链霉菌属次级代谢物及其制备方法和医药用途

本发明属于医药，涉及链霉菌属次级代谢物(多环芳香聚酮类化合物)及其制备方法和应用，具体涉及多环芳香聚酮类化合物在制备抗肿瘤、抗菌药物中的应用。

背景技术：

1、恶性肿瘤是一种严重威胁人类健康的疾病，并且呈现出越来越年轻化的态势，极大地危害人类的健康，我国作为一个发展中的大国，由于工业化、城镇化和人口老龄化进程的加快，不良的生活方式以及环境污染等问题的存在，恶性肿瘤面临的形势也愈发严峻。因此寻找更加安全、有效的抗肿瘤药物刻不容缓。除了恶性肿瘤以外，我们也面临着更多的细菌及耐药菌的巨大挑战，继续开发新的抗病原微生物的药物和研究行之有效的给药方案仍是一项艰巨的任务。同时，随着化学合成药物日渐显露出毒副作用带来的弊端，以植物药来源为主的天然药物生长周期长,稀有药用植物资源匮乏，越来越体现出来源于微生物次级代谢产物的优越性。微生物资源是大自然赋予人类的一座宝库，采用微生物菌株的次级代谢产物提取生物活性物质越来越受到相关领域技术人员的重视。

2、链霉菌(streptomyces rosealbus)可从多种土壤中获得，对于该菌株的形态特征、生理生化特征及系统发育分析早已有文献报道，早在2005年，就报道了从云南省永胜县次生林的土壤样本中首次发现该菌种，并首次完成该菌种的鉴定(l.h.xu et.al,antonievan leeuwenhoek,2005,87(3),189-194)。但到目前为止，并没有相关的对链霉菌(streptomyces rosealbus)的次级代谢产物的研究报道

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一系列链霉菌属次级代谢物(多环芳香聚酮类化合物)。

2、本发明的第二个目的在于提供所述的多环芳香聚酮类化合物的提取分离纯化方法。

3、本发明的第三个目的在于提供含于所述的多环芳香聚酮类化合物的药物组合物。

4、本发明的第四个目的在于提供所述的多环芳香聚酮类化合物或药物组合物在制备抗肿瘤及抗菌药物中的应用。

5、为实现上述目的，本发明是通过如下技术方案实现的：

6、一种链霉菌属次级代谢物：链霉菌属次级代谢物为多环芳香聚酮类化合物，具体为通式i、ii、iii、iv、v、vi或ⅶ所示，

7、

8、上述式中，

9、通式i、ii、iii、iv、v、vi或ⅶ中r1、r2可相同或不同的选自h、c1-c4羰基、羟基、c1-c6烷基、卤素或氰基；

10、或上述各通式所示多环芳香聚酮类化合物药学上可接受的盐、溶剂化物或异构体。

11、优选，所述通式i、ii、iii、iv、v、vi或ⅶ中

12、r1、r2可相同或不同的选自c1-c4羰基、羟基或c1-c4烷基；

13、或上述各通式所示多环芳香聚酮类化合物药学上可接受的盐、溶剂化物或异构体。

14、更优选化合物为：

15、

16、一种链霉菌属次级代谢物的制备方法，通过链霉属放线菌streptomycesrosealbus发酵、纯化获得通式i或ii或iii或iv或v或vi或ⅶ所示的多环芳香聚酮类化合物。

17、具体为：

18、(1)菌种的发酵生产：将活化后菌株streptomyces rosealbus接种于一级种子培养基中，28-30℃，振荡培养24-36h，收集菌液作为一级种液，将一级种液接种至接种至二级种子培养基中，28-32℃，振荡培养24-36h，获得二级种液，将二级种液接种于发酵培养基中进行发酵，发酵温度为28-30℃、通气条件0.2-0.4vvm，发酵周期为7-10天，获得发酵液；

19、(2)浸膏的制备：取步骤(1)的发酵液，8000-10000rpm离心10-15min去除菌体，上清液用乙酸乙酯浸泡、超声、再减压蒸馏得到浸膏；

20、(3)化合物的分离纯化：发酵得到浸膏，用二氯甲烷/甲醇混合溶液(二氯甲烷/甲醇(v/v)为1:100-50:50)进行硅胶柱色谱即依次分别获得通式i或ii或iii或iv或v或vi或ⅶ所示链霉菌属次级代谢物。

21、所述将发酵后浸膏溶解后用二氯甲烷/甲醇混合液进行硅胶柱色谱纯化，收集二氯甲烷/甲醇(v/v)为90:10-85:15的粗馏分(馏分b)，再以纯甲醇为流动相(流速0.1ml/min)进行sephadex lh-20柱层析分离，将得到的馏分，利用制备液相(uv 220nm)以乙腈-水混合液(乙腈-水(v/v)为80:20-60:40)为流动相(流速3ml/min)进行分离纯化得到通式i和ii所示化合物；

22、或，将发酵后浸膏溶解后用二氯甲烷/甲醇混合液进行硅胶柱色谱纯化，收集二氯甲烷/甲醇(v/v)为85:15-80:20的粗馏分(馏分c)，再以纯甲醇为流动相(流速0.1ml/min)进行sephadex lh-20柱层析分离，将得到的馏分，利用制备液相(uv 220nm)以乙腈-水混合液(乙腈-水(v/v)为80:20-60:40)为流动相(流速3ml/min)进行分离纯化得到通式iii所示化合物；

23、或，将发酵后浸膏溶解后用二氯甲烷/甲醇混合液进行硅胶柱色谱纯化，收集二氯甲烷/甲醇(v/v)为80:20-60:40的粗馏分(馏分d)，再以纯甲醇为流动相(流速0.1ml/min)进行sephadex lh-20柱层析分离，将得到的馏分，利用制备液相(uv 220nm)以乙腈-水混合液(乙腈-水(v/v)为60:40-20:80)为流动相(流速3ml/min)进行分离纯化，得到通式iv、v和vi所示化合物；

24、或，将发酵后浸膏溶解后用二氯甲烷/甲醇混合液进行硅胶柱色谱纯化，收集二氯甲烷/甲醇(v/v)为60:40-50:50的粗馏分(馏分e)，再以纯甲醇为流动相(流速0.1ml/min)进行sephadex lh-20柱层析分离，将得到的馏分，利用制备液相(uv 220nm)以乙腈-水混合液(乙腈-水(v/v)为40:60-20:80)为流动相(流速3ml/min)进行分离纯化，得到通式ⅶ所示化合物。

25、所述一级种子培养基和二级种子培养基(1000ml)为：每1000水中加入酵母粉4.0g，葡萄糖4.0g，麦芽粉2.0g，微量盐1.0ml，ph调至7.2，121℃灭菌30min；

26、发酵培养基(1000ml)为：每1000水中加入甘油20.0ml，麦芽粉4.0g，酵母膏8.0g，微量盐溶液1.0ml，ph调至7.2，121℃灭菌30min；

27、所述微量盐配方为feso4·7h2o 0.1g，mncl2·4h2o 0.1g，znso4·7h2o0.1g，水100ml。

28、一种多环芳香聚酮类化合物的应用，所述各通式所示化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物或异构体在制备抗肿瘤或抗菌药物中的应用。

29、所述各通式所示化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物或异构体可作用于mmp2蛋白的制备抗肿瘤药物中的应用。

30、一种抗肿瘤或抗菌的组合物，组合物为含各通式所示化合物。

31、本发明分离鉴定的化合物对人肺癌细胞a549、人肝癌细胞hepg2、人乳腺癌细胞mcf-7细胞、人胃癌细胞(mgc-803)，小鼠乳腺癌细胞(4t-1)和人三阴性乳癌细胞(mda-mb-231)具有较强的抗肿瘤作用，活性较好，尤其化合物a1和a4作用更明显。

32、本发明分离鉴定的化合物对金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)、肺炎克雷伯菌(klebsiella pneumoniae)和粪肠球菌(enterococcus faecium)具有不同程度的抗菌活性，尤其化合物a3、a4和a5更为明显。

33、本发明所具有的优点：

34、本发明从链霉菌streptomyces rosealbus发酵培养物中分离提取到具有多环芳香聚酮母核结构的系列新化合物，所得化合物均具有良好的抗多种肿瘤细胞和致病细菌的活性；并经药理实验证明，本发明分离鉴定的化合物对人肺癌细胞a549、人肝癌细胞hepg2、人乳腺癌细胞mcf-7细胞、人胃癌细胞(mgc-803)，小鼠乳腺癌细胞(4t-1)和人三阴性乳癌细胞(mda-mb-231)均具有较强的抗肿瘤作用，其作用与阳性对照药5-氟尿嘧啶相比，活性较好，尤其通式i中a1与通式iii中a4化合物作用更明显；经药理实验证明，本发明分离鉴定的化合物对金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌和粪肠球菌具有较好的抗菌作用，尤其通式ii中a3、通式iii中a4和通式iv中a5化合物作用更明显。