一种用于降解硫氰酸盐的菌株、复合菌株、菌剂及应用的制作方法

1.本发明涉及硫氰酸盐降解技术领域，具体涉及一种用于降解硫氰酸盐的菌株、复合菌株、菌剂及应用。


背景技术：

2.硫氰酸盐并非剧毒物质，其作为cod的贡献者之一，对环境影响较小，但是，硫氰酸盐在氧气、微生物等协同作用下会分解为cno-，进而产生剧毒氰化物，所以，硫氰酸盐可能产生二次污染。硫氰酸盐产生途径一般为金精矿生物氧化厂氰化尾渣，电解铜和电镀行业的生产废水。
3.目前，国内外常用处理含硫氰酸盐废水的方法有氧化回收法、碱氯法、因科法、生物法等，现有方法处理成本高、效率低、易造成二次污染，且单菌降解能力低，无法满足市场需求。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种用于降解硫氰酸盐的菌株、复合菌株、菌剂及应用，该复合菌株能够高效降解废水中硫氰酸盐，且降解周期短、成本低。
5.为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
6.本发明第一方面提供一种用于降解硫氰酸盐的菌株，所述菌株为硫杆菌thiobacillus sp.a，所述thiobacillus sp.a在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为cctcc no：m2022216，保藏日期为2022年3月9号。
7.本发明第二方面提供一种用于降解硫氰酸盐的复合菌株，所述复合菌株包括赖氨酸芽胞杆菌lysinibacillus sp.s3，西氏不动杆菌acinetobacter seifertii lb3，硫杆菌thiobacillus sp.a，假单胞菌pseudomonas sp.wu6，贝氏不动杆菌acinetobacter baylyi wu9，上述各菌种的保藏日期均为2022年3月9号；
8.其中，lysinibacillus sp.s3在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为cctcc no：m2022214，acinetobacter seifertii lb3在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为cctcc no：m2022215，thiobacillus sp.a在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为cctcc no：m2022216，pseudomonas sp.wu6在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为cctcc no：m2022217，acinetobacter baylyi wu9在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为cctcc no：m2022218。
9.优选地，所述复合菌株中lysinibacillus sp.s3、acinetobacter seifertii lb3、thiobacillus sp.a、pseudomonas sp.wu6和acinetobacter baylyi wu9的质量比为1∶(0.8～1.2)∶(0.8～1.2)∶(0.8～1.2)∶(0.8～1.2)。
10.优选地，所述lysinibacillus sp.s3、acinetobacter seifertiil b3、thiobacillus sp.a、pseudomonas sp.wu6和acinetobacter baylyi wu9菌株的含水量分别为25％～35％。
11.本发明第三方面提供一种含有上述菌株或复合菌株的微生物菌剂。
12.本发明第四方面提供一种上述菌株、复合菌株或微生物菌剂在降解废水中硫氰酸盐的应用。
13.本发明第五方面提供一种含硫氰酸盐废水中硫氰酸盐的降解方法，所述降解方法包括如下步骤：
14.将上述菌株、复合菌株或微生物菌剂接种到含硫氰酸盐的废水中进行硫氰酸盐的降解。
15.优选地，所述上述菌株、复合菌株或微生物菌剂的接种量为4～8g/l。
16.优选地，所述降解过程中控制废水温度为28～35℃，溶解氧含量为2～5mg/l；所述废水ph值为6.7～7.5。
17.优选地，所述废水中硫氰酸盐含量不大于3000mg/l。
18.优选地，所述复合菌株通过如下方法制得：
19.将各菌种分别进行活化、扩大培养，然后，离心去除培养基，再进行润洗、离心，得到各菌体；
20.将各菌体进行干燥，按照质量比混合，即得复合菌株。
21.优选地，所述干燥为将菌体在30℃下风干。
22.干燥条件及温度：30℃风干
23.前处理：离心去除培养基
24.优选地，所述混合后以100r/min搅拌4～6min，以使各菌体混合均匀。
25.优选地，所述离心去除培养基中离心转速为6000～10000r/min，温度为4℃。
26.与现有技术相比，本发明的有益效果至少包括：
27.本发明通过将特定菌株复合在一起，实现各菌种的协同增效作用，进而达到对废水中硫氰酸盐的高效降解，显著提高了含硫氰酸盐废水处理的效率，有效缩短了含硫氰酸盐废水降解周期。具体而言，本发明复合菌株能够在36h内将硫氰酸盐浓度为3000mg/l的工业废水进行有效降解，该降解方法降解效率高、周期短、运行稳定，能更好地满足市场需求。
附图说明
28.为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。在所有附图中，类似的元件或部分一般由类似的附图标记标识。附图中，各元件或部分并不一定按照实际的比例绘制。
29.图1为本发明实施例1中不同菌种的划线培养结果；
30.图2为本发明实验例1中不同组硫氰酸盐的降解率；
31.图3为本发明实验例2中不同组硫氰酸盐的降解率；
32.图4为本发明实验例3中不同组硫氰酸盐的降解率；
33.图5为本发明实验例4中不同组硫氰酸盐的降解率；
34.图6为本发明实验例5中不同组硫氰酸盐的降解率。
具体实施方式
35.下面将结合实施例对本发明技术方案的实施例进行详细的描述。以下实施例仅用
于更加清楚地说明本发明的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本发明的保护范围。
36.需要注意的是，除非另有说明，本技术使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域技术人员所理解的通常意义。
37.实施例1
38.本实施例为lysinibacillus sp.s3、acinetobacter seifertii lb3、thiobacillus sp.a、pseudomonas sp.wu6和acinetobacter baylyi wu9的筛选过程，具体包括：
39.含硫氰酸盐的工业废水(来源于江西省丰城新高焦化有限公司)，采用含有硫氰酸盐为唯一碳源的培养基进行筛选，筛选得到5个菌株，分别记为s3、lb3、a、wu6和wu9；
40.采用16srdna基因测序法对上述得到的5个菌株进行分类鉴定，其中，a的基因序列如seq id no：1所示，具体如下：
41.attgaacgctggcggaatgctccacacatgcaagtcgaacggcagcacgggagcttgctcctggtggcgagtggcgaacgggtgagtaatgcgtcggaacgtgccgagtaatgggggataacgcggcgaaagtcgcgctaataccgcatacgccctgagggggaaagcgggggatcgcaagacctcgcgccattcgagcggaagacgtctgattagctagttggtggggtaaaggcccaccaaggcgacgatcagtagcgggtctgagaggatgatccgccacactgggactgagacacggcaaagactcctacgggaggcagcagtggggaattttggacaatgggggcaaccctgatccagccattccgcgtgagtgaagaaggccttcgggttgtaaagctctttcagctggaacgaaacggtgcgctctaacatagcgtgctaatgacggtaccagcagaagaagcaccggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtagggtgcgagcgttaatcggaattactgggcgtaaagcgtgcgcaggcggattgttaagcaagacgtgaaatccatgggcttaacctgggaatggcgtaatgaactggcagtctagagtgcgtcagaggggggtggaattccacgtgtagcagtgaaatgcgtagagatgtggaggaacaccgatggcgaaggcagccggctgggatgacactgacgctcatgtacgaccgcgtgggtagcaaacaggattagataccctggtagtccacgccctaaacgatgtcaactggttgttgggggagtgaaatcccttagtaacgaagctaacgcgtgaagttgaccgcctggggagtacggtcgcaagattaaggctcaaaggaattgacggggacccgcacaagcggtggatgatgtggattaattcgatgcaacgcgaaccaccttacctacccttgacatgtccggaatcctgcagagatgcgggagtgcccgaaagggaatcggaacacaggtgctgcatggctgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttatcattagttgctacgcaagggcactctaatgagactgccggtgacaaaccggaggaaggtggggatgacgtcaagtcctcatggcccttatgggtagggcttcacacgtcatacaatggtcattacagagggttgccaagccgcgaggtggagccaatcccagaaagccgatcgtagtccggattgttctctgcaactcgagagcatgaagtcggaatcgctagtaatcgcggatcagcatgtcgcggtgaatacgttcccgggtcttgtacacaccgcccgtcacaccatgggagtggaatctgccagaagtaggtagcctaaccgcaaccggggcgcttaccacggtgggtttcatgactggggtgaag；
42.lb3的基因序列如seq id no：2所示，具体如下：
43.ttgctactgatcttagcggcggacgggtgagtaatgcttaggaatctgcctattagtgggggacaacatctcgaaagggatgctaataccgcatacgtcctacgggagaaagcaggggatcttcggaccttgcgctaatagatgagcctaagtcggattagctagttggtggggtaaaggcctaccaaggcgacgatctgtagcgggtctgagaggatgatccgccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtggggaatattggacaatggggggaaccctgatccagccatgccgcgtgtgtgaagaaggccttatggttgtaaagcactttaagcgaggaggaggctactttagttaatacctagagatagtggacgttactcgcagaataagcaccggctaactctgtgccagcagccgcggtaa
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44.wu9的基因序列如seq id no：3所示，具体如下：agtcgagcggagagaggtacttcgctactgaccttagcggcggacgggtgagtaatacttaggaatctgcctattagtgggggacaacatctcgaaagggatgctaataccgcatacgtcctacgggagaaagcaggggatctttatgaccttgcgctaatagatgagcctaagtcggattagctagttggtggggtaaaggcctaccaaggcgacgatctgtagcgggtctgagaggatgatccgccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtggggaatattggacaatggggggaaccctgatccagccatgccgcgtgtgtgaagaaggccttatggttgtaaagcactttaagcgaggaggaggctcttttggttaatacccaagatgagtggacgttactcgcagaataagcaccggctaactctgtgccagcagccgcggtaatacagagggtgcaagcgttaatcggatttactgggcgtaaagcgcgcgtaggcggccaattaagtcaaatgtgaaatccccgagcttaacttgggaattgcattcgatactgtttggctagagtgtgggagaggatggtagaattccaggtgtagcggtgaaatgcgtagagatctggaggaataccgatggcgaaggcagccatctggcctaacactgacgctgaggtgcgaaagcatggggagcaaacaggattagataccctggtagtccatgccgtaaacgatgtctactagccgttggggcctttgaggctttagtggcgcagctaacgcgataagtagaccgcctggggagtacggtcgcaagactaaaactcaaatgaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgatgcaacgcgaagaaccttacctggccttgacatagtagaaactttccagagatggattggtgccttcgggaatctacatacaggtgctgcatggctgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttttccttacttgccagcatttcggatgggaactttaaggatactgccagtgacaaactggaggaaggcggggacgacgtcaagtcatcatggcccttacggccagggctacacacgtgctacaatggtcggtacaaagggttgctacctagcgataggatgctaatctcaaaaagccgatcgtagtccggattggagtctgcaactcgactccatgaagtcggaatcgctagtaatcgcggatcagaatgccgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacaccatgggagtttgttgcaccagaagtagctagcctaactgcaaagagg；
45.wu6的基因序列如seq id no：4所示，具体如下：
46.tgattcagcggcggacgggtgagtaatgcctaggaatctgcctggtagtgggggacaacgtttcgaaaggaacgctaataccgcatacgtcctacgggagaaagcaggggaccttcgggccttgcgctatcagatgagcctaggtcggattagctagttggtggggtaatggctcaccaaggcgacgatccgtaactggtctgagaggatgatcagtcacactggaactgagacacggtccagactcctacgggaggcagcagtggggaatattggacaatgggcgaaagcctgatccagccatgccgcgtgtgtgaagaaggtcttcggattgtaaagcactttaagttgggaggaagggcagtaagttaataccttgctgttttgacgttaccgacagaataagcaccggctaactctgtgccagcagccgcggtaatacagagggtgcaagcgttaatcggaattactgggcgtaaagcgcgcgtaggtggtttgttaagttggatgtgaaagccccgggc
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47.s3的基因序列如seq id no：5所示，具体如下：
48.gcgaacagaaaaggagcttgctcctttgacgttagcggcggacgggtgagtaacacgtgggcaacctaccctatagtttgggataactccgggaaaccggggctaataccgaataatctcttttacttcatggtgaaggactgaaagacggtttcggctgtcgctataggatgggcccgcggcgcattagctagttggtgaggtaacggctcaccaaggcgacgatgcgtagccgacctgagagggtgatcggccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtagggaatcttccacaatgggcgaaagcctgatggagcaacgccgcgtgagtgaagaaggttttcggatcgtaaaactctgttgtaagggaagaacaagtacagtagtaactggctgtaccttgacggtaccttattagaaagccacggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtaggtggcaagcgttgtccggaattattgggcgtaaagcgcgcgcaggcggtcctttaagtctgatgtgaaagcccacggctcaaccgtggagggtcattggaaactgggggacttgagtgcagaagaggaaagtggaattccaagtgtagcggtgaaatgcgtagagatttggaggaacaccagtggcgaaggcgactttctggtctgtaactgacgctgaggcgcgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacgatgagtgctaagtgttagggggtttccgccccttagtgctgcagctaacgcattaagcactccgcctggggagtacggtcgcaagactgaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttaccaggtcttgacatcccgttgaccactgtagagatatagtttccccttcgggggcaacggtgacaggtggtgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttgatcttagttgccatcatttagttgggcactctaaggtgactgccggtgacaaaccggaggaaggtggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgtgctacaatggacgatacaaacggttgccaactcgcgagagggagctaatccgataaagtcgttctcagttcggattgtaggctgcaactcgcctacatgaagccggaatcgctagtaatcgcggatcagcatgccgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacaccacgagagtttgtaacacccgaagtcggtgaggtaacctttggagcca。
49.将基因序列进行核苷酸序列比对，进行菌株的鉴定，结果表明：s3为赖氨酸芽胞杆菌，lb3为西氏不动杆菌，a为硫杆菌，wu6为假单胞菌，wu9为贝氏不动杆菌。
50.对各菌种进行划线培养，培养结果如图1所示，由图1可知，a菌种菌落规则圆形，不透明，凸起湿润，培养前期白色后变黄色；lb3菌种菌落规则圆形，不透明，凸起湿润，白色；wu9菌种菌落规则圆形，不透明，凸起湿润，白色；wu6菌种菌落规则圆形，不透明，扁平湿润，暗白色，菌落中心有白点；s3菌种菌落规则圆形，不透明，凸起湿润，暗白色。
51.实施例2
52.本实施例为一种用于降解硫氰酸盐的复合菌株，该复合菌株包括赖氨酸芽胞杆菌
lysinibacillus sp.s3，不动杆菌acinetobacter seifertii lb3，硫杆菌thiobacillus sp.a，假单胞菌pseudomonas sp.wu6，不动杆菌acinetobacter baylyi wu9；
53.其中，lysinibacillus sp.s3在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为cctcc no：m2022214，acinetobacter seifertii lb3在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为cctcc no：m2022215，thiobacillus sp.a在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为cctcc no：m2022216，pseudomonas sp.wu6在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为cctcc no：m2022217，acinetobacter baylyi wu9在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为cctcc no：m2022218；
54.复合菌株中lysinibacillus sp.s3、acinetobacter seifertii lb3、thiobacillus sp.a、pseudomonas sp.wu6和acinetobacter baylyi wu9的质量比为1∶1∶1∶1∶1。
55.实施例3
56.本实施例为一种含硫氰酸盐废水中硫氰酸盐的降解方法，该降解方法包括如下步骤：
57.(a)实施例1复合菌株的制备：
58.将各菌种分别接种至lb培养基中进行活化，再进行扩大培养，然后，将扩大培养的培养液在4℃下以8000r/min离心，去除培养基后用生理盐水润洗、离心，得到各菌体；
59.将各菌体在室温下进行干燥，按照质量比将各菌种混合，即得复合菌株；
60.(b)按照接种量为6g/l，将复合菌株接种到含硫氰酸盐的废水中进行硫氰酸盐的降解36h，其中，控制废水温度为28～35℃，溶解氧含量为2～5mg/l，ph值为6.7～7.5，工业废水中硫氰酸盐的初始浓度为3000mg/l。
61.采用比色方法对降解后废水中硫氰酸盐的含量进行检测，并计算降解率，计算降解率为100％。
62.实验例1
63.实施例2的复合菌株按a～p的不同配比下对3000mg/l硫氰酸盐在36h内降解效果研究(复合菌株接种量6g/l)(实施例3的降解方法)：
64.a表示接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为1∶1∶1∶1∶1；
65.b表示接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为2∶1∶1∶1∶1；
66.c表示接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为1∶2∶1∶1∶1；
67.d表示接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为1∶1∶2∶1∶1；
68.e表示接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为1∶1∶1∶2∶1；
69.f表示接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为1∶1∶1∶1∶2；
70.g表示接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为3∶1∶1∶1∶1；
71.h表示接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为1∶3∶1∶1∶1；
72.i表示接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为1∶1∶3∶1∶1；
73.j表示接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为1∶1∶1∶3∶1；
74.k表示接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为1∶1∶1∶1∶3；
75.l表示接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为1∶2∶3∶1∶1；
76.m表示接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为1∶1∶2∶3∶1；
77.n表示接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为1∶1∶1∶2∶3；
78.o表示接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为3∶1∶1∶1∶2；
79.p表示接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为2∶3∶1∶1∶1；
80.并计算降解率，计算结果如图2所示，
81.由图2可知，接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为1∶1∶1∶1∶1时，硫氰酸盐降解效果最佳。
82.实验例2
83.实施例2的复合菌株以及单一菌株对3000mg/l硫氰酸盐在36h内降解效果研究(复合菌株接种量6g/l)(实施例3的降解方法)：分组如下：
84.a表示接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为1∶1∶1∶1∶1；
85.b表示只接种a菌株；
86.c表示只接种lb3菌株；
87.d表示只接种wu9菌株；
88.e表示只接种wu6菌株；
89.f表示只接种s3菌株；
90.计算降解率，计算结果如图3所示，
91.由图3可知，接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为1∶1∶1∶1∶1时，硫氰酸盐降解效果最佳。
92.实验例3
93.实施例2的复合菌株以及任意两株菌株对3000mg/l硫氰酸盐在36h内降解效果研究(复合菌株接种量6g/l)(实施例3的降解方法)：分组如下：
94.a表示接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为1∶1∶1∶1∶1；
95.b表示接种a、lb3菌株的质量比为1∶1；
96.c表示接种a、wu9菌株的质量比为1∶1；
97.d表示接种a、wu6菌株的质量比为1∶1；
98.e表示接种a、s3菌株的质量比为1∶1；
99.f表示接种lb3、wu9菌株的质量比为1∶1；
100.g表示接种lb3、wu6菌株的质量比为1∶1；
101.h表示接种lb3、s3菌株的质量比为1∶1；
102.i接种表示wu9、wu6菌株的质量比为1∶1；
103.j接种表示wu9、s3菌株的质量比为1∶1；
104.k接种表示wu6、s3菌株的质量比为1∶1；
105.计算降解率，计算结果如图4所示，
106.由图4可知，接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为1∶1∶1∶1∶1时，硫氰酸盐降解效果最佳。
107.实验例4
108.实施例2的复合菌株以及任意三株菌株对3000mg/l硫氰酸盐在36h内降解效果研究(复合菌株接种量6g/l)(实施例3的降解方法)：分组如下：
109.a表示接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为1∶1∶1∶1∶1；
110.b表示接种a、lb3、wu9菌株的质量比为1∶1∶1；
111.c表示接种a、lb3、wu6菌株的质量比为1∶1∶1；
112.d表示接种a、lb3、s3菌株的质量比为1∶1∶1；
113.e表示接种a、wu9、wu6菌株的质量比为1∶1∶1；
114.f表示接种a、wu9、s3菌株的质量比为1∶1∶1；
115.g表示接种a、wu6、s3菌株的质量比为1∶1∶1；
116.h表示接种lb3、wu9、wu6菌株的质量比为1∶1∶1；
117.i接种表示lb3、wu9、s3菌株的质量比为1∶1∶1；
118.j接种表示lb、wu6、s3菌株的质量比为1∶1∶1；
119.k接种表示wu9、wu6、s3菌株的质量比为1∶1∶1；
120.计算降解率，计算结果如图5所示，
121.由图5可知，接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为1∶1∶1∶1∶1时，硫氰酸盐降解效果最佳。
122.实验例5
123.实施例2的复合菌株以及任意三株菌株对3000mg/l硫氰酸盐在36h内降解效果研究(复合菌株接种量6g/l)(实施例3的降解方法)：分组如下：
124.a表示接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为1∶1∶1∶1∶1；
125.b表示接种a、lb3、wu9、wu6菌株的质量比为1∶1∶1∶1；
126.c表示接种a、wu9、wu6、s3菌株的质量比为1∶1∶1∶1；
127.d表示接种a、lb3、wu6、s3菌株的质量比为1∶1∶1∶1；
128.e表示接种a、lb3、wu9、s3菌株的质量比为1∶1∶1∶1；
129.f表示接种lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为1∶1∶1∶1；
130.计算降解率，计算结果如图6所示，
131.由图6可知，接种a、lb3、wu9、wu6、s3菌株的质量比为1∶1∶1∶1∶1时，硫氰酸盐降解效果最佳。
132.最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围，其均应涵盖在本发明的权利要求和说明书的范围当中。