技术特征：
1.一种食品安全检测用稳定同位素标记啶酰菌胺内标试剂的制备方法，该稳定同位素标记的啶酰菌胺的化学结构如式(labeled boscalid)所示：其中，r为h或d，*为
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c或
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c，其合成步骤总路线为：其中，r为h或d，*为
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c或
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c；(1)在有机溶剂存在条件下，加入稳定同位素标记4-氯硝基苯，然后加入对还原剂和添加剂，在-5℃～50℃条件下，反应0.5～6小时；tlc跟踪反应原料反应完全后，反应混合溶液用水淬灭，过滤，滤液用有机溶剂萃取，合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，饱和氯化钠溶液洗涤，加入干燥剂干燥；减压蒸馏除去溶剂，残留物经柱层析得到稳定同位素标记4-氯苯胺；该步骤反应如下所示：其中稳定同位素标记4-氯硝基苯的化学结构如式(i)所示，稳定同位素标记4-氯苯胺的化学结构式如式(ii)所示，其中，r为h或d，*为
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c或
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c；(2)将步骤(1)所得稳定同位素标记4-氯苯胺加入氟硼酸中，加入重氮化试剂在-10℃～10℃条件下，反应0.5～6小时；tlc跟踪反应原料反应完全后，过滤，少量水漂洗，将所得固体加有机溶剂溶清，滴加有机溶剂析出固体，过滤，减压干燥，得到稳定同位素标记4-氯苯基氟硼酸重氮盐；
该步骤反应如下所示：其中稳定同位素标记4-氯苯基氟硼酸重氮盐的化学结构如式(iii)所示，其中，r为h或d，*为
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c或
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c；(3)将步骤(2)所得稳定同位素标记4-氯苯基氟硼酸重氮盐溶于有机溶剂中，加入催化剂、配体、2-氨基苯硼酸，在氮气保护下，在20℃～120℃条件下继续反应2～12小时；tlc跟踪反应原料反应完全后，反应混合溶液用水淬灭，用有机溶剂萃取，合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，饱和氯化钠溶液洗涤，加入干燥剂干燥；减压蒸馏除去溶剂，残留物经柱层析得到纯品稳定同位素标记4
’‑
氯-2-氨基联苯；该步骤反应如下所示：其中稳定同位素标记4
’‑
氯-2-氨基联苯的化学结构如式(iv)所示，其中，r为h或d，*为
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c或
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c；(4)将步骤(3)所得稳定同位素标记4
’‑
氯-2-氨基联苯溶于有机溶剂中，加入2-氯烟酰氯，在氮气保护下，在20℃～80℃条件下继续反应1～8小时；tlc跟踪反应原料反应完全后，反应混合溶液用水淬灭，用有机溶剂萃取，合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，饱和氯化钠溶液洗涤，加入干燥剂干燥；减压蒸馏除去溶剂，残留物经柱层析得到纯品稳定同位素标记啶酰菌胺；该步骤反应如下所示：其中稳定同位素标记啶酰菌胺的化学结构如式(labeled boscalid)所示，其中，r为h或d，*为
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c或
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c。2.根据权利要求1所述的稳定同位素标记啶酰菌胺内标试剂的制备方法，其特征在于所述步骤(1)中，稳定同位素标记的4-氯硝基苯为氘标记的4-氯硝基苯、
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c标记的4-氯硝基苯；还原剂为硼氢化锂、硼氢化钠，硼氢化钾、氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠中的一种
或几种；添加剂为氯化亚铜、溴化亚铜、氯化钴、氯化镍中的一种或几种；有机溶剂为四氢呋喃、甲基四氢呋喃、二氧六环、甲苯、甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、二甘醇二甲醚、二甘醇二乙醚等溶剂中的一种或几种；反应温度为-5℃～50℃；反应时间为0.5～6小时。3.根据权利要求1所述的稳定同位素标记啶酰菌胺内标试剂的制备方法，其特征在于所述步骤(2)中，重氮化试剂为亚硝酸钠、亚硝酸异戊酯、亚硝酸叔丁酯中的一种或几种；有机溶剂为乙醚、甲基叔丁基醚、丙酮、甲苯、二氯甲烷、四氢呋喃、氯仿中的一种或几种；反应温度为-10℃～10℃；反应时间为0.5～6小时。4.根据权利要求1所述的稳定同位素标记啶酰菌胺内标试剂的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中，催化剂为醋酸钯、氯化钯、双(三苯基膦)二氯化钯、四(三苯基膦)钯、双(二苯基膦苯基醚)二氯化钯、双(二苯基膦二茂铁)二氯化钯、乙酰丙酮钯、三氟乙酸钯、双(二苯基磷)乙烷二氯化钯、三(二亚苄基丙酮)二钯、三(二亚苄基丙酮)二钯氯仿加合物中的一种或几种；配体为1,3-二(2,6-二异丙基苯基)氯化咪唑、1,3-二(2,4,6-三甲基苯基)氯化咪唑、1,3-双(2,4,6-三甲苯基)氯化咪唑鎓、1,3-双((2,6-二异丙苯基)氯化咪唑鎓等中的一种或几种；溶剂为四氢呋喃、二氧六环、甲苯、二甲苯、2-甲基四氢呋喃、n,n-二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、苯、氯苯中的一种或几种；反应温度为20℃～120℃；反应时间为2～12小时。5.根据权利要求1所述的稳定同位素标记啶酰菌胺内标试剂的制备方法，其特征在于所述步骤(4)中，溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇中的一种或几种；反应温度为20℃～80℃；反应时间为1～8小时。
技术总结
本发明属于食品安全检测用标准物质研发领域，具体涉及一种食品安全检测用稳定同位素标记啶酰菌胺内标试剂的制备方法。本发明以稳定同位素标记4-氯硝基苯为原料，经还原、重氮化、偶联、缩合生成稳定同位素标记啶酰菌胺。合成所需原料、中间体简单易得，反应条件温和，目标产物稳定同位素标记啶酰菌胺，所得产品化学纯度可达99％以上，同位素丰度可达99％以上，能满足食品安全检测用液相色谱串联质谱法所需内标试剂的技术要求。目前尚未发现有该结构稳定同位素标记啶酰菌胺的制备文献报道，因此，研制稳定同位素标记啶酰菌胺对我国的食品安全监管检测工作有重要意义。安全监管检测工作有重要意义。安全监管检测工作有重要意义。
技术研发人员：李珂珂 王玮 李宇孟 潘黎东
受保护的技术使用者：谱同生物医药科技（常州）有限公司
技术研发日：2021.11.18
技术公布日：2022/1/14