20mpa下进行均质；然后在95℃条件下杀菌10min，在4℃下冷藏，即得到所述发酵蔬菜汁饮料。

本发明还提供了一种发酵食品，由上述的制备方法制备得到。

本申请与现有技术相比，其详细说明如下：

内源产生通过微生物代谢直接合成2-甲基己酸，可以改善发酵发酵食品的风味，可以产物2-甲基己酸可以自然释放至发酵食品环境中。但在蔬菜发酵过程中，能产生2-甲基己酸的乳酸菌的种类较少，因此尚缺乏对理想产量效果和产香效果的乳酸菌资源的挖掘。

本发明肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)为可用于食品的安全菌株，高产2-甲基己酸；该菌株在盐卤水和蔬菜汁中生长特性良好，发酵14天时，肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)发酵蔬菜制品可产2-甲基己酸0.23μg/kg发酵蔬菜，且可达到0.97～1.12μg/kg发酵蔬菜。该菌株应用到发酵制品中，可改善发酵制品成熟过程的风味，赋予产品奶油、脂质香气，能有效提高发酵制品中发酵速率，增加产品风味，且有利于产品品质特性的提高，在发酵蔬菜制品领域具有广阔的应用前景。

本发明的肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)生长温度范围较广，从15℃到45℃都生长，在30～37℃生长良好，最适生长温度为37℃；菌株的延迟期相对较短，6h进入对数生长期，16h达到稳定期。

附图说明

图1示本发明实施例1发酵蔬菜gc-ms总离子流图。

图2示本发明肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)菌落形态图；

图3示本发明肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)的细胞形态图((×1600)；

图4示本发明肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)的生长曲线图；

图5示本发明肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)不同温度下的od值图；

图6示本发明肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)不同ph下的od值图。

具体实施方式

为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。

常规发酵剂为市售发酵剂(北京川秀科技有限公司，乳酸菌发酵粉-植物乳杆菌)

本发明实施例中总酸1.0％，为总酸(以乳酸计)含量达到发酵蔬菜质量的1.0％。

实施例1

肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)菌株分离方法

1、获得合适的稀释梯度并培养

从四川省眉山市传统泡菜(市售)中取样，称取5g，加入到装有45ml无菌水中，梯度稀释后取4个稀释度分别为10^-1，10^-2，10^-3，10^-4的菌悬液各100μl分别涂布于mrs琼脂培养基上，于温度37℃下培养48h。

2、分离纯化

用平板划线法，挑选典型单菌落，重复培养挑选操作得到优良性状的菌株。

3、菌株的初筛

革兰氏染色及过氧化氢酶实验

挑取单菌落，做革兰氏染色及过氧化氢酶实验，将革兰氏阳性、过氧化氢阴性菌通过平板纯化，经10000rpm离心5min后贮藏于30％(v/v)甘油管内，－80℃保藏。。

4、复筛

产2-甲基己酸能力的测定

(1)无菌脱脂乳的制备

称取12％(m/v)脱脂乳粉、6％(m/v)的葡萄糖和2％(v/v)的甘油，加入纯净水使其充分溶解，在115℃下灭菌20min，然后冷却至室温(15～30℃)，即得到无菌脱脂乳。

(2)菌种活化

将甘油管保藏的乳酸菌在mrs琼脂培养基平板上划线，在37℃培养箱中24h至长出单菌落，即得到平板活化菌种；

用接种环取上述所得的平板活化菌种一环接入装有50mlmrs肉汤培养基的250ml规格的三角瓶中，置于37℃的培养箱中恒温培养18～24h，得到培养液。

(3)工作发酵剂的制备

将上述所得的培养液控制转速为10000rpm离心20min，离心所得的沉淀用无菌磷酸盐缓冲溶液(50mm，ph6.8)清洗3次，然后在清洗后的沉淀中加入2ml无菌脱脂乳涡旋震荡重悬菌体，得到重悬后菌种培养液；

将重悬后的菌种培养液在无菌条件下导入玻璃安瓿瓶中，液面高度0.8～1cm，盖瓶塞后放入-80℃速冻，而后将玻璃安瓿瓶用托盘盛装，放入冻干机进行冷冻干燥，得到工作发酵剂，且工作发酵剂活菌浓度至10⁷～10⁹cfu/ml。

(4)蔬菜预处理

蔬菜整理去除杂质及不可食用部分，然后将蔬菜加工切成块状或条状，含次氯酸钠的消毒液消毒处理5min，控制蔬菜的微生物数量≤300cfu/g；再用清水冲洗5min，沥干备用，得到预处理蔬菜。

(5)盐卤水制备

称取2％(m/v)老姜，3％(m/v)野山椒，1％％(m/v)桂皮，4％(m/v)食盐，4％(m/v)葡萄糖，加入纯净水使其充分溶解，加热煮沸45min后，冷却至室温(15～30℃)，300目滤布过滤得到泡菜卤水，即得到盐卤水。

(6)蔬菜盐卤水混合物的制备

步骤(4)所得的预处理蔬菜与步骤(5)所得的盐卤水按1:2(m/v)比例混合，得到蔬菜盐卤水混合物。

(7)发酵培养

步骤(3)所得的工作发酵剂与常规发酵剂(市售)的接种量均为3％(m/v)进行接种，控制温度25℃，进行发酵14天，至总酸1.0％，即得到发酵蔬菜。

(8)gc-ms测蔬菜发酵过程中2-甲基己酸含量

色谱条件为：将上述所得的发酵蔬菜称取5g，加1.3gnacl，定量采用庚酸甲酯为内标(1mg/ml，上样量1μl)置于顶空固相微萃取小瓶中，完成发酵蔬菜香气化合物的检测，从而测定得出发酵蔬菜中2-甲基己酸的含量。

db-wax-ui毛细管柱；柱子规格：30m×0.25μm×0.25μm，进口温度为240℃，柱流速35cm/s，载气为氦气；程序升温：初始温度40℃，保持10min；10℃/min升温至90℃，保持15min,；20℃/min升温至130℃，保持5min；20℃/min升温至250℃，保持5min。

质谱条件为：离子化方式ei，发射能量为74ev，离子源温度230℃，接口温度280℃，四级杆温度：150℃，质荷比15～500。在nist2001标准谱库的检索及标准品比对进行物质定性，并采用峰面积归一化法计算各成分的峰面积，表示为μg/kg蔬菜制品。

(9)发酵过程中2-甲基己酸含量变化

通过测定发酵蔬菜中2-甲基己酸的含量筛选得到产2-甲基己酸的量最多的菌株肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)b-ms-pc-13。

采用肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)b-ms-pc-13的工作发酵剂，发酵14天时，2-甲基己酸含量为1.08μg/kg发酵蔬菜，发酵蔬菜gc-ms总离子流图见图1；常规发酵剂进行发酵2-甲基己酸含量为0.23μg/kg发酵蔬菜。

实施例2

肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)b-ms-pc-13的鉴定

1、pcr扩增16srdna

实施例1步骤3菌株的初筛过程中得到的的肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)b-ms-pc-13单菌落点种于mrs琼州平板上，37℃培养18～24h,长出的单菌落作为pcr模版。

1)pcr体系25μl，其中mix为12.5μl，27f为0.5μl，1492r为0.5μl，ddh2o为11.5μl。

所用引物为27f：agagtttgatcctggcctca和1492r：ggttaccttgttacgactt。扩增片段长度为1500bp。

2)pcr条件：

dna双链在94℃，10min的条件下预变性；94℃，30s变性；50℃，30s，复火；72℃，80s延伸，并循环29次，最后72℃下保持7min。

2、琼脂凝胶电泳

称取0.5g琼脂糖溶于50mltbe缓冲液中，加热溶解后加入eb染料5μl；注胶凝固后，每个点样孔加样3～5μl；于120v电压下运行20min；胶板在uv下观察图像，挑选清晰条带的pcr产物送北京六合华大基因科技股份有限公司进行测序。

3、16srdna序列分析鉴定

经北京六合华大基因科技股份有限公司测序，该肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)b-ms-pc-13的16srdna如seqidno.1所示：

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采用blast分析工具(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast)将所分离b-ms-pc-1316srdna序列与genbank/embl/ddbj数据库比对，经分析鉴定为菌株肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)。

该菌菌落图如图2所示，菌落特征为：细胞呈球状，mrs琼脂培养基上菌落为白色，菌落大小0.5mm-0.8mm，凸起，光滑，湿润，不透明。

该菌细胞形态图(×1600)如图3所示，菌体特征：菌体呈球状多排列成长短不一的链状，也有单个分散排列，菌体大小一般为0.5μm×1.5μm，革兰氏染色阳性。

依据形态特征、生理生化特征等微生物学特性及其遗传特性16srdna将该菌鉴定为肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)。该肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)b-ms-pc-13已保藏于中国典型培养物保藏中心(简称gdmcc)，保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，邮编：510075，保藏编号为gdmccno.61344，保藏日期为2020年12月4日，命名为b-ms-pc-13。

实施例3

肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)的生长特性和发酵特性

(1)肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)菌株的生长曲线

将-80℃保存的实施例1肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)b-ms-pc-13接种于mrs肉汤培养基中，37℃培养24h，得到活化好的菌株。

将活化好的菌按2～4％(v/v)接种量接种入mrs肉汤培养基中，37℃恒温培养26h，每隔2h于600nm测定培养液的od值，以od值对时间作图得到菌株的生长曲线，其结果见图4(肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)生长曲线图)。结果表明：表明：肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)b-ms-pc-13在mrs培养基中生长迅速，在18h后达到最大菌量6.8*10⁹cfu/ml。，菌株的延迟期相对较短，6h进入对数生长期，16h达到稳定期。

(2)肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)菌株最适生长温度测定

将上述活化好的菌株按2～4％(v/v)接种量分别接于10mlmrs肉汤培养基中，分别置于15℃、25℃、32℃、37℃、40℃和45℃条件下恒温培养24h，以未接种的mrs肉汤培养基作对照，于600nm测定不同温度下培养液的od值，确定最适生长温度，其结果见图5(肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)不同温度下的od值图)。

结果表明：肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)b-ms-pc-13的生长温度范围较广，从15℃到45℃都生长，在30～37℃生长良好，最适生长温度为37℃。

(3)肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)菌株最适生长ph测定

将上述活化好的菌按2～4％(v/v)接种量分别接种入ph为8.0、7.0、6.0、4.0、3.5的mrs液体培养基中，37℃恒温培养72h，测定培养液的od值，其结果见图6(肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroide不同ph的生长od图)。

结果表明：酵母菌在ph为3.5～8.0均生长良好，最适生长ph为6.0。

实施例4

含肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)的发酵剂

(1)无菌脱脂乳的制备

称取10％(m/v)脱脂乳粉、6％(m/v)的葡萄糖和2％(v/v)的甘油，加入纯净水使其充分溶解，在115℃下灭菌20min，然后冷却到37℃，即得到无菌脱脂乳；

(2)菌种活化

用接种环取无菌水溶解的冷冻干燥管保存的肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)b-ms-pc-13一环在mrs琼脂培养基平板上划线，在37℃培养箱中培养48h至长出单菌落，即得到平板活化菌种；

(3)发酵剂的制备

挑取一环mrs琼脂培养基平板上的单菌落接种到mrs肉汤培养基，置于37℃恒温培养箱中培养18h，得到培养液；

将所得的培养液控制转速为10000rpm进行离心20min，离心所得的沉淀用无菌磷酸盐缓冲溶液(50mm，ph6.8)清洗3次，然后在清洗后的沉淀中加入2ml无菌脱脂乳溶液涡旋震荡重悬菌体，得到重悬后菌种培养液；

将重悬后的菌种培养液在无菌条件下导入玻璃安瓿瓶中，液面高度0.8～1cm，盖瓶塞后放入-80℃速冻，而后将玻璃安瓿瓶用托盘盛装，放入冻干机进行冷冻干燥，即得到含肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)b-ms-pc-13的发酵剂。

所述发酵剂中肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)b-ms-pc-13活菌数为10⁷～10⁹cfu/ml。

实施例5

含肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)b-ms-pc-13的发酵蔬菜

(1)蔬菜预处理

蔬菜整理去除杂质及不可食用部分，然后将蔬菜加工切成块状或条状，含次氯酸钠的消毒液消毒处理5min，控制蔬菜的微生物数量≤300cfu/g；再用清水冲洗5min，沥干备用，得到预处理蔬菜。

(2)盐卤水制备

称取1％(m/v)八角，2％(m/v)花椒，2％(m/v)，桂皮3％(m/v)食盐，3％葡萄糖，加入纯净水使其充分溶解，加热煮沸60min后，冷却至室温(15～30℃)，200目滤布过滤得到泡菜卤水，即得到盐卤水。

(3)蔬菜盐卤水混合物的制备

步骤(1)所得的预处理蔬菜与步骤(2)所得的盐卤水按1:2(m/v)比例混合，得到蔬菜盐卤水混合物。

(4)发酵培养

实施例4的发酵剂按接种量为4％(m/v)进行接种，控制温度30℃，进行发酵10天，至总酸1.0％，即得到含肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)b-ms-pc-13的发酵蔬菜。

测定产品中2-甲基己酸含量，含肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)b-ms-pc-13的发酵蔬菜中2-甲基己酸的含量为0.97μg/kg发酵蔬菜。

实施例6

含肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)b-ms-pc-13的发酵蔬菜饮料

(1)蔬菜预处理

蔬菜整理去除杂质及不可食用部分，然后将蔬菜切成块状，含次氯酸钠的消毒液消毒处理5min，控制蔬菜的微生物数量≤300cfu/g；再用清水冲洗5min，沥干备用，得到预处理蔬菜。

(2)蔬菜浆液的制备

称取10％(m/v)蔬菜和6％(m/v)的葡萄糖，加入纯净水，放入打浆机中打浆，得到蔬菜浆液。

(3)发酵基料的制备

实施例4的发酵剂按2％(m/v)的接种量接入蔬菜浆液中，控制温度25℃，进行发酵7天，至总酸1.0％，过滤所得清液经过冷藏即得到含肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)b-ms-pc-13的发酵基料。

(4)发酵蔬菜汁的调配

取2％(m/v)的蔗糖，用80℃的纯净水处理，搅拌溶解30min，95℃灭菌10min并冷却至30℃；取30％(m/v)的发酵基料加入上述溶液中，搅拌15min，并用柠檬酸盐调节ph值至4.0。

(5)均质、杀菌

在30℃、20mpa下进行均质；然后在95℃条件下杀菌10min，在4℃下冷藏即得到含肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)b-ms-pc-13的发酵蔬菜汁饮料。

测定产品中2-甲基己酸含量，含肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)b-ms-pc-13的发酵蔬菜汁饮料中2-甲基己酸的含量为1.12μg/kg发酵蔬菜汁饮料。

对比例1

本对比例和实施例5的区别仅在于：采用常规发酵剂(市售)替换实施例5中的发酵剂进行发酵培养。

测定产品中2-甲基己酸含量，发酵蔬菜中2-甲基己酸的含量为0.13μg/kg发酵蔬菜。

对比实施例5和对比例1，证明肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)b-ms-pc-13在发酵蔬菜中具有较高的2-甲基己酸产生能力，并且在发酵过程中能大幅提高发酵蔬菜的内源产香，在发酵蔬菜中具有广阔的应用前景。

对比例2

本对比例和实施例6的区别仅在于：采用常规发酵剂(市售)替换实施例5中的发酵剂进行发酵培养。

测定产品中2-甲基己酸含量，发酵蔬菜汁饮料中2-甲基己酸的含量为0.21μg/kg发酵蔬菜汁饮料。

对比实施例6和对比例2，证明肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)b-ms-pc-13在发酵蔬菜中具有较高的2-甲基己酸产生能力，并且在发酵过程中能大幅提高发酵蔬菜的内源产香，在发酵蔬菜中具有广阔的应用前景。

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110>四川老坛子食品有限公司

四川省农业科学院农产品加工研究所

<120>一种肠膜明串珠菌及其应用

<160>1

<170>siposequencelisting1.0

<210>1

<211>1070

<212>dna

<213>肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)

<400>1

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