技术特征：
1.一种人源胎盘来源间充质干细胞的优化培养基，其特征在于，所述培养基包括：基础培养基、血清替代物和补充剂；所述基础培养基包括dmem-low glucose、l-谷氨酰胺和β-巯基乙醇；所述血清替代物包括knockout
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血清替代物；所述补充剂包括重组人fgf2蛋白、重组人fgf4蛋白、重组人pdgfab蛋白、重组人egf蛋白、重组人vegf 165a蛋白、重组人hgf蛋白、重组人tgf-beta 1蛋白、烟酰胺单核苷酸和非必需氨基酸。2.根据权利要求1所述的优化培养基，其特征在于，所述基础培养基、血清替代物和补充剂的体积比为90:9:1；所述优化培养基中，l-谷氨酰胺的物质的量浓度为6mm、β-巯基乙醇的物质的量浓度为0.15mm、重组人fgf2蛋白的质量浓度为30ng/ml、重组人fgf4蛋白的质量浓度为20ng/ml、重组人pdgfab蛋白的质量浓度为6.0ng/ml、重组人egf蛋白的质量浓度为2.0ng/ml、重组人vegf 165a蛋白的质量浓度为0.4ng/ml、重组人hgf蛋白的质量浓度为0.4ng/ml、重组人tgf-beta 1蛋白的质量浓度为1.0ng/ml、烟酰胺单核苷酸的物质的量浓度为4mm和非必需氨基酸的体积百分含量为1％。3.一种培养人源胎盘来源间充质干细胞的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的优化培养基、组织消化液、红细胞裂解液和培养皿；所述组织消化液包括100u/ml collagenase typei、1.5μg/mldnase i和2.4u/mldispase。4.一种人源胎盘来源间充质干细胞的培养方法，包括以下步骤：1)将预处理的胎盘组织与组织消化液混合，37℃消化2～3h，中止消化，得到消化后胎盘组织细胞悬液；2)将消化后的胎盘组织细胞悬液进行过滤，得到含有单核细胞的细胞悬液，离心，得到单个核细胞沉淀；3)将单个核细胞沉淀与红细胞裂解液混合进行红细胞的裂解，得到胎盘组织细胞；4)将胎盘组织细胞重悬于权利要求1或2所述的优化培养基中，得到胎盘组织细胞重悬液，将所述胎盘组织细胞重悬液接种到液，将所述胎盘组织细胞重悬液接种到培养瓶中进行培养，得到人源胎盘来源间充质干细胞。5.根据权利要求4所述的培养方法，其特征在于，步骤1)所述预处理的胎盘组织的预处理方法包括：以脐带为中心，从最接近脐带的区域剪切下半径为2～3cm的胎盘组织，剪掉脐带对侧胎盘组织，弃掉，将剩下的脐带侧胎盘组织剪为2～4cm的小块，使用hbss溶液对小块进行洗涤，直至没有明显血液，得到洗涤后的组织块；将洗涤后的组织块切成2～5mm的细小块，得到预处理的胎盘组织。6.根据权利要求4所述的培养方法，其特征在于，步骤2)所述过滤包括：将消化后的胎盘组织进行过滤，得到含有单个核细胞的细胞悬液和未消化的胎盘组织碎片；将所述未消化的胎盘组织碎片悬浮后再次过滤，收集含有单个核细胞的细胞悬液；所述过滤的次数为2～3次。7.根据权利要求4所述的培养方法，其特征在于，步骤3)所述裂解包括：将单个核细胞沉淀与红细胞裂解液混合后反复吹打2～3min，离心后弃上清；取沉淀再次与红细胞裂解液混合，反复吹打2～3min，离心弃上清，重复取沉淀和与红细胞裂解液混合、反复吹打和离心
弃上清的操作，直至细胞沉淀中看不到明显的红色血细胞。8.根据权利要求4所述的培养方法，其特征在于，步骤4)中，所述接种的密度为6
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106个细胞/t-175培养瓶；所述培养的条件为37℃和5％co2加湿培养。9.根据权利要求4所述的培养方法，其特征在于，步骤4)所述培养包括：培养48h后，使用新鲜的优化培养基进行半量换液，再培养24h后，使用37℃预热的d-pbs洗涤，去除非贴壁细胞和细胞碎屑，加入新的优化培养基，之后，每3天全量更换新的优化培养基一次，直至细胞单层铺满t-175培养瓶90％以上，得到第0代细胞。10.根据权利要求9所述的培养方法，其特征在于，得到第0代细胞后，还包括对第0代细胞进行继代培养，所述继代培养包括：待第0代细胞汇合率达到90％，使用37℃预热的d-pbs进行洗涤，洗涤后加入细胞消化液进行消化，消化后，将消化后细胞接种在新鲜的优化培养基中培养，实现细胞的继代培养；所述继代培养以1.2
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106个细胞/瓶的接种密度在t-175培养瓶中进行接种。
技术总结
本发明涉及一种人源胎盘来源间充质干细胞的优化培养基、试剂盒和培养方法，属于细胞培养技术领域。本发明所述培养基包括：DMEM-low glucose、L-谷氨酰胺、β-巯基乙醇、Knockout
技术研发人员：雷欣华 金倞 梁磊
受保护的技术使用者：北京吉中科生物技术有限公司
技术研发日：2021.12.03
技术公布日：2022/1/11