技术特征：
1.一种用于同步快速检测荔枝霜疫霉菌(peronophythora litchii)和炭疽病菌(colletotrichum gloeosporioides)的双重pcr引物，其特征在于，包括引物plf1/plr1和cgf1/cgr1，各引物的序列为：plf1：5
’‑
ttcggtctgaactagtagct
‑3’
plr1：5
’‑
ttcagcgggtaatcttgcct
‑3’
cgf1：5
’‑
tcttctgagtggtacaagc
‑3’
cgr1：5
’‑
taaagttactacgcaaagga
‑3’
。2.一种用于同步检测荔枝霜疫霉菌和荔枝炭疽病菌的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的双重pcr专用引物。3.根据权利要求2所示的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括pcr反应试剂。4.权利要求1所述的双重pcr引物、权利要求2或权利要求3所述的试剂盒在检测荔枝霜疫霉菌和荔枝炭疽病菌中的应用。5.一种同步检测荔枝霜疫霉菌和荔枝炭疽病菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)提取待测样品dna；2)以待测样品dna为模板，用权利要求1所述的双重pcr引物进行双重pcr扩增；3)结果判定：将双重pcr扩增进行琼脂糖凝胶电泳，根据扩增产物的大小进行结果判定；若获得694bp单一目的条带说明待测样本含有荔枝霜疫霉菌，若获得286bp单一目的条带说明待测样本含有荔枝炭疽病菌；若获得2条分别为694bp和286bp目的条带说明待测样本同时含有荔枝霜疫霉菌和荔枝炭疽病菌。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，双重pcr扩增的反应体系为：2
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taq pcr master mix
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20μl，10μm引物plf1/plr1共0.5μl，10μm引物cgf1/cgr1共2μl，50μg/ml
‑1dna模板1μl，无菌水补足40μl。7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，双重pcr扩增的反应程序为：94℃预变性3min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，共30个循环，72℃延伸5min。
技术总结
本发明公开一种用于同步快速检测荔枝霜疫霉菌和炭疽病菌的双重PCR引物及检测方法。所述引物包括PlF1/PlR1和CgF1/CgR1引物对。本发明以含有荔枝霜疫霉菌和荔枝炭疽病菌的样本DNA为模板，在同一个PCR反应体系中加入上述双重PCR引物，经过双重PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳，分别得到694bp和286bp的特异扩增产物。利用本组引物建立的针对荔枝霜疫霉菌和荔枝炭疽病菌的双重PCR检测引物及检测方法特异性强、敏感性高、快速准确地在一个体系里同步检测和鉴别荔枝中的两种病原菌，可用于田间病害的早期诊断和病菌的监测和鉴别，有效指导荔枝霜疫霉病及炭疽病的防控。霜疫霉病及炭疽病的防控。
技术研发人员：陈庆河 李智婷 杨成东 贾斯蒂
受保护的技术使用者：海南大学
技术研发日：2021.07.16
技术公布日：2021/9/24