一组环状多肽化合物及其制备方法和应用

1.本发明涉及一系列含有8-9个氨基酸残基的环状多肽化合物及其制备方法，还涉及该环状多肽化合物在制备抗菌药物中的用途，以及含有该环状多肽化合物作为活性组分的药物组合物及其应用，本发明属于生物医药领域。


背景技术：

2.耐药病原体的迅速出现已成为全球性健康问题，世界卫生组织指出，抗生素耐药性是一种全球公共卫生危机，必须予以最紧急的管理。抗生素的过度使用和滥用刺激了耐抗生素细菌的迅速出现。耐药菌使现有抗生素(如碳青霉烯类、氟喹诺酮类等)的使用受到严重制约，且临床治疗方案对耐药细菌引起的感染疗效甚微，而多粘菌素作为目前针对临床治疗革兰氏阴性菌感染的最后一道防线也已出现耐药案例，因此，人们对新型抗菌剂的需求迫切。
3.多肽类抗菌剂即抗菌肽(amp)因具有抗菌活性广、灭菌快、细胞选择性高、难产生耐药性等特点而受到广泛关注，有望用其解决耐药细菌感染的问题。amp在自然界中普遍存在，且部分amp已被应用，如使用多粘菌素e作为一线抗菌剂以治疗由多药耐药微生物引起的严重感染。
4.八肽菌素发现于1973年，是环状芽孢杆菌产生的一种抗菌肽。天然八肽菌素分为a、b、c、d四种结构类型，主要结构由含有羟基的脂肪酰基链和环状七肽通过一个d构型氨基酸连接而成。其具有广谱抗菌活性，对革兰氏阳性菌活性差，对大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌的活性中等，铜绿假单胞菌活性与多粘菌素相当，但对多粘菌素耐药的铜绿假单胞菌依旧有抗菌活性，且对酵母菌、真菌均有很强的抗菌活性，急性毒性比多粘菌素b小。
5.由于耐药菌的日益增多、新型抗生素临床需求迫切，抗菌谱广、毒性低、对耐药菌活性佳的新型八肽菌素及其衍生物的制备和应用研究尤为重要。
6.直至2015年，天然八肽菌素才经化学制备方法被首次合成得到，文献(de zoysagayan heruka，cameron alan james，hegde veena v et al.antimicrobial peptides with potential for biofilm eradication：synthesis and structure activity relationship studies of battacin peptides.j med chem，2015，58：625-39.)报道的方法中，采用fmoc固相合成多肽法，在树脂上先得到相应直链肽而后从树脂上切下直链肽，在液相条件下进行环合。此类方法操作复杂、收率较低仅为10％、不易纯化。而后tony等人对天然八肽菌素c类化合物进行衍生物设计及改造，优化合成路线，通过固相缩合、固相环合以得到操作简便、收率为20％的衍生物(velkov tony，gallardo-godoy alejandra，swarbrick james d et al.structure，function，and biosynthetic origin of octapeptin antibiotics active against extensively drug-resistant gram-negative bacteria.cell chem biol，2018，25：380-391.)。
7.本发明基于以上基础，研究一组含有8-9个氨基酸的环状多肽的设计、合成与应
用，并再次优化反应路线，简化操作、提高收率至30％。
8.关于新衍生物的制备，本发明制备了通过改变侧链酰基链长度和体积来提高或降低侧链酰基链(改变r0)疏水性的新衍生物，碱性氨基酸或极性氨基酸替换1位和/或3位氨基酸(改变r1、r2)的新衍生物，疏水氨基酸或极性氨基酸替换4位和/或5位氨基酸(改变r3、r4)的新衍生物，疏水氨基酸或酸性氨基酸或极性氨基酸替换8位氨基酸(改变r7)的新衍生物，改变z的长度来扩大或缩小环的新衍生物。通过改变氨基数目或疏水性，扩大其抗菌谱或提高抗菌活性或降低肾毒性。
9.本发明研究发现了一组新结构的含有8-9个氨基酸残基的环状多肽化合物，该类化合物的抗菌活性与抗菌谱均较天然产物八肽菌素有显著改善，本发明的提出为抗菌药物的开发应用提供了新的技术手段。


技术实现要素：

10.本发明的目的之一是提供一组具有新结构的含有8-9个氨基酸残基的环状多肽化合物，其抗菌活性与抗菌谱均较天然产物八肽菌素有显著改善。
11.本发明的目的之二是提供所述的环状多肽化合物的制备方法，特别是包含固相缩合、固相环合的制备方法。
12.本发明的目的之三是提供所述的环状多肽化合物在制备抗菌药物中的用途。
13.为达到上述目的，本发明采用如下技术方案来实现：
14.本发明提供了一组含8-9个氨基酸残基的环状多肽化合物或其可药用盐，结构如通式i’所示：
[0015][0016]
式i’中数字1至8表示氨基酸残基在式i’中的具体位置，采用中括号将1位至8位的氨基酸分别分隔开。每个中括号对应于一个具体数字，例如对应于数字1的中括号中是1位氨基酸，例如对应于数字2的中括号中是2位氨基酸。
[0017]
为了简化说明，将通式i’中的中括号去掉，形成通式i：
[0018][0019]
本发明的一组具有通式i所示结构的环状多肽化合物或其可药用盐，所述的环状多肽化合物由环状七肽、一个氨基酸线肽侧链和一个末端酰基链三部分组成；
[0020]
式中：
[0021]
r0选自由以下组成的组：含有6-11个碳的直链烷基、含有7-12个碳的支链烷基、羟基取代的含有6-11个碳的直链烷基、羟基取代的含有7-12个碳的支链烷基、含有6-11个碳的含醚键的直链烷基、被含有4-8个碳的直链烷基或者含有5-9个碳的支链烷基取代的苯基、被含有2-8个碳的直链烷基取代的四氢呋喃环、
[0022][0023]
r1选自由以下组成的组：-ch2oh、-ch(ch3)oh、nh
2-(ch2)
x-、ch
3-nh-(ch2)
x-、nh
2-co-(ch2)
x-，x是1-4的整数；1位氨基酸的构型为d或l型；
[0024]
r2、r5和r6独立选自由以下组成的组：-ch2oh、-ch(ch3)oh、-(ch2)
2-s-ch3、含有1-4个碳的直链烷基或者含有3-4个碳的支链烷基、nh
2-(ch2)
y-、ch
3-nh-(ch2)
y-、y是1-4的整数；3、6、7位氨基酸的构型为l型；
[0025]
r3和r4独立选自由以下组成的组：h、含有1-8个碳的直链烷基或者含有3-8个碳的支链烷基、-ch2oh、-ch(ch3)oh、-(ch2)
2-s-ch3、-ch2cooh和-ch
2-r8；r8选自由以下组成的组：苯基、环己基、3-吲哚基、4位、5位氨基酸的构型为d或l型；r9、r
10
和r
11
独立选自
由以下组成的组：-oh、-nh2、-f、-cl、-br、-cn、-no2、-cf3、ch3o-、ch3ch2o-、含有1-4个碳的直链烷基或者含有3-4个碳的支链烷基、苯基、苄基、苯甲酰基；
[0026]
r7选自由以下组成的组：-ch2oh、-ch(ch3)oh、-ch2cooh、苯基、苄基和含有1-4个碳的直链烷基或者含有3-4个碳的支链烷基；8位氨基酸的构型为l型；
[0027]
z是0-3的整数，2位氨基酸的构型为l型。
[0028]
当通式i中的z＝1，即具有如通式ii所示的结构：
[0029][0030]
在本发明的具体实施例中，所述的环状多肽化合物包括选自由以下组成的组：(hx-1)(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-thr-dab-dab-thr]
[0031][0032]
(hx-2)(s)-6-甲基辛酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu]
[0033][0034]
(hx-3)(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu]
[0035][0036]
(hx-4)(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe-leu-dab-dab-leu]
[0037][0038]
(hx-5)(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-leu]
[0039][0040]
(hx-6)(s)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu]
[0041]
[0042]
(hx-7)(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe-leu-dab-dab-thr]
[0043][0044]
(hx-8)(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]
[0045][0046]
(hx-9)(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-leu-d-phe-dab-dab-leu]
[0047][0048]
(hx-10)(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe-thr-dab-dab-leu]
[0049][0050]
(hx-11)(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-leu-d-phe-dab-dab-thr]
[0051][0052]
(hx-12)(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-thr-dab-dab-leu]
[0053][0054]
(hx-13)(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe-thr-dab-dab-thr]
[0055][0056]
(hx-14)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu]
[0057][0058]
(hx-15)正壬酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu]
[0059][0060]
(hx-16)丁二酸单(1-甲基丁基)酯-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]
[0061][0062]
(hx-17)(r)-3-羟基癸酰基-d-ser-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu]
[0063][0064]
(hx-18)(r)-3-羟基癸酰基-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu]
[0065][0066]
(hx-19)(r)-3-羟基癸酰基-dab-d-dab-环(3-9)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-leu]
[0067][0068]
(hx-20)(r)-3-羟基癸酰基-d-ser-d-dab-环(3-9)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-leu]
[0069][0070]
(hx-21)正辛酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu]
[0071][0072]
(hx-22)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-leu-leu-dab-dab-thr]
[0073][0074]
(hx-23)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-d-leu-dab-dab-thr]
[0075][0076]
(hx-24)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-bip-dab-dab-thr]
[0077][0078]
(hx-25)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-bip-leu-dab-dab-thr]
[0079][0080]
(hx-26)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-chg-leu-dab-dab-thr]
[0081][0082]
(hx-27)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-octyl-gly-dab-dab-thr]
[0083][0084]
(hx-28)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-asp-dab-dab-thr]
[0085][0086]
(hx-29)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-asp]
[0087][0088]
(hx-30)苯己酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]
[0089][0090]
(hx-31)7，7-二甲基辛酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]
[0091]
[0092]
(hx-32)正癸酰基-d-dap-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]
[0093][0094]
(hx-33)正癸酰基-d-orn-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]
[0095][0096]
(hx-34)正癸酰基-d-thr-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]
[0097][0098]
(hx-35)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-lys-d-leu-leu-dab-dab-thr]
[0099][0100]
(hx-36)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-orn-d-leu-leu-dab-dab-thr]
[0101][0102]
(hx-37)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dap-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]
[0103][0104]
(hx-38)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[orn-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]
[0105][0106]
(hx-39)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe(4-tbu)-leu-dab-dab-thr]
[0107][0108]
(hx-40)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe(4-cl)-leu-dab-dab-thr]
[0109][0110]
(hx-41)正辛酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-leu]
[0111][0112]
(hx-42)正壬酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-leu]
[0113][0114]
(hx-43)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-leu]
[0115][0116]
(hx-44)正癸酰基-d-asn-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-leu]
[0117]
[0118]
(hx-45)正癸酰基-d-dab-环(2-8)
[0119]
[dab-dab-d-phe-bip-dab-dab-thr]
[0120][0121]
(hx-46)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-trp-dab-dab-leu]
[0122][0123]
(hx-47)正癸酰基-d-dab-环(2-8)
[0124]
[dab-dab-d-phe-bip-dab-dab-leu]
[0125][0126]
(hx-48)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe-phe-dab-dab-leu]
[0127][0128]
(hx-49)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-ser]
[0129][0130]
(hx-50)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-phe]
[0131][0132]
(hx-51)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe(4-me)-dab-dab-leu]
[0133]
[0134]
(hx-52)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe(4-ome)-dab-dab-leu]
[0135][0136]
(hx-53)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe(3-cl)-leu-dab-dab-thr]
[0137][0138]
(hx-54)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe(4-nh2)-leu-dab-dab-thr]
[0139][0140]
(hx-55)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe(2-cl)-leu-dab-dab-thr]
[0141][0142]
(hx-56)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe(3，4-dicl)-leu-dab-dab-thr]
[0143][0144]
(hx-57)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe(4-me)-leu-dab-dab-thr]
[0145][0146]
(hx-58)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-ala]
[0147][0148]
(hx-59)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-gly]
[0149][0150]
(hx-60)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-val]
[0151][0152]
(hx-61)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-nva]
[0153][0154]
(hx-62)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-ile]
[0155][0156]
(hx-63)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-val-leu-dab-dab-thr]
[0157][0158]
(hx-64)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-nva-leu-dab-dab-thr]
[0159][0160]
(hx-65)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-ile-leu-dab-dab-thr]
[0161][0162]
(hx-66)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-val-dab-dab-thr]
[0163][0164]
(hx-67)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-nva-dab-dab-thr]
[0165][0166]
(hx-68)正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-ile-dab-dab-thr]
[0167]
[0168]
(hx-69)(r)-3-羟基-6-甲基庚酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]
[0169][0170]
(hx-70)(r)-2-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]
[0171][0172]
(hx-71)9-羟基壬酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]
[0173][0174]
(hx-72)(3r，6s)-3-羟基-6-甲基辛酰基-d-dab-环(2-8)
[0175]
[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]
[0176][0177]
(hx-73)4-戊氧基丁酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]
[0178][0179]
(hx-74)3-(四氢呋喃-2-基)丙酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]
[0180][0181]
(hx-75)6-甲氧基己酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]
[0182][0183]
(hx-76)(r)-3-羟基癸酰基-d-n-methyl-dab-环(2-8)
[0184]
[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu]
[0185][0186]
(hx-77)(r)-3-羟基癸酰基-d-arg-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu]
[0187][0188]
(hx-78)(r)-3-羟基癸酰基-d-3-胍基丙氨酸-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu]
[0189][0190]
(hx-79)(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-n-methyl-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu]
[0191][0192]
(hx-80)(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-n-methyl-dab-dab-leu]
[0193][0194]
术语“环(2-8)”是指通过酰胺键、8位氨基酸末端羧基连接到2位碱性氨基酸的侧链氨基，形成七肽环，结构如通式i、通式ii所示。
[0195]
d-氨基酸的构型用d表示。当没有提及构型时，可理解为氨基酸构型是l。dab表示α，γ-二氨基丁酸，orn表示2，5-二氨基戊酸，dap表示α，β-二氨基丙酸，bip表示3-(4-联苯)丙氨酸，octyl-gly表示辛基甘氨酸，chg表示环己基甘氨酸，nva表示2-氨基戊酸，n-methyl-dab表示2-氨基-4-甲氨基丁酸。
[0196]
本发明所述通式i化合物的可药用盐包括通式i化合物与酸形成的盐，所述的酸选自由以下组成的组：无机酸或有机酸，其中，所述无机酸例如高氯酸、氢碘酸、氢溴酸、盐酸、
硫酸、硝酸或磷酸；所述有机酸例如乙酸、三氟乙酸、乳酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、柠檬酸、苯甲酸、甲磺酸或对甲苯磺酸。
[0197]
本发明还提供了一种新的环状多肽化合物或其可药用盐固相合成的方法。该方法通过固相缩合、固相环合制备环状多肽化合物或其可药用盐，包括以下步骤：
[0198]
(1)经保护的碱性氨基酸fmoc-aa-op侧链游离氨基和卤代树脂反应得到fmoc-aa-op-树脂；其中p为羧基保护基，例如，烯丙基(allyl)、苄基(bn)：
[0199]
当fmoc-aa-op为fmoc-dab-op时，其结构如式iii所示：
[0200][0201]
(2)fmoc-aa-op-树脂逐一偶联得到线性多肽-树脂；
[0202]
(3)经由线性多肽-树脂选择性脱除保护基、固相环合得到环状多肽-树脂；
[0203]
(4)环状多肽-树脂经酸解得环状多肽化合物粗品；
[0204]
(5)环状多肽粗品经纯化和/或转盐，冻干得环状多肽化合物纯品。
[0205]
其中，优选的，步骤(1)中，卤代树脂选自由以下组成的组：三苯甲基氯树脂、4-甲基三苯甲基氯树脂、4-甲氧基三苯甲基氯树脂、2-氯三苯甲基氯树脂、溴-(4-甲基苯基)-甲基树脂或溴-(4-甲氧基苯基)-甲基树脂，例如，树脂为2-氯三苯甲基氯树脂。
[0206]
卤代树脂的取代度为0.1-1.6mmol/g，例如，取代度为0.5-1.0mmol/g。
[0207]
各个fmoc-保护的氨基酸用量为投料树脂总摩尔数的1.2-6倍，例如2.0-3.5倍。
[0208]
所述的碱选自由以下组成的组：n，n-二异丙基乙胺(diea)、三乙胺(tea)、吡啶中的至少一种，例如，为diea；碱的摩尔用量为fmoc-保护的氨基酸摩尔量的1.5-3倍，例如，为fmoc-保护的氨基酸摩尔量的2倍。
[0209]
取代反应时间为1-12h，例如，为2-3h。
[0210]
其中，优选的，步骤(2)中，fmoc-aa-op-树脂逐一偶联得到线性多肽-树脂包括以下步骤：
[0211]
脱去α-氨基fmoc保护基的试剂包括但不仅限于哌啶(pip)在dmf中的溶液，浓度为10-30％pip在dmf中的溶液，例如，浓度为20％。使用的去保护试剂用量为每克投料树脂5-15ml，例如，为每克投料树脂10ml。去保护反应时间为10-60min，例如，为10-20min。脱去2位氨基酸侧链氨基ivdde或dde保护基的试剂包括但不仅限于水合肼在dmf中的溶液，浓度为1-10％水合肼在dmf中的溶液，例如，浓度为3％。使用的去保护试剂用量为每克投料树脂5-15ml，例如，为每克投料树脂10ml。去保护反应时间为30-100min，例如，为30-60min。
[0212]
偶联反应中偶联剂选自由以下组成的组：n，n-二异丙基碳二亚胺(dic)、n，n-二环己基碳二亚胺(dcc)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(edc)、苯并三氮唑-n，n，n
′
，n
′‑
四甲基脲六氟磷酸盐(hbtu)、6-氯苯并三氮唑-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(hctu)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n，n，n
′
，n
′‑
四甲基脲六氟磷酸盐(hatu)、o-苯并三氮唑-n，n，n
′
，n
′‑
四甲基脲四氟硼酸盐(tbtu)、苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(pybop)，例如，为n，n-二异丙基碳二亚胺(dic)。
[0213]
偶联剂的摩尔用量为投料树脂总摩尔数的1.2-6倍，例如2.0-3.5倍。
[0214]
活化剂选自由以下组成的组：1-羟基苯并三唑(hobt)、6-氯-1-羟基苯并三氮唑(cl-hobt)、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(hoat)，例如，为1-羟基苯并三唑(hobt)。
[0215]
活化剂的摩尔用量为投料树脂总摩尔数的1.2-6倍，例如2.0-3.5倍。
[0216]
偶联反应时间为60-300min，例如，为60-120min。
[0217]
偶联反应中部分偶联剂需加入催化剂，催化剂为有机碱，选自由以下组成的组：n，n-二异丙基乙胺(diea)、三乙胺(tea)、n-甲基吗啉(nmm)，例如，为n，n-二异丙基乙胺(diea)。
[0218]
溶剂为非质子性极性溶剂，选自由以下组成的组：二甲基甲酰胺(dmf)或n-甲基吡咯烷酮(nmp)或其混合物，例如，dmf。
[0219]
其中，优选的，步骤(3)中，经由线性多肽-树脂选择性脱除保护基、固相环合得到环状多肽-树脂包括以下步骤：
[0220]
脱去羧基的烯丙基保护基的试剂为四(三苯基膦)钯/苯硅烷在dcm和dmf中的溶液(dcm∶dmf体积比为5∶5的混合溶液)。四(三苯基膦)钯摩尔用量为投料树脂总摩尔数的0.1-2倍，例如，0.1-0.3倍。苯硅烷摩尔用量为投料树脂总摩尔数的2-10倍，例如，3-5倍。使用的去保护试剂用量为每克投料树脂10-30ml，例如，为每克投料树脂20ml。去保护反应时间为60-300min，例如，为60-120min。
[0221]
固相环合偶联剂选自由以下组成的组：(3h-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶-3-氧基)三-1-吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(pyaop)、苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(pybop)，例如，(3h-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶-3-氧基)三-1-吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(pyaop)。
[0222]
偶联剂的摩尔用量为投料树脂总摩尔数的1.2-6倍，例如2.0-3.5倍。
[0223]
活化剂选自由以下组成的组：1-羟基苯并三唑(hobt)、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(hoat)，例如，为1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(hoat)。
[0224]
活化剂的摩尔用量为投料树脂总摩尔数的1.2-6倍，例如2.0-3.5倍。
[0225]
环合反应时间为1-20h，例如，为1-3h。
[0226]
催化剂为有机碱，选自由以下组成的组：n，n-二异丙基乙胺(diea)、三乙胺(tea)、n-甲基吗啉(nmm)，例如，为n-甲基吗啉(nmm)。
[0227]
溶剂为非质子性极性溶剂，选自由以下组成的组：二甲基甲酰胺(dmf)或n-甲基吡咯烷酮(nmp)或其混合物，例如，dmf。
[0228]
其中，优选的，步骤(4)中环状多肽-树脂经酸解得环状多肽粗品包括以下步骤：
[0229]
酸解选用含有氢氟酸(hf)或三氟乙酸(tfa)，例如，三氟乙酸的酸解液。
[0230]
酸解液用量为每克投料树脂5-30ml，例如，为每克投料树脂10ml。所述酸解液包含三氟乙酸以及侧链保护基脱除剂。
[0231]
三氟乙酸浓度为80％-95％，其余为侧链保护基脱除剂。
[0232]
侧链保护基脱除剂，选自由以下组成的组：茴香硫醚、三异丙基硅烷、苯酚、水、1，2-乙二硫醇，例如，水。
[0233]
酸解时间为60-300min，例如，为100-120min。
[0234]
将酸解后含多肽的酸解液加到冷乙醚中(酸解液与冷乙醚体积比例为1∶20)析出
肽，离心，干燥得粗肽。
[0235]
其中，优选的，步骤(5)中环状多肽粗品经纯化和/或转盐，冻干得环状多肽纯品包括以下步骤：
[0236]
粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤，经制备型高效液相色谱纯化，采用流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，进行梯度洗脱，检测波长214nm，通过冻干使产品干燥。通过该方法可以达到的最终纯度大于95％，例如，大于95％。
[0237]
其中，优选的，所述的方法包括以下步骤：
[0238]
(1)fmoc-aa-op-树脂的制备：将卤代树脂加入到多肽固相合成管中，加入dcm溶胀，溶胀结束，用dmf洗三次，dcm洗三次，将经保护的起始氨基酸fmoc-aa-op和碱用dcm溶解后加到多肽合成管中，室温反应2h，真空抽去反应液，将树脂用dmf洗三次，用dcm洗三次，得到fmoc-aa-op-树脂；
[0239]
(2)偶联合成法：步骤(1)反应得到的fmoc-aa-op-树脂，用20％哌啶/dmf处理，每次10min，共处理2次，脱去α-氨基fmoc保护基，用dmf洗三次，dcm洗三次，将氨基酸或侧链羧酸、diea和hctu用dmf溶解后加到多肽合成管中，室温反应120min，真空抽去反应液，用dmf洗三次，dcm洗三次；从起始氨基酸，即x位氨基酸，x为6或7，逐一偶联至1位氨基酸，然后将侧链羧酸偶联到保护的多肽-树脂上；用2％水合肼/dmf溶液脱去2位氨基酸侧链氨基的ivdde或dde保护基，用dmf洗三次，dcm洗三次，将8位氨基酸羧基偶联到2位氨基酸侧链氨基；从8位氨基酸逐一偶联至起始氨基酸的前一位氨基酸，即x+1位氨基酸，得到线性全保护的多肽-树脂；所述逐一偶联顺序包括两部分，第一部分是起始氨位基酸，即x位氨基酸，x为6或7，到1位氨基酸，再到侧链羧酸，第二部分是从8位氨基酸到x+1位氨基酸；
[0240]
(3)选择性脱除保护基、固相环合：将步骤(2)中线性全保护的多肽-树脂用20％哌啶/dmf处理，每次10min，共处理2次，脱去α-氨基fmoc保护基，用dmf洗三次，dcm洗三次，形成游离氨基；用四(三苯基膦)钯/苯硅烷在dcm和dmf的混合溶液中脱去羧基烯丙基保护基，形成游离羧基；将pyaop、hoat用dmf溶解后加入nmm，加到多肽合成管中，室温反应3h，真空抽去反应液，用dmf洗三次，dcm洗三次，得到环状全保护的多肽-树脂；
[0241]
(4)通过酸解得到的环状碱性多肽粗品：将tfa∶h2o体积比为95∶5的酸解液加到多肽合成管中，室温反应120min，酸解液加到冷乙醚中，tfa裂解液与冷乙醚的体积比为1∶20，析出肽，离心，干燥得粗肽；
[0242]
(5)粗品纯化、转盐、冻干：粗品溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份，将级份蒸去乙腈，得多肽水溶液，冷冻干燥得产品。
[0243]
其中，优选的，所述的卤代树脂选自由以下组成的组：三苯甲基氯树脂、4-甲基三苯甲基氯树脂、4-甲氧基三苯甲基氯树脂、2-氯三苯甲基氯树脂、溴-(4-甲基苯基)-甲基树脂或溴-(4-甲氧基苯基)-甲基树脂，例如，树脂为2-氯三苯甲基氯树脂。
[0244]
相较于现有合成方法，该方法应用范围广，绿色环保，多肽粗品纯度高，易于分离纯化，通过该方法可以达到的最终纯度大于95.0％，例如，大于95.0％。以所述树脂计算，大部分产物的产率大于30.0％。
[0245]
按照上述方法本发明制备了新型环状多肽化合物，本发明的环状多肽化合物易于根据所述的化学合成方法制备，操作简便，产率高。部分环状多肽化合物的结构如表1所示：
[0246]
[0247]
[0248]
[0249]
[0250]
[0251]
[0252]
[0253]
[0254]
[0255][0256]
本发明还提供所述的环状多肽化合物或其可药用盐在制备抗菌药物中的用途。优选的，所述的药物为抑制革兰阴性菌和革兰阳性菌的药物。
[0257]
医药相关的革兰阴性菌包括大肠埃希菌(escherichia coli)、肺炎克雷伯菌(klebsiella pneumoniae)、铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa)、鲍曼不动杆菌(acinetobacter baumanii)、沙门氏菌(salmonella)、摩拉克氏菌属(moraxella)、螺杆菌属(helicobacter)、军团杆菌属(legionella)、流感嗜血杆菌(haemophilus influenzae)、阴沟肠杆菌(enterobacter cloacae)、产气肠杆菌(enterobacter aerogenes)、粘质沙雷氏菌(serratia marcescens)、摩根氏菌(morganella morganii)、雷极普鲁菲登杆菌(providentia rettgeri)、普通变形杆菌(proteus vulgaris)、奇异变形杆菌(proteus mirabilis)、嗜麦芽假单孢菌(stenotrophomonas maltophilia)、弗劳地枸橼酸菌(citrobacter freundii)等。医药相关的革兰阳性菌包括表皮葡萄球菌(staphylococcus epidermidis)、金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)、粪肠球菌(enterococcus faecalis)、屎肠球菌(enterococcus faecium)等。
[0258]
革兰阴性菌例如大肠埃希菌(escherichia coli)、肺炎克雷伯菌(klebsiella pneumoniae)、铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa)和鲍曼不动杆菌(acinetobacter baumanii)。革兰阳性菌例如表皮葡萄球菌(staphylococcus epidermidis)和金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)。
[0259]
本发明还提供了该类环状多肽化合物的药物组合物，其包括治疗有效量的环状多肽化合物或其可药用盐作为活性成分，所述环状多肽化合物或其可药用盐在药物组合物中的含量以药物组合物的总重量计为0.1重量％-99.5重量％。可将化合物本身或其可药用盐与药用赋形剂、稀释剂等混合物以片剂、胶囊、颗粒剂、散剂或糖浆剂的形式口服给药，或以注射剂、喷雾剂、气雾剂、软膏剂、滴眼剂的形式非口服给药。
[0260]
上述制剂可通过常规制药方法制备。可用的药用赋形剂、稀释剂的例子包括赋形剂(例如糖类衍生物如乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和山梨糖醇；淀粉衍生物如玉米淀粉、土豆淀粉、糊精和羧甲基淀粉；纤维素衍生物如结晶纤维素、羟丙基纤维素、羟甲基纤维素、羟甲基纤维素钙、羟甲基纤维素钠；阿拉伯胶；右旋糖酐；硅酸盐衍生物如偏硅酸镁铝、磷酸盐衍生物如磷酸钙；碳酸盐衍生物如碳酸钙；硫酸盐衍生物如硫酸钙等)；粘合剂(例如明胶、聚乙烯吡咯烷酮和聚乙二醇)；崩解剂(例如纤维素衍生物如羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮)；润滑剂(例如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、鲸蜡、硼酸、苯甲酸钠、亮氨酸)、稳定剂(对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯等)；矫味剂(例如常用的甜味剂、酸味剂和香料等)；稀释剂和注射液溶剂(例如水、乙醇和甘油等)。
附图说明
[0261]
图1为以经保护的7位氨基酸fmoc-dab-op为起始氨基酸合成环状多肽化合物的路线图。其中：
[0262]
p代表：烯丙基(allyl)
[0263]
p1代表：叔丁氧羰基(boc)
[0264]
p2代表：1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己-1-亚基)-乙基(dde)
[0265]
p3代表：叔丁基(tbu)
[0266]
fmoc代表：9-芴甲氧羰基
具体实施方式
[0267]
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
[0268]
一种新的环状多肽化合物或其可药用盐的合成路线，该合成路线通过固相缩合、固相环合制备环状多肽化合物或其可药用盐，包括以下步骤：
[0269]
(1)经保护的碱性氨基酸fmoc-aa-op侧链游离氨基和卤代树脂反应得到fmoc-aa-op-树脂；其中p为羧基保护基，例如，烯丙基(allyl)、苄基(bn)：
[0270]
以经保护的7位氨基酸fmoc-dab-op为起始氨基酸合成环状多肽化合物的路线图如图1所示：经保护的7位氨基酸fmoc-dab-op为起始氨基酸，其结构如式iii所示：
[0271][0272]
卤代树脂选自由以下组成的组：三苯甲基氯树脂、4-甲基三苯甲基氯树脂、4-甲氧基三苯甲基氯树脂、2-氯三苯甲基氯树脂、溴-(4-甲基苯基)-甲基树脂或溴-(4-甲氧基苯基)-甲基树脂，例如，树脂为2-氯三苯甲基氯树脂。
[0273]
卤代树脂的取代度为0.1-1.6mmol/g，例如，取代度为0.5-1.0mmol/g。
[0274]
各个fmoc-保护的氨基酸用量为投料树脂总摩尔数的1.2-6倍，例如2.0-3.5倍。
[0275]
所述的碱选自由以下组成的组：n，n-二异丙基乙胺(diea)、三乙胺(tea)、吡啶中的至少一种，例如，为diea；碱的摩尔用量为fmoc-保护的氨基酸摩尔量的1.5-3倍，例如，为fmoc-保护的氨基酸摩尔量的2倍。
[0276]
取代反应时间为1-12h，例如，为2-3h。
[0277]
(2)fmoc-aa-op-树脂逐一偶联得到线性多肽-树脂：
[0278]
脱去α-氨基fmoc保护基的试剂包括但不仅限于哌啶(pip)在dmf中的溶液，浓度为10-30％pip在dmf中的溶液，例如，浓度为20％。使用的去保护试剂用量为每克投料树脂5-15ml，例如，为每克投料树脂10ml。去保护反应时间为10-60min，例如，为10-20min。脱去2位氨基酸侧链氨基ivdde或dde保护基的试剂包括但不仅限于水合肼在dmf中的溶液，浓度为1-10％水合肼在dmf中的溶液，例如，浓度为3％。使用的去保护试剂用量为每克投料树脂5-15ml，例如，为每克投料树脂10ml。去保护反应时间为30-100min，例如，为30-60min。
[0279]
偶联反应中偶联剂选自由以下组成的组：n，n-二异丙基碳二亚胺(dic)、n，n-二环己基碳二亚胺(dcc)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(edc)、苯并三氮唑-n，n，n
′
，n
′‑
四甲基脲六氟磷酸盐(hbtu)、6-氯苯并三氮唑-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(hctu)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n，n，n
′
，n
′‑
四甲基脲六氟磷酸盐(hatu)、o-苯并三氮唑-n，n，n
′
，n
′‑
四甲基脲四氟硼酸盐(tbtu)、苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(pybop)，例如，为n，n-二异丙基碳二亚胺(dic)。
[0280]
偶联剂的摩尔用量为投料树脂总摩尔数的1.2-6倍，例如2.0-3.5倍。
[0281]
活化剂选自由以下组成的组：1-羟基苯并三唑(hobt)、6-氯-1-羟基苯并三氮唑(cl-hobt)、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(hoat)，例如，为1-羟基苯并三唑(hobt)。
[0282]
活化剂的摩尔用量为投料树脂总摩尔数的1.2-6倍，例如2.0-3.5倍。
[0283]
偶联反应时间为60-300min，例如，为60-120min。
[0284]
偶联反应中部分偶联剂需加入催化剂，催化剂为有机碱，选自由以下组成的组：n，n-二异丙基乙胺(diea)、三乙胺(tea)、n-甲基吗啉(nmm)，例如，为n，n-二异丙基乙胺(diea)。
[0285]
溶剂为非质子性极性溶剂，选自由以下组成的组：二甲基甲酰胺(dmf)或n-甲基吡咯烷酮(nmp)或其混合物，例如，dmf。
[0286]
(3)经由线性多肽-树脂选择性脱除保护基、固相环合得到环状多肽-树脂：
[0287]
脱去羧基的烯丙基保护基的试剂为四(三苯基膦)钯/苯硅烷在dcm和dmf中的溶液(dcm∶dmf体积比为5∶5的混合溶液)。四(三苯基膦)钯摩尔用量为投料树脂总摩尔数的0.1-2倍，例如，0.1-0.3倍。苯硅烷摩尔用量为投料树脂总摩尔数的2-10倍，例如，3-5倍。使用的去保护试剂用量为每克投料树脂10-30ml，例如，为每克投料树脂20ml。去保护反应时间为60-300min，例如，为60-120min。
[0288]
固相环合偶联剂选自由以下组成的组：(3h-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶-3-氧基)三-1-吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(pyaop)、苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(pybop)，例如，(3h-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶-3-氧基)三-1-吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(pyaop)。
[0289]
偶联剂的摩尔用量为投料树脂总摩尔数的1.2-6倍，例如2.0-3.5倍。
[0290]
活化剂选自由以下组成的组：1-羟基苯并三唑(hobt)、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(hoat)，例如，为1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(hoat)。
[0291]
活化剂的摩尔用量为投料树脂总摩尔数的1.2-6倍，例如2.0-3.5倍。
[0292]
环合反应时间为1-20h，例如，为1-3h。
[0293]
催化剂为有机碱，选自由以下组成的组：n，n-二异丙基乙胺(diea)、三乙胺(tea)、n-甲基吗啉(nmm)，例如，为n-甲基吗啉(nmm)。
[0294]
溶剂为非质子性极性溶剂，选自由以下组成的组：二甲基甲酰胺(dmf)或n-甲基吡咯烷酮(nmp)或其混合物，例如，dmf。
[0295]
(4)环状多肽-树脂经酸解得环状多肽粗品：
[0296]
酸解选用含有氢氟酸(hf)或三氟乙酸(tfa)，例如，三氟乙酸的酸解液。
[0297]
酸解液用量为每克投料树脂5-30ml，例如，为每克投料树脂10ml。所述酸解液包含三氟乙酸以及侧链保护基脱除剂。
[0298]
三氟乙酸浓度为80％-95％，其余为侧链保护基脱除剂。
[0299]
侧链保护基脱除剂，选自由以下组成的组：茴香硫醚、三异丙基硅烷、苯酚、水、1，2-乙二硫醇，例如，水。
[0300]
酸解时间为60-300min，例如，为100-120min。
[0301]
将酸解后含多肽的酸解液加到冷乙醚中(酸解液与冷乙醚体积比例为1∶20)析出肽，离心，干燥得粗肽。
[0302]
(5)环状多肽粗品经纯化和/或转盐，冻干得环状多肽纯品。
[0303]
粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤，经制备型高效液相色谱纯化，采用流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，进行梯度洗脱，检测波长214nm，通过冻干使产品干燥。通过该方法可以达到的最终纯度大于95％，例如，大于95％。
[0304]
步骤(1)中，fmoc-aa-op-树脂的制备例如如下操作：将卤代树脂加入到多肽固相合成管中，加入dcm溶胀，溶胀结束，用dmf洗三次，dcm洗三次，将经保护的起始氨基酸fmoc-aa-op和diea用dcm溶解后加到多肽合成管中，室温反应2h，真空抽去反应液，将树脂用dmf洗三次，用dcm洗三次，得到fmoc-aa-op-树脂。
[0305]
步骤(2)中，偶联合成法包括：步骤(1)反应得到的fmoc-aa-op-树脂，用20％哌啶/dmf处理(2次，每次10min)脱去α-氨基fmoc保护基，用dmf洗三次，dcm洗三次，将氨基酸或侧链羧酸(r
0-cooh)、diea和hctu用dmf溶解后加到多肽合成管中，室温反应120min，真空抽去反应液，用dmf洗三次，dcm洗三次。从起始氨基酸(即x位氨基酸，x为6或7)逐一偶联至1位氨基酸，然后将侧链羧酸偶联到保护的多肽-树脂上。用2％水合肼/dmf溶液(30min)脱去2位氨基酸侧链氨基的ivdde或dde保护基，用dmf洗三次，dcm洗三次，将8位氨基酸羧基偶联到2位氨基酸侧链氨基；从8位氨基酸逐一偶联至起始氨基酸的前一位氨基酸(x+1位氨基酸)，得到线性全保护的多肽-树脂。所述逐一偶联顺序包括两部分，第一部分是起始氨位基酸(即x位氨基酸，x为6或7)到1位氨基酸，再到侧链羧酸，第二部分是从8位氨基酸到(x+1)位氨基酸。如果x为7，那么第一部分顺序是7位氨基酸到1位氨基酸，再到侧链羧酸，第二部分只是8位氨基酸；如果x为6，那么第一部分顺序是6位氨基酸到1位氨基酸，再到侧链羧酸，第二部分顺序是从8位氨基酸到7位氨基酸。
[0306]
步骤(3)中，选择性脱除保护基、固相环合的具体方法例如如下操作：将步骤(2)中线性全保护的多肽-树脂用20％哌啶/dmf处理(2次，每次10min)脱去α-氨基fmoc保护基，用dmf洗三次，dcm洗三次，形成游离氨基；用四(三苯基膦)钯/苯硅烷在dcm和dmf中的溶液(dcm∶dmf体积比为5∶5的混合溶液)脱去羧基烯丙基保护基(120min)，形成游离羧基。将pyaop、hoat用dmf溶解后加入nmm，加到多肽合成管中，室温反应3h，真空抽去反应液，用dmf洗三次，dcm洗三次，得到环状全保护的多肽-树脂。
[0307]
步骤(4)中，通过酸解得到的环状碱性多肽粗品的具体方法例如如下操作：将酸解液(tfa∶h2o体积比为95∶5)加到多肽合成管中，室温反应120min，酸解液加到冷乙醚中(tfa裂解液与冷乙醚比例为1∶20)析出肽，离心，干燥得粗肽。
[0308]
步骤(5)中，粗品纯化、转盐、冻干具体方法例如如下操作：粗品溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份，将级份蒸去乙腈，得多肽水溶液，冷冻干燥得产品。
[0309]
实施例1：制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-thr-dab-dab-thr](化合物hx-1)
[0310]
图1合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-thr(tbu)-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、(r)-3-羟基癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0311]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-thr-dab-dab-thr]。
[0312]
得粗肽472mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为164mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为33.2％。
[0313]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝986.63263([m+h]
+
)。
[0314]
实施例2：制备(s)-6-甲基辛酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu](化合物hx-2)
[0315]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、(s)-6-甲基辛酸、fmoc-leu-oh。
[0316]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备(s)-6-甲基辛酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu]。
[0317]
得粗肽438mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为152mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为31.0％。
[0318]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝980.69604([m+h]
+
)。
[0319]
实施例3：制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu](化合物hx-3)
[0320]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、(r)-3-羟基癸酸、fmoc-leu-oh。
[0321]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu]。
[0322]
得粗肽472mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为126mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为25.1％。
[0323]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝
1010.70630([m+h]
+
)。
[0324]
实施例4：制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe-leu-dab-dab-leu](化合物hx-4)
[0325]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-phe-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、(r)-3-羟基癸酸、fmoc-leu-oh。
[0326]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe-leu-dab-dab-leu]。
[0327]
得粗肽433mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为168mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为32.1％。
[0328]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1044.69006([m+h]
+
)。
[0329]
实施例5：制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-leu](化合物hx-5)
[0330]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-phe-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、(r)-3-羟基癸酸、fmoc-leu-oh。
[0331]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-leu]。
[0332]
得粗肽429mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为156mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为29.8％。
[0333]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1044.69092([m+h]
+
)。
[0334]
实施例6：制备(s)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu](化合物hx-6)
[0335]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、(s)-3-羟基癸酸、fmoc-leu-oh。
[0336]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备(s)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu]。
[0337]
得粗肽392mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱
纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为153mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为30.3％。
[0338]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1010.70575([m+h]
+
)。
[0339]
实施例7：制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe-leu-dab-dab-thr](化合物hx-7)
[0340]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-phe-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、(r)-3-羟基癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0341]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe-leu-dab-dab-thr]。
[0342]
得粗肽386mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为180mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为34.8％。
[0343]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1032.65479([m+h]
+
)。
[0344]
实施例8：制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr](化合物hx-8)
[0345]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、(r)-3-羟基癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0346]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]。
[0347]
得粗肽432mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为153mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为30.6％。
[0348]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝998.66882([m+h]
+
)。
[0349]
实施例9：制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-leu-d-phe-dab-dab-leu](化合物hx-9)
[0350]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-d-phe-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、(r)-3-羟基癸酸、fmoc-leu-oh。
[0351]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-leu-d-phe-dab-dab-leu]。
[0352]
得粗肽491mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为164mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为31.4％。
[0353]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1044.69006([m+h]
+
)。
[0354]
实施例10：制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe-thr-dab-dab-leu](化合物hx-10)
[0355]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-thr(tbu)-oh、fmoc-d-phe-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、(r)-3-羟基癸酸、fmoc-leu-oh。
[0356]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe-thr-dab-dab-leu]。
[0357]
得粗肽342mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为192mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为37.2％。
[0358]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1032.65320([m+h]
+
)。
[0359]
实施例11：制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-leu-d-phe-dab-dab-thr](化合物hx-11)
[0360]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-d-phe-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、(r)-3-羟基癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0361]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-leu-d-phe-dab-dab-thr]。
[0362]
得粗肽431mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份
并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为178mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为34.4％。
[0363]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1032.65442([m+h]
+
)。
[0364]
实施例12：制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-thr-dab-dab-leu](化合物hx-12)
[0365]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-thr(tbu)-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、(r)-3-羟基癸酸、fmoc-leu-oh。
[0366]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-thr-dab-dab-leu]。
[0367]
得粗肽368mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为146mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为29.2％。
[0368]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝998.67059([m+h]
+
)。
[0369]
实施例13：制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe-thr-dab-dab-thr](化合物hx-13)
[0370]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-thr(tbu)-oh、fmoc-d-phe-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、(r)-3-羟基癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0371]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe-thr-dab-dab-thr]。
[0372]
得粗肽521mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为156mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为30.6％。
[0373]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1020.61707([m+h]
+
)。
[0374]
实施例14：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu](化合物hx-14)
[0375]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-leu-oh。
[0376]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu]。
[0377]
得粗肽356mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为162mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为32.7％。
[0378]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝994.71088([m+h]
+
)。
[0379]
实施例15：制备正壬酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu](化合物hx-15)
[0380]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正壬酸、fmoc-leu-oh。
[0381]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正壬酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu]。
[0382]
得粗肽366mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为176mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为36.1％。
[0383]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝980.69611([m+h]
+
)。
[0384]
实施例16：制备丁二酸单(1-甲基丁基)酯-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr](化合物hx-16)
[0385]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、丁二酸单(1-甲基丁基)酯、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0386]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备丁二酸单(1-甲基丁基)酯-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]。
[0387]
得粗肽431mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为159mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为31.7％。
leu]。
[0402]
得粗肽513mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为195mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为34.0％。
[0403]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1144.75281([m+h]
+
)。
[0404]
实施例20：制备(r)-3-羟基癸酰基-d-ser-d-dab-环(3-9)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-leu](化合物hx-20)
[0405]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-phe-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、fmoc-d-ser(tbu)-oh、(r)-3-羟基癸酸、fmoc-leu-oh。
[0406]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备(r)-3-羟基癸酰基-d-ser-d-dab-环(3-9)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-leu]。
[0407]
得粗肽503mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为160mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为28.4％。
[0408]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1131.72131([m+h]
+
)。
[0409]
实施例21：制备正辛酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu](化合物hx-21)
[0410]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正辛酸、fmoc-leu-oh。
[0411]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正辛酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu]。
[0412]
得粗肽341mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为172mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为35.6％。
[0413]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝
966.67920([m+h]
+
)。
[0414]
实施例22：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-leu-leu-dab-dab-thr](化合物hx-22)
[0415]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0416]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-leu-leu-dab-dab-thr]。
[0417]
得粗肽361mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为159mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为32.4％。
[0418]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝982.67316([m+h]
+
)。
[0419]
实施例23：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-d-leu-dab-dab-thr](化合物hx-23)
[0420]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0421]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-d-leu-dab-dab-thr]。
[0422]
得粗肽392mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为204mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为41.4％。
[0423]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝982.67535([m+h]
+
)。
[0424]
实施例24：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-bip-dab-dab-thr](化合物hx-24)
[0425]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-bip-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0426]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-bip-dab-dab-thr]。
[0427]
得粗肽494mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱
纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a0.08％tfa/水溶液，流动相b0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为204mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为37.4％。
[0428]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1092.69324([m+h]
+
)。
[0429]
实施例25：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-bip-leu-dab-dab-thr](化合物hx-25)
[0430]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-bip-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0431]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-bip-leu-dab-dab-thr]。
[0432]
得粗肽467mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为186mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为34.2％。
[0433]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1092.69043([m+h]
+
)。
[0434]
实施例26：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-chg-leu-dab-dab-thr](化合物hx-26)
[0435]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-chg-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0436]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-chg-leu-dab-dab-thr]。
[0437]
得粗肽381mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a0.08％tfa/水溶液，流动相b0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为172mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为33.5％。
[0438]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1008.69141([m+h]
+
)。
[0439]
实施例27：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-octyl-gly-dab-dab-thr](化合物hx-27)
[0440]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-octyl-gly-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0441]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-octyl-gly-dab-dab-thr]。
[0442]
得粗肽493mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为165mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为31.8％。
[0443]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1038.74121([m+h]
+
)。
[0444]
实施例28：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-asp-dab-dab-thr](化合物hx-28)
[0445]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-asp(tbu)-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0446]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-asp-dab-dab-thr]。
[0447]
得粗肽417mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为167mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为34.1％。
[0448]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝984.61798([m+h]
+
)。
[0449]
实施例29：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-asp](化合物hx-29)
[0450]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-asp(tbu)-oh。
[0451]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-asp]。
[0452]
得粗肽476mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份
并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为186mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为37.4％。
[0453]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝996.65570([m+h]
+
)。
[0454]
实施例30：制备苯己酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr](化合物hx-30)
[0455]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、苯己酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0456]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备苯己酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]。
[0457]
得粗肽384mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为148mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为29.6％。
[0458]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1002.64447([m+h]
+
)。
[0459]
实施例31：制备7，7-二甲基辛酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr](化合物hx-31)
[0460]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、新癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0461]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备7，7-二甲基辛酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]。
[0462]
得粗肽466mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为182mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为37.1％。
[0463]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝982.67615([m+h]
+
)。
[0464]
实施例32：制备正癸酰基-d-dap-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr](化合物hx-32)
[0465]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dap(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0466]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dap-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]。
[0467]
得粗肽439mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为157mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为32.4％。
[0468]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝968.65967([m+h]
+
)。
[0469]
实施例33：制备正癸酰基-d-orn-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr](化合物hx-33)
[0470]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-orn(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0471]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-orn-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]。
[0472]
得粗肽407mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为182mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为36.4％。
[0473]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝996.69183([m+h]
+
)。
[0474]
实施例34：制备正癸酰基-d-thr-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr](化合物hx-34)
[0475]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-thr(tbu)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0476]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-thr-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]。
[0477]
得粗肽402mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a0.08％tfa/水溶液，流动相b0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为198mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为40.2％。
[0478]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝
983.65930([m+h]
+
)。
[0479]
实施例35：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-lys-d-leu-leu-dab-dab-thr](化合物hx-35)
[0480]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-lys(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0481]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-lys-d-leu-leu-dab-dab-thr]。
[0482]
得粗肽465mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为202mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为40.0％。
[0483]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1010.70697([m+h]
+
)。
[0484]
实施例36：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-orn-d-leu-leu-dab-dab-thr](化合物hx-36)
[0485]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-orn(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0486]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-orn-d-leu-leu-dab-dab-thr]。
[0487]
得粗肽383mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为162mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为32.4％。
[0488]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝996.69232([m+h]
+
)。
[0489]
实施例37：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dap-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr](化合物hx-37)
[0490]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dap(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0491]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dap-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]。
[0492]
得粗肽371mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱
纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214n，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为166mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为33.4％。
[0493]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝968.65985([m+h]
+
)。
[0494]
实施例38：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[orn-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr](化合物hx-38)
[0495]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-orn(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0496]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[orn-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]。
[0497]
得粗肽447mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为138mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为27.6％。
[0498]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝996.69263([m+h]
+
)。
[0499]
实施例39：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe(4-tbu)-leu-dab-dab-thr](化合物hx-39)
[0500]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-phe(4-tbu)-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0501]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe(4-tbu)-leu-dab-dab-thr]。
[0502]
得粗肽489mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a0.08％tfa/水溶液，流动相b0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214n，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为157mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为29.6％。
[0503]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1072.72351([m+h]
+
)。
[0504]
实施例40：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe(4-cl)-leu-dab-dab-thr](化合物hx-40)
[0505]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-phe(4-cl)-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0506]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe(4-cl)-leu-dab-dab-thr]。
[0507]
得粗肽490mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为213mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为40.2％。
[0508]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1050.62020([m+h]
+
)。
[0509]
实施例41：制备正辛酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-leu](化合物hx-41)
[0510]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-phe-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正辛酸、fmoc-leu-oh。
[0511]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正辛酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-leu]。
[0512]
得粗肽407mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为180mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为36.1％。
[0513]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1000.66265([m+h]
+
)。
[0514]
实施例42：制备正壬酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-leu](化合物hx-42)
[0515]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-phe-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(bαc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正壬酸、fmoc-leu-oh。
[0516]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正壬酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-leu]。
[0517]
得粗肽381mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份
并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为169mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为33.3％。
[0518]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1014.68030([m+h]
+
)。
[0519]
实施例43：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-leu](化合物hx-43)
[0520]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-phe-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-leu-oh。
[0521]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-leu]。
[0522]
得粗肽389mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为149mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为29.1％。
[0523]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1028.69629([m+h]
+
)。
[0524]
实施例44：制备正癸酰基-d-asn-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-leu](化合物hx-44)
[0525]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-phe-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(b0c)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-asn(boe)-oh、正癸酸、fmoc-leu-oh。
[0526]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-asn-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-leu]。
[0527]
得粗肽342mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a0.08％tfa/水溶液，流动相b0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为191mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为36.5％。
[0528]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1042.67573([m+h]
+
)。
[0529]
实施例45：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe-bip-dab-dab-thr](化合物hx-45)
[0530]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-bip-oh、fmoc-d-phe-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0531]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe-bip-dab-dab-thr]。
[0532]
得粗肽509mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为226mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为40.3％。
[0533]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1126.67373([m+h]
+
)。
[0534]
实施例46：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-trp-dab-dab-leu](化合物hx-46)
[0535]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-trp(boc)-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-leu-oh。
[0536]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-trp-dab-dab-leu]。
[0537]
得粗肽423mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为147mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为27.5％。
[0538]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1067.70598([m+h]
+
)。
[0539]
实施例47：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe-bip-dab-dab-leu](化合物hx-47)
[0540]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-bip-oh、fmoc-d-phe-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-leu-oh。
[0541]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe-bip-dab-dab-leu]。
[0542]
得粗肽466mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为183mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为32.1％。
[0543]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝
1138.70894([m+h]
+
)。
[0544]
实施例48：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe-phe-dab-dab-leu](化合物hx-48)
[0545]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-phe-oh、fmoc-d-phe-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-leu-oh。
[0546]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe-phe-dab-dab-leu]。
[0547]
得粗肽399mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为146mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为27.3％。
[0548]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1062.67710([m+h]
+
)。
[0549]
实施例49：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-ser](化合物hx-49)
[0550]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-phe-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-ser(tbu)-oh。
[0551]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-ser]。
[0552]
得粗肽369mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为141mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为28.1％。
[0553]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1002.64622([m+h]
+
)。
[0554]
实施例50：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-phe](化合物hx-50)
[0555]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-phe-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(bαc)-oh、fmoc-dab(dde）-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-phe-oh。
[0556]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe-dab-dab-leu]。
[0557]
得粗肽394mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱
纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为179mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为33.8％。
[0558]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1062.67961([m+h]
+
)。
[0559]
实施例51：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe(4-me)-dab-dab-leu](化合物hx-51)
[0560]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-phe(4-me)-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-leu-oh。
[0561]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe(4-me)-dab-dab-leu]。
[0562]
得粗肽406mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为178mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为34.2％。
[0563]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1042.70524([m+h]
+
)。
[0564]
实施例52：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe(4-ome)-dab-dab-leu](化合物hx-52)
[0565]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-phe(4-ome)-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-leu-oh。
[0566]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-phe(4-ome)-dab-dab-leu]。
[0567]
得粗肽427mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为148mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为28.1％。
[0568]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1058.70971([m+h]
+
)。
[0569]
实施例53：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe(3-cl)-leu-dab-dab-thr](化合物hx-53)
[0570]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-phe(3-cl)-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0571]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe(3-cl)-leu-dab-dab-thr]。
[0572]
得粗肽458mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为193mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为36.2％。
[0573]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1050.62169([m+h]
+
)。
[0574]
实施例54：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe(4-nh2)-leu-dab-dab-thr](化合物hx-54)
[0575]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-phe(4-nh2)-oh、fmoc-dab(bαc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0576]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe(4-nh2)-leu-dab-dab-thr]。
[0577]
得粗肽411mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a0.08％tfa/水溶液，流动相b0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为198mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为38.4％。
[0578]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1031.66847([m+h]
+
)。
[0579]
实施例55：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe(2-cl)-leu-dab-dab-thr](化合物hx-55)
[0580]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-phe(2-cl)-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde）-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0581]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe(2-cl)-leu-dab-dab-thr]。
[0582]
得粗肽339mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份
并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为195mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为37.2％。
[0583]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1050.62089([m+h]
+
)。
[0584]
实施例56：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe(3，4-dicl)-leu-dab-dab-thr](化合物hx-56)
[0585]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-phe(3，4-dicl)-oh、fmoc-dab(bαc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0586]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe(3，4-dicl)-leu-dab-dab-thr]。
[0587]
得粗肽384mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为147mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为27.1％。
[0588]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1084.58171([m+h]
+
)。
[0589]
实施例57：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe(4-me)-leu-dab-dab-thr](化合物hx-57)
[0590]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-phe(4-me)-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0591]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-phe(4-me)-leu-dab-dab-thr]。
[0592]
得粗肽373mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为172mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为33.5％。
[0593]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1030.67965([m+h]
+
)。
[0594]
实施例58：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-ala](化合物hx-58)
[0595]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-ala-oh。
[0596]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-ala]。
[0597]
得粗肽173mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为204mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为36.4％。
[0598]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝952.66986([m+h]
+
)。
[0599]
实施例59：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-gly](化合物hx-59)
[0600]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-gly-oh。
[0601]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-gly]。
[0602]
得粗肽387mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为159mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为33.9％。
[0603]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝938.65367([m+h]
+
)。
[0604]
实施例60：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-val](化合物hx-60)
[0605]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-val-oh。
[0606]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-val]。
[0607]
得粗肽407mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为167mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为34.1％。
[0608]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝
980.69541([m+h]
+
)。
[0609]
实施例61：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-nva](化合物hx-61)
[0610]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-nva-oh。
[0611]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-nva]。
[0612]
得粗肽384mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为189mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为38.6％。
[0613]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝980.69863([m+h]
+
)。
[0614]
实施例62：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-ile](化合物hx-62)
[0615]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-ile-oh。
[0616]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-ile]。
[0617]
得粗肽438mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为216mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为43.5％。
[0618]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝994.71671([m+h]
+
)。
[0619]
实施例63：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-val-leu-dab-dab-thr](化合物hx-63)
[0620]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-val-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0621]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-val-leu-dab-dab-thr]。
[0622]
得粗肽368mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱
纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为179mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为37.0％。
[0623]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝968.66435([m+h]
+
)。
[0624]
实施例64：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-nva-leu-dab-dab-thr](化合物hx-64)
[0625]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-nva-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0626]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-nva-leu-dab-dab-thr]。
[0627]
得粗肽388mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为173mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为35.8％。
[0628]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝968.66314([m+h]
+
)。
[0629]
实施例65：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-ile-leu-dab-dab-thr](化合物hx-65)
[0630]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-ile-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0631]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-d-leu-dab-dab-thr]。
[0632]
得粗肽357mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为170mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为34.7％。
[0633]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝982.67916([m+h]
+
)。
[0634]
实施例66：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-val-dab-dab-thr](化合物hx-66)
[0635]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-val-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0636]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-val-dab-dab-thr]。
[0637]
得粗肽374mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为159mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为32.9％。
[0638]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝968.66427([m+h]
+
)。
[0639]
实施例67：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-nva-dab-dab-thr](化合物hx-67)
[0640]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-nva-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0641]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-nva-dab-dab-thr]。
[0642]
得粗肽383mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为188mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为38.9％。
[0643]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝968.66363([m+h]
+
)。
[0644]
实施例68：制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-ile-dab-dab-thr](化合物hx-68)
[0645]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-ile-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、正癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0646]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备正癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-ile-dab-dab-thr]。
[0647]
得粗肽367mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份
并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为158mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为32.2％。
[0648]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝982.67549([m+h]
+
)。
[0649]
实施例69：制备(r)-3-羟基-6-甲基庚酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr](化合物hx-69)
[0650]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、(r)-3-羟基-6-甲基庚酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0651]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备(r)-3-羟基-6-甲基庚酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]。
[0652]
得粗肽391mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为188mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为38.8％。
[0653]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝970.64352([m+h]
+
)。
[0654]
实施例70：制备(r)-2-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr](化合物hx-70)
[0655]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、(r)-2-羟基癸酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0656]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备(r)-2-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]。
[0657]
得粗肽416mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为213mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为42.7％。
[0658]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝998.67586([m+h]
+
)。
[0659]
实施例71：制备9-羟基壬酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr](化合物hx-71)
[0660]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、
fmoc-d-dab(boc)-oh、9-羟基壬酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0661]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备9-羟基壬酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]。
[0662]
得粗肽377mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为199mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为40.5％。
[0663]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝984.65981([m+h]
+
)。
[0664]
实施例72：制备(3r，6s)-3-羟基-6-甲基辛酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr](化合物hx-72)
[0665]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、(3r，6s)-3-羟基-6-甲基辛酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0666]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备(3r，6s)-3-羟基-6-甲基辛酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]。
[0667]
得粗肽369mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为168mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为34.2％。
[0668]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝984.65752([m+h]
+
)。
[0669]
实施例73：制备4-戊氧基丁酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr](化合物hx-73)
[0670]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、4-戊氧基丁酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0671]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备4-戊氧基丁酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]。
[0672]
得粗肽377mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为159mg，以所述0.5mmol的
2-cl-trt树脂计算，产率为32.3％。
[0673]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝984.66013([m+h]
+
)。
[0674]
实施例74：制备3-(四氢呋喃-2-基)丙酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr](化合物hx-74)
[0675]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、3-(四氢呋喃-2-基)丙酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0676]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备3-(四氢呋喃-2-基)丙酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]。
[0677]
得粗肽374mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a0.08％tfa/水溶液，流动相b0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为154mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为32.3％。
[0678]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝954.61148([m+h]
+
)。
[0679]
实施例75：制备6-甲氧基己酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr](化合物hx-75)
[0680]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、6-甲氧基己酸、fmoc-thr(tbu)-oh。
[0681]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备6-甲氧基己酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-thr]。
[0682]
得粗肽369mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为158mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为33.0％。
[0683]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝956.62883([m+h]
+
)。
[0684]
实施例76：制备(r)-3-羟基癸酰基-d-n-methyl-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu](化合物hx-76)
[0685]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-n-methyl-dab-oh、(r)-3-羟基癸酸、fmoc-leu-oh。
[0686]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备(r)-3-羟基癸酰基-d-n-methyl-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu]。
[0687]
得粗肽496mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为147mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为28.7％。
[0688]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1024.72688([m+h]
+
)。
[0689]
实施例77：制备(r)-3-羟基癸酰基-d-arg-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu](化合物hx-77)
[0690]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-arg(boc)
2-oh、(r)-3-羟基癸酸、fmoc-leu-oh。
[0691]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备(r)-3-羟基癸酰基-d-arg-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu]。
[0692]
得粗肽506mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为174mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为32.6％。
[0693]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1066.74679([m+h]
+
)。
[0694]
实施例78：制备(r)-3-羟基癸酰基-d-3-胍基丙氨酸-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu](化合物hx-78)
[0695]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-alg(boc)
2-oh、(r)-3-羟基癸酸、fmoc-leu-oh。
[0696]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备(r)-3-羟基癸酰基-d-3-胍基丙氨酸-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu]。
[0697]
得粗肽493mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为166mg，以所述0.5mmol的
2-cl-trt树脂计算，产率为32.0％。
[0698]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1038.71983([m+h]
+
)。
[0699]
实施例79：制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-n-methyl-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu](化合物hx-79)
[0700]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-n-methyl-dab-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、(r)-3-羟基癸酸、fmoc-leu-oh。
[0701]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-n-methyl-dab-d-leu-leu-dab-dab-leu]。
[0702]
得粗肽481mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a 0.08％tfa/水溶液，流动相b 0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为157mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为30.7％。
[0703]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1024.72842([m+h]
+
)。
[0704]
实施例80：制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-n-methyl-dab-dab-leu](化合物hx-80)
[0705]
合成路线中经保护的氨基酸和侧链羧酸加入反应的顺序为：fmoc-dab-oallyl、fmoc-n-methyl-dab-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-leu-oh、fmoc-dab(boc)-oh、fmoc-dab(dde)-oh、fmoc-d-dab(boc)-oh、(r)-3-羟基癸酸、fmoc-leu-oh。
[0706]
取2-cl-trt树脂(0.5mmol，取代度＝0.5mmol/g)加入到多肽固相合成管中，按照合成路线制备(r)-3-羟基癸酰基-d-dab-环(2-8)[dab-dab-d-leu-leu-n-methyl-dab-dab-leu]。
[0707]
得粗肽500mg，粗肽溶于水，以孔径0.22μm滤膜过滤备用，经制备型高效液相色谱纯化，色谱填料为10μm的反相c18，流动相a0.08％tfa/水溶液，流动相b0.08％tfa/乙腈溶液，22mm
×
250mm的色谱柱，流动相流速为8ml/min，检测波长214nm，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集对应于色谱主峰的级份并将其蒸去乙腈，得多肽化合物水溶液，冷冻干燥得产品。产量为141mg，以所述0.5mmol的2-cl-trt树脂计算，产率为27.6％。
[0708]
纯化后的肽的表征：纯度(通过hplc图谱的面积积分)＞95.0％；esi：m/z＝1024.72395([m+h]
+
)。
[0709]
实验例1：抗菌活性实验
[0710]
参照clsi推荐方法，采用微量肉汤稀释法进行最小抑菌浓度(mic)测定。
[0711]
1)样品的配制
[0712]
称取适量实施例1-80制备得到的环状多肽化合物和对照品，根据样品的溶解性，
用无菌纯水溶解样品，使母液的浓度为2.56mg/ml。取适量母液用无菌mh肉汤进行十倍稀释至0.256mg/ml，一半体积的药液分装至96孔加样槽内，另一半体积的药液用无菌mh肉汤进行二倍稀释后加入深孔加样槽内。重复以上步骤，使加样槽内的药物浓度依次为128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.06mg/l，现配现用。
[0713]
2)接种物的制备
[0714]
从18-24h培养的琼脂平皿中挑选几个菌落直接在无菌生理盐水中制成菌悬液，调整菌悬液的浓度为0.5麦氏单位。将校正后的菌液用mh肉汤稀释至(4～8)
×
105cfu/ml，现配现用。
[0715]
3)加样及接种
[0716]
分别吸取100μl上述不同浓度的本发明化合物(例如实施例制备的化合物)和对照品溶液到无菌的96孔聚苯乙烯板中的第1至第12孔内，另取上述接种物100μl加入各孔。孔内样品终浓度分别为64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.06、0.03mg/l(多粘菌素b的终浓度范围为512～0.25mg/l)，最终接种物浓度均为(2～4)
×
105cfu/ml。另设生长对照孔，孔内含100μl接种物与100μl无菌mh肉汤。各孔内受试物与接种物混匀后密封。
[0717]
4)孵育
[0718]
将加样接种后的96孔板置于35-37℃培养箱内培养16-20h。
[0719]
5)mic终点判读
[0720]
培养结束后，观察各孔内细菌的生长情况，以在小孔内完全抑制细菌生长的最低药物浓度为其最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration，mic)。
[0721]
用于抗菌活性实验的菌株来自美国菌种保藏中心(atcc)和临床分离菌株。
[0722]
用于抗菌活性实验的菌株包括金黄色葡萄球菌atcc33591、atcc29213，表皮葡萄球菌mrse19-5、mrse19-6，屎肠球菌efm19-2、vre efm19-13，粪肠球菌atcc29212，大肠埃希菌atcc baa-2340(kpc)、atcc baa-2523、eco-19-2，肺炎克雷伯菌atcc baa-1705(kpc)、kpn+19-15、kpn+19-17，铜绿假单胞菌atcc27853、pae19-1、pae19-3、pae17-1，鲍曼不动杆菌nctc 13304(oxa-27)、aba19-1、aba19-8和多粘菌素耐药的铜绿假单胞菌。
[0723]
受试品：依据本发明技术方案制备的环状多肽化合物；
[0724]
对照品：多粘菌素b、美罗培南。
[0725]
结果：
[0726]
本发明环状多肽化合物的革兰阳性菌和阴性菌活性如表2所示。
[0727]
表2 本发明化合物的革兰阳性菌和阴性菌活性(mic，单位μg/ml)
[0728]
[0729]
[0730][0731][0732]
nd表示未测。金黄色葡萄球菌，2株；表皮葡萄球菌，2株；屎肠球菌，2株；粪肠球菌，1株；大肠埃希菌，3株；肺炎克雷伯菌，3株；铜绿假单胞菌，4株；鲍曼不动杆菌，3株；多粘菌
素耐药铜绿假单胞菌，1株。
[0733]
实验例2：肾毒性实验
[0734]
采用cck-8法进行体外hk-2细胞毒性检测。
[0735]
1)细胞培养
[0736]
人肾hk-2细胞的培养液为含10％fbs(gibco)的rpmi-1640完全培养基(invitrogen)，冻存液为90％fbs+10％dmso，长期保存于液氮中；在37℃含5％co2的湿润环境无菌培养箱中培养，待细胞密度生长至70％-80％，进行消化传代。
[0737]
2)环状多肽化合物稀释
[0738]
称取实施例1-80制备得到的环状多肽化合物，用无菌水溶解至1mg/ml的母液，配制含药培养基，终浓度依次是500，250，200，100，50，25，12.5μg/ml。
[0739]
3)检测方法
[0740]
计5
×
104个/ml细胞，铺于96孔板中，每孔100μl细胞悬液，稳定培养24h后更换含药培养基，置于培养箱中培养72h。轻轻吸掉培养基，加100μl含10％的cck-8空白培养基，置于培养箱中孵育3h后，利用biotek读板酶标仪测定od 450nm值，实验进行三次重复，每次设定多粘菌素b做阳性药和未含药空白处理组做对照。计算细胞存活率(％)＝(od
给药组-od
调零
)/(od
未含药-od
调零
)*100％，利用log回归计算ic
50
值。
[0741]
用于肾细胞毒性实验的细胞来自美国atcc(american type culture collection)。
[0742]
用于肾细胞毒性实验的cell counting kit-8(cck-8)试剂盒来自beyotime biotechnology公司。
[0743]
受试品：依据本发明技术方案制备的多肽化合物；
[0744]
对照品：多粘菌素b。
[0745]
结果：
[0746]
部分本发明环状多肽化合物的肾细胞毒性结果如表3所示。
[0747]
表3 部分本发明环状多肽化合物的肾细胞毒性(ic
50
，单位μg/ml)
[0748]
[0749][0750]
综上所述，本发明所制备的部分新型环状多肽具有低肾毒性、高且广的抗菌活性、耐药菌活性，完全有可能成为一类新的临床用抗生素。