一种调控巨噬细胞分化的方法

1.本发明涉及一种调控细胞分化的方法，具体地说，涉及一种调控巨噬细胞分化的方法。


背景技术：

2.巨噬细胞是一种位于组织内的白血球，源自单核细胞，其在脊椎动物体内参与非特异性和特异性防卫。
3.目前巨噬细胞诱导分化的方法都是通过体外化学物质，细胞因子的方法。公开号为cn105274054 a的中国发明专利申请公开了一种体外诱导调节性巨噬细胞及其制备方法和应用，其制备方法包括以下步骤：取大鼠骨髓细胞，进行培养，培养时在培养基中加入重组大鼠巨噬细胞集落刺激因子，得贴壁生长的巨噬细胞；在培养基中，加入全反式维甲酸以及肿瘤转化因子
‑
β，继续培养，诱导巨噬细胞极化为得到调节性巨噬细胞。
4.上述专利申请中公开的方法主要存在如下问题：(1)需加入生物因子对巨噬细胞进行诱导分化；(2)诱导所得的巨噬细胞不能直接应用，还需对贴壁的细胞进行处理后获得悬浮细胞。


技术实现要素：

5.本发明针对在现有调控巨噬细胞分化的方法中存在的需加入生物因子且所得巨噬细胞不能直接应用的技术问题，提供一种不需加入生物因子且所得巨噬细胞能够直接应用的调控巨噬细胞分化的方法。
6.为此，本发明提供一种调控巨噬细胞分化的方法，其通过仿生手性凝胶调控巨噬细胞分化，包括如下步骤：(1)将苯丙胺酸衍生物组成自组装而成的仿生左旋手性凝胶基质粉末加入二甲基亚砜溶液中，混合均匀至粉末完全溶解，制成凝胶因子的二甲基亚砜储备液；(2)将所述步骤(1)得到的二甲基亚砜储备液加入raw264.7巨噬细胞悬液中，混合、吹匀，然后转移至培养板内；(3)将所述步骤(2)中的培养板转移至细胞孵育箱内，待凝胶形成，再加入高糖培养基。
7.优选的，所述步骤(2)中，所述细胞悬液的细胞密度为1
×
106‑3×
106cells/ml。
8.优选的，所述步骤(3)中，所述凝胶因子的最终浓度为3mg/ml。
9.优选的，所述步骤(3)中，培养基中二甲基亚砜的最终质量百分比含量为3.3％。
10.优选的，所述步骤(3)中，所述高糖培养基为含质量百分比10％胎牛血清、质量百分比1％双抗的dmem高糖培养基。
11.本发明具有以下有益效果：本发明提供的方法无需额外加入生物活性因子；而且通过本发明提供的方法诱导后胶体中的巨噬细胞可直接应用于组织工程学。
附图说明
12.图1a、图1b和图1c是本发明中左旋纤维三维结构体外显著促进巨噬细胞向m2分化
示意图；其中图1a为本发明中手性水凝胶培养巨噬细胞24h cd206免疫荧光染色；图1b为本发明中手性水凝胶培养巨噬细胞24h ccr7免疫荧光染色；图1c为本发明中手性水凝胶培养巨噬细胞24hcd206流式细胞术检测结果；
13.图2a和图2b为本发明中手性纤维三维结构体外培养细胞增殖情况示意图；其中图2a为本发明中手性水凝胶培养巨噬细胞24h phallodin免疫荧光染色；图2b为本发明中水凝胶培养巨噬细胞24h phallodin免疫荧光染色三维重建图。
具体实施方式
14.下面结合实施例对本发明做进一步描述。
15.实施例1
16.将凝胶因子粉末加入二甲基亚砜(dmso)溶液中，混合均匀至粉末完全溶解，制成凝胶因子的dmso储备液。将该储备液加入至细胞密度为1
×
106cells/ml的raw264.7巨噬细胞(cyagen biosciences,inc.)悬液中，快速混合、吹匀，然后迅速用移液枪转移至24孔培养板内，每孔加入量为500μl。然后将24孔板转移至细胞孵育箱内，3
‑
5min后待凝胶形成，再加入500μl培养基。根据细胞的生长情况，每隔2
‑
3天换一次液。凝胶因子的最终浓度为3mg/ml。dmso最终浓度为3.3％。
17.实施例2
18.将凝胶因子粉末加入二甲基亚砜(dmso)溶液中，混合均匀至粉末完全溶解，制成凝胶因子的dmso储备液。将该储备液加入至细胞密度为2
×
106cells/ml的raw264.7巨噬细胞(cyagen biosciences,inc.)悬液中，快速混合、吹匀，然后迅速用移液枪转移至24孔培养板内，每孔加入量为500μl。其它条件同实施例1。
19.实施例3
20.将凝胶因子粉末加入二甲基亚砜(dmso)溶液中，混合均匀至粉末完全溶解，制成凝胶因子的dmso储备液。将该储备液加入至细胞密度为3
×
106cells/ml的raw264.7巨噬细胞(cyagen biosciences,inc.)悬液中，快速混合、吹匀，然后迅速用移液枪转移至24孔培养板内，每孔加入量为500μl。其它条件同实施例1。
21.惟以上所述者，仅为本发明的具体实施例而已，当不能以此限定本发明实施的范围，故其等同组件的置换，或依本发明专利保护范围所作的等同变化与修改，皆应仍属本发明权利要求书涵盖之范畴。


技术特征：
1.一种调控巨噬细胞分化的方法，其特征是，通过仿生手性凝胶调控巨噬细胞分化，包括如下步骤：(1)将苯丙胺酸衍生物组成自组装而成的仿生左旋手性凝胶基质粉末加入二甲基亚砜溶液中，混合均匀至粉末完全溶解，制成凝胶因子的二甲基亚砜储备液；(2)将所述步骤(1)得到的二甲基亚砜储备液加入raw264.7巨噬细胞悬液中，混合、吹匀，然后转移至培养板内；(3)将所述步骤(2)中的培养板转移至细胞孵育箱内，待凝胶形成，再加入高糖培养基。2.根据权利要求1所述的调控巨噬细胞分化的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述细胞悬液的细胞密度为1
×
106‑3×
106cells/ml。3.根据权利要求1所述的调控巨噬细胞分化的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述凝胶因子的最终浓度为3mg/ml。4.根据权利要求1所述的调控巨噬细胞分化的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，培养基中二甲基亚砜的最终质量百分比含量为3.3％。5.根据权利要求1所述的调控巨噬细胞分化的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述高糖培养基为含质量百分比10％胎牛血清、质量百分比1％双抗的dmem高糖培养基。

技术总结
本发明涉及一种调控巨噬细胞分化的方法，其解决了现有方法中存在的需加入化学因子或生物活性因子诱导分化、诱导分化后无法直接进行植入应用的技术问题，其包括如下步骤：将凝胶因子粉末加入二甲基亚砜溶液中，混合均匀至粉末完全溶解，制成凝胶因子的二甲基亚砜储备液；将二甲基亚砜储备液加入细胞悬液中，混合、吹匀，然后转移至培养板内；将培养板转移至细胞孵育箱内，待凝胶形成，再加入培养基。本发明可用于调控巨噬细胞的分化及免疫组织工程学研究。研究。研究。


技术研发人员：曾蔷 卫彦 邓旭亮 冯传良 江圣杰 刘进营
受保护的技术使用者：北京大学口腔医学院
技术研发日：2021.07.01
技术公布日：2021/9/24