白细胞介素1α(IL-1α)特异性的真正人类抗体的制作方法

发明领域本发明总体上涉及免疫学和抗体(ab)领域。

背景技术：

0、背景

1、il-1α是促炎细胞因子，其在包括炎症、免疫应答、肿瘤转移和血细胞发生在内的许多不同的活动中起作用。针对il-1α的igg自身抗体在普通人群中天然存在，并被认为对许多涉及无菌性炎症的不同疾病有益。

技术实现思路

0、概述

1、发现了编码以高亲和力结合人类il-1α的单克隆ab(mab)的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列。因此，本文描述了纯化的人类mab，所述纯化的人类mab包含抗原结合可变区，所述抗原结合可变区(i)对人类il-1α表现出非常高的结合亲和力，并且(ii)包含含有seq id no:1(或其cdr)的氨基酸序列的轻链可变区和含有seq id no:2(或其cdr)的氨基酸序列的重链可变区。

2、本文还描述了一组分离的核酸，所述一组分离的核酸包括编码与il-1α特异性结合的人类mab的重链的第一核酸和编码与人类il-1α特异性结合的人类mab的轻链的第二核酸。第一核酸能够编码seq id no:1(或其cdr)的氨基酸序列并且第二核酸能够编码seq idno:2(或其cdr)的氨基酸序列。

3、在另一方面，本文描述了表达载体，所述表达载体包含编码seq id no:1(或其cdr)的氨基酸序列的核酸和编码seq id no:2(或其cdr)的氨基酸序列的核酸两者。本文还描述了一组表达载体，所述一组表达载体包括编码seq id no:1(或其cdr)的氨基酸序列的第一表达载体和编码seq id no:2(或其cdr)的氨基酸序列的第二表达载体。

4、另外，本文描述了分离的宿主细胞(例如哺乳动物细胞，诸如cho细胞)，所述分离的宿主细胞包含编码seq id no:1(或其cdr)的氨基酸序列的核酸和编码seq id no:2(或其cdr)的氨基酸序列的核酸。

5、除非另外定义，否则本文使用的所有技术术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。生物学术语的通常理解的定义可以在以下中找到：rieger等人,glossary of genetics:classical and molecular,第五版,springer-verlag:newyork,1991；和lewin,genes v,oxford university press:new york,1994。

6、如本文所用，名词前的词语“一(a)”或“一(an)”表示一个或更多个特定名词。例如，措辞“抗体(an antibody)”代表“一个或更多个抗体”。

7、术语“抗体”或“ab”意指与抗原(例如，人类il-1α)特异性结合的任何免疫球蛋白(例如，人类、啮齿动物、软骨鱼或骆驼科动物抗体)或其缀合物。本领域技术人员已知各种各样的ab。ab的非限制性实例包括：单克隆ab(例如，包括全长ab)、多克隆ab、多特异性ab(例如，双特异性ab)、单链ab(例如，单结构域ab、骆驼科动物ab和软骨鱼ab)、嵌合(例如，人源化)ab和完全人类ab(即，真正人类ab(true human ab)，包括可在人体内发现或诱导的ab)。术语抗体还包括ab缀合物(例如，与稳定化蛋白、标记或治疗剂(例如，本文描述的或本领域已知的治疗剂中的任一种)缀合的ab)。

8、术语“抗原结合片段”意指全长ab的包含至少一个能够与抗原特异性结合的可变结构域[例如，哺乳动物(例如，人类、小鼠、大鼠、兔或山羊)重链或轻链免疫球蛋白的可变结构域、骆驼科动物可变抗原结合结构域(vhh)或软骨鱼免疫球蛋白新抗原受体(ig-nar)结构域]的任何部分。例如，本文描述的抗原结合片段可以包括ab fc区域中的至少部分，所述部分足以在哺乳动物(例如，人类)中介导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)和/或补体依赖性细胞毒性(cdc)和/或与治疗剂(例如，本文描述的或本领域已知的治疗剂中的任一种)缀合。作为另一实例，本文描述的抗原结合片段可以包括ab fc区中的至少部分，所述部分在哺乳动物(例如，人类)中不介导adcc和/或cdc。ab片段的非限制性实例包括fab、fab’、f(ab’)2、fv片段、双抗体(diabodies)、线性抗体和由ab片段形成的多特异性ab。含有至少一个骆驼科动物vhh结构域或至少一个软骨鱼ig-nar结构域的其他ab片段包括微型抗体(mini-bodies)、微抗体(micro-antibodies)、亚纳米抗体(subnano-antibodies)和纳米抗体，以及美国专利申请公布第2010/0092470号中描述的其他形式的ab中的任一种。

9、术语“人类抗体”意指由存在于人类基因组中的核酸(例如，重排的人类免疫球蛋白重链或轻链基因座)编码的ab。在一些实施方案中，人类ab在哺乳动物(例如，人类)细胞培养物(例如，中国仓鼠卵巢细胞系)中产生。在一些实施方案中，人类ab在非人类细胞(例如，小鼠或仓鼠细胞系)中产生。在一些实施方案中，人类ab在细菌或酵母细胞中产生。

10、术语“单链抗体”意指包含至少一个能够与抗原特异性结合的可变结合结构域的单个多肽。本文描述了单链抗体的非限制性实例，并且其是本领域已知的(参见例如美国专利公布第2010/0092470号中描述的抗体)。

11、当ab或其抗原结合片段与特定抗原(例如，人类il-1α)结合，但以较低程度识别并结合(例如，不识别并结合)样品中的其他分子时，ab或其抗原结合片段与该抗原“特异性结合(specifically binds)”或“特异性结合(binds specifically)”(通过本文描述的包含轻链可变区和重链可变区的全长抗体结合的表位)。在一些实施方案中，ab或其抗原结合片段以在磷酸盐缓冲盐水中等于或小于1×10-10m(例如，小于1×10-11m或小于1x 10-12m)的亲和力(kd)(例如，通过表面等离子体共振确定)与表位选择性地结合。ab或抗原结合片段特异性结合蛋白表位的能力可以使用本领域已知的方法或本文描述的那些方法中的任一种来确定。

12、术语“互补决定区”或“cdr”意指ig(重链ig或轻链ig)内形成ab或其抗原结合片段中抗原结合位点的部分的区域。如本领域已知的，重链ig包含三个cdr：分别为cdr1、cdr2和cdr3，并且轻链ig包含三个cdr：cdr1、cdr2和cdr3。在任何ab或其抗原结合片段中，来自重链ig的三个cdr和来自轻链ig的三个cdr一起在ab或其抗原结合片段中形成抗原结合位点。kabat数据库是本领域中用于对轻链ig或重链ig中存在的cdr序列进行编号的一种系统。

13、尽管在本发明的实践或测试中可以使用与本文描述的方法和材料相似或等同的方法和材料，但下面描述了合适的方法和材料。本文提及的所有申请和出版物通过引用以其整体并入。在有冲突的情况下，以本说明书(包括定义)为准。另外，下面讨论的特定实施方案仅是说明性的而不是旨在限制。

14、                         序列表

15、<110>  埃克斯生物科技公司

16、<120>  白细胞介素1α (il-1α)特异性的真正人类抗体

17、<130>  pat 109599w-90

18、<150>  ca 3,095,676

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21、<170>  patentin version 3.5

22、<210>  1

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24、<212>  prt

25、<213>  智人(homo sapiens)

26、<400>  1

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29、glu arg ala thr ile asn cys lys ser ser gln ser val leu tyr ser

30、            20                  25                  30

31、ser asp asn lys asn tyr leu ala trp tyr gln gln lys ala gly gln

32、        35                  40                  45

33、pro pro lys leu leu ile tyr trp ala ser thr arg glu ser gly val

34、    50                  55                  60

35、pro asp arg phe ser gly ser gly ser ala thr asp phe thr leu thr

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38、                85                  90                  95

39、tyr tyr ser leu pro ile thr phe gly gln gly thr arg leu glu ile

40、            100                 105                 110

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52、        35                  40                  45

53、gly gly ile ile pro ile phe asp glu thr asp his ala gln asp phe

54、    50                  55                  60

55、gln asp arg leu thr ile thr val asp glu ser met thr thr ala tyr

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101、<213>  智人(homo sapiens)

102、<400>  8

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104、1               5                   10