技术特征：
1.一种双酶偶联合成(s)-香茅醇的方法，其特征在于所述方法为：以含醇脱氢酶ysadh基因的工程菌和含老黄酶nemr-ps基因的工程菌各自经发酵培养获得的湿菌体混合后作为催化剂，以橙花醇为底物，以nadp
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为辅酶，以ph 6-9缓冲液为反应介质构成反应体系，在25-55℃、0-900rpm条件下反应完全后，反应液分离纯化，最终获得(s)-香茅醇。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述醇脱氢酶ysadh基因核苷酸序列为seq id no.2所示；老黄酶nemr-ps基因核苷酸序列为seq id no.4所示。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述含醇脱氢酶ysadh基因的工程菌按如下方法构建：将醇脱氢酶ysadh编码基因插入pet28b载体的nco i和hind iii限制性酶切位点，得到重组载体pet28b-ysadh；将重组载体pet28b-ysadh导入宿主细胞e.coli bl21(de3)，得到基因工程菌e.coli bl21(de3)/pet28b-ysadh。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述含老黄酶nemr-ps基因的工程菌按如下方法构建：将老黄酶nemr-ps编码基因插入pet28b载体的nco i和xho i限制性酶切位点，得到重组载体pet28b-nemr-ps；将重组载体pet28b-nemr-ps导入宿主细胞e.coli bl21(de3)，得到基因工程菌e.coli bl21(de3)/pet28b-nemr-ps。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述含醇脱氢酶ysadh基因工程菌的湿菌体与含老黄酶nemr-ps基因工程菌的湿菌体以质量比0.25-4:1混合，所述催化剂加入量以湿菌体总量计为120g/l。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述底物以1m橙花醇乙醇溶液形式加入，所述橙花醇加入终浓度为10-100mm；所述辅酶加入终浓度0-1mm。7.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述缓冲液为ph 7.5的50mm tris-hcl缓冲液。8.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述含醇脱氢酶ysadh基因工程菌的湿菌体按如下方法制备：将含醇脱氢酶ysadh基因的工程菌接种于含有终浓度100μg/ml卡那霉素的lb液体培养基中，在37℃和200rpm下培养过夜，然后以体积浓度2％的接种量转接于含有100μg/ml卡那霉素的lb液体培养基中，在37℃和200rpm培养至菌体浓度od
600
至0.6～0.8，向培养物中加入终浓度0.2mm的iptg，在21℃下诱导培养12h，获得诱导培养液；再将诱导培养液于4℃和8000rpm下离心10min，弃去上清液；然后用ph 8.0、50mm tris-hcl缓冲液重悬菌体，于4℃和8000rpm下离心10min，弃去上清液，收集湿菌体。9.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述含老黄酶nemr-ps基因工程菌的湿菌体按如下方法制备：将含老黄酶nemr-ps基因的工程菌接种于含有终浓度100μg/ml卡那霉素的lb液体培养基中，在37℃和200rpm下培养过夜，以体积浓度2％的接种量转接于终浓度100μg/ml卡那霉素的lb液体培养基中，在37℃和200rpm培养至菌体浓度od
600
至0.6～0.8，向培养物中加入终浓度0.2mm的iptg，在24℃下诱导培养12h，获得诱导培养液；再将诱导培养液于4℃和8000rpm下离心10min，弃去上清液；然后用ph 8.0、50mm tris-hcl缓冲液重悬菌体，于4℃和8000rpm下离心10min，弃去上清液，收集湿菌体。10.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述反应液分离纯化方法为：反应液在12000rpm下离心2min，取上清，加入4倍反应液体积的乙酸乙酯，在200rpm和30℃条件下萃取1h，萃取结束后，在12000rpm下离心1min，取上层有机相，经减压蒸馏去除乙酸乙酯，最终获得(s)-香茅醇。
技术总结
本发明公开了供了一种双酶偶联合成(S)-香茅醇的方法，以含醇脱氢酶YsADH基因的工程菌和含老黄酶NemR-PS基因的工程菌各自经发酵培养获得的湿菌体混合后作为催化剂，以橙花醇为底物，以NADP
技术研发人员：应向贤 邵帅 王崎舟
受保护的技术使用者：浙江工业大学
技术研发日：2021.09.28
技术公布日：2022/1/14