技术特征：
1.催化reb a生产reb m的重组糖基转移酶。2.编码权利要求1所述重组糖基转移酶的重组基因，其特征在于，所述重组基因的核苷酸序列如seq id no.1-seq id no.8所示。3.一种表达催化reb a生产reb m的重组糖基转移酶的重组菌株，其特征是用下述方法构建：将权利要求2所述重组基因构建至表达载体，获得重组载体；将所述重组载体转化宿主菌株中获得重组菌株。4.根据权利要求3所述的重组菌株，其特征在于所述表达载体为ppic9k、ppic9、ppinkα-hc、pet-28a、pmal或pbad30。5.根据权利要求3所述的重组菌株，其特征在于所述宿主菌株为大肠杆菌或巴斯德毕赤酵母菌。6.权利要求3的重组菌株的诱导表达，其特征是包括如下步骤：将权利要求3所述重组菌株进行培养并加入诱导剂，在15
–
37℃，诱导表达6
–
27h，获得含有催化reb a生产reb m的重组糖基转移酶的菌体细胞；将所述菌体细胞破胞，得到催化reb a生产reb m的重组糖基转移酶的酶液。7.含有催化reb a生产reb m的重组糖基转移酶的菌体细胞催化reb a生产reb m的方法，其特征是包括如下步骤：取终od
600
为25
–
250权利要求6所述的含有催化reb a生产reb m的重组糖基转移酶的菌体细胞或经过通透性处理的含有催化reb a生产reb m的重组糖基转移酶的菌体细胞，加入终浓度为1
–
10g/l reb a、终浓度为4
–
10mm尿苷二磷酸葡萄糖和终浓度为0.4
–
1mm的mn
2+
，加入终浓度为50mm的ph为7.2
–
8.0的pbs，在26℃
–
42℃、转速为50
–
250rpm、反应10
–
24h，催化生成reb m；所述经过通透性处理的含有催化reb a生产reb m的重组糖基转移酶的菌体细胞用下述方式制备：方式一：将含有催化reb a生产reb m的重组糖基转移酶的菌体细胞在-20
°
～-80℃冷冻0.5
–
24h；方式二：将含有催化reb a生产reb m的重组糖基转移酶的菌体细胞用终浓度为0.15
–
0.45g/l的细胞通透剂重悬，在20
–
30℃静置5min
–
1h；所述细胞通透剂为十六烷基三甲基溴化铵、曲拉通x-100、聚山梨酯-80或十二烷基硫酸钠。8.催化reb a生产reb m的重组糖基转移酶的酶液催化reb a生产reb m的方法，其特征是包括如下步骤：取终浓度为1
–
5g/l权利要求6所述的催化reb a生产reb m的重组糖基转移酶的酶液，加入终浓度为1
–
10g/l reb a，终浓度为1
–
8mm尿苷二磷酸葡萄糖和终浓度为0.1
–
6mm金属离子，加入终浓度为50mm的ph为5.5
–
10.5的缓冲液，在26℃
–
42℃反应12
–
96h，催化生成reb m；所述金属离子为mg
2+
、mn
2+
、ba
2+
、ca
2+
或pb
2+
。
技术总结
本发明公开了催化Reb A生产Reb M的重组糖基转移酶，编码所述重组糖基转移酶的重组基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.8所示；本发明的一种催化Reb A生产Reb M的重组糖基转移酶能直接以Reb A作为底物高效催化生成Reb M，避免了由Reb A两步催化或由Reb D催化生产Reb M。避免了以低溶解度且更昂贵的Reb D生产Reb M的方式，极大节约了底物的生产成本。相比传统两步体外级联催化法，本发明实现了一步催化，整体操作流程精简化，有效减少耗材损耗及操作时间，降低生产成本；本发明的方法Reb M生成率高。M生成率高。M生成率高。
技术研发人员：马媛媛 王保淇 汪振洋 魏晓珍 宋浩
受保护的技术使用者：天津大学
技术研发日：2022.05.27
技术公布日：2022/8/19