西瓜病毒A的外壳蛋白CP的基因及其蛋白、抗体和应用

文档序号:30644437发布日期:2022-07-05 22:45阅读:来源:国知局

技术特征:
1.一种编码西瓜病毒a的外壳蛋白cp的核苷酸序列,其特征在于,所述核苷酸序列为序列表中seq id no.20所示的核苷酸序列。2.一种西瓜病毒a的外壳蛋白cp,其特征在于,所述外壳蛋白cp由权利要求1所述的核苷酸序列编码得到。3.根据权利要求2所述的西瓜病毒a的外壳蛋白cp,其特征在于:所述西瓜病毒a的外壳蛋白cp的氨基酸序列如序列表中seq id no.19所示。4.含有权利要求1所述核苷酸序列的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。5.一种wva cp蛋白抗体,用于检测西瓜病毒a,其特征在于,该wva cp蛋白抗体以西瓜病毒a的外壳蛋白cp核苷酸序列的编码蛋白为抗原制备得到,所述核苷酸序列为序列表中seq id no.20所示;所述编码蛋白的氨基酸序列如序列表中seq id no.19所示。6.根据权利要求5所述的wva cp蛋白抗体,其特征在于,所述wva cp蛋白抗体的制备方法,包括如下步骤:将seq id no.20所示核苷酸构建到原核表达载体上,转化至大肠杆菌,收集表达蛋白;以表达蛋白为免疫原对模式动物进行注射免疫和三次加强免疫,最后收集血清得到抗体。7.根据权利要求6所述的wva cp蛋白抗体,其特征在于,利用seq id no.21和seq id no.22的引物对扩增seq id no.20所示核苷酸。8.权利要求5~7任一项所述的wva cp蛋白抗体在制备检测西瓜病毒a的试剂或试剂盒中的应用。9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述试剂或试剂盒为elisa或/和western blot检测试剂或试剂盒。10.采用权利要求5~7任一项所述的wva cp蛋白抗体检测西瓜病毒a的方法,其特征在于,包括如下步骤:样品制备,sds
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page 电泳,转膜至硝酸纤维素膜上,封闭,一抗反应,二抗反应,显色,检测;一抗为wva cp蛋白抗体,所述二抗为羊抗兔hrp 。

技术总结
本发明涉及植物基因工程与病毒诊断技术领域,具体涉及一种编码西瓜病毒A的外壳蛋白CP的核苷酸序列,具体如序列表中SEQ ID NO.20所示的核苷酸序列。并将该核苷酸序列克隆到原核表达载体上,转化大肠杆菌,经过蛋白表达纯化可得到WVA外壳蛋白CP;再以该蛋白为免疫原对模式动物进行免疫,得到效价高的抗体。本发明提供的抗体在西瓜病毒A检测中,可快速准确的检测西瓜、葫芦等感病样品中的病毒,从而建立快速、高效和高灵敏度的瓜类作物中西瓜病毒A检测鉴定体系,对于植物病毒病的早期监测、诊断和综合防治具有重要应用价值,也为后续西瓜病毒A致病机制研究奠定基础。病毒A致病机制研究奠定基础。病毒A致病机制研究奠定基础。


技术研发人员:李正刚 何自福 佘小漫 汤亚飞 蓝国兵 于琳
受保护的技术使用者:广东省农业科学院植物保护研究所
技术研发日:2022.06.06
技术公布日:2022/7/4
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