一种用于公共环境的微生物除臭液及其制备方法

1.本发明属于微生物除臭领域，具体涉及一种用于公共环境的微生物除臭液及其制备方法。


背景技术：

2.公共场所的臭气主要来源于碳水化合物和含氮含硫有机物的厌氧发酵，这两类物质在厌氧的环境条件下，可分解释放出带酸味、臭鸡蛋味、鱼腥味、烂白菜味等刺激性气体。而恶臭气体的产生是由多种厌氧菌或兼性厌氧菌以碳水化合物和含氮含硫有机物作为营养物质代谢作用的结果，粪便中主要的菌为链球菌、真杆菌属、梭菌属。据测定，粪便的臭味由168种臭味化合物组成，如畜禽养殖场主要的恶臭气体是硫化氢、氨、三甲氨、丁二胺、戊二胺、甲硫醇、二硫化碳、吲哚类、挥发性脂肪酸类等，这些气体长期存在于养殖场所，不仅严重影响动物的生产性能，而且大大提高畜禽呼吸道相关疾病的发生率。又由于恶臭污染属于敞开式无组织排放，成分复杂，产生量大，影响范围广，持续时间长，气体收集困难，所以其治理起来十分困难，对养殖场周边环境造成极大污染。对于恶臭气体的处理方法大致可以分为三类：物理法(掩蔽法、吸收法、吸附法)、化学法(燃烧法、氧化法、中和法、洗涤法)和生物法。其中生物除臭法具有处理效率高、无二次污染、所需设备简单、便于操作、费用低廉和管理维护方便的特点，已成为近年来许多国家热衷的研究方向。
3.微生物相关研究表明，单一添加的微生物，无论其活性有多高，在加快恶臭物质分解进程中的作用都比不上复合微生物菌群的共同作用。


技术实现要素：

4.为了克服现有技术存在的不足，本发明提供一种用于公共环境的微生物除臭液及其制备方法，使用该微生物除臭液处理臭气的基本原理是利用微生物把溶解到水中的恶臭物质吸收于微生物自身体内，通过微生物的代谢活动使其降解。
5.本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：
6.一种用于公共环境的微生物除臭液，包括下述质量百分含量的组分：
7.8.余量为光合菌液，总质量百分含量之和为100％。
9.其进一步优选的质量百分含量的组分为：
[0010][0011]
余量为光合菌液，总质量百分含量之和为100％。
[0012]
一种用于公共环境的微生物除臭液的制备方法，依次包括下述步骤：
[0013]
(1)分别制备枯草芽孢杆菌菌粉、地衣芽孢杆菌菌粉、酿酒酵母菌粉、乳酸杆菌菌粉、绿色木霉菌粉、黑曲霉菌粉、光合菌液；
[0014]
(2)按质量百分含量分别称取枯草芽孢杆菌菌粉、地衣芽孢杆菌菌粉、酿酒酵母菌粉、乳酸杆菌菌粉、绿色木霉菌粉、黑曲霉菌粉、光合菌液；
[0015]
(3)将步骤(2)称取的枯草芽孢杆菌菌粉、地衣芽孢杆菌菌粉加入光合菌液中，边搅拌边加入，得到混合物a；
[0016]
(4)将步骤(2)称取的酿酒酵母菌粉、乳酸杆菌菌粉依次加入步骤(3)制得的混合物a中，边搅拌边加入，充分混合均匀，得到混合物b；
[0017]
(5)将步骤(2)称取的绿色木霉菌粉、黑曲霉菌粉缓慢加入到步骤(4)制得的混合物b中，边搅拌边加入，充分搅拌均匀，得到混合物c；
[0018]
(6)经60目尼龙网片过滤，去除杂质后，检测产品技术指标，分装，即得本发明所述微生物除臭液。
[0019]
进一步的，所述步骤(1)枯草芽孢杆菌菌粉的制备方法具体为：
[0020]
枯草芽孢杆菌分离采用稀释涂布平板法，分别采集畜禽养殖场圈舍垫料、小麦秸秆，按质量比2:1混合，加入无菌水稀释，无菌水用量没有要求，将固体物质没入即可，混匀后静置，吸取100μl上清液均匀涂布于营养琼脂培养基平板上，营养琼脂培养基的成分为：蛋白胨10g/l，牛肉膏3g/l，氯化钠5g/l，琼脂20g/l，灭菌前ph＝7.2～7.4，置于30℃培养箱中培养48h，观察菌落形态；
[0021]
枯草芽孢杆菌纯化采用平板划线法，挑取菌落形态呈圆形、表面干燥且有褶皱、乳白色、边缘无规则的单菌落，在新的培养基平板上进行连续划线，以获得多量的、形态单一的单菌落；
[0022]
挑取经纯化获得的枯草芽孢杆菌，进行显微形态鉴定与生化特性分析；
[0023]
经鉴定后，将纯化获得的枯草芽孢杆菌转接到营养琼脂试管斜面中，置于30℃培养48～72h，至整个斜面长满菌苔，利用此方法不断进行扩繁，是为一级种培养；
[0024]
选取生长成熟的一级种，无菌条件下接种于盛有500ml扩增培养液的2000ml锥形
瓶中，扩增培养液的成分为：葡萄糖10g/l，麸皮10g/l，蛋白胨5g/l，牛肉膏2g/l，na2hpo42.5g/l，kh2po41g/l，tween-801.5g/l，灭菌前ph＝7.2～7.4，28℃摇瓶培养48h，取样计数，菌液中有效活菌数≥5
×
10
10
个/g；
[0025]
枯草芽孢杆菌的三级固体发酵采用深层通风发酵法，将灭菌冷却后的固体发酵物料与二级菌液按质量比1:10混合均匀，固体发酵物料的成分为：麸皮6kg，玉米粉1kg，稻壳1kg，糖蜜1.5kg，大豆蛋白胨或鱼蛋白胨0.5kg，kh2po41g，mgso40.5g，含水量35～40％，灭菌前ph＝7.2～7.4，平铺于通风发酵池中，物料深度15～20cm，28℃发48h，当料心温度≥45℃时，翻料操作一次；
[0026]
发酵结束，干燥，粉碎后过60目筛，最终产品中有效活菌数≥5
×
10
10
个/g，含水量8～9％。
[0027]
进一步的，所述步骤(1)地衣芽孢杆菌菌粉的制备方法具体为：
[0028]
地衣芽孢杆菌分离采用稀释涂布平板法，分别采集养殖场圈舍土壤、养殖废水，按质量比为3:1混合，加入无菌水稀释，无菌水用量没有要求，将固体物质没入即可，混匀后静置，吸取100μl上清液均匀涂布于营养琼脂培养基平板上，置于30℃培养箱中培养48h，观察菌落形态；
[0029]
地衣芽孢杆菌纯化采用平板划线法，挑取菌落形态呈圆形、表面干燥且较粗糙、边缘无规则的单菌落，在新的培养基平板上进行连续划线，以获得多量的、形态单一的单菌落；
[0030]
挑取经纯化获得的地衣芽孢杆菌，进行显微形态鉴定与生化特性分析；
[0031]
经鉴定后，将纯化获得的地衣芽孢杆菌转接到营养琼脂试管斜面中，置于30℃培养48～72h，至整个斜面长满菌苔，利用此方法不断进行扩繁，是为一级种培养；
[0032]
选取生长成熟的一级种，无菌条件下接种于盛有500ml扩增培养液的2000ml锥形瓶中，28℃摇瓶培养48h，取样计数，菌液中有效活菌数≥5
×
10
10
个/g；
[0033]
地衣芽孢杆菌的三级固体发酵采用深层通风发酵法，将灭菌冷却后的固体发酵物料与二级菌液按质量比1:10混合均匀，固体发酵物料的成分为：麸皮6kg，玉米粉1kg，稻壳1kg，糖蜜1.5kg，大豆蛋白胨或鱼蛋白胨0.5kg，kh2po41g，mgso40.5g，含水量35～40％，灭菌前ph＝7.2～7.4，平铺于通风发酵池中，物料深度15～20cm，28℃发酵48h，当料心温度≥45℃时，翻料操作一次；
[0034]
发酵结束，干燥，粉碎后过60目筛，最终产品中有效活菌数≥5
×
10
10
个/g，含水量8～9％；
[0035]
进一步的，所述步骤(1)酿酒酵母菌粉的制备方法具体为：
[0036]
本发明中的酿酒酵母为酿酒酵母菌ciccno.1015，具有发酵半乳糖、棉子糖等多种小分子糖类的特性，将酿酒酵母菌种冻干物转接到ypd培养基试管斜面中，ypd培养基的成分为：酵母膏10g/l，蛋白胨20g/l，葡萄糖20g/l，琼脂粉20g/l，灭菌前ph＝6.5～6.8，置于30℃培养48～72h，至整个斜面长满菌苔，利用此方法不断进行扩繁，是为一级种培养；
[0037]
选取生长成熟的一级种，无菌条件下接种于盛有500mlypd培养液的2000ml锥形瓶中，28℃摇瓶培养48h，取样计数，菌液中有效活菌数≥2
×
10
10
个/g；
[0038]
酿酒酵母的三级固体发酵采用深层通风发酵法，将灭菌冷却后的固体发酵物料与二级菌液按质量比1:10混合均匀，固体发酵物料的成分为：麸皮5kg，小麦粉1kg，葡萄糖
2kg，麦芽粉1kg，大豆蛋白胨或鱼蛋白胨1kg，kh2po41g，mgso40.5g，含水量35～40％，灭菌前ph＝6.5～6.8，平铺于通风发酵池中，物料深度15～20cm，28℃发酵72h，当料心温度≥40℃时，翻料操作一次；
[0039]
发酵结束，干燥，粉碎后过60目筛，产品中有效活菌数≥2
×
10
10
个/g，含水量8～9％；
[0040]
优选的，上述的乳酸杆菌菌粉为市售农用级乳酸杆菌固体发酵物，产品中有效活菌数≥5
×
10
10
个/g，含水量8～9％；
[0041]
进一步的，所述步骤(1)绿色木霉菌粉的制备方法具体为：
[0042]
绿色木霉菌分离采用稀释涂布平板法，分别采集养殖场圈舍垫料、腐败料草，按质量比为1:1混合均匀，称取10g加入到90ml无菌水中，置于180r/min转数的摇床上震荡1h，静置，吸取100μl上清液均匀涂布于木霉筛选培养基平板上，木霉筛选培养基按如下方法制备：每1l纯水中加入100g新鲜土豆块，熬煮10～15min，冷却后匀浆，补纯水至1000ml，依次加入红糖20g，kh2po41.2g，mgso40.6g，硫胺素0.008g，氯霉素0.1g，琼脂20g，灭菌前ph＝6.5～6.8，置于28℃培养箱中培养72h，观察菌落形态；
[0043]
绿色木霉菌纯化采用单孢子菌落法，即当平板上生长出木霉菌落并产生绿色孢子时，用接种铲轻轻挑取孢子，均匀接种于木霉强化培养基平板上，木霉强化培养基按如下方法制备：每1l土壤浸出液中加入100g新鲜土豆块，熬煮10～15min，冷却后匀浆，补纯水至1000ml，依次加入红糖20g，kh2po41.2g，mgso40.6g，硫胺素0.008g，氯霉素0.1g，琼脂20g，灭菌前ph＝6.5～6.8，置于28℃培养箱中培养72h，依此法纯化多次，以获得多量的、形态单一的单菌落；
[0044]
挑取经纯化获得的木霉孢子，进行显微形态鉴定；
[0045]
经鉴定后，将纯化获得的绿色木霉孢子转接到木霉强化培养基试管斜面中，置于28℃培养72h，至整个斜面长满菌丝且产生成熟孢子，利用此方法不断进行扩繁，是为一级菌种培养；
[0046]
选取生长成熟的一级种，无菌条件下用接种铲刮取试管斜面上的孢子，接种于装有霉菌扩增培养基的500ml锥形瓶中，霉菌扩增培养基的成分为：麸皮32.5g，玉米粉25g，稻壳7.5g，大豆蛋白胨或鱼蛋白胨5g，含水量42～47％，灭菌前ph＝6.5～6.8，28℃培养72h，至培养基物料长满绿色木霉分生孢子，取样计数，绿色木霉分生孢子数≥5
×
109个/g；
[0047]
绿色木霉的三级固体发酵采用深层通风发酵法，将灭菌冷却后的固体发酵物料与二级菌种按质量比1:8混合均匀，固体发酵物料的成分为：麸皮3.25kg，玉米粉2.5kg，稻壳0.75kg，大豆蛋白胨或鱼蛋白胨0.5kg，kh2po41g，mgso40.5g，含水量42～47％，灭菌前ph＝6.5～6.8，平铺于通风发酵池中，物料深度15～20cm，28℃发酵72h，当料心温度≥40℃时，翻料操作一次；
[0048]
发酵结束，干燥，粉碎后过60目筛，产品中绿色木霉分生孢子数≥5
×
109个/g，含水量8～9％；
[0049]
进一步的，所述步骤(1)黑曲霉菌粉的制备方法具体为：
[0050]
黑曲霉分离采用稀释涂布平板法，分别采集有机肥腐熟场表层土壤，称取10g加入到90ml无菌水中，置于180r/min转数的摇床上震荡1h，静置，吸取100μl上清液均匀涂布于黑曲霉选择培养基平板上，黑曲霉选择培养基的成分为：(nh4)2so40.5g/l，红糖150g/l，
kh2po41g/l，mgso40.5g/l，氯霉素0.1g/l，琼脂30g/l，灭菌前ph＝6.5～6.8，置于28℃培养箱中培养72h，观察菌落形态；
[0051]
黑曲霉纯化采用单孢子菌落法，即当平板上生长出黑曲霉菌落并产生黑色孢子时，用接种铲轻轻挑取孢子，均匀接种于黑曲霉选择培养基平板上，置于28℃培养箱中培养72h，依此法纯化多次，以获得多量的、形态单一的单菌落；
[0052]
挑取经纯化获得的黑曲霉孢子，进行显微形态鉴定；
[0053]
经鉴定后，将纯化获得的黑曲霉孢子转接到黑曲霉选择培养基试管斜面中，置于28℃培养72h，至整个斜面长满菌丝且产生成熟分生孢子，利用此方法不断进行扩繁，是为一级菌种培养；
[0054]
选取生长成熟的一级种，无菌条件下用接种铲刮取试管斜面上的孢子，接种于装有霉菌扩增培养基的500ml锥形瓶中，霉菌扩增培养基的成分为：麸皮32.5g，玉米粉25g，稻壳7.5g，大豆蛋白胨或鱼蛋白胨5g，含水量42～47％，灭菌前ph＝6.5～6.8，28℃培养72h，至培养基物料长满黑曲霉分生孢子，取样计数，黑曲霉分生孢子数≥5
×
109个/g；
[0055]
黑曲霉的三级固体发酵采用深层通风发酵法，将灭菌冷却后的固体发酵物料与二级菌种按质量比1:8混合均匀，固体发酵物料的成分为：麸皮3.25kg，玉米粉2.5kg，稻壳0.75kg，大豆蛋白胨或鱼蛋白胨0.5kg，kh2po41g，mgso40.5g，含水量42～47％，灭菌前ph＝6.5～6.8，平铺于通风发酵池中，物料深度15～20cm，28℃发酵72h，当料心温度≥40℃时，翻料操作一次；
[0056]
发酵结束，干燥，粉碎后过60目筛，产品中黑曲霉分生孢子数≥5
×
109个/g，含水量8～9％；
[0057]
进一步的，所述步骤(1)光合菌液的制备方法具体为：
[0058]
(1)分别称取nahco31g、乙酸钠1g、nacl1g、nh4cl1g、mgso40.3g、k2hpo40.2g、丙酸钠0.2g、苹果酸0.25g、蛋白胨0.2g、酵母膏0.1g、去离子水1000ml；
[0059]
(2)将步骤(1)称取的酵母膏、蛋白胨加入去离子水中，加热，搅拌混匀，得到混合物d；
[0060]
(3)将步骤(1)称取的nahco3、乙酸钠、nacl、nh4cl、mgso4、k2hpo4、丙酸钠、苹果酸依次加入步骤(2)制得的混合物d中，充分混合均匀，得到混合物e；
[0061]
(4)分别称取10gγ-氨基丁酸和0.2g谷氨酸，溶解于1l去离子水中，得到混合物f；
[0062]
(5)按每升混合物e加入1ml混合物f，将步骤(4)制得的混合物f加入到步骤(3)制得的混合物e中，充分搅拌均匀得到混合物g；
[0063]
(6)采集养殖废水或化粪池表层水样，按水样：混合物g＝1:6～1:8的体积比，充分混合，分装于透明容器中，进行光照厌氧培养；
[0064]
进一步的，所述步骤(6)的光照厌氧培养条件为：28～32℃，4000lux，定期进行搅拌或摇晃，培养7～10天。
[0065]
本发明与现有技术相比的有益效果是：
[0066]
本发明除臭液中的各类微生物都发挥着重要作用，形成状态稳定及功能齐全的共生关系。
[0067]
光合菌系是一类厌氧自养型微生物，主要包括红螺菌类、着色菌类、绿杆菌类、绿色丝状菌类等，每一类菌的代谢类型都存在着差异，也就赋予了光合菌多方面的用途。在环
保除臭方面，光合菌能够利用硫化氢等异味物质作为还原剂，通过光合磷酸化过程将二氧化碳合成有机物；它们还能够利用氨等为氮源，合成蛋白质、核酸等，从而实现恶臭物质的转化。
[0068]
芽孢杆菌类微生物也是一类常用的益生菌，广泛应用于种植业、养殖业、食品发酵、医药卫生、环境治理等行业，本发明中的芽孢杆菌从养殖环境及农业废弃物中分离提取，其分解有害物质能力强、效率高，且它们的原生生活环境中有害菌种类较多，故其在使用过程中一直有害菌生长的能力也较强。
[0069]
乳酸杆菌类和酵母菌类微生物能够分别在厌氧和有氧条件下，利用多样化的代谢途径，将甲硫氨酸、半胱氨酸、三甲胺、二硫醇等小分子有机物，或合成多肽、蛋白质等自身成分，或将其分解为无机物，供光合菌等其它微生物利用。此外，它们还能产生有机酸、醇等代谢产物，抑制有害菌的生长，减少有害气体的产生。
[0070]
利用霉菌类微生物进行环境治理是近几年环境保护领域的新的研究方向，霉菌代谢类型及其多样，且其产生的高活性酶类往往分泌到细胞外产生作用，这就使其具有适用范围广、代谢效率高、生长迅速等优点。利用黑曲霉分解污水中的动植物残体、排泄物、餐厨垃圾、微塑料等；木霉被广泛用于改良土壤、治理污水方面，其在生长过程中，不仅能分泌蛋白酶、肽酶、纤维素酶、半纤维素酶、几丁质酶等水解酶类，还能够产生多种次生代谢物，如苯乙醇、吡喃酮、生物刺激素等，在分解有害污染物的同时，亦有效促进其它益生菌的生长。现有的微生物除臭液未发现含有霉菌成分，本发明将霉菌加入到光合菌、芽孢杆菌、乳酸杆菌类和酵母菌类中，多种微生物协同作用，从而建立高效降解有害污染物的微生态菌群。除臭复合菌液就会抑制腐败菌与病原菌，消除臭味物质，形成良好的环境，从而提高全社会的生产水平和生活质量，保护地球环境和人类美好的家园。
附图说明
[0071]
图1为喷洒本品一周内对化粪池内硫化氢(a)和氨气(b)的去除效果图，单位为mg/m3；
[0072]
图2为本发明腐熟促进效果验证实验结果图；
[0073]
图3为使用本品处理腐熟不彻底的粪尿出苗实验结果图。
具体实施方式
[0074]
下面通过具体实施例详述本发明，但不限制本发明的保护范围。如无特殊说明，本发明所采用的实验方法均为常规方法，所用实验器材、材料、试剂等均可从商业途径获得。
[0075]
实施例1本发明微生物除臭液的制备
[0076]
(1)分别制备枯草芽孢杆菌菌粉、地衣芽孢杆菌菌粉、酿酒酵母菌粉、乳酸杆菌菌粉、绿色木霉菌粉、黑曲霉菌粉、光合菌液；
[0077]
枯草芽孢杆菌菌粉的制备方法具体为：
[0078]
枯草芽孢杆菌分离采用稀释涂布平板法，分别采集畜禽养殖场圈舍垫料、小麦秸秆，按质量比2:1混合，加入无菌水稀释，无菌水用量没有要求，将固体物质没入即可，混匀后静置，吸取100μl上清液均匀涂布于营养琼脂培养基平板上，营养琼脂培养基的成分为：蛋白胨10g/l，牛肉膏3g/l，氯化钠5g/l，琼脂20g/l，灭菌前ph＝7.2～7.4，置于30℃培养箱
中培养48h，观察菌落形态；
[0079]
枯草芽孢杆菌纯化采用平板划线法，挑取菌落形态呈圆形、表面干燥且有褶皱、乳白色、边缘无规则的单菌落，在新的培养基平板上进行连续划线，以获得多量的、形态单一的单菌落；
[0080]
挑取经纯化获得的枯草芽孢杆菌，进行显微形态鉴定与生化特性分析；
[0081]
经鉴定后，将纯化获得的枯草芽孢杆菌转接到营养琼脂试管斜面中，置于30℃培养48～72h，至整个斜面长满菌苔，利用此方法不断进行扩繁，是为一级种培养；
[0082]
选取生长成熟的一级种，无菌条件下接种于盛有500ml扩增培养液的2000ml锥形瓶中，扩增培养液的成分为：葡萄糖10g/l，麸皮10g/l，蛋白胨5g/l，牛肉膏2g/l，na2hpo42.5g/l，kh2po41g/l，tween-801.5g/l，灭菌前ph＝7.2～7.4，28℃摇瓶培养48h，取样计数，菌液中有效活菌数≥5
×
10
10
个/g；
[0083]
枯草芽孢杆菌的三级固体发酵采用深层通风发酵法，将灭菌冷却后的固体发酵物料与二级菌液按质量比1:10混合均匀，固体发酵物料的成分为：麸皮6kg，玉米粉1kg，稻壳1kg，糖蜜1.5kg，大豆蛋白胨或鱼蛋白胨0.5kg，kh2po41g，mgso40.5g，含水量35～40％，灭菌前ph＝7.2～7.4，平铺于通风发酵池中，物料深度15～20cm，28℃发48h，当料心温度≥45℃时，翻料操作一次；
[0084]
发酵结束，干燥，粉碎后过60目筛，最终产品中有效活菌数≥5
×
10
10
个/g，含水量8～9％。
[0085]
地衣芽孢杆菌菌粉的制备方法具体为：
[0086]
地衣芽孢杆菌分离采用稀释涂布平板法，分别采集养殖场圈舍土壤、养殖废水，按质量比为3:1混合，加入无菌水稀释，无菌水用量没有要求，将固体物质没入即可，混匀后静置，吸取100μl上清液均匀涂布于营养琼脂培养基平板上，置于30℃培养箱中培养48h，观察菌落形态；
[0087]
地衣芽孢杆菌纯化采用平板划线法，挑取菌落形态呈圆形、表面干燥且较粗糙、边缘无规则的单菌落，在新的培养基平板上进行连续划线，以获得多量的、形态单一的单菌落；
[0088]
挑取经纯化获得的地衣芽孢杆菌，进行显微形态鉴定与生化特性分析；
[0089]
经鉴定后，将纯化获得的地衣芽孢杆菌转接到营养琼脂试管斜面中，置于30℃培养48～72h，至整个斜面长满菌苔，利用此方法不断进行扩繁，是为一级种培养；
[0090]
选取生长成熟的一级种，无菌条件下接种于盛有500ml扩增培养液的2000ml锥形瓶中，28℃摇瓶培养48h，取样计数，菌液中有效活菌数≥5
×
10
10
个/g；
[0091]
地衣芽孢杆菌的三级固体发酵采用深层通风发酵法，将灭菌冷却后的固体发酵物料与二级菌液按质量比1:10混合均匀，固体发酵物料的成分为：麸皮6kg，玉米粉1kg，稻壳1kg，糖蜜1.5kg，大豆蛋白胨或鱼蛋白胨0.5kg，kh2po41g，mgso40.5g，含水量35～40％，灭菌前ph＝7.2～7.4，平铺于通风发酵池中，物料深度15～20cm，28℃发酵48h，当料心温度≥45℃时，翻料操作一次；
[0092]
发酵结束，干燥，粉碎后过60目筛，最终产品中有效活菌数≥5
×
10
10
个/g，含水量8～9％；
[0093]
酿酒酵母菌粉的制备方法具体为：
[0094]
本发明中的酿酒酵母为酿酒酵母菌ciccno.1015，具有发酵半乳糖、棉子糖等多种小分子糖类的特性，将酿酒酵母菌种冻干物转接到ypd培养基试管斜面中，ypd培养基的成分为：酵母膏10g/l，蛋白胨20g/l，葡萄糖20g/l，琼脂粉20g/l，灭菌前ph＝6.5～6.8，置于30℃培养48～72h，至整个斜面长满菌苔，利用此方法不断进行扩繁，是为一级种培养；
[0095]
选取生长成熟的一级种，无菌条件下接种于盛有500mlypd培养液的2000ml锥形瓶中，28℃摇瓶培养48h，取样计数，菌液中有效活菌数≥2
×
10
10
个/g；
[0096]
酿酒酵母的三级固体发酵采用深层通风发酵法，将灭菌冷却后的固体发酵物料与二级菌液按质量比1:10混合均匀，固体发酵物料的成分为：麸皮5kg，小麦粉1kg，葡萄糖2kg，麦芽粉1kg，大豆蛋白胨或鱼蛋白胨1kg，kh2po41g，mgso40.5g，含水量35～40％，灭菌前ph＝6.5～6.8，平铺于通风发酵池中，物料深度15～20cm，28℃发酵72h，当料心温度≥40℃时，翻料操作一次；
[0097]
发酵结束，干燥，粉碎后过60目筛，产品中有效活菌数≥2
×
10
10
个/g，含水量8～9％；
[0098]
优选的，上述的乳酸杆菌菌粉为市售农用级乳酸杆菌固体发酵物，产品中有效活菌数≥5
×
10
10
个/g，含水量8～9％；
[0099]
绿色木霉菌粉的制备方法具体为：
[0100]
绿色木霉菌分离采用稀释涂布平板法，分别采集养殖场圈舍垫料、腐败料草，按质量比为1:1混合均匀，称取10g加入到90ml无菌水中，置于180r/min转数的摇床上震荡1h，静置，吸取100μl上清液均匀涂布于木霉筛选培养基平板上，木霉筛选培养基按如下方法制备：每1l纯水中加入100g新鲜土豆块，熬煮10～15min，冷却后匀浆，补纯水至1000ml，依次加入红糖20g，kh2po41.2g，mgso40.6g，硫胺素0.008g，氯霉素0.1g，琼脂20g，灭菌前ph＝6.5～6.8，置于28℃培养箱中培养72h，观察菌落形态；
[0101]
绿色木霉菌纯化采用单孢子菌落法，即当平板上生长出木霉菌落并产生绿色孢子时，用接种铲轻轻挑取孢子，均匀接种于木霉强化培养基平板上，木霉强化培养基按如下方法制备：每1l土壤浸出液中加入100g新鲜土豆块，熬煮10～15min，冷却后匀浆，补纯水至1000ml，依次加入红糖20g，kh2po41.2g，mgso40.6g，硫胺素0.008g，氯霉素0.1g，琼脂20g，灭菌前ph＝6.5～6.8，置于28℃培养箱中培养72h，依此法纯化多次，以获得多量的、形态单一的单菌落；
[0102]
挑取经纯化获得的木霉孢子，进行显微形态鉴定；
[0103]
经鉴定后，将纯化获得的绿色木霉孢子转接到木霉强化培养基试管斜面中，置于28℃培养72h，至整个斜面长满菌丝且产生成熟孢子，利用此方法不断进行扩繁，是为一级菌种培养；
[0104]
选取生长成熟的一级种，无菌条件下用接种铲刮取试管斜面上的孢子，接种于装有霉菌扩增培养基的500ml锥形瓶中，霉菌扩增培养基的成分为：麸皮32.5g，玉米粉25g，稻壳7.5g，大豆蛋白胨或鱼蛋白胨5g，含水量42～47％，灭菌前ph＝6.5～6.8，28℃培养72h，至培养基物料长满绿色木霉分生孢子，取样计数，绿色木霉分生孢子数≥5
×
109个/g；
[0105]
绿色木霉的三级固体发酵采用深层通风发酵法，将灭菌冷却后的固体发酵物料与二级菌种按质量比1:8混合均匀，固体发酵物料的成分为：麸皮3.25kg，玉米粉2.5kg，稻壳0.75kg，大豆蛋白胨或鱼蛋白胨0.5kg，kh2po41g，mgso40.5g，含水量42～47％，灭菌前ph＝
6.5～6.8，平铺于通风发酵池中，物料深度15～20cm，28℃发酵72h，当料心温度≥40℃时，翻料操作一次；
[0106]
发酵结束，干燥，粉碎后过60目筛，产品中绿色木霉分生孢子数≥5
×
109个/g，含水量8～9％；
[0107]
黑曲霉菌粉的制备方法具体为：
[0108]
黑曲霉分离采用稀释涂布平板法，分别采集有机肥腐熟场表层土壤，称取10g加入到90ml无菌水中，置于180r/min转数的摇床上震荡1h，静置，吸取100μl上清液均匀涂布于黑曲霉选择培养基平板上，黑曲霉选择培养基的成分为：(nh4)2so40.5g/l，红糖150g/l，kh2po41g/l，mgso40.5g/l，氯霉素0.1g/l，琼脂30g/l，灭菌前ph＝6.5～6.8，置于28℃培养箱中培养72h，观察菌落形态；
[0109]
黑曲霉纯化采用单孢子菌落法，即当平板上生长出黑曲霉菌落并产生黑色孢子时，用接种铲轻轻挑取孢子，均匀接种于黑曲霉选择培养基平板上，置于28℃培养箱中培养72h，依此法纯化多次，以获得多量的、形态单一的单菌落；
[0110]
挑取经纯化获得的黑曲霉孢子，进行显微形态鉴定；
[0111]
经鉴定后，将纯化获得的黑曲霉孢子转接到黑曲霉选择培养基试管斜面中，置于28℃培养72h，至整个斜面长满菌丝且产生成熟分生孢子，利用此方法不断进行扩繁，是为一级菌种培养；
[0112]
选取生长成熟的一级种，无菌条件下用接种铲刮取试管斜面上的孢子，接种于装有霉菌扩增培养基的500ml锥形瓶中，霉菌扩增培养基的成分为：麸皮32.5g，玉米粉25g，稻壳7.5g，大豆蛋白胨或鱼蛋白胨5g，含水量42～47％，灭菌前ph＝6.5～6.8，28℃培养72h，至培养基物料长满黑曲霉分生孢子，取样计数，黑曲霉分生孢子数≥5
×
109个/g；
[0113]
黑曲霉的三级固体发酵采用深层通风发酵法，将灭菌冷却后的固体发酵物料与二级菌种按质量比1:8混合均匀，固体发酵物料的成分为：麸皮3.25kg，玉米粉2.5kg，稻壳0.75kg，大豆蛋白胨或鱼蛋白胨0.5kg，kh2po41g，mgso40.5g，含水量42～47％，灭菌前ph＝6.5～6.8，平铺于通风发酵池中，物料深度15～20cm，28℃发酵72h，当料心温度≥40℃时，翻料操作一次；
[0114]
发酵结束，干燥，粉碎后过60目筛，产品中黑曲霉分生孢子数≥5
×
109个/g，含水量8～9％；
[0115]
光合菌液的制备方法具体为：
[0116]
(1)分别称取nahco31g、乙酸钠1g、nacl1g、nh4cl1g、mgso40.3g、k2hpo40.2g、丙酸钠0.2g、苹果酸0.25g、蛋白胨0.2g、酵母膏0.1g、去离子水1000ml；
[0117]
(2)将步骤(1)称取的酵母膏、蛋白胨加入去离子水中，加热，搅拌混匀，得到混合物d；
[0118]
(3)将步骤(1)称取的nahco3、乙酸钠、nacl、nh4cl、mgso4、k2hpo4、丙酸钠、苹果酸依次加入步骤(2)制得的混合物d中，充分混合均匀，得到混合物e；
[0119]
(4)分别称取10gγ-氨基丁酸和0.2g谷氨酸，溶解于1l去离子水中，得到混合物f；
[0120]
(5)按每升混合物e加入1ml混合物f，将步骤(4)制得的混合物f加入到步骤(3)制得的混合物e中，充分搅拌均匀得到混合物g；
[0121]
(6)采集养殖废水或化粪池表层水样，按水样：混合物g＝1:6～1:8的体积比，充分
混合，分装于透明容器中，进行光照厌氧培养；
[0122]
进一步的，所述步骤(6)的光照厌氧培养条件为：28～32℃，4000lux，定期进行搅拌或摇晃，培养7～10天。
[0123]
(2)按下述质量百分含量分别称取枯草芽孢杆菌菌粉、地衣芽孢杆菌菌粉、酿酒酵母菌粉、乳酸杆菌菌粉、绿色木霉菌粉、黑曲霉菌粉、光合菌液；
[0124][0125]
余量为光合菌液，总质量百分含量之和为100％。
[0126]
(3)将步骤(2)称取的枯草芽孢杆菌菌粉、地衣芽孢杆菌菌粉加入光合菌液中，边搅拌边加入，得到混合物a；
[0127]
(4)将步骤(2)称取的酿酒酵母菌粉、乳酸杆菌菌粉依次加入步骤(3)制得的混合物a中，边搅拌边加入，充分混合均匀，得到混合物b；
[0128]
(5)将步骤(2)称取的绿色木霉菌粉、黑曲霉菌粉缓慢加入到步骤(4)制得的混合物b中，边搅拌边加入，充分搅拌均匀，得到混合物c；
[0129]
(6)经60目尼龙网片过滤，去除杂质后，检测产品技术指标，分装，即得本发明所述微生物除臭液。
[0130]
实施例2本发明所述微生物除臭液的技术指标如下表：
[0131]
产品主要技术指标
[0132]
项目 指标光合菌有效活菌数(cfu)，亿/ml≥20.0枯草芽孢杆菌有效活菌数(cfu)，亿/ml≥5.0地衣芽孢杆菌有效活菌数(cfu)，亿/ml≥5.0乳酸菌有效活菌数(cfu)，亿/ml≥5.0酵母菌有效活菌数(cfu)，亿/ml≥2.0绿色木霉孢子数，亿/ml≥0.2黑曲霉孢子数，亿/ml≥0.2杂菌率，％≤10ph值 6.5-7.5水分，％≤30.0粪大肠杆菌群数(个/ml)≤100黄曲霉素b1(mg/kg)＜0.02
蛔虫卵死亡率(％)≥95砷及其化合物(以as计)/(mg/kg)≤75镉(及其化合物(以cd计)/(mg/kg)≤10铅及其化合物(以pb计)/(mg/kg)≤100铬及其化合物(以cr计)/(mg/kg)≤15汞及其化合物(以hg计)/(mg/kg)≤5保质期，月≥12
[0133]
实施例3本产品对畜禽养殖场臭气去除效果
[0134]
本发明所述微生物除臭液使用方法为：
[0135]
本产品主要用于畜禽养殖场、公共卫生间、化粪池、垃圾站、腐熟场等产废气臭气场所；宾馆、商场、超市等的卫生间、排污池及家庭卫生间、排污管道、沟渠等的清洁除臭工作，具体使用情况见下表：
[0136][0137]
注：1.使用量、次数、稀释率为一般参考值。
[0138]
2.本品中含多种生物活性成分，打开包装后请尽快用完，不宜久置；
[0139]
3.本品不能与农药、含铜物质及消毒剂混合使用；
[0140]
4.本品若有少量沉淀属于正常现象，使用前请摇匀；
[0141]
5.请置于避光、阴凉处保存，有效期12个月。
[0142]
本产品对畜禽养殖场臭气去除效果如图1所示，稀释本品10倍后，进行喷洒实验，3天后化粪池的恶臭味开始减轻，5后显著减轻，1周后基本无臭味，而且蚊蝇数量减少很多，乱飞的场面也看不到了，对化粪池内的硫化氢含量检测结果亦表明，产品对清除硫化氢的效果非常显著，对氨气的去除效果也很明显。
[0143]
实施例4本产品对粪尿腐熟促进效果
[0144]
使用常规技术腐熟粪尿，因腐熟不彻底，所产腐熟物料对幼苗有毒害作用。左图为利用腐熟不彻底物料混合土壤进行育苗的油菜，右图为使用本品腐熟彻底物料混合土壤育苗的油菜。
[0145]
2周后，各随机挑选30株测量株高，如图2所示，利用腐熟不彻底物料混合土壤进行育苗的油菜平均株高为2.72cm；使用本品腐熟彻底物料混合土壤育苗的油菜平均株高为5.01cm。
[0146]
将上述未彻底腐熟的粪尿，加入本产品，混合均匀放置5天后，重复上述实验，左图为实验组，右图为对照组。
[0147]
2周后，各随机挑选30株测量株高，如图3所示。经本品腐熟彻底物料混合土壤育苗的油菜平均株高为7.24cm；对照组利用腐熟不彻底物料混合土壤进行育苗的油菜平均株高为4.93cm。
[0148]
以上所述仅为本发明的较佳实施方案，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。