一种抗体稀释保护剂的制作方法

1.本发明涉及生物试剂保护技术领域，具体涉及一种抗体稀释保护剂。


背景技术：

2.抗体指机体在抗原物质刺激下，由b细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白。抗体与抗原存在结构互补性和亲和性，因此两者能稳定结合形成复合物，这种特性被广泛地应用。抗体容易受外部环境因素影响，其保存环境与方式直接决定了抗体的活性与使用效果。对于许多抗体而言，合适的保存方式是分装后在-20℃或-80℃下低温保存，分装抗体可以最大限度减少冻融对抗体造成的损坏。在大部分情况下，分装后的抗体在4℃下，可保存1至2周。同时，高浓度蛋白更有利于蛋白质的稳定，因此在抗体的保存溶液或反应液中添加合适剂量的蛋白质可以增加抗体的稳定性。
3.4℃保存的抗体不用冻融，可以直接使用，可以更方便更高效率的开展科研工作与医学工作。然而4℃保存下的抗体稳定性无法长时间保持，时间一长，其活性就容易降低。这种情况对于需要频繁使用抗体的用户造成极大的不便。因此，本领域亟需开发新的技术方案，以提高抗体在4℃条件下保存的稳定性。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种抗体稀释保护剂，该抗体稀释保护剂可以显著提高所保存抗体的37℃热稳定性及2～8℃长期稳定性，具有良好的应用前景。
5.为此，第一方面，本发明提供四氢嘧啶用于制备抗体稀释保护剂的用途。
6.本发明通过向抗体稀释保护剂中添加含有四氢嘧啶的缓冲液，发现其对稀释后的抗体于37℃的热稳定性保护作用显著高于对照组，且在2～8℃下实时稳定性可长达12个月。因此，根据本发明的技术方案，四氢嘧啶可以作为抗体的稀释保护剂。
7.进一步，所述抗体稀释保护剂中，四氢嘧啶的浓度为0.5-4％(w/v)，例如0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％等。
8.根据本发明的技术方案，用于制备抗体稀释保护剂时，四氢嘧啶的浓度优选为0.5-4％，且在此浓度范围内其热稳定性保护作用没有显著差异。
9.本发明的第二方面，提供一种抗体稀释保护剂，其包括四氢嘧啶。
10.进一步，所述抗体稀释保护剂中，四氢嘧啶的浓度为0.5-4％(w/v)，例如0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％等。
11.进一步，所述抗体稀释保护剂还包括牛血清白蛋白(bsa)、吐温-20、procline300、pbs缓冲液。
12.进一步，所述抗体稀释保护剂包含0.5-4％四氢嘧啶，1-3％bsa，0.1-0.2％吐温-20，0.02-0.05％procline300，ph为7.2-7.5的pbs缓冲液。
13.进一步，所述抗体稀释保护剂中，所述牛血清白蛋白的浓度为1-3％(w/v)，例如1％、1.5％、2％、2.5％、3％等。
14.进一步，所述抗体稀释保护剂中，所述吐温-20的浓度为0.1-0.2％(v/v)，例如0.1％、0.15％、0.2％等。
15.进一步，所述抗体稀释保护剂中，所述procline300的浓度为0.02-0.05％(v/v)，例如0.02％、0.03％、0.04％、0.05％等。
16.在一些实施方式中，所述抗体稀释保护剂由以下组分组成：0.5-4％四氢嘧啶，1-3％bsa，0.1-0.2％吐温-20，0.02-0.05％procline300，ph为7.2-7.5的pbs缓冲液。
17.在一些实施方式中，所述抗体稀释保护剂包含以下组分：0.5-4％四氢嘧啶，1％bsa，0.1％吐温-20，0.03％procline300，ph为7.2-7.5的pbs缓冲液。
18.在一些实施方式中，所述抗体稀释保护剂包含以下组分：0.5％四氢嘧啶，1％bsa，0.1％吐温-20，0.03％procline300，ph为7.2-7.5的pbs缓冲液。
19.在一些实施方式中，所述抗体稀释保护剂包含以下组分：1％四氢嘧啶，1％bsa，0.1％吐温-20，0.03％procline300，ph为7.2-7.5的pbs缓冲液。
20.在一些实施方式中，所述抗体稀释保护剂包含以下组分：2％四氢嘧啶，1％bsa，0.1％吐温-20，0.03％procline300，ph为7.2-7.5的pbs缓冲液。
21.在一些实施方式中，所述抗体稀释保护剂包含以下组分：3％四氢嘧啶，1％bsa，0.1％吐温-20，0.03％procline300，ph为7.2-7.5的pbs缓冲液。
22.在一些实施方式中，所述抗体稀释保护剂包含以下组分：4％四氢嘧啶，1％bsa，0.1％吐温-20，0.03％procline300，ph为7.2-7.5的pbs缓冲液。
23.本发明的第三方面，提供一种抗体的保存方法，包括：用所述抗体稀释保护剂稀释抗体，并于2～37℃的温度条件下保存。
24.进一步，所述稀释倍数为1:10-20。
25.进一步，所述保存的温度条件为2～8℃，保存时间为0-1年。
26.进一步，所述保存的温度条件为37℃，保存时间为0-14天。
27.与现有技术相比，本发明的技术方案具有以下有益效果：
28.(1)本发明提供了四氢嘧啶用于抗体稀释保护剂的新用途，本发明通过向抗体稀释保护剂中添加四氢嘧啶，发现其显著提高了稀释后的抗体于37℃的热稳定性，且在2～8℃下的实时稳定性可长达一年。
29.(2)本发明提供了相应的抗体稀释保护剂，其具有易于配制、成本低廉、使用方便等优点，可显著提高所稀释抗体的37℃热稳定性及2～8℃长期稳定性，具有良好的应用前景。
附图说明
30.通过阅读下文优选实施方式的详细描述，各种其他的优点和益处对于本领域普通技术人员将变得清楚明了。附图仅用于示出优选实施方式的目的，而并不认为是对本发明的限制。在附图中：
31.图1：用本发明提供的抗体稀释保护剂保存抗体，其在4℃保存条件下的稳定性检测结果。
具体实施方式
32.下面将参照附图更详细地描述本公开的示例性实施方式。虽然附图中显示了本公开的示例性实施方式，然而应当理解，可以以各种形式实现本公开而不应被这里阐述的实施方式所限制。相反，提供这些实施方式是为了能够更透彻地理解本公开，并且能够将本公开的范围完整的传达给本领域的技术人员。
33.在本发明实施例中，若无特殊说明，所有原料组分均为本领域技术人员熟知的常规市售产品；在本发明实施例中，若未具体指明，所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规技术手段。在本发明实施例中，所使用的原料均为常规市售产品。
34.实施例1
35.本实施例提供一种抗体稀释保护剂，其组成成分为：1％bsa、0.1％吐温-20、0.05％procline300、10.68％10
×
pbs溶液、0.5％四氢嘧啶，溶剂为无菌水；将各组分混合均匀后即制得所述抗体稀释保护剂。
36.实施例2
37.本实施例提供一种抗体稀释保护剂，其组成成分为：1％bsa、0.1％吐温-20、0.05％procline300、10.68％10
×
pbs溶液、1％四氢嘧啶，溶剂为无菌水；将各组分混合均匀后即制得所述抗体稀释保护剂。
38.实施例3
39.本实施例提供一种抗体稀释保护剂，其组成成分为：1％bsa、0.1％吐温-20、0.05％procline300、10.68％10
×
pbs溶液、2％四氢嘧啶，溶剂为无菌水；将各组分混合均匀后即制得所述抗体稀释保护剂。
40.实施例4
41.本实施例提供一种抗体稀释保护剂，其组成成分为：1％bsa、0.1％吐温-20、0.05％procline300、10.68％10
×
pbs溶液、3％四氢嘧啶，溶剂为无菌水；将各组分混合均匀后即制得所述抗体稀释保护剂。
42.实施例5
43.本实施例提供一种抗体稀释保护剂，其组成成分为：1％bsa、0.1％吐温-20、0.05％procline300、10.68％10
×
pbs溶液、4％四氢嘧啶，溶剂为无菌水；将各组分混合均匀后即制得所述抗体稀释保护剂。
44.对比例1
45.本对比例提供一种抗体稀释保护剂，其组成成分为：1％bsa、0.1％吐温-20、0.05％procline300、10.68％10
×
pbs溶液，溶剂为无菌水；将各组分混合均匀后即制得所述抗体稀释保护剂。
46.实验例1
47.本实验例在37℃加速7天与15天的条件下，测试了由实施例1-5、对比例1的抗体稀释保护剂稀释所保存的抗体的热稳定性。
48.取实施例1-5和对比例1的抗体稀释保护剂，按照1:20的稀释比，用上述抗体稀释保护剂分别将抗体原液稀释为相应的抗体母液，将稀释得到的抗体母液分装至抗体保存管中，每种抗体母液保存3份，每份30μl。做三组平行。
49.对于分装至抗体保存管的每种抗体母液，将其中2份放入37℃的恒温培养箱中，在
保存至第7天和第14天时分别进行热稳定性测试；其中1份于4℃条件保存，将其作为37℃加速7天与15天热稳定性的对照。
50.抗体热稳定性测定：
51.在上述抗体母液保存至第7天时，使用elisa法对抗体于37℃加速7天后的热稳定性进行测定。取抗体母液，用pbs缓冲液按1:20稀释比稀释抗体母液，然后用双抗夹心法检测抗体有效浓度，并计算加速比(对于同一种抗体稀释保护剂，加速比＝37℃保存的抗体母液的抗体有效浓度/4℃保存的抗体母液的抗体有效浓度)。结果显示于表1。
52.表1 37℃加速7天的热稳定性检测结果
[0053][0054]
在上述抗体母液保存至第14天时，使用elisa法对抗体于37℃加速14天后的热稳定性进行测定。取抗体母液，用pbs缓冲液按1:20稀释比稀释抗体母液，然后用双抗夹心法检测抗体活性，并计算加速比(对于同一种抗体稀释保护剂，加速比＝37℃保存的抗体母液的抗体有效浓度/4℃保存的抗体母液的抗体有效浓度)。结果显示于表2。
[0055]
表2 37℃加速14天的热稳定性检测结果
[0056][0057][0058]
使用统计学分析软件对上述数据进行对比分析，针对六种抗体稀释保护剂的抗体有效浓度检测值，研究了不同抗体稀释保护剂之间的统计学差异。数据显示，采用本发明提
供的含四氢嘧啶的抗体稀释保护剂(实施例1-5)对抗体进行保存，在37℃中加速7天和15天后的热稳定性均显著高于未加四氢嘧啶的抗体稀释保护剂(对比例1)。因此，本发明提供的含四氢嘧啶的抗体稀释保护剂具有显著更优的热稳定性保护效果。
[0059]
实验例2
[0060]
本实验例在4℃的保存条件下，测试了由实施例1、实施例4、对比例1的抗体稀释保护剂稀释所保存的抗体的实时稳定性。
[0061]
取实施例1、实施例4和对比例1的抗体稀释保护剂，按照1:20的稀释比，用上述抗体稀释保护剂分别将抗体原液稀释为相应的抗体母液，将稀释得到的抗体母液分装至抗体保存管中，于4℃进行保存。每种抗体母液保存6份；其中管编号1、2、3、4、5分别依次用于第1、3、6、9、12个月的实时稳定性实验，管编号6作为备用。
[0062]
在上述抗体母液于4℃条件保存第1、3、6、9、12个月时，用elisa法进行抗体的实时稳定性测定。取抗体母液，用pbs缓冲液按1:20稀释比稀释抗体母液，然后用双抗夹心法检测抗体有效浓度，并计算稳定性(稳定性＝保存至第t月时抗体母液的抗体有效浓度/保存前抗体母液的抗体有效浓度
×
100％)，结果显示于图1。
[0063]
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。