治疗增生性瘢痕、疤痕的小干扰核苷酸双链及其应用的制作方法

1.本发明属于生物医疗领域，尤其涉及治疗增生性瘢痕、疤痕的小干扰核苷酸双链及其应用，具体涉及一种fkbp10在作为增生性瘢痕的治疗靶点方面的应用，一种治疗增生性瘢痕、疤痕的小干扰核苷酸双链，一种用于治疗增生性瘢痕的药物，一种治疗增生性瘢痕的方法，一种用于增生性瘢痕诊断或治疗的生物标志物。


背景技术：

2.增生性瘢痕的病理基础是以成纤维细胞为主的细胞成分的过度增殖和以胶原为主的细胞外基质的过度沉积，这种增生性瘢痕的特点是损伤后炎症反应延长，导致局部成纤维细胞的血管化、细胞增生和过量胶原沉积。致病因素主要包括：代谢异常、细胞因子、低氧和自由基、基因水平变化。
3.目前国内外治疗瘢痕多采用局部药物封闭、皮肤移植、手术切除植皮、晶体磨疤术、气囊扩张术、抗体注射、放射治疗、压迫疗法、激素疗法、硅酮类等疗法；但是，现有治疗增生性瘢痕的技术在临床上都不是很成熟,疗效有待观察；而且，有的治疗方法所需治疗时间长，治疗痛苦大，而且容易反复，出现不良后果等，治疗效果都不尽如人意。


技术实现要素：

4.发明目的：针对现有技术中存在问题或不足，本发明提供一种fkbp10在作为增生性瘢痕的治疗靶点方面的应用，一种治疗增生性瘢痕、疤痕的小干扰核苷酸双链，一种用于治疗增生性瘢痕的药物，一种治疗增生性瘢痕的方法，一种用于增生性瘢痕诊断或治疗的生物标志物。
5.为实现上述发明目的，本发明的实施例提供一种fkbp10在作为增生性瘢痕的治疗靶点方面的应用。
6.本发明的实施例还提供一种治疗增生性瘢痕、疤痕的小干扰核苷酸双链，其特征在于，所述小干扰核苷酸双链由fkbp10作为靶点设计得到。
7.具体的，所述小干扰核苷酸双链的序列为下列序列中的一条或一条以上：
8.sirna-fkbp10-1：正义链：5
‘‑
agcucaagcugaagucaga-3’(seq id no.1)，
9.反义链：5
‘‑
ucugacuucagcuugagcu-3’(seq id no.2)；
10.sirna-fkbp10-2：正义链：5
‘‑
gaagauguggucaucgaga-3’(seq id no.3)，
11.反义链：5
‘‑
ucucgaugaccacaucuuc-3’(seq id no.4)；
12.sirna-fkbp10-3：正义链：5
‘‑
agcugaagucagaugaggac-3’(seq id no.5)，
13.反义链：5
‘‑
uccucaucugacuucagcuug-3’(seq id no.6)；
14.sirna-fkbp10-4：正义链：5
‘‑
gaagauguggucaucgagag-3’(seq id no.7)，
15.反义链：5
‘‑
ucucgaugaccacaucuucca-3’(seq id no.8)；
16.sirna-fkbp10-5：正义链：5
‘‑
uggaagauguggucaucga-3’(seq id no.9)，
17.反义链：5
‘‑
ucgaugaccacaucuucca-3’(seq id no.10)；
18.sirna-fkbp10-6：正义链：5
‘‑
gcucaagcugaagucagau-3’(seq id no.11)，
19.反义链：5
‘‑
aucugacuucagcuugagc-3’(seq id no.12)；
20.sirna-fkbp10-7：正义链：5
‘‑
ugggcaugugugucaacgagc-3’(seq id no.13)，
21.反义链：5
‘‑
ucguugacacacaugcccaug(seq id no.14)；
22.sirna-fkbp10-8：正义链：5
‘‑
agcugaagucagaugagga-3’(seq id no.15)，
23.反义链：5
‘‑
uccucaucugacuucagcu-3’(seq id no.16)；
24.sirna-fkbp10-9：正义链：5
‘‑
gggcaugugugucaacgagcg-3’(seq id no.17)，
25.反义链：5
‘‑
cucguugacacacaugcccau-3’(seq id no.18)；
26.sirna-fkbp10-10：正义链：5
‘‑
ucaugggcaugugugucaa-3’(seq id no.19)，
27.反义链：5
‘‑
uugacacacaugcccauga-3’(seq id no.20)；
28.sirna-fkbp10-11：正义链：5
‘‑
gcucaagcugaagucagauga-3’(seq id no.21)，
29.反义链：5
‘‑
aucugacuucagcuugagcuc-3’(seq id no.22)；
30.sirna-fkbp10-12：正义链：5
‘‑
caggcuaccuguuugugugg-3’(seq id no.23)，
31.反义链：5
‘‑
cacacaaacagguagccugug-3’(seq id no.24)；
32.sirna-fkbp10-13：正义链：5
‘‑
gggcaugugugucaacgag-3’(seq id no.25)，
33.反义链：5
‘‑
cucguugacacacaugccc-3’(seq id no.26)；
34.sirna-fkbp10-14：正义链：5
‘‑
ccuucaucaaggcucaagu-3’(seq id no.27)，
35.反义链：5
‘‑
acuugagccuugaugaagg-3’(seq id no.28)；
36.sirna-fkbp10-15：正义链：5
‘‑
gccugcagggcaugugugu-3’(seq id no.29)，
37.反义链：5
‘‑
acacacaugcccugcaggc-3’(seq id no.30)；
38.sirna-fkbp10-16：正义链：5
‘‑
gggccugcagggcaugugu-3’(seq id no.31)，
39.反义链：5
‘‑
acacaugcccugcaggccc-3’(seq id no.32)；
40.sirna-fkbp10-17：正义链：5
‘‑
cuucaucaaggcucaagug-3’(seq id no.33)，
41.反义链：5
‘‑
cacuugagccuugaugaag-3’(seq id no.34)；
42.sirna-fkbp10-18：正义链：5
‘‑
uucaucaaggcucaaguga-3’(seq id no.35)，
43.反义链：5
‘‑
ucacuugagccuugaugaagg-3’(seq id no.36)；
44.sirna-fkbp10-19：正义链：5
‘‑
caaaggacgccucaugccu-3’(seq id no.37)，
45.反义链：5
‘‑
aggcaugaggcguccuuug-3’(seq id no.38)；
46.sirna-fkbp10-20：正义链：5
‘‑
uucaucaaggcucaaguga-3’(seq id no.39)，
47.反义链：5
‘‑
ucacuugagccuugaugaa-3’(seq id no.40)；
48.sirna-fkbp10-21：正义链：5
‘‑
cccgcaaccacaccuacaaua-3’(seq id no.41)，
49.反义链：5
‘‑
uuguaggugugguugcgggag-3’(seq id no.42)；
50.sirna-fkbp10-22：正义链：5
‘‑
cgcaaccacaccuacaauacc-3’(seq id no.43)，
51.反义链：5
‘‑
uauuguaggugugguugcggg-3’(seq id no.44)；
52.sirna-fkbp10-23：正义链：5
‘‑
gcaaccacaccuacaauaccu-3’(seq id no.45)，
53.反义链：5
‘‑
agguauuguaggugugguugc-3’(seq id no.46)；
54.sirna-fkbp10-24：正义链：5
‘‑
gaagauguggucaucgagagg-3’(seq id no.47)，
55.反义链：5
‘‑
ucucgaugaccacaucuucca-3’(seq id no.48)；
56.sirna-fkbp10-25：正义链：5
‘‑
ggauguguggaacaaggaaga-3’(seq id no.49)，
57.反义链：5
‘‑
uuccuuguuccacacauccag-3’(seq id no.50)；
58.sirna-fkbp10-26：正义链：5
‘‑
guguggaacaaggaagacacc-3’(seq id no.51)，
59.反义链：5
‘‑
ugucuuccuuguuccacacau-3’(seq id no.52)；
60.sirna-fkbp10-27：正义链：5
‘‑
agcugaagucagaugaggacg-3’(seq id no.53)，
61.反义链：5
‘‑
uccucaucugacuucagcuug-3’(seq id no.54)；
62.sirna-fkbp10-28：正义链：5
‘‑
acuuuguccgcuaccacuaca-3’(seq id no.55)，
63.反义链：5
‘‑
uagugguagcggacaaagucg-3’(seq id no.56)；
64.sirna-fkbp10-29：正义链：5
‘‑
ggcgagaaaggcuaugggaca-3’(seq id no.57)，
65.反义链：5
‘‑
ucccauagccuuucucgccau-3’(seq id no.58)；
66.sirna-fkbp10-30：正义链：5
‘‑
gaggaguucuccaccuucauc-3’(seq id no.59)，
67.反义链：5
‘‑
ugaagguggagaacuccuccg-3’(seq id no.60)；
68.sirna-fkbp10-31：正义链：5
‘‑
gaguucuccaccuucaucaag-3’(seq id no.61)，
69.反义链：5
‘‑
ugaugaagguggagaacuccu-3’(seq id no.62)；
70.sirna-fkbp10-32：正义链：5
‘‑
aguucuccaccuucaucaagg-3’(seq id no.63)，
71.反义链：5
‘‑
uugaugaagguggagaacucc-3’(seq id no.64)；
72.sirna-fkbp10-33：正义链：5
‘‑
ccauaggagacauguuccaga-3’(seq id no.65)，
73.反义链：5
‘‑
uggaacaugucuccuaugguu-3’(seq id no.66)；
74.sirna-fkbp10-34：正义链：5
‘‑
uaggagacauguuccagaacc-3’(seq id no.67)，
75.反义链：5
‘‑
uucuggaacaugucuccuaug-3’(seq id no.68)；
76.sirna-fkbp10-35：正义链：5
‘‑
agcucaagcugaagucagaug-3’(seq id no.69)，
77.反义链：5
‘‑
ucugacuucagcuugagcucg-3’(seq id no.70)；
78.sirna-fkbp10-36：正义链：5
‘‑
ugcuggauguguggaacaagg-3’(seq id no.71)，
79.反义链：5
‘‑
uuguuccacacauccagcaga-3’(seq id no.72)；
80.sirna-fkbp10-37：正义链：5
‘‑
cacaccuacaauaccuauauc-3’(seq id no.73)，
81.反义链：5
‘‑
uauagguauuguagguguggu-3’(seq id no.74)；
82.sirna-fkbp10-38：正义链：5
‘‑
cggaggaguucuccaccuuca-3’(seq id no.75)，
83.反义链：5
‘‑
aagguggagaacuccuccgga-3’(seq id no.76)；
84.sirna-fkbp10-39：正义链：5
‘‑
ggcaagaaguuugauucaagc-3’(seq id no.77)，
85.反义链：5
‘‑
uugaaucaaacuucuugccau-3’(seq id no.78)；
86.sirna-fkbp10-40：正义链：5
‘‑
gaaguuugauucaagcuauga-3’(seq id no.79)，
87.反义链：5
‘‑
auagcuugaaucaaacuucuu-3’(seq id no.80)；
88.sirna-fkbp10-41：正义链：5
‘‑
guuugauucaagcuaugaucg-3’(seq id no.81)，
89.反义链：5
‘‑
aucauagcuugaaucaaacuu-3’(seq id no.82)；
90.sirna-fkbp10-42：正义链：5
‘‑
gauucaagcuaugaucgcaac-3’(seq id no.83)，
91.反义链：5
‘‑
ugcgaucauagcuugaaucaa-3’(seq id no.84)；
92.sirna-fkbp10-43：正义链：5
‘‑
ggagagagaaggaagauuauc-3’(seq id no.85)，
93.反义链：5
‘‑
uaaucuuccuucucucuccag-3’(seq id no.86)；
94.sirna-fkbp10-44：正义链：5
‘‑
gagagaaggaagauuaucauc-3’(seq id no.87)，
95.反义链：5
‘‑
ugauaaucuuccuucucucuc-3’(seq id no.88)；
96.sirna-fkbp10-45：正义链：5
‘‑
cugccgugcuaaucuucaacg-3’(seq id no.89)，
97.反义链：5
‘‑
uugaagauuagcacggcagag-3’(seq id no.90)；
98.sirna-fkbp10-46：正义链：5
‘‑
cgauaccauuacaacuguucu-3’(seq id no.91)，
99.反义链：5
‘‑
aacaguuguaaugguaucgaa-3’(seq id no.92)；
100.sirna-fkbp10-47：正义链：5
‘‑
gagacauguuccagaaccagg-3’(seq id no.93)，
101.反义链：5
‘‑
ugguucuggaacaugucuccu-3’(seq id no.94)；
102.sirna-fkbp10-48：正义链：5
‘‑
cuaccguguuucucuuccauc-3’(seq id no.95)，
103.反义链：5
‘‑
uggaagagaaacacgguagag-3’(seq id no.96)；
104.sirna-fkbp10-49：正义链：5
‘‑
cagcugagcuuguuauccauc-3’(seq id no.97)，
105.反义链：5
‘‑
uggauaacaagcucagcugug-3’(seq id no.98)；
106.sirna-fkbp10-50：正义链：5
‘‑
cuuucucuuucuuuguacuuc-3’(seq id no.99)，
107.反义链：5
‘‑
aguacaaagaaagagaaaguu-3’(seq id no.100)；
108.sirna-fkbp10-51：正义链：5
‘‑
cuuucuuuguacuucuuguca-3’(seq id no.101)，
109.反义链：5
‘‑
acaagaaguacaaagaaagag-3’(seq id no.102)；
110.sirna-fkbp10-52：正义链：5
‘‑
gaaccauagaagagaggaaga-3’(seq id no.103)，
111.反义链：5
‘‑
uuccucucuucuaugguuccu-3’(seq id no.104)；
112.sirna-fkbp10-53：正义链：5
‘‑
gagagagaaggaagauuauca-3’(seq id no.105)，
113.反义链：5
‘‑
ugauaaucuuccuucucucuc-3’(seq id no.106)；
114.sirna-fkbp10-54：正义链：5
‘‑
gaaaggcuaugggacagugau-3’(seq id no.107)，
115.反义链：5
‘‑
aucacugucccauagccuuuc-3’(seq id no.108)；
116.sirna-fkbp10-55：正义链：5
‘‑
ggacuucaugcgcuaccacua-3’(seq id no.109)，
117.反义链：5
‘‑
uagugguagcgcaugaagucc-3’(seq id no.110)；
118.sirna-fkbp10-56：正义链：5
‘‑
gcacuuaugacaccuacgucg-3’(seq id no.111)，
119.反义链：5
‘‑
acguaggugucauaagugccg-3’(seq id no.112)；
120.sirna-fkbp10-57：正义链：5
‘‑
ccgugcuaaucuucaacgucc-3’(seq id no.113)，
121.反义链：5
‘‑
acguugaagauuagcacggca-3’(seq id no.114)；
122.sirna-fkbp10-58：正义链：5
‘‑
cccuggaagauguggucaucg-3’(seq id no.115)，
123.反义链：5
‘‑
augaccacaucuuccaggggg-3’(seq id no.116)；
124.sirna-fkbp10-59：正义链：5
‘‑
ccugcugcaguugcugcuacu-3’(seq id no.117)，
125.反义链：5
‘‑
uagcagcaacugcagcagggg-3’(seq id no.118)；
126.sirna-fkbp10-60：正义链：5
‘‑
cucuuucuuuguacuucuugu-3’(seq id no.119)，
127.反义链：5
‘‑
aagaaguacaaagaaagagaa-3’(seq id no.120)；
128.sirna-fkbp10-61：正义链：5
‘‑
gcuaugaaaucuuggauuugg-3’(seq id no.121)，
129.反义链：5
‘‑
aaauccaagauuucauagccc-3’(seq id no.122)；
130.sirna-fkbp10-62：正义链：5
‘‑
uggaagauguggucaucgaga-3’(seq id no.123)，
131.反义链：5
‘‑
ucgaugaccacaucuuccagg-3’(seq id no.124)；
132.sirna-fkbp10-63：正义链：5
‘‑
cuacaacggcacuuuugaaga-3’(seq id no.125)，
133.反义链：5
‘‑
uucaaaagugccguuguagug-3’(seq id no.126)；
134.sirna-fkbp10-64：正义链：5
‘‑
agaaguuugauucaagcuaug-3’(seq id no.127)，
135.反义链：5
‘‑
uagcuugaaucaaacuucuug-3’(seq id no.128)；
136.sirna-fkbp10-65：正义链：5
‘‑
ccucuacuucgaugugguucu-3’(seq id no.129)，
137.反义链：5
‘‑
aaccacaucgaaguagagggu-3’(seq id no.130)；
138.sirna-fkbp10-66：正义链：5
‘‑
cgaugugguucugcuggaugu-3’(seq id no.131)，
139.反义链：5
‘‑
auccagcagaaccacaucgaa-3’(seq id no.132)；
140.sirna-fkbp10-67：正义链：5
‘‑
gcaugguccaggacggcgacu-3’(seq id no.133)，
141.反义链：5
‘‑
ucgccguccuggaccaugcgg-3’(seq id no.134)；
142.sirna-fkbp10-68：正义链：5
‘‑
gguccaggacggcgacuuugu-3’(seq id no.135)，
143.反义链：5
‘‑
aaagucgccguccuggaccau-3’(seq id no.136)；
144.sirna-fkbp10-69：正义链：5
‘‑
ccuccuucgacaccagcuaca-3’(seq id no.137)，
145.反义链：5
‘‑
uagcuggugucgaaggaggug-3’(seq id no.138)；
146.sirna-fkbp10-70：正义链：5
‘‑
gagagagaaggaagauuauca-3’(seq id no.139)，
147.反义链：5
‘‑
auaaucuuccuucucucucca-3’(seq id no.140)；
148.sirna-fkbp10-71：正义链：5
‘‑
gaaggacgcuguccagcuaga-3’(seq id no.141)，
149.反义链：5
‘‑
uagcuggacagcguccuucgg-3’(seq id no.142)；
150.sirna-fkbp10-72：正义链：5
‘‑
cccucuucgauuccagcuacu-3’(seq id no.143)，
151.反义链：5
‘‑
uagcuggaaucgaagagggug-3’(seq id no.144)；
152.sirna-fkbp10-73：正义链：5
‘‑
ggagaauggaacuggagacaa-3’(seq id no.145)，
153.反义链：5
‘‑
uugucuccaguuccauucucc-3’(seq id no.146)；
154.sirna-fkbp10-74：正义链：5
‘‑
gaauggaacuggagacaagau-3’(seq id no.147)，
155.反义链：5
‘‑
aucuugucuccaguuccauuc-3’(seq id no.148)；
156.sirna-fkbp10-75：正义链：5
‘‑
augucauugacuuccacaacc-3’(seq id no.149)，
157.反义链：5
‘‑
uuguggaagucaaugacaugg-3’(seq id no.150)；
158.sirna-fkbp10-76：正义链：5
‘‑
ccugcaaugagaccaccaagc-3’(seq id no.151)，
159.反义链：5
‘‑
uugguggucucauugcagguc-3’(seq id no.152)；
160.sirna-fkbp10-77：正义链：5
‘‑
gggacuuuguucgauaccauu-3’(seq id no.153)，
161.反义链：5
‘‑
ugguaucgaacaaagucccca-3’(seq id no.154)；
162.sirna-fkbp10-78：正义链：5
‘‑
gacuuuguucgauaccauuac-3’(seq id no.155)，
163.反义链：5
‘‑
aaugguaucgaacaaaguccc-3’(seq id no.156)；
164.sirna-fkbp10-79：正义链：5
‘‑
gcagugcugugcugcuguuug-3’(seq id no.157)，
165.反义链：5
‘‑
aacagcagcacagcacugccu-3’(seq id no.158)；
166.sirna-fkbp10-80：正义链：5
‘‑
gugcugugcugcuguuugagg-3’(seq id no.159)，
167.反义链：5
‘‑
ucaaacagcagcacagcacug-3’(seq id no.160)；
168.sirna-fkbp10-81：正义链：5
‘‑
ccaccuucaucaaggcucaag-3’(seq id no.161)，
169.反义链：5
‘‑
ugagccuugaugaagguggag-3’(seq id no.162)；
170.sirna-fkbp10-82：正义链：5
‘‑
caccuucaucaaggcucaagu-3’(seq id no.163)，
171.反义链：5
‘‑
uugagccuugaugaaggugga-3’(seq id no.164)；
172.sirna-fkbp10-83：正义链：5
‘‑
gcaagaucacagucgacgagc-3’(seq id no.165)，
173.反义链：5
‘‑
ucgucgacugugaucuugccg-3’(seq id no.166)；
174.sirna-fkbp10-84：正义链：5
‘‑
gucgacgagcucaagcugaag-3’(seq id no.167)，
175.反义链：5
‘‑
ucagcuugagcucgucgacug-3’(seq id no.168)；
176.sirna-fkbp10-85：正义链：5
‘‑
cuucaacguccaugucauuga-3’(seq id no.169)，
177.反义链：5
‘‑
aaugacauggacguugaagau-3’(seq id no.170)；
178.sirna-fkbp10-86：正义链：5
‘‑
guggaaaucaggacacugucc-3’(seq id no.171)，
179.反义链：5
‘‑
acaguguccugauuuccacca-3’(seq id no.172)；
180.sirna-fkbp10-87：正义链：5
‘‑
ccuucaucaaggcucaaguga-3’(seq id no.173)，
181.反义链：5
‘‑
acuugagccuugaugaaggug-3’(seq id no.174)；
182.sirna-fkbp10-88：正义链：5
‘‑
caucaaggcucaagugaguga-3’(seq id no.175)，
183.反义链：5
‘‑
acucacuugagccuugaugaa-3’(seq id no.176)；
184.sirna-fkbp10-89：正义链：5
‘‑
gauggcaagaaguuugauuca-3’(seq id no.177)，
185.反义链：5
‘‑
aaucaaacuucuugccaucuu-3’(seq id no.178)；
186.sirna-fkbp10-90：正义链：5
‘‑
cucuucgauuccagcuacucc-3’(seq id no.179)，
187.反义链：5
‘‑
aguagcuggaaucgaagaggg-3’(seq id no.180)；
188.sirna-fkbp10-91：正义链：5
‘‑
cugccaaccuguuugaagaca-3’(seq id no.181)，
189.反义链：5
‘‑
ucuucaaacagguuggcagga-3’(seq id no.182)；
190.sirna-fkbp10-92：正义链：5
‘‑
gccaaccuguuugaagacaug-3’(seq id no.183)，
191.反义链：5
‘‑
ugucuucaaacagguuggcag-3’(seq id no.184)；
192.sirna-fkbp10-93：正义链：5
‘‑
ccaaccuguuugaagacaugg-3’(seq id no.185)，
193.反义链：5
‘‑
augucuucaaacagguuggca-3’(seq id no.186)；
194.sirna-fkbp10-94：正义链：5
‘‑
auguggucaucgagagguacc-3’(seq id no.187)，
195.反义链：5
‘‑
uaccucucgaugaccacaucu-3’(seq id no.188)；
196.sirna-fkbp10-95：正义链：5
‘‑
gugugucaacgagcggcgacg-3’(seq id no.189)，
197.反义链：5
‘‑
ucgccgcucguugacacacau-3’(seq id no.190)；
198.sirna-fkbp10-96：正义链：5
‘‑
gcgacuuuguccgcuaccacu-3’(seq id no.191)，
199.反义链：5
‘‑
ugguagcggacaaagucgccg-3’(seq id no.192)；
200.sirna-fkbp10-97：正义链：5
‘‑
ucgacaccagcuacaguaagg-3’(seq id no.193)，
201.反义链：5
‘‑
uuacuguagcuggugucgaag-3’(seq id no.194)；
202.sirna-fkbp10-98：正义链：5
‘‑
agagaaggaagauuaucaucc-3’(seq id no.195)，
203.反义链：5
‘‑
augauaaucuuccuucucucu-3’(seq id no.196)；
204.sirna-fkbp10-99：正义链：5
‘‑
uccugauugacgugcacaacc-3’(seq id no.197)，
205.反义链：5
‘‑
uugugcacgucaaucaggagg-3’(seq id no.198)；
206.sirna-fkbp10-100：正义链：5
‘‑
gacgcuguccagcuagagacg-3’(seq id no.199)，
207.反义链：5
‘‑
ucucuagcuggacagcguccu-3’(seq id no.200)；
208.sirna-fkbp10-101：正义链：5
‘‑
gggacuucaugcgcuaccacu-3’(seq id no.201)，
209.反义链：5
‘‑
ugguagcgcaugaaguccccg-3’(seq id no.202)；
210.sirna-fkbp10-102：正义链：5
‘‑
caugcgcuaccacuacaaugg-3’(seq id no.203)，
211.反义链：5
‘‑
auuguagugguagcgcaugaa-3’(seq id no.204)；
212.sirna-fkbp10-103：正义链：5
‘‑
acaccuacaauaccuauaucg-3’(seq id no.205)，
213.反义链：5
‘‑
auauagguauuguaggugugg-3’(seq id no.206)；
214.sirna-fkbp10-104：正义链：5
‘‑
ccugcggaugugguggaaauc-3’(seq id no.207)，
215.反义链：5
‘‑
uuuccaccacauccgcagggu-3’(seq id no.208)；
216.sirna-fkbp10-105：正义链：5
‘‑
cugcggaugugguggaaauca-3’(seq id no.209)，
217.反义链：5
‘‑
auuuccaccacauccgcaggg-3’(seq id no.210)；
218.sirna-fkbp10-106：正义链：5
‘‑
gcggaugugguggaaaucagg-3’(seq id no.211)，
219.反义链：5
‘‑
ugauuuccaccacauccgcag-3’(seq id no.212)；
220.sirna-fkbp10-107：正义链：5
‘‑
caaugagaccaccaagcuugg-3’(seq id no.213)，
221.反义链：5
‘‑
aagcuugguggucucauugca-3’(seq id no.214)；
222.sirna-fkbp10-108：正义链：5
‘‑
ggacuuuguucgauaccauua-3’(seq id no.215)，
223.反义链：5
‘‑
augguaucgaacaaagucccc-3’(seq id no.216)；
224.sirna-fkbp10-109：正义链：5
‘‑
ggagagaggcggcagcucauc-3’(seq id no.217)，
225.反义链：5
‘‑
ugagcugccgccucucuccca-3’(seq id no.218)；
226.sirna-fkbp10-110：正义链：5
‘‑
accuguuugaagacauggacc-3’(seq id no.219)，
227.反义链：5
‘‑
uccaugucuucaaacagguug-3’(seq id no.220)；
228.sirna-fkbp10-111：正义链：5
‘‑
aagacauggaccucaacaagg-3’(seq id no.221)，
229.反义链：5
‘‑
uuguugagguccaugucuuca-3’(seq id no.222)；
230.sirna-fkbp10-112：正义链：5
‘‑
ccaggacggcaagaucacagu-3’(seq id no.223)，
231.反义链：5
‘‑
ugugaucuugccguccugguu-3’(seq id no.224)；
232.sirna-fkbp10-113：正义链：5
‘‑
agaucacagucgacgagcuca-3’(seq id no.225)，
233.反义链：5
‘‑
agcucgucgacugugaucuug-3’(seq id no.226)；
234.sirna-fkbp10-114：正义链：5
‘‑
ucacagucgacgagcucaagc-3’(seq id no.227)，
235.反义链：5
‘‑
uugagcucgucgacugugauc-3’(seq id no.228)；
236.sirna-fkbp10-115：正义链：5
‘‑
cagucgacgagcucaagcuga-3’(seq id no.229)，
237.反义链：5
‘‑
agcuugagcucgucgacugug-3’(seq id no.230)；
238.sirna-fkbp10-116：正义链：5
‘‑
ucgacgagcucaagcugaagu-3’(seq id no.231)，
239.反义链：5
‘‑
uucagcuugagcucgucgacu-3’(seq id no.232)；
240.sirna-fkbp10-117：正义链：5
‘‑
cgagcucaagcugaagucaga-3’(seq id no.233)，
241.反义链：5
‘‑
ugacuucagcuugagcucguc-3’(seq id no.234)；
242.sirna-fkbp10-118：正义链：5
‘‑
gguccacgaggagcucugagg-3’(seq id no.235)，
243.反义链：5
‘‑
ucagagcuccucguggacccg-3’(seq id no.236)；
244.sirna-fkbp10-119：正义链：5
‘‑
ggguguuagggcuaugaaauc-3’(seq id no.237)，
245.反义链：5
‘‑
uuucauagcccuaacacccac-3’(seq id no.238)；
246.sirna-fkbp10-120：正义链：5
‘‑
ggcuccuuucccuaaggaacc-3’(seq id no.239)，
247.反义链：5
‘‑
uuccuuagggaaaggagccuu-3’(seq id no.240)；
248.sirna-fkbp10-121：正义链：5
‘‑
aaauguuuggauuugcaaagc-3’(seq id no.241)，
249.反义链：5
‘‑
uuugcaaauccaaacauuuua-3’(seq id no.242)；
250.sirna-fkbp10-122：正义链：5
‘‑
agcugagcuuguuauccaucu-3’(seq id no.243)，
251.反义链：5
‘‑
auggauaacaagcucagcugu-3’(seq id no.244)；
252.sirna-fkbp10-123：正义链：5
‘‑
ccuaaggaaccauagaagaga-3’(seq id no.245)，
253.反义链：5
‘‑
ucuucuaugguuccuuaggga-3’(seq id no.246)；
254.sirna-fkbp10-124：正义链：5
‘‑
agagcucugcacacucaaagg-3’(seq id no.247)，
255.反义链：5
‘‑
uuugagugugcagagcucugc-3’(seq id no.248)；
256.sirna-fkbp10-125：正义链：5
‘‑
cugcacacucaaaggcuaaac-3’(seq id no.249)，
257.反义链：5
‘‑
uuagccuuugagugugcagag-3’(seq id no.250)；
258.sirna-fkbp10-126：正义链：5
‘‑
gcugcuuggguggguguuagg-3’(seq id no.251)，
259.反义链：5
‘‑
uaacacccacccaagcagcuu-3’(seq id no.252)；
260.sirna-fkbp10-127：正义链：5
‘‑
gcacagaccucuaccguguuu-3’(seq id no.253)，
261.反义链：5
‘‑
acacgguagaggucugugcug-3’(seq id no.254)；
262.sirna-fkbp10-128：正义链：5
‘‑
agaaggcuccuuucccuaagg-3’(seq id no.255)，
263.反义链：5
‘‑
uuagggaaaggagccuucuuu-3’(seq id no.256)；
264.sirna-fkbp10-129：正义链：5
‘‑
uccacagcacagaccucuacc-3’(seq id no.257)，
265.反义链：5
‘‑
uagaggucugugcuguggauu-3’(seq id no.258)；
266.sirna-fkbp10-130：正义链：5
‘‑
cagagcucugcacacucaaag-3’(seq id no.259)，
267.反义链：5
‘‑
uugagugugcagagcucugcc-3’(seq id no.260)；
268.sirna-fkbp10-131：正义链：5
‘‑
ugguguucccaccacccuaga-3’(seq id no.261)，
269.反义链：5
‘‑
uaggguggugggaacaccaga-3’(seq id no.262)；
270.sirna-fkbp10-132：正义链：5
‘‑
ggacugaccugcugacaguca-3’(seq id no.263)，
271.反义链：5
‘‑
acugucagcaggucaguccca-3’(seq id no.264)；
272.sirna-fkbp10-133：正义链：5
‘‑
gagguccaggagccaacuaaa-3’(seq id no.265)，
273.反义链：5
‘‑
uuuaguuggcuccuggaccuc-3’(seq id no.266)；
274.sirna-fkbp10-134：正义链：5
‘‑
guucgauaccauuacaacugu-3’(seq id no.267)，
275.反义链：5
‘‑
acaguuguaaugguaucgaac-3’(seq id no.268)；
276.sirna-fkbp10-135：正义链：5
‘‑
guucccaccacccuagaugaa-3’(seq id no.269)，
277.反义链：5
‘‑
uucaucuaggguggugggaac-3’(seq id no.270)；
278.sirna-fkbp10-136：正义链：5
‘‑
cugagcuuguuauccaucucc-3’(seq id no.271)，
279.反义链：5
‘‑
agauggauaacaagcucagcu-3’(seq id no.272)；
280.sirna-fkbp10-137：正义链：5
‘‑
gagaauggaacuggagacaag-3’(seq id no.273)，
281.反义链：5
‘‑
ugucuccaguuccauucuccc-3’(seq id no.274)；
282.sirna-fkbp10-138：正义链：5
‘‑
guucgauaccauuacaacugu-3’(seq id no.275)，
283.反义链：5
‘‑
aguuguaaugguaucgaacaa-3’(seq id no.276)；
284.sirna-fkbp10-139：正义链：5
‘‑
caucccuaaaccacuuccuua-3’(seq id no.277)，
285.反义链：5
‘‑
aggaagugguuuagggaugga-3’(seq id no.278)；
286.sirna-fkbp10-140：正义链：5
‘‑
gguguuagggcuaugaaaucu-3’(seq id no.279)，
287.反义链：5
‘‑
auuucauagcccuaacaccca-3’(seq id no.280)；
288.sirna-fkbp10-141：正义链：5
‘‑
ccucuaccguguuucucuucc-3’(seq id no.281)，
289.反义链：5
‘‑
aagagaaacacgguagagguc-3’(seq id no.282)；
290.sirna-fkbp10-142：正义链：5
‘‑
cccuaaaccacuuccuuaaaa-3’(seq id no.283)，
291.反义链：5
‘‑
uuaaggaagugguuuagggau-3’(seq id no.284)；
292.sirna-fkbp10-143：正义链：5
‘‑
ccuaaaccacuuccuuaaaau-3’(seq id no.285)，
293.反义链：5
‘‑
uuuaaggaagugguuuaggga-3’(seq id no.286)；
294.sirna-fkbp10-144：正义链：5
‘‑
cuaaaccacuuccuuaaaaug-3’(seq id no.287)，
295.反义链：5
‘‑
uuuuaaggaagugguuuaggg-3’(seq id no.288)；
296.sirna-fkbp10-145：正义链：5
‘‑
ccuuaaaauguuuggauuugc-3’(seq id no.289)，
297.反义链：5
‘‑
aaauccaaacauuuuaaggaa-3’(seq id no.290)；
298.sirna-fkbp10-146：正义链：5
‘‑
guuuggauuugcaaagccaau-3’(seq id no.291)，
299.反义链：5
‘‑
uggcuuugcaaauccaaacau-3’(seq id no.292)；
300.sirna-fkbp10-147：正义链：5
‘‑
ggauuugcaaagccaauuugg-3’(seq id no.293)，
301.反义链：5
‘‑
aaauuggcuuugcaaauccaa-3’(seq id no.294)；
302.sirna-fkbp10-148：正义链：5
‘‑
ccaaacuuucucuuucuuugu-3’(seq id no.295)，
303.反义链：5
‘‑
aaagaaagagaaaguuugggg-3’(seq id no.296)；
304.sirna-fkbp10-149：正义链：5
‘‑
gcuuuucaucccuaaagaagg-3’(seq id no.297)，
305.反义链：5
‘‑
uucuuuagggaugaaaagcua-3’(seq id no.298)；
306.sirna-fkbp10-150：正义链：5
‘‑
cccuaaagaaggcuccuuucc-3’(seq id no.299)，
307.反义链：5
‘‑
aaaggagccuucuuuagggau-3’(seq id no.300)；
308.sirna-fkbp10-151：正义链：5
‘‑
cuuucccuaaggaaccauaga-3’(seq id no.301)，
309.反义链：5
‘‑
uaugguuccuuagggaaagga-3’(seq id no.302)；
310.sirna-fkbp10-152：正义链：5
‘‑
guuagggcuaugaaaucuugg-3’(seq id no.303)，
311.反义链：5
‘‑
aagauuucauagcccuaacac-3’(seq id no.304)；
312.sirna-fkbp10-153：正义链：5
‘‑
gggcuaugaaaucuuggauuu-3’(seq id no.305)，
313.反义链：5
‘‑
auccaagauuucauagcccua-3’(seq id no.306)；
314.sirna-fkbp10-154：正义链：5
‘‑
cacacucaaaggcuaaacugg-3’(seq id no.307)，
315.反义链：5
‘‑
aguuuagccuuugagugugca-3’(seq id no.308)；
316.sirna-fkbp10-155：正义链：5
‘‑
cuaaacuggugucaguccuuu-3’(seq id no.309)，
317.反义链：5
‘‑
aggacugacaccaguuuagcc-3’(seq id no.310)；
318.sirna-fkbp10-156：正义链：5
‘‑
cuuuguuccaaauaaaagauu-3’(seq id no.311)，
319.反义链：5
‘‑
ucuuuuauuuggaacaaagga-3’(seq id no.312)；
320.sirna-fkbp10-157：正义链：5
‘‑
guuccaaauaaaagauuaaac-3’(seq id no.313)，
321.反义链：5
‘‑
uuaaucuuuuauuuggaacaa-3’(seq id no.314)；
322.sirna-fkbp10-158：正义链：5
‘‑
caaauaaaagauuaaaccaau-3’(seq id no.315)，
323.反义链：5
‘‑
ugguuuaaucuuuuauuugga-3’(seq id no.316)；
324.sirna-fkbp10-159：正义链：5
‘‑
guguuucucuuccaucccuaa-3’(seq id no.317)，
325.反义链：5
‘‑
agggauggaagagaaacacgg-3’(seq id no.318)；
326.sirna-fkbp10-160：正义链：5
‘‑
ccuuucccuaaggaaccauag-3’(seq id no.319)，
327.反义链：5
‘‑
augguuccuuagggaaaggag-3’(seq id no.320)；
328.sirna-fkbp10-161：正义链：5
‘‑
ggcuaugaaaucuuggauuug-3’(seq id no.321)，
329.反义链：5
‘‑
aauccaagauuucauagcccu-3’(seq id no.322)。。
330.本发明的实施例还提供一种用于治疗增生性瘢痕的药物，其特征在于，所述药物至少包括以fkbp10为靶点设计的小干扰核苷酸双链。所述小干扰核苷酸双链为上述治疗增生性瘢痕、疤痕的小干扰核苷酸双链，序列选择与以上治疗增生性瘢痕、疤痕的小干扰核苷酸双链相同。
331.进一步的，所述小干扰核苷酸双链为修饰后的sirna药物组合物。
332.进一步的，所述小干扰核苷酸双链与载体制备成纳米颗粒制剂。
333.进一步的，所述载体至少包括分支肽、lnp中的一种或多种。
334.本发明的实施例另外还提供一种治疗增生性瘢痕的方法，其特征在于，包括以下过程：(1)以fkbp10为靶点，设计小干扰核苷酸双链；(2)从中选择最有效的sirna；(3)将这些选定的sirna进行修饰或与载体制备成纳米颗粒制剂；(4)采用皮下或皮内注射治疗增生性瘢痕。
335.本发明的实施例另外还提供一种用于增生性瘢痕诊断或治疗的生物标志物，其特征在于，该生物标志物为fkbp10。
336.本发明的上述技术方案的有益效果如下：
337.(1)本发明中治疗增生性瘢痕的药物或治疗方法，以fkbp10为靶点，设计小干扰核苷酸(sirna)双链，并从中选择最有效的sirna，将这些选定的sirna进行修饰，或与载体(如分支肽、lnp等)制备成纳米颗粒制剂，皮下或皮内注射治疗增生性瘢痕。
338.(2)本发明以fkbp10为靶点所设计的sirna经过修饰或与载体形成纳米颗粒将成为治疗增生性瘢痕、疤痕的特效药，具有广阔的应用市场。
附图说明
339.图1、qpcr分析选定的sirna对fkbp10 mrna和下游纤维化标记物mrna(α-sma，collagen i，collagen iii，fibronectin)表达水平的影响。
340.图2、lnp-sifkbp10对细胞的毒性较小。
341.图3、小鼠烫伤评估模型评价治疗效果。
342.图4、小鼠烫伤模型评估lnp-sifkbp10药效结果显示fkbp10、ctgf、tgfβ1和下游标记物的mrna水平降低。
343.图5、小鼠烫伤模型评估lnp-sifkbp10药效模型下，fkbp10和下游生物标记物的关联性。
344.图6、小鼠烫伤模型评估lnp-sictgf药效结果显示fkbp10、ctgf、tgfβ1和下游标记物的mrna水平降低。
345.图7、鼠烫伤模型评估lnp-sictgf药效模型下，ctgf和下游生物标记物的关联。
346.图8、小鼠给药后治疗效果。
347.如无特别说明，图中数据使用的sirna为sirna-fkbp1、sirna-fkbp10-45、sirna-fkbp10-49。
具体实施方式
348.为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例进行详细描述。
349.本发明中所使用的“标志物”指称个体中正常或异常进展的指征或个体中疾病或其他状态的指征或表现这些的靶分子。更详细地，“标志物”为正常或异常，以及若是异常，则为与慢性或急性的特定生理学状态或进展的存在相关的解剖学、生理学、生物化学或分子学参数。生物标志物可通过包括实验室检测和医学成像的多种方法来进行检测及测定。
350.实验步骤：
351.体外实验步骤：
352.1.体外实验
353.1.1体外细胞模型测试fkbp10 sirna的活性
354.nsfb细胞转染24h前铺板，12孔板，50000cells/孔。2μl/孔rnaimax和sirna配置转染复合物，sirna转染终浓度为10nm和0.1nm。转染48h后细胞收样，提取rna，用反转录试剂盒反转录成cdna(hiscript ii 1st strand cdna synthesis kit(+gdna wiper))，以gapdh基因为内参荧光定量pcr反应检测mrna的相对表达水平，其中用于扩增内参基因gapdh、目的基因fkbp10的pcr引物如表1所示。细胞活性数据见表2。
355.表1.引物序列
[0356][0357][0358]
表2.nsfb细胞fkbp10 mrna抑制率
[0359]
[0360][0361]
1.2 lnp-sifkbp10体外药效实验步骤和数据
[0362]
lnp制作过程如下：在乙醇中以50:38.5:1.5:10的摩尔比混合60mm可离子化阳离子脂质、胆固醇、peg
2000-dmg和dope(或dspc)。用乙醇将混合物稀释至10mg/ml。将其作为一个容器装入注射泵a。将sirna溶解在50mm ph值为4的醋酸钠中。用50mm乙酸钠ph4将sifkbp10浓度稀释至0.4mg/ml，将其并作为b装载到另一个注射泵中。将泵a和泵b的流速分别设置为0.5-1.5ml/min和1.5-4.5ml/min。同时启动a泵和b泵的流量。收集a和b的最终混合物。用透析管(mwco:30,000d)将lnp-sifkbp10与50mm ph为6的醋酸钠透析2小时，然后与1x pbs缓冲液(ph为7.2)透析过夜16h。透析后，lnp-sifkbp10通过0.22μm膜过滤器过滤，使用nano-zs90测量粒径。使用ribogreen分析法计算包封效率为(总游离)/总百分比。使用nsfb正常人成纤维细胞系在体外细胞模型中测试药物疗效。将50nm lnp-sifkbp10药物(在50ul optimem中)添加到450ul细胞培养基(含10％fbs)中的2.5x105细胞中。混合物在37℃下培养48小时，5％co2。培养后取出细胞培养基。用1x pbs清洗电池两次。将trizol添加到细胞板的每个孔中，用trizol和苯酚氯仿法提取总rna。提取得rna通过nanodrop定量。使用hiscript ii一步法qpcr试剂盒使用qpcr分析fkbp10 mrna和下游纤维化标记物mrna(α-sma，collagen i，collagen iii，fibronectin)表达水平(图1)。
[0363]
1.3 lnp-sifkbp10体外细胞毒性评价
[0364]
lnp-sifkbp10的体外细胞毒性评价在正常人纤维细胞nsfb和增生性瘢痕人纤维细胞hsfb中进行。lnp-sifkbp10在细胞培养基中的终浓度分别为0.3mg/ml,0.03mg/ml和0.003mg/ml。细胞活力实验通过mtt实验得到数据。数据显示lnp-sifkbp10对细胞的毒性较小(图2)。
[0365]
1.4 lnp-sirna-af647进入细胞机制结果显示血清和apoe蛋白可以协助lnp纳米制剂被nsfb细胞摄取
[0366]
lnp-sirna-af647制剂加入到无血清，血清+10％fbs，和血清+10％fbs+apoe的nsfb和hela细胞培养基内处理4h。细胞摄取效率通过细胞流式仪器测量。结果显示血清和apoe蛋白可以协助lnp纳米制剂被nsfb细胞摄取。
[0367]
2.体内实验
[0368]
2.1小鼠烫伤评估模型建立
[0369]
称重并记录小鼠的体重。确保小鼠的体重差异在其平均体重的20％以内。通过腹腔注射1％戊巴比妥钠麻醉小鼠。用剃须刀刮小鼠背部的皮肤(面积约10cm2)，并涂抹脱毛膏。1分钟后，用脱脂棉和温水擦拭皮肤。在皮肤区域，用90℃的加热棒和500g的重量压力按压背部。将皮肤烫伤7s，形成直径约1.5cm的圆形烫伤伤口(图3)。
[0370]
2.2小鼠烫伤模型评估lnp-sifkbp10药效结果显示fkbp10、ctgf、tgfβ1和下游标记物的mrna水平降低了～80％
[0371]
称重并记录小鼠的体重。确保小鼠的体重差异在其平均体重的20％以内。通过腹腔注射1％戊巴比妥钠麻醉小鼠。用剃须刀刮小鼠背部的皮肤(面积约10cm2)，并涂抹脱毛膏。1分钟后，用脱脂棉和温水擦拭皮肤。在皮肤区域，用90℃的加热棒和500g的重量压力按压大鼠背部。将皮肤烫伤7s，形成直径约1.5cm的圆形烫伤伤口。第1天，将4μg lnp-sirna药物(50ul 1x无菌pbs)皮内注射到烫伤皮肤区域的边缘。标记注射部位。在第3-5天和第5-7天，再注射4微克剂量lnp-sirna药物(50ul 1x无菌pbs)。第8-11天，处死小鼠并提取注射部位周围新生长的皮肤。从皮肤中提取rna。对fkbp10、tgfβ1、ctgf、cox2和下游生物标记物(包括sma、i型胶原、iii型胶原和纤维连接蛋白)的mrna表达进行qpcr分析(结果见图4)。
[0372]
2.3小鼠烫伤模型评估lnp-sifkbp10药效模型下，fkbp10和下游生物标记物的关联性(图5).。
[0373]
2.4小鼠烫伤模型评估lnp-sictgf药效结果显示fkbp10、ctgf、tgfβ1和下游标记物的mrna水平降低了～80％(图6)。
[0374]
2.5小鼠烫伤模型评估lnp-sictgf药效模型下，ctgf和下游生物标记物的关联(见图7)
[0375]
2.6小鼠毒性评价-多次给药后lnp-sirna对皮肤刺激和毒性评价评价标准如下表：
[0376]
刺激反应分值红斑 无红斑0轻度红斑(勉强可见)1中度红斑(明显可见)2重度红斑3紫红色红斑到轻度焦痂形成4水肿 无水肿0轻度水肿(勉强可见)1中度水肿(明显隆起)2重度水肿(皮肤隆起1mm.轮廓清楚)3严重水肿(皮肤隆起1mm以上并有扩大)4斑痕 无斑痕0轻度斑痕(0＜φ≤1)1
中度斑痕(1＜φ≤3)2重度斑痕(3＜φ≤5)3
ꢀꢀ
严重斑痕(φ＞5)4
[0377]
小鼠给药后治疗效果见图8：
[0378]
小鼠模型的治疗评价结果见下表：
[0379]
临床观察
[0380]
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。