用于治疗癌症的多特异性抗体的制作方法

本发明涉及结合分子的领域。特别地，本发明涉及用于治疗涉及异常细胞、特别是癌细胞的疾病的治疗性结合分子的领域。特别地，本发明涉及结合两种或更多种不同膜相关蛋白的细胞外部分并从而调节细胞表达的生物活性的多特异性抗体。

背景技术：

1、尽管在治疗癌症方面取得了许多进展并且对导致癌症的分子事件的了解有所增加，但癌症仍然是世界上发病和死亡的主要原因。

2、传统上，大多数癌症药物的发现都集中在阻断基本细胞功能和杀死分裂细胞的药剂。然而，在晚期癌症的情况下，无论应用多么积极，甚至达到患者因治疗而遭受危及生命的副作用的程度，化疗也很少能导致完全治愈。在大多数情况下，患者体内的肿瘤停止生长或暂时缩小(称为缓解)只是为了再次开始增殖，有时速度更快(称为复发)，并且变得越来越难以治疗。最近，癌症药物开发的重点已经从广泛细胞毒性的化学疗法转移到毒性较小的靶向细胞抑制疗法。晚期癌症的治疗已在白血病和其他一些癌症中得到临床验证。然而，在大多数癌症中，靶向方法仍被证明不足够有效以完全消除大多数患者的癌症。

3、癌症的靶向已经使用多种不同的方法实现，包括例如针对癌症赖以生存和/或生长的信号传导蛋白的小分子；具有肿瘤特异性蛋白的疫苗；使用主动杀死肿瘤细胞的免疫细胞和将细胞毒性分子靶向肿瘤的抗体的细胞疗法；干扰信号传导和/或将宿主的免疫系统(重新)引导至肿瘤细胞。

4、免疫系统的(重新)引导可以通过多种方式实现。一种方式是激活t细胞共刺激分子，诸如肿瘤坏死因子受体超家族，包括cd137(4-1bb，tnfrsf9)。cd137的激活导致t细胞增殖增加、细胞因子产生和cd8+t细胞存活延长。另一种方式是阻断由参与免疫检查点的分子诱导的负信号，诸如细胞毒性t淋巴细胞相关联的抗原4(ctla-4)、在t细胞上表达的程序性细胞死亡(pd-1)或可在肿瘤细胞上表达的其同源配体程序性细胞死亡1配体1(pd-l1)。pd-l1与pd-1结合之后，信号转导导致t细胞受体(tcr)信号传导减弱和t细胞耗竭。这是肿瘤用来逃避和/或抑制免疫系统的机制。

5、这种免疫抑制可以被诸如针对pd-1或pd-l1的拮抗抗体的免疫检查点抑制剂疗法(ici)阻断。ici治疗已在与激活的cd8+t细胞浸润和增殖相关的癌症患者的亚组中展示了非常持久的反应。ici的组合(例如，抗pd-1和抗ctla-4)已被证明进一步增强功效，但以毒性为代价，因为大多数患者经历3级或4级治疗相关的不良事件。

6、pd-1/pd-l1轴和cd137的双重靶向可能有利于最佳地参与特异性抗肿瘤免疫。目前，在临床测试中最先进的两种治疗性cd137激动剂抗体是乌瑞芦单抗(urelumab)(igg4)和乌托鲁单抗(utomilumab)(igg2)。由于患者的cd137通路的全身激活导致剂量依赖性肝炎，所以乌瑞芦单抗的开发已经停止。乌瑞芦单抗的安全施用需要减少的剂量；选择0.1mg/kg用于与pd-1抑制剂的组合研究。乌托鲁单抗被患者更好地耐受，但作为单一疗法具有适度的抗肿瘤活性，并且在组合疗法中与pd-1阻断剂没有明显的协同作用。

7、因此，仍然需要为医疗保健专业人员提供更多且更好的选择来治疗癌症，特别是携带微卫星高度不稳定性(高度msi或msi-h)改变的任何实体瘤、宫颈癌、子宫内膜癌、肺癌、脑癌和乳腺癌。

技术实现思路

1、本公开提供了用于在癌症治疗中(重新)引导免疫系统成分的手段和方法，所述癌症特别是携带高度msi改变的任何实体瘤、宫颈癌、子宫内膜癌、肺癌、脑癌和乳腺癌。

2、在某些实施方案中，本公开提供了一种多特异性抗体，其包含结合cd137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点，所述多特异性抗体用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其中所述多特异性抗体以25-300mg、优选地25-150mg或25-100mg、更优选地50-100mg的剂量施用。

3、在某些实施方案中，本公开提供一种多特异性抗体，其包含结合cd137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点，所述多特异性抗体用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其中所述多特异性抗体以25-300mg、或25-150mg或25-100mg、或25-75mg、或25-50mg的剂量施用。

4、在某些实施方案中，本公开提供一种多特异性抗体，其包含结合cd137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点，所述多特异性抗体用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其中所述癌症选自：

5、携带高度msi改变的任何实体瘤；

6、子宫内膜癌，特别是高度msi子宫内膜癌；

7、肺癌，特别是非小细胞肺癌(nsclc)，更特别是具有pd-l1高表达的nsclc；和

8、乳腺癌，特别是转移性乳腺癌和三阴性乳腺癌(tnbc)。

9、在某些实施方案中，本公开提供一种多特异性抗体，其包含结合cd137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点，所述多特异性抗体用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其中所述癌症选自：

10、携带高度msi改变的任何实体瘤；

11、宫颈癌，诸如pd-l1阳性宫颈癌或pd-l1高表达的宫颈癌；

12、子宫内膜癌，诸如高度msi子宫内膜癌；

13、肺癌，诸如非小细胞肺癌(nsclc)、pd-l1阳性nsclc或pd-l1高表达的nsclc；

14、脑癌，诸如胶质母细胞瘤；和

15、乳腺癌，诸如转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(tnbc)。

16、在某些实施方案中，本公开提供一种多特异性抗体，其包含结合cd137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点，所述多特异性抗体用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其中所述癌症选自：

17、携带高度msi改变的任何实体瘤；

18、子宫内膜癌，特别是高度msi子宫内膜癌；

19、肺癌，特别是非小细胞肺癌(nsclc)，更特别是pd-l1高表达的nsclc；和

20、乳腺癌，特别是转移性乳腺癌和三阴性乳腺癌(tnbc)，并且

21、其中所述多特异性抗体以10-1200mg、优选地25-600mg或25-300mg、更优选地25-150mg或25-100mg、最优选地50-100mg的剂量施用。

22、在某些实施方案中，本公开提供一种多特异性抗体，其包含结合cd137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点，所述多特异性抗体用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其中所述癌症选自：

23、携带高度msi改变的任何实体瘤；

24、宫颈癌，诸如pd-l1阳性宫颈癌或具有pd-l1高表达的宫颈癌；

25、子宫内膜癌，诸如高度msi子宫内膜癌；

26、肺癌，诸如非小细胞肺癌(nsclc)、pd-l1阳性nsclc或具有pd-l1高表达的nsclc；

27、脑癌，诸如胶质母细胞瘤；和

28、乳腺癌，诸如转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(tnbc)，并且

29、其中所述多特异性抗体以10-1200mg、或25-600mg、或25-300mg、或25-150mg、或25-100mg、或25-75mg、或25-50mg的剂量施用。

30、在某些实施方案中，本公开提供一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用25-300mg、优选地25-150mg或25-100mg、更优选地50-100mg多特异性抗体，所述多特异性抗体包含结合cd137的细胞外部分的结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点。

31、在某些实施方案中，本公开提供一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用25-300mg、或25-150mg、或25-100mg、或25-75mg、或25-50mg多特异性抗体，所述多特异性抗体包含结合cd137的细胞外部分的结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点。

32、在某些实施方案中，本公开提供一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的患者施用多特异性抗体，所述多特异性抗体包含可结合cd137的细胞外部分的抗原结合位点和可结合第二膜蛋白胞的细胞外部分的抗原结合位点，其中所述癌症选自：

33、携带高度msi改变的任何实体瘤；

34、子宫内膜癌，特别是高度msi子宫内膜癌；

35、肺癌，特别是非小细胞肺癌(nsclc)，更特别是具有pd-l1高表达的nsclc；和

36、乳腺癌，特别是转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(tnbc)。

37、在某些实施方案中，本公开提供一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的患者施用多特异性抗体，所述多特异性抗体包含可结合cd137的细胞外部分的抗原结合位点和可结合第二膜蛋白胞的细胞外部分的抗原结合位点，其中所述癌症选自：

38、携带高度msi改变的任何实体瘤；

39、宫颈癌，诸如pd-l1阳性宫颈癌或具有pd-l1高表达的宫颈癌；

40、子宫内膜癌，诸如高度msi子宫内膜癌；

41、肺癌，诸如非小细胞肺癌(nsclc)、或pd-l1阳性nsclc、或具有pd-l1高表达的nsclc；

42、脑癌，诸如胶质母细胞瘤；和

43、乳腺癌，诸如转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(tnbc)。

44、在某些实施方案中，本公开提供一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用10-1200mg、优选地25-600mg或25-300mg、更优选地25-150mg或25-100mg、最优选地50-100mg多特异性抗体，所述多特异性抗体包含结合cd137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白胞的细胞外部分的抗原结合位点，其中所述癌症选自：

45、携带高度msi改变的任何实体瘤；

46、子宫内膜癌，特别是高度msi子宫内膜癌；

47、肺癌，特别是非小细胞肺癌(nsclc)，更特别是具有pd-l1高表达的nsclc；和

48、乳腺癌，特别是转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(tnbc)。

49、在某些实施方案中，本公开提供一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用10-1200mg、或25-600mg、或25-300mg、或25-150mg、或25-100mg、或25-75mg、或25-50mg多特异性抗体，所述多特异性抗体包含结合cd137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白胞的细胞外部分的抗原结合位点，其中所述癌症选自：

50、携带高度msi改变的任何实体瘤；

51、宫颈癌，诸如pd-l1阳性宫颈癌或具有pd-l1高表达的宫颈癌；

52、子宫内膜癌，诸如高度msi子宫内膜癌；

53、肺癌，诸如非小细胞肺癌(nsclc)、或pd-l1阳性nsclc、或pd-l1高表达的nsclc；

54、脑癌，诸如胶质母细胞瘤；和

55、乳腺癌，诸如转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(tnbc)。