用于调节抗体产物的无岩藻糖基化的方法与流程

本申请涉及用于调节在生物反应器中生产的抗体产物的无岩藻糖基化的方法。该方法包括向生物反应器添加甘露糖以控制抗体产物的无岩藻糖基化，包括相对于未经处理的生物反应器产物，使无岩藻糖基化增加1％或更多。

背景技术：

1、蛋白质产物(诸如抗体)在其从细胞表达期间经历翻译后修饰，包括糖部分的附接。一种此类修饰为免疫球蛋白g(igg)的n-连接的糖基化，其发生在哺乳动物igg重链的ch2结构域的位置asn 297处。这种特殊的n-连接的糖基化通过以下步骤实现：最初添加预形成的寡糖，然后该寡糖经历后续修饰以去除葡萄糖和甘露糖残基并添加其他糖，诸如岩藻糖、半乳糖、唾液酸和n-乙酰氨基葡萄糖(glcnac)。此类糖基化可以对蛋白质的生物活性具有强烈影响。特别是，抗体依赖性细胞毒性(adcc)(其为许多治疗性抗体的重要作用机制)依赖于抗体的岩藻糖基化水平。各种报告已发现，与其岩藻糖基化对应物相比，具有减少量的岩藻糖基化(即更高的无岩藻糖基化)的单克隆抗体表现出更高的adcc。因此，其中可以增加无岩藻糖基化的抗体产物的生产对于一些治疗方法是有利的，尤其是在肿瘤学中。

2、此外，由于糖基化的类型和程度可影响生物活性，因此治疗性抗体的聚糖谱是重要的关键质量属性，其必须报告给监管机构并一致地再现。然而，当治疗性抗体的制造从一个过程转移到另一个过程(或甚至在制造地点之间)时，cqa(诸如岩藻糖基化)可能发生变化，这可能导致需要调整所转移的过程以实现先前获得的针对该产物的范围内的岩藻糖基化水平。

3、因此，需要能够调节重组表达的抗体组合物中的岩藻糖基化水平以增强生物活性和/或使岩藻糖基化水平与先前的制造过程相匹配。

技术实现思路

1、令人惊讶地发现，以大于约1g/l的量向抗体生产过程添加甘露糖导致抗体产物的无岩藻糖基化的统计上显著的增加(当与不添加甘露糖的相同生产过程相比时)。此外，在本方法中以这样的量添加甘露糖似乎不会导致高甘露糖种类的增加。这些结果是令人惊奇且出乎意料的，并且如本文所述，本方法提供一种手段以(i)调节抗体产物的无岩藻糖基化，以便生产可增强adcc的治疗性抗体，并且因此提供增强的治疗效果；以及(ii)考虑到这是关键的质量属性，调整无岩藻糖基化水平以确保一致的水平。与需要对细胞系进行基因工程化(难以生产和维持此类细胞系)以增强无岩藻糖基化的其他方法以及需要对上游生物加工参数进行显著的操作的其他方法相比，本方法具有显著的优势。

2、因此，在一个实施例中，本发明提供一种用于增加在生物反应器中重组表达的抗体的无岩藻糖基化的方法，该方法包括：在生物反应器中培养表达该抗体的细胞；在抗体生产过程期间向细胞培养物添加甘露糖，使得与通过不添加甘露糖的抗体生产过程生产的相同抗体相比，该抗体的无岩藻糖基化有所增加。

3、本文还提供用于将重组生产的抗体的无岩藻糖基化与先前获得的针对相同抗体的目标无岩藻糖基化百分比相匹配的方法，该方法包括：在生物反应器中培养表达该抗体的细胞；在抗体生产过程期间控制向该生物反应器中添加甘露糖，以获得具有该目标无岩藻糖基化百分比的所表达的抗体。

4、下面更详细地讨论本公开的其它特征和方面。

技术特征：

1.一种用于增加在生物反应器中重组表达的抗体的无岩藻糖基化的方法，所述方法包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其中所添加的甘露糖的量为从约1g/l至约10g/l。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述生物反应器具有至少10l的体积。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述抗体为单克隆igg。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述细胞为哺乳动物的。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中与通过不添加甘露糖的抗体生产过程生产的抗体相比，所述抗体的无岩藻糖基化增加至少0.5％。

7.根据权利要求6所述的方法，其中与通过不添加甘露糖的抗体生产过程生产的抗体相比，抗体产物的无岩藻糖基化增加至少1％，诸如至少2％。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗体生产过程为补料分批过程。

9.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗体生产过程为灌注过程。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，所述方法进一步包括分离所表达的抗体并且任选地使所述抗体经历一个或多个纯化步骤。

11.一种用于将重组生产的抗体的无岩藻糖基化与先前获得的针对相同抗体的目标无岩藻糖基化百分比进行匹配的方法，所述方法包括：

12.根据权利要求11所述的方法，其中所表达的抗体的所述无岩藻糖基化百分比在所述目标无岩藻糖基化百分比的+/-0.25％内。

13.根据权利要求11或权利要求12所述的方法，其中所述抗体生产过程为灌注过程。

技术总结
本申请涉及用于调节在生物反应器中生产的抗体产物的无岩藻糖基化的方法。所述方法包括向所述生物反应器添加甘露糖以控制所述抗体产物的所述无岩藻糖基化，包括相对于未经处理的生物反应器产物，使无岩藻糖基化增加1％或更多。

技术研发人员：J·阿姆斯特朗,J·格雷厄姆
受保护的技术使用者：隆萨本德股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15