一种氟官能团共价有机框架材料、制备方法及应用

1.本发明属于多孔共价有机框架材料和医药生物技术领域，尤其涉及一种氟官能团共价有机框架材料、制备方法及应用。


背景技术：

2.目前，共价有机框架材料(covalent organic frameworks,cofs)是一种由有机构筑单元通过可逆的共价键联结成高度有序的晶状高分子材料。因为它具有高结晶性、多孔性、热稳定性、低密度和高比表面积性的特点，所以cofs材料在气体存储与吸附、分子识别与分离、智能传感、光电、能量储存、生物医药和催化等领域有着广泛的应用前景。(k.y.geng,t.he,r.y.liu,s.dalapati,k.t.tan,z.p.li,s.s.tao,y.f.gong,q.h.jiang,d.l.jiang,chem.rev.,2020,120,8814
–
8933；r.y.liu,k.t.tan,y.f.gong,y.z.chen,z.e.li,s.l.xie,t.he,z.lu,h.yang,d.l.jiang,chem.soc.rev.,2021,50,120
–
242.)因此新型cof材料的合成对于推动其研究的进一步深入和实际应用具有重要作用。
3.为使合成出来的cof具有特殊的结构、孔径和功能，多种共价键连接方式如c-n、n-n、b-n、c-c及b-o等用来构建cof的骨架结构。其中亚胺(c＝n)连接的cofs因其更容易形成结晶性以及较好的稳定性，另外合成亚胺cofs的单体也具有多样性和官能团易修饰性，这些性质促使了亚胺连接cofs在各种领域的广泛应用。通过前期文献的调研，虽然已经报道了一些cofs负载药物的研究，但是普遍存在这些cofs材料负载药物量比较低的情况。(g.zhang,x.li,q.liao,y.liu,k.xi,w.huang,x.jia,nat.commun.,2018,9,2785；q.r.fang,j,h.wang,s.gu,r.b.kaspar,z.b.zhuang,j.zheng,h.x.guo,s.l.qiu,y.s.yan,j.am.chem.soc.,2015,137,8352-8355；l.y.bai,s.z.f.phua,w.q.lim,a.jana,z.luo,h.p.tham,l.z.zhao,q.gao,y.l.zhao,chem.commun.,2016,52,4128-4131；l.akyuz,micropor.mesopor.mat.,2020,294,109850；y.t.jia,l.n.zhang,b.n.he,y.l.lin,j.wang,m.li,2020,117,111243；m.li,y.peng,f.yan,c.g.li,y.q.he,y.lou,d.x.ma,y.li,z.shi,s.h.feng,new j.chem.,2021,45,3343-3348；k.zhao,p.w.gong,j.huang,y.huang,d.d.wang,j.y.peng,d.y.shen,x.f.zheng,j.m.you,z.liu,2021,311,110713.)造成这种负载药物量低的原因是：只利用了cofs材料的孔道和弱的分子间色散力(π-π作用力等)来容纳药物分子。为了克服这种缺点，可以设计一种含有氟官能团的亚胺连接的cof材料。
4.通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：
5.(1)现有技术中荧光cof材料的合成步骤繁琐，收率低。
6.(2)现有技术中cof材料在各种有机溶剂和水中分散性和稳定性差，且耐酸碱和耐高温性能差。
7.(3)现有技术中cof材料需使用高键能的化学键与药物分子形成负载，这种负载方式容易损坏材料和药物分子。而且现有技术中cof材料对药物负载过程操作繁琐和周期长，负载率低。
8.(4)现有技术中cof材料生物兼容性和有效的药物治疗缓释效果差。
9.目前开发出具有高负载药物能力同时兼具良好的药物缓释性能的材料比较难。为了解决这一问题，本发明在设计材料时，可以利用单体中富含氟、氧、氮等官能团容易和被负载的药物形成氢键作用力，这种键能位于共价键和色散力之间，所以对药物很容易实现高负载，同时也不会太难或者太容易释放。特别是含有氟官能团的材料，它能和药物分子间可以形成最强的氢键，从而更容易高负载药物。另外，和其它多孔材料相比，cof材料的孔道更有序规整，这就为高负载药物和缓释药物提供了平台。
10.由此，本发明设计了一种含有氟官能团的亚胺连接的cof材料。这样，负载药物除了可以利用cofs材料的孔道和分子色散力容纳药物分子，最主要是可以利用cof的氟官能团与药物分子形成氢键分子间作用力，进而可以达到高负载药物的目的，同时本发明利用这一特性，达到缓慢释放药物的目的。


技术实现要素：

11.为克服相关技术中存在的问题，本发明公开实施例提供了一种氟官能团共价有机框架材料、制备方法及应用。所述技术方案如下：
12.针对上述现有技术中cofs负载药物含量低的问题，本发明合成制备一种含有丰富氟基基团、具备规则孔道、低细胞毒性和高荧光强度的共价有机框材料(tp-dfpa-cof)，通过材料中的氟基团与药物分子的氢键作用力，协同材料的有序孔道及分子间π-π作用力，实现对各种抗癌药物或治疗高尿酸药物的高负载和提高药物分子的缓释性能。
13.在一个实施例中，一种氟官能团共价有机框架材料，所述氟官能团共价有机框架材料结构式(1)为：
14.15.在一个实施例中，所述氟官能团采用氧官能团或氮官能团替代。
16.本发明的另一目的在于提供一种氟官能团共价有机框架材料的制备方法包括：
17.步骤一，将1,3,6,8-四-(对胺基苯基)-芘(pyta)和2,5-二羟基对苯二甲醛(dhtp)加入到混合溶剂中，加入催化剂；
18.步骤二，进行超声处理，然后真空条件下进行液氮冷冻、解冻、冷冻循环过程2次；
19.步骤三，随后进行加热反应，反应结束经过溶剂洗涤、真空干燥，得到暗黄色的tp-dfpa-cof。
20.在一个实施例中，步骤一中每1mmol 1,3,6,8-四-(对胺基苯基)-芘中加入2,5-二羟基对苯二甲醛的量为1.5mmol，催化剂的用量为0.2～3mol。
21.在一个实施例中，步骤一中反应混合溶剂为1,4-二氧六环与均三甲苯或者邻二氯苯与正丁醇的混合溶剂，所述1,4-二氧六环与均三甲苯或者邻二氯苯与正丁醇的体积比为(0.1:1)～(10:1)，每10ml的混合溶剂中分散单体的总质量为0.1～1g。
22.在一个实施例中，步骤一中催化剂为3-6m的乙酸水溶液，所述混合溶剂与催化剂的体积之比为10：(0.5～2)。
23.在一个实施例中，步骤二中超声处理时间为2～10min，液氮冷冻时间为1～5min；解冻时间为1～10min；加热反应的温度为90～180℃，加热反应时间为48～96h。
24.在一个实施例中，步骤三中反应后的洗涤溶剂dmf、四氢呋喃和乙醇，溶剂洗涤用量为100毫克反应物对应dmf 5-20ml,四氢呋喃1-5毫升和乙醇1-5毫升。
25.在一个实施例中，所述氟官能团共价有机框架材料的制备反应式为：
[0026][0027]
本发明的另一目的在于提供一种所述的氟官能团共价有机框架材料在负载抗癌和抗高尿酸症药物中的应用。
[0028]
本发明的另一目的在于提供一种所述的氟官能团共价有机框架材料在制备用于治疗癌症和高尿酸疾病药物中的应用。
[0029]
结合上述的所有技术方案，本发明所具备的优点及积极效果为：
[0030]
一、把技术方案看作一个整体或者从产品的角度，本发明所要保护的技术方案具
备的技术效果和优点，具体描述如下：
[0031]
(1)本发明提供该tp-dfpa-cof材料的化学结构式。
[0032]
(2)本发明提供tp-dfpa-cof材料负载各种抗癌药物及治疗高尿酸症药物的制备方法。
[0033]
(3)本发明也提供了tp-dfpa-cof材料负载各种抗癌药物及治疗高尿酸症药物后，在体外药物缓释性能方面的应用。
[0034]
(4)本发明为设计具有高负载药物能力的材料提供思路。
[0035]
(5)本发明具有含氟基团的荧光cof材料的合成步骤简单，收率高(90％以上)，可以放大到克级以上规格，且收率可以得到保持。
[0036]
(6)本发明cof材料在各种有机溶剂和水中具有良好的分散性和稳定性，且耐酸碱和高温。
[0037]
(7)本发明抗癌药物和抗高尿酸药物等通过孔道中的π-π相互作用力等分子间色散力，最重要的是通过材料中的氟基与药物分子形成氢键作用力，避免使用了高键能的化学键负载，这种负载方式不损坏材料和药物分子。并且材料对药物负载过程操作简便和周期短，且可以达到很高的负载率(67％-80％,附图10所示)。而已经报道的cof材料对药物的负载率普遍在10％-30％之间。(g.zhang,x.li,q.liao,y.liu,k.xi,w.huang,x.jia,nat.commun.,2018,9,2785；q.r.fang,j,h.wang,s.gu,r.b.kaspar,z.b.zhuang,j.zheng,h.x.guo,s.l.qiu,y.s.yan,j.am.chem.soc.,2015,137,8352-8355；l.y.bai,s.z.f.phua,w.q.lim,a.jana,z.luo,h.p.tham,l.z.zhao,q.gao,y.l.zhao,chem.commun.,2016,52,4128-4131；l.akyuz,micropor.mesopor.mat.,2020,294,109850；etc.)
[0038]
(8)本发明cof材料毒性小，对细胞无显著毒性，从附图13可以看出当材料浓度达到250ug ml-1
时，细胞存活率也可以得到95％以上。说明该材料具有良好的生物兼容性，同时从附图12可以看出该材料经过六天时间可以对药物的完全释放，说明该材料具有有效的药物缓释效果。
[0039]
二、作为本发明的权利要求的创造性辅助证据，还体现在以下几个重要方面：
[0040]
(1)本发明的技术方案转化后的预期收益和商业价值为：本发明技术方案转化后具有比较大的商业价值。cof材料的生物兼容性好，以及具有很高的药物负载药物能力，这些特性使得该材料更容易应用到临床研究，进而实现该材料的医用价值。
[0041]
(2)本发明的技术方案填补了国内外业内技术空白。
[0042]
(3)本发明的技术方案解决了人们一直渴望解决、但始终未能获得成功的技术难题：本发明的技术方案解决了以往cof材料负载药物含量低的问题，可以实现很高的药物负载量，这为cof负载药物提供了很好的科学思路。
[0043]
当理解的是，以上的一般描述和后文的细节描述仅是示例性和解释性的，并不能限制本发明的公开。
附图说明
[0044]
此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本公开的实施例，并与说明书一起用于解释本公开的原理。
[0045]
图1是本发明实施例提供的氟官能团共价有机框架材料的制备方法流程图。
[0046]
图2是本发明实施例提供的合成的tp-dfpa-cof的pxrd和经酸碱处理后的pxrd图片。其中，图2a:tp-dfpa-cof示意图，图2b:1mol l-1
hc1处理后的tp-dfpa-cof示意图，图2c:1mol l-1
naoh处理后的tp-dfpa-cof示意图。
[0047]
图3是本发明实施例提供的tp-dfpa-cof和该cof负载5-fu以及ao药物后的pxrd谱图，其中，图3a曲线为实施例7中的tp-dfpa-cof的pxrd图，图3b曲线为实施例7中的负载5-fu药物后的tp-dfpa-cof的pxrd图，图3c曲线为实施例7中的负载ao药物后的tp-dfpa-cof的pxrd图。
[0048]
图4是本发明实施例提供的5-氟尿嘧啶(5-fu)、tp-dfpa-cof和cof负载5-fu后的红外吸收谱图。
[0049]
图5是本发明实施例提供的别嘌醇(ao)、tp-dfpa-cof和cof负载5-fu后的红外吸收谱图。
[0050]
图6是本发明实施例提供的cof材料的bet谱图。
[0051]
图7是本发明实施例提供的cof的荧光激发波长和发射波长图。
[0052]
图8是本发明实施例提供的cof材料扫描电镜图，其中，图8a为cof材料200nm标尺下的sem形貌图，图8b为cof材料1μm标尺下的sem形貌图。
[0053]
图9是本发明实施例提供的图8为cof材料的热重分析图。
[0054]
图10是本发明实施例提供的5-fu、ao的热重以及cof负载5-fu、ao的热重分析图。其中，图10a为负载5-fu后的cof(5-fu@tp-dfpa-cof)和5-fu热重对照图，图10b为负载ao后的cof(ao@tp-dfpa-cof)和ao热重对照图。
[0055]
图11是本发明实施例提供的tp-dfpa-cof以及负载5-fu和ao后的xps图；其中图11a为tp-dfpa-cof的xps图；图11b为tp-dfpa-cof负载5-fu后的tp-dfpa-cof xps图；图11c为tp-dfpa-cof负载ao后的xps图。
[0056]
图12是本发明实施例提供的tp-dfpa-cof负载5-fu和ao药物后的释放率图。
[0057]
图13是本发明实施例提供的不同浓度的cof材料对mcf-7细胞的毒性分析数据示意图。
[0058]
图14是本发明实施例提供的tp-dfpa-cof负载5-fu后，不同浓度5-fu对黑色素瘤癌细胞b16f10的毒性分析数据示意图。
具体实施方式
[0059]
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其他方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。
[0060]
一、为了使本领域技术人员充分了解本发明如何具体实现，该部分是对权利要求技术方案进行展开说明的解释说明的实施例。
[0061]
本发明提供一种氟官能团共价有机框架材料，其结构式如(1)式所示：
[0062][0063]
在一个优选实施例中，所述氟官能团采用氧官能团或氮官能团替代。
[0064]
如图1所示，本发明提供的氟官能团共价有机框架材料的制备方法包括：
[0065]
s101，将1,3,6,8-四-(对胺基苯基)-芘(pyta)和2,5-二羟基对苯二甲醛(dhtp)加入到混合溶剂中，加入催化剂；
[0066]
s102，进行超声处理，然后循环进行液氮冷冻、解冻、冷冻过程2次；
[0067]
s103，随后进行加热反应，反应结束经过溶剂洗涤、真空干燥，得到暗黄色的tp-dfpa-cof。
[0068]
[0069]
优选的，每1mmol 1,3,6,8-四-(对胺基苯基)-芘中加入2,5-二羟基对苯二甲醛的量为1.5mmol，催化剂的用量为0.2～3mol。
[0070]
优选的，超声处理时间为2～10min，液氮冷冻时间为1～5min；解冻时间为1～10min；加热反应的温度为90～180℃，加热反应时间为48～96h。
[0071]
优选的，反应混合溶剂可以为1,4-二氧六环与均三甲苯或者邻二氯苯与正丁醇的混合溶剂，其中体积比为(0.1:1)～(10:1)，每10ml的混合溶剂中分散单体的总质量为0.1～1g。
[0072]
优选的，催化剂为3-6m的乙酸水溶液，所述混合溶剂与催化剂的体积之比为10：(0.5～2)。
[0073]
优选的，反应后的洗涤溶剂dmf、四氢呋喃和乙醇，溶剂洗涤用量为100毫克反应物对应dmf 5-20ml,四氢呋喃1-5毫升和乙醇1-5毫升。
[0074]
上述方法制备的tp-dfpa-cof产品的尺寸为20～500nm，形貌为颗粒状。
[0075]
上述方法制备的cof材料在负载抗癌和抗高尿酸症药物中的应用。
[0076]
所述的抗癌药物包括但不限于5-氟脲嘧啶(5-fu)、巯嘌呤、硫鸟嘌呤、丝裂霉素、博来霉素、紫杉醇、阿糖胞苷、替加氟、蟾毒灵、喜树碱、表柔比星、他莫昔芬、多西他赛、泰素、吉西他滨、顺铂、卡铂、反铂、丙卡巴肼、环磷酰胺、放线菌素d、阿霉素、依托泊苷、普卡霉素、甲氨蝶呤中的一种或多种的混合物。
[0077]
所述的抗高尿酸症的药物包括但不限于别嘌醇(ao)、非布司他、苯溴马隆、丙磺舒、秋水仙碱、塞来昔布和醋酸泼尼松龙。
[0078]
本发明的药物载体可用于癌症和高尿酸疾病的治疗。包括肝癌、胃癌、鼻咽癌、肺癌、胆囊癌、乳腺癌、肾癌、前列腺癌、睾丸癌、脑瘤、卵巢癌、食道癌、喉癌、胰腺癌、膀胱癌、结肠癌、宫颈癌。还包括高尿酸症、通风和痛风性结石。本发明的药物载体中所包含的药物成分的种类可根据应用途径而变化。也就是说，本发明的药物载体不止局限于癌症和高尿酸疾病的治疗，也可将其应用到其他医疗应用中。
[0079]
二、为了证明本发明的技术方案的创造性和技术价值，该部分是对权利要求技术方案进行具体产品上或相关技术上的应用实施例。
[0080]
实施例1
[0081]
合成方法：在均三甲苯：1,4-二氧六环体积比为1:1混合溶剂中(2ml)加入1,3,6,8-四-(对胺基苯基)-芘(pyta)28.3mg和2,5-二羟基对苯二甲醛(dhtp)16.6mg，然后加入0.2ml的6m的乙酸水溶液作为催化剂，超声2min，然后循环进行液氮冷冻-解冻过程2次，其中液氮冷冻时间为2min，解冻时间为4min。置于干燥箱中120℃进行反应，过滤并用dmf、四氢呋喃洗涤，得到暗黄色粉末cof产品，产率为96％。
[0082][0083]
cof分析：
[0084]
图2a为实施例1中合成的tp-dfpa-cof的pxrd图，通过pxrd测试可以看到在2.9
°
左右有一个很强的衍射峰，证实了该有机材料具有高度的结晶性。图2b和图2c的pxrd证明了该cof在强酸和强碱条件下依然稳定。
[0085]
图3为合成cof的红外吸收图，1510cm-1
的c＝n强吸收峰证明了cof材料成功合成。
[0086]
图6为材料的bet图，可以看出该材料具有较高的比表面积以及孔径，有利于暴露活性的氟基团，更易于和药物分子形成氢键作用力等，同时大的孔道为容纳药物分子提供了良好平台。
[0087]
图7为cof的荧光激发波长和发射波长图，说明了该cof具有强的荧光信号，可以作为荧光探针。
[0088]
图8为合成cof的扫描电镜电镜图片。电镜数据表明合成的cof具有均一的颗粒状结构，尺寸在200nm左右。其中，图8a为cof材料200nm标尺下的sem形貌图，图8b为cof材料1μm标尺下的sem形貌图。
[0089]
图9是该cof的热重分析图，说明在400℃以内该材料都很稳定，具有良好的热稳定性。
[0090]
实施例2
[0091]
本实施例与实施例1的区别在于：均三甲苯：1,4-二氧六环的体积比为1:2(2ml)，加入0.1ml的6m的乙酸水溶液作为催化剂，产率为90％。
[0092]
本实施例中其他步骤与实施例1相同。
[0093]
实施例3
[0094]
本实施例与实施例1的区别在于：0.3ml的6m的乙酸水溶液作为催化剂，置于干燥箱中150℃进行反应，产率为95％。
[0095]
本实施例中其他步骤与实施例1相同。
[0096]
实施例4
[0097]
本实施例与实施例1的区别在于：0.2ml的3m的乙酸水溶液作为催化剂，置于干燥
箱中90℃进行反应，产率为91％。
[0098]
本实施例中其他步骤与实施例1相同。
[0099]
实施例5
[0100]
本实施例与实施例1的区别在于：邻二氯苯和正丁醇作为反应溶剂，体积比为1:1(2ml)，0.3ml的6m的乙酸水溶液作为，产率为91％。
[0101]
本实施例中其他步骤与实施例1相同。
[0102]
实施例6
[0103]
本实施例与实施例1的区别在于：邻二氯苯和正丁醇作为反应溶剂，体积比为1:1(1ml)，反应温度为150℃，产率为89％。
[0104]
本实施例中其他步骤与实施例1相同。
[0105]
实施例7
[0106]
将200mg的5-fu和15mg的cof加入到10ml的正己烷溶液中，室温搅拌3小时后，过滤，磷酸盐缓冲盐水(pbs)洗涤多余的5-fu。将样品冷冻干燥备用。
[0107]
图3a曲线和图3b曲线分别为实施例7中的tp-dfpa-cof负载5-fu前后的pxrd图，10-30℃的这些特征峰的存在说明负载5-fu的cof材料中存在5-fu衍射峰，证实了5-fu药物的成功负载。
[0108]
图4为tp-dfpa-cof负载5-fu前后和5-fu分子的红外吸收对照图，1660cm-1
的c＝o强吸收说明了cof材料成功负载5-fu。
[0109]
图10a为负载5-fu后的cof(5-fu@tp-dfpa-cof)和5-fu热重对照图，从图中可以看出，cof的负载5-fu含量高达67wt％。
[0110]
实施例8
[0111]
将200mg的ao和15mg的cof加入到10ml的正己烷溶液中，室温搅拌3小时后，过滤，dmso洗涤后，再用磷酸盐缓冲盐水(pbs)洗涤多余的ao。将样品冷冻干燥备用。
[0112]
图3a曲线和图3c曲线分别为实施例7中的tp-dfpa-cof负载ao前后的pxrd图，15-30℃的这些特征峰的存在说明负载ao的cof材料中存在ao衍射峰，证实了ao药物的成功负载。
[0113]
图5为tp-dfpa-cof负载ao前后和ao分子的红外吸收对照图，1700cm-1
的c＝o强吸收峰和3085-2945cm-1
的吸收峰说明了cof材料成功负载ao。
[0114]
图10b为负载ao后的cof(ao@tp-dfpa-cof)和ao热重对照图，从图中可以看出，cof的负载ao含量高达80wt％。
[0115]
图11是本发明实施例提供的tp-dfpa-cof以及负载5-fu和ao后的xps图；其中图11a为tp-dfpa-cof的xps图；图11b为tp-dfpa-cof负载5-fu后的tp-dfpa-cof xps图；图11c为tp-dfpa-cof负载ao后的xps图。
[0116]
实施效果例
[0117]
将实施例7中的5-fu@tp-dfpa-cof进行5-fu药物缓释实验分析。步骤如下：
[0118]
将20mg 5-fu@tp-dfpa-cof加入到一个半透膜袋里，将其放入到盛有50ml ph＝7.2的pbs的瓶子里，使其完全浸泡，将瓶子密封。然后将其放入到37℃的恒温摇床中，每24h取一次0.1ml pbs溶液样品，取后，及时补充0.1ml纯pbs，直至5-fu药物充分释放完全。将样品置于紫外可见光仪广谱仪中测试，测试出每组样品的紫外吸收图，根据5-fu标准曲线就
可以得出5-fu药物浓度，进而得出5-fu@tp-dfpa-cof缓释5-fu药物的释放率。
[0119]
图12中a曲线是5-fu@tp-dfpa-cof释放5-fu药物的释放率图，从图中可以看出5-fu@tp-dfpa-cof具有较好的5-fu药物缓释性能，3天后可以释放77％的5-fu，六天后可以完全释放5-fu药物。
[0120]
将实施例8中的ao@tp-dfpa-cof进行ao药物缓释实验分析，步骤如下：
[0121]
将10mg ao@tp-dfpa-cof加入到一个半透膜袋里，将其放入到盛有100ml ph＝7.2的pbs的瓶子里，使其完全浸泡，将瓶子密封。然后将其放入到37℃的恒温摇床中，每24h取一次0.2ml pbs溶液样品，取后，及时补充0.2ml纯pbs，直至ao药物充分释放完全。将样品置于紫外可见光吸收广谱仪中测试，测试出每组样品的紫外吸收图，根据ao标准曲线就可以得出ao药物浓度，进而得出ao@tp-dfpa-cof缓释ao的药物释放率。
[0122]
图12中b曲线是ao@tp-dfpa-cof释放ao药物的释放率图，从图中可以看出5-fu@tp-dfpa-cof具有较好的ao药物缓释性能，3天后可以释放80％的ao，六天后可以完全释放ao药物。
[0123]
下面结合细胞实验对本发明的技术方案作进一步描述。
[0124]
体外细胞毒理实验
[0125]
采用mtt法分析tp-dfpa-cof材料对mcf-7细胞的毒性。将mcf-7细胞放在含有5％co2中的37℃恒温培养箱中培养，其中培养基是按照dmem：胎牛血清为9:1的比例进行配制。将细胞(每孔5
×
104)培养24小时后，加入溶解好的不同浓度cof样品。将细胞培养24小时后，每孔加入mtt继续培养4小时。除去清液后，向各孔中加入0.2ml二甲基亚砜充分溶解甲瓒晶体，利用酶标仪测量吸光度进而求算细胞存活率。
[0126]
图13为细胞不同浓度的cof材料对细胞的毒性作用数据。结果显示即使在高浓度下，细胞的存活率依然达到94％。表明该cof材料具有低的细胞毒性。
[0127]
采用mtt法分析负载药物后的5-fu@tp-dfpa-cof对b16f10癌细胞的毒性。将b16f10细胞放在含有5％co2中的37℃恒温培养箱中培养，其中培养基是按照dmem：胎牛血清为9:1的比例进行配制。将细胞(每孔5
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104)培养24小时后，加入溶解好的不同浓度cof样品。细胞培养24小时后，每孔加入mtt继续培养4小时。除去上清液后，向各孔中加入0.2ml二甲基亚砜充分溶解甲瓒晶体，利用酶标仪测量吸光度进而求算细胞存活率。
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图14为负载不同浓度5-fu的cof材料对于b16f10癌细胞的治疗效果图。抗癌活性数据表明，负载了5-fu的cof材料对黑色素瘤癌细胞具有比较好的抑制效果，在5-fu浓度仅为32μg/ml的情况下，85％以上黑色素瘤癌细胞生长被抑制。
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