本技术属于生物医药，更具体地，本技术涉及一种用于检测受试者是否患有多发性硬化(ms)的试剂盒，以及一种能用于甄别ms及视神经脊髓炎谱系疾病(nmosd)的试剂盒。进一步的，本技术还涉及一种筛选能够用于检测受试者是否患有ms，和/或能够甄别nmosd和ms的试剂或试剂组合的方法。
背景技术：
：：1、多发性硬化(multiple sclerosis，ms)是一种慢性自身免疫性脱髓鞘疾病，该病理特点是髓鞘质丧失的离散和病灶性区域，已知为斑或损伤，斑可以由不同量的脱髓鞘、神经胶质增生、炎症、水肿和轴突退化组成。不同的理论提示在该病症的发展中涉及许多如环境因素，自身免疫功能紊乱和遗传异常，但是目前病因仍然是未知的。2、ms是年轻人中仅次于癫痫症的第二大中枢神经系统(central nervous systemcns)疾病，是年轻人中最常见的神经病症之一。据who最新数据显示，目前全球ms病例约250万例，患病率自1990年来增长了10.4％，仍呈现逐年上升的趋势。目前患病人群主要集中于北美和欧洲，亚洲缺乏相关流行病学研究，尽管目前报道病例少，但是who认为随着核磁共振成像(magnetic resonance imaging，mri)的应用及更多神经科医生的参与，亚洲会有相当大数量人群得以诊断。ms在10-15％的疾病持续期具有后续的慢性功能障碍和能力丧失的风险。10％患者呈现原发-进展型(primary progress ms,ppms)，定义为在整个疾病过程中逐渐恶化而没有任何临床上的缓解的症状，ppms发病以后症状一直慢性加重，预后不佳。80-90％的患者呈现复发-缓解型(relapsing and remitting ms,rrms)，定义为持续至少24小时的临床发作(复发)而后是部分或完全的恢复(缓解)；其中40％的rrms将继续发展为继发-进展型(secondary progressive ms，spms)，其症状加重并且缓解期最终消失。ms病程进展快者可在数月内死亡，也有少数患者缓解期很长可存活30年以上，即使患者得以生存，但是60％以上的患者最终会失去行动能力，严重影响患者生活质量同时，造成社会极大的经济负担。3、早在20世纪60～70年代即已制定了ms的诊断标准，其中包括schumacher、mcalpine、rose等主要基于临床表现的标准，但均缺乏影像学和实验室依据，容易将其他疾病误诊为ms；至80年代，随着影像学诊断技术和脑脊液免疫学检测指标的临床应用，如寡克隆区带(oligoclonal band，ob)，使ms的诊断标准不断完善。2001年首次将mri技术结合进ms诊断中，并建议用“ms”、“可疑ms”与“非ms”进行诊断分层。2005年，临床专家基于2001年版本又推出了修正版，主要修正为:①强调病变时间多发性证据在诊断中的重要性；②对脊髓病变的确定及其在诊断中的作用进行说明；③简化ppms的诊断标准。修正版mcdonald标准实现了ms的相对早期诊断，具有相对过去更高的敏感性与特异性，在临床实践与试验中皆可使用，是ms临床诊断进展的里程碑事件。然而，该修正版标准依旧较为复杂，即使经验丰富的ms专家也不能确定部分患者诊断是否符合该标准的部分内容，难以在临床中普遍应用。基于以上不足，2010年polman等对2005版标准再一次修订，推出2010版mcdonald标准。与过去的标准相比其敏感性及特异性相同，但诊断过程简化，要求mri检查次数减少，对mri时间及空间多发性的标准也进行了修改。临床诊断标准是：①在中枢神经系统白质内有2处不同部位病变存在证据，病程>1年；②至少有>2处缓解与复发的病史；③慢性逐渐加重的病程至少>6个月；④发病年龄在10—50岁之间；⑤不能用其他病因来解释神经系统病变表现者。其中修改的空间多发的定义需具备下列2项中的任何1项：①4个中枢cns脱髓鞘典型病灶区域(脑室旁、近皮质、幕下和脊髓)中至少2个区域有≥1个t2病灶；②等待累及cns不同部位的再次临床发作。时间的多发性需具备下列3项中的任何1项：①任何时间mri检查同时存在无症状的钆增强和非增强病灶；②随访mri检查有新发t2病灶和/或钆增强病灶。不管与基线mri扫描的间隔时间长短；③等待再次临床发作。鉴于上述标准依然复杂，2017版mcdoanld再次进行标准修订，但是不管怎么完善，目前ms的诊断主要依赖于对受试者临床病史认识，大脑和脊髓的mri检测，还有csf的分析。mri通常用来观察体内ms病变，在疾病早期缺乏特异性，需要大型仪器且费用高昂；csf免疫学检查ob等是提供了损伤的免疫或炎性反应的证据，但是这个结果并非ms特异，其它中枢脱髓鞘类疾病如视神经脊髓炎或者其他慢性感染也可出现，无法有效区分；mcdonald标准虽然已经显著缩短了诊断时间，但其诊断分类方案和mri标准的复杂和繁琐性限制了其在日常实践中的使用，综合来讲，现行的诊断方法检测繁琐、代价较大，依赖相关专业人员的经验，无法客观量化同时，不能进行规模化筛查，不利于临床上的普及。4、另一方面，ms和视神经脊髓炎谱系疾病(neuromyelitis optica spectrumdisorders，nmosd)，当前的《中国视神经脊髓炎谱系疾病诊断与治疗指南》已经将视神经脊髓炎(neuromyelitis optica，nmo)和nmosd统称为nmosd，临床表现相似，在临床上，如何有效甄别ms和nmosd是一直困扰临床医生的问题。nmosd为高复发、高致残性疾病，90％以上患者为多时相病程，亚洲相对多见，约60％的患者在1年内复发，90％的患者在3年内复发，多数患者遗留有严重的视力障碍和/或肢体功能障碍、尿便障碍等。nmosd的预后较ms差，5年内约有半数患者单眼视力严重损伤甚至失明，约有50％复发性nmosd患者发病5年后不能独立行走。2004年发现的一种特殊的血清生物标志物——水通道蛋白4抗体(aqp4-igg)，有助于将nmosd与ms区分开来，此后认为aqp4-igg介导的异常免疫反应是nmosd发生的关键因素，也是诊断为nmosd的重要依据之一，但研究发现仍有近30％的nmosd患者血清aqp4-igg阴性，而大部分ms患者也是血清aqp4-igg阴性，这便导致临床上诊断甄别nmosd和ms出现了问题，而在临床诊断中，两种疾病的区分诊断十分关键，因为其对应的治疗方案完全不同：对ms治疗效果很好的药物(如ifn-β，natalizumab，oral fingolimod等)不仅对nmosd治疗无效反而会加重nmosd的病情，因此设法区分ms和nmosd，对于疾病有效诊断和个体化治疗十分关键。5、因此，需要开发一种新的检测ms的方法和试剂盒，以及区分ms和nmosd的方法和试剂盒。技术实现思路1、本技术的申请人在研究脱髓鞘疾病的过程中出乎意料地发现，在包括多发性硬化(ms)在内的脱髓鞘疾病患者的样本中g蛋白偶联受体37(g protein-coupled receptor37，gpr37)的水平显著低于正常人样本，该结果提示gpr37在ms在内的脱髓鞘疾病的检测中具有重要作用。接着，本技术的申请人评价了包括ms、视神经脊髓炎谱系疾病(nmosd)、格林巴利综合征(guillain-barrésyndrome，gbs)在内的脱髓鞘疾病的样本，发现ms患者中的gpr37水平显著低于nmosd患者，提示gpr37的检测能进一步用于区分ms和nmosd。2、进一步的，本技术的申请人发现对ms患者和正常人有显著区分价值的抗体均识别gpr37胞外段(1-265aa)或其片段(101-265aa)。因此，能够特异性结合gpr37蛋白或其片段(尤其是包含1-265aa或101-265aa区域的片段)的抗体或抗体组合，在检测ms或区分ms和nmosd中具有较大的应用潜能。3、因此，在第一方面，本技术提供了一种用于检测受试者是否患有ms和/或甄别nmosd和ms的试剂盒，所述试剂盒包含用于确定生物样品中生物标志物水平的试剂或试剂组合，所述生物标志物为gpr37或其片段。4、在某些实施方案中，所述生物标志物的水平是所述生物标志物的蛋白质或mrna水平。5、在某些实施方案中，所述gpr37的片段包含gpr37的氨基酸序列的第1位氨基酸残基至第265位氨基酸残基。6、在某些实施方案中，所述gpr37的片段包含gpr37的氨基酸序列的第101位氨基酸残基至第265位氨基酸残基。7、在某些实施方案中，所述gpr37具有如seq id no:1所示的氨基酸序列。8、在某些实施方案中，所述gpr37的片段具有如seq id no:3或21所示的氨基酸序列。9、在某些实施方案中，所述生物样品为获自受试者的血液样品(例如，全血、血浆或血清)，排泄物(例如，尿液)，分泌物(例如，汗液，泪液)或脑脊液或组织或其他人体来源的样品。10、在现有技术中，已存在一些检测gpr37或其片段的试剂和相应方法(例如，fitzgerald公司的抗体，其货号为70r-17581)，并且本领域技术人员也有能力通过多种技术制备新的能够检测gpr37或其片段的试剂或试剂组合(例如杂交瘤技术，具体方法参见，kohler等人.nature,256:495,1975；噬菌体抗体库技术，具体方法参见，clackson等.nature352：624-628,1991)。综上，本领域技术人员有能力选取合适的试剂并使用相应的方法对gpr37或其片段进行检测。因此，在本文中，如上所述的试剂盒所包含的，用于确定生物样品中gpr37或其片段水平的试剂或试剂组合并不局限于本技术中具体使用的试剂或试剂组合。11、在某些实施方案中，如前所述的试剂盒，其中，所述生物标志物的水平是所述生物标志物的蛋白质水平。12、在某些实施方案中，所述试剂或试剂组合通过免疫学测定来测定所述生物样品中生物标志物的水平。13、在某些实施方案中，所述免疫学测定选自elisa测定，western印迹，表面等离子共振法，elispot测定。14、在某些实施方案中，所述试剂或试剂组合包含：抗gpr37或其片段的第一抗体和/或第二抗体。15、在某些实施方案中，如前所述的试剂盒，其中，所述生物标志物的水平是编码所述生物标志物的mrna的水平。16、在某些实施方案中，所述试剂或试剂组合通过定量pcr来测定所述生物样品中生物标志物的水平。17、在某些实施方案中，所述试剂或试剂组合包含能够定量编码gpr37或其片段的mrna水平的引物和/或探针。18、在某些实施方案中，如前所述的试剂盒，其中，所述试剂盒包括：(i)第一抗体其缀合物，或(ii)第二抗体或其缀合物，或(iii)它们的组合；其中，所述第一抗体或第二抗体为特异性结合gpr37或其片段的抗体或其抗原结合片段。19、在某些实施方案中，所述试剂盒用于检测受试者是否患有ms。20、在某些实施方案中，所述试剂盒用于检测受试者是否患有nmosd。21、在某些实施方案中，所述试剂盒用于区分健康受试者、患有ms的受试者或患有nmosd的受试者。22、在某些实施方案中，所述试剂盒包括：第一抗体，第一抗体的缀合物，第二抗体，第二抗体的缀合物，或其任意组合。23、在某些实施方案中，所述试剂盒包括：第一抗体和/或第一抗体的缀合物；以及，第二抗体和/或第二抗体的缀合物。24、在某些实施方案中，所述试剂盒用于区分健康受试者和患有脱髓鞘疾病(例如，ms，nmosd)的受试者。在某些实施方案中，所述试剂盒用于区分健康受试者和患有ms疾病的受试者。在某些实施方案中，所述试剂盒用于区分健康受试者和患有nmosd疾病的受试者。在某些实施方案中，所述试剂盒用于区分患有ms疾病和患有nmosd疾病的受试者。在某些实施方案中，所述试剂盒用于区分健康受试者、患有ms疾病和患有nmosd疾病的受试者。25、在某些实施方案中，所述第一抗体包含：如下3个重链cdrs：如seq id no:5所示的vh cdr1、如seq id no:6所示的vh cdr2、如seq id no:7所示的vh cdr3；和如下3个轻链cdrs：如seq id no:8所示的vl cdr1、如seq id no:9所示的vl cdr2、如seq id no:10所示的vl cdr3。26、在某些实施方案中，所述第一抗体包含：如seq id no:11所示的vh；和，如seq idno:12所示的vl。27、在某些实施方案中，第一抗体的缀合物包含所述第一抗体，以及与所述第一抗体连接的可检测的标记。28、在某些实施方案中，所述可检测的标记选自酶(例如，辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶)、化学发光试剂(例如，吖啶酯类化合物，鲁米诺及其衍生物，钌衍生物)、荧光染料(例如，荧光素，荧光蛋白)、放射性核素或生物素。29、在某些实施方案中，所述可检测的标记为辣根过氧化物酶。30、在某些实施方案中，所述第二抗体包含：如下3个重链cdrs：如seq id no:13所示的vh cdr1、如seq id no:14所示的vh cdr2、如seq id no:15所示的vh cdr3；和，如下3个轻链cdrs：如seq id no:16所示的vl cdr1、如seq id no:17所示的vl cdr2、如seq id no:18所示的vl cdr3。31、在某些实施方案中，所述第二抗体包含：如seq id no:19所示的vh；和，如seq idno:20所示的vl。32、在某些实施方案中，第二抗体的缀合物包含所述第二抗体，以及与所述第二抗体连接的可检测的标记。33、在某些实施方案中，所述可检测的标记选自酶(例如，辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶)、化学发光试剂(例如，吖啶酯类化合物，鲁米诺及其衍生物，钌衍生物)、荧光染料(例如，荧光素，荧光蛋白)、放射性核素或生物素。34、在某些实施方案中，所述可检测的标记为辣根过氧化物酶。35、在另一方面，本技术提供了一种检测受试者是否患有ms和/或甄别nmosd和ms的方法，所述方法包括，确定生物样品中生物标志物水平的试剂，所述生物标志物为gpr37或其片段。36、在另一方面，本技术还提供了一种以gpr37或其片段作为生物标志物检测受试者是否患有ms和/或甄别nmosd和ms的方法，所述方法包括，确定生物样品中生物标志物水平的试剂，所述生物标志物为gpr37或其片段。37、在某些实施方案中，检测获自受试者的生物样品中生物标志物的水平，将所述水平与健康人的生物标志物水平进行比较，以判断受试者是否患有ms或nmosd。在某些实施方案中，所述受试者的生物标志物水平较健康人生物标志物的水平低，则所述受试者患有ms或nmosd。38、在某些实施方案中，检测获自不同受试者的生物样品中生物标志物的水平，将所述水平进行比较，以判断受试者是否患有ms或nmosd。在某些实施方案中，生物标志物的水平较低的受试者，患有ms或nmosd。39、在另一方面，本技术提供了一种用于确定生物样品中生物标志物水平的试剂在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测受试者是否患有ms和/或nmosd和ms；其中，所述生物标志物为gpr37或其片段。40、在某些实施方案中，所述生物标志物的水平是所述生物标志物的蛋白质或mrna水平。41、在某些实施方案中，所述gpr37的片段包含gpr37的氨基酸序列的第1位氨基酸残基至第265位氨基酸残基。42、在某些实施方案中，所述gpr37的片段包含gpr37的氨基酸序列的第101位氨基酸残基至第265位氨基酸残基。43、在某些实施方案中，所述gpr37具有如seq id no:1所示的氨基酸序列。44、在某些实施方案中，所述gpr37的片段具有如seq id no:3或21所示的氨基酸序列。45、在某些实施方案中，所述生物样品为获自受试者的血液样品(例如，全血、血浆或血清)，排泄物(例如，尿液)，分泌物(例如，汗液，泪液)或脑脊液或组织或其他人体来源的样品。46、在某些实施方案中，所述试剂盒用于区分患有ms或患有nmosd的受试者。47、在某些实施方案中，所述生物标志物的水平是所述生物标志物的蛋白质水平。48、在某些实施方案中，所述试剂或试剂组合通过免疫学测定来测定所述生物样品中生物标志物的水平。49、在某些实施方案中，所述免疫学测定选自elisa测定，western印迹，表面等离子共振法，elispot测定。50、在某些实施方案中，所述试剂或试剂组合包含：抗gpr37或其片段的第一抗体和/或第二抗体。51、在某些实施方案中，所述生物标志物的水平是编码所述生物标志物的mrna的水平。52、在某些实施方案中，所述试剂或试剂组合通过定量pcr来测定所述生物样品中生物标志物的水平。53、在某些实施方案中，所述试剂或试剂组合包含能够定量编码gpr37或其片段的mrna水平的引物和/或探针。54、在某些实施方案中，在如前所述的用途中，所述试剂盒包括：(i)第一抗体或其缀合物，或(ii)第二抗体或其缀合物，或(iii)它们的组合；其中，所述第一抗体或第二抗体为特异性结合g蛋白偶联受体37(gpr37)或其片段的抗体或其抗原结合片段。55、在某些实施方案中，所述试剂盒用于区分健康受试者、患有ms的受试者或患有nmosd的受试者。56、在某些实施方案中，所述试剂盒用于区分健康受试者和患有脱髓鞘疾病(例如，ms，nmosd)的受试者。在某些实施方案中，所述试剂盒用于区分健康受试者和患有ms疾病的受试者。在某些实施方案中，所述试剂盒用于区分健康受试者和患有nmosd疾病的受试者。在某些实施方案中，所述试剂盒用于区分患有ms疾病和患有nmosd疾病的受试者。在某些实施方案中，所述试剂盒用于区分健康受试者、患有ms疾病和患有nmosd疾病的受试者。57、在某些实施方案中，所述第一抗体包含：如下3个重链cdrs：如seq id no:5所示的vh cdr1、如seq id no:6所示的vh cdr2、如seq id no:7所示的vh cdr3；和，如下3个轻链cdrs：如seq id no:8所示的vl cdr1、如seq id no:9所示的vl cdr2、如seq id no:10所示的vl cdr3。58、在某些实施方案中，所述第一抗体包含：如seq id no:11所示的vh；和，如seq idno:12所示的vl。59、在某些实施方案中，第一抗体的缀合物包含所述第一抗体，以及与所述第一抗体连接的可检测的标记。60、在某些实施方案中，所述可检测的标记选自酶(例如，辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶)、化学发光试剂(例如，吖啶酯类化合物，鲁米诺及其衍生物，钌衍生物)、荧光染料(例如，荧光素，荧光蛋白)、放射性核素或生物素。61、在某些实施方案中，所述可检测的标记为辣根过氧化物酶。62、在某些实施方案中，所述第二抗体包含：如下3个重链cdrs：如seq id no:13所示的vh cdr1、如seq id no:14所示的vh cdr2、如seq id no:15所示的vh cdr3；和，如下3个轻链cdrs：如seq id no:16所示的vl cdr1、如seq id no:17所示的vl cdr2、如seq id no:18所示的vl cdr3。63、在某些实施方案中，所述第一抗体包含：如seq id no:19所示的vh；和，如seq idno:20所示的vl。64、在某些实施方案中，第二抗体的缀合物包含所述第二抗体，以及与所述第二抗体连接的可检测的标记。65、在某些实施方案中，所述可检测的标记选自酶(例如，辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶)、化学发光试剂(例如，吖啶酯类化合物，鲁米诺及其衍生物，钌衍生物)、荧光染料(例如，荧光素，荧光蛋白)、放射性核素或生物素。66、在某些实施方案中，所述可检测的标记为辣根过氧化物酶。67、在另一方面，本技术提供了一种筛选能够用于检测受试者是否患有ms，和/或能够甄别nmosd和ms的试剂或试剂组合的方法，所述方法包括：68、(1)提供获自受试者的含有gpr37或其片段的生物样品，将试剂或试剂组合与所述生物样品接触；69、(2)检测所述试剂或试剂组合与所述生物样品中含有的gpr37或其片段是否形成了复合物；70、(3)如果步骤(2)中形成了复合物，则所述试剂或试剂组合能够用于检测受试者是否患有ms，和/或能够甄别nmosd和ms。71、在某些实施方案中，所述gpr37的片段包含gpr37的氨基酸序列的第1位氨基酸残基至第265位氨基酸残基。72、在某些实施方案中，所述gpr37的片段包含gpr37的氨基酸序列的第101位氨基酸残基至第265位氨基酸残基。73、在某些实施方案中，所述gpr37具有如seq id no:1所示的氨基酸序列。74、在某些实施方案中，所述gpr37的片段具有如seq id no:3或21所示的氨基酸序列。75、在某些实施方案中，所述生物样品为获自受试者的血液样品(例如，全血、血浆或血清)，排泄物(例如，尿液)，分泌物(例如，汗液，泪液)或脑脊液或组织或其他人体来源的样品。76、在某些实施方案中，所述试剂或试剂组合用于区分患有ms或患有nmosd的受试者。77、在某些实施方案中，所述试剂或试剂组合为能够特异性结合gpr37或其片段的抗体或其缀合物。78、在某些实施方案中，所述缀合物包含所述抗体，以及与所述抗体连接的可检测的标记。79、在某些实施方案中，所述可检测的标记选自酶(例如，辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶)、化学发光试剂(例如，吖啶酯类化合物，鲁米诺及其衍生物，钌衍生物)、荧光染料(例如，荧光素，荧光蛋白)、放射性核素或生物素。80、在某些实施方案中，所述可检测的标记为辣根过氧化物酶。81、术语定义82、在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的分子遗传学、核酸化学、化学、分子生物学、生物化学、细胞培养、微生物学、细胞生物学、基因组学和重组dna等操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。83、如本文中所使用的，术语“脱髓鞘疾病”是指以神经髓鞘脱失为主要或始发病变而轴索、胞体和神经胶质受损相对较轻的神经系统疾病。ms、nmosd(当前的《中国视神经脊髓炎谱系疾病诊断与治疗指南》已经将视神经脊髓炎(neuromyelitis optica，nmo)和视神经脊髓炎谱系疾病(neuromyelitis optica spectrum disorders，nmosd)统称为nmosd)和gbs等。其中，ms和nmosd在临床上表现相似，因此，ms和nmosd的区分一直是较难解决的问题。84、如本文中所使用的，术语“野生的”或“天然的”可互换地使用。当这些术语用于描述核酸分子、多肽或蛋白时，其表示该核酸分子、多肽或蛋白在自然界中存在，发现于自然界，并且未经过人工的任何修饰或加工。如本文中所使用的，天然的gpr37蛋白是指天然存在的，具有生物学活性的gpr37蛋白。本领域技术人员可以方便地从各种公共数据库(例如genbank数据库)获得gpr37蛋白的氨基酸序列。例如，天然的gpr37蛋白的氨基酸序列可如seq id no：1所示。85、如本文中所使用的，当提及天然的gpr37蛋白的氨基酸序列时，其使用seq id no：1所示的序列来进行描述。例如，表述“天然的gpr37蛋白的第101位氨基酸至第265位氨基酸”是指，seq id no：1所示的蛋白的第101位氨基酸至第265位氨基酸。然而，本领域技术人员理解，天然的gpr37蛋白可具有多种版本，它们具有基本上相同的一级结构(即，氨基酸序列)和高级结构(即，空间结构)，以及基本上相同的生物学功能，但是它们彼此之间在氨基酸序列上仍然可以存在微小差异。因此，在本技术中，天然的gpr37蛋白并不局限于seq idno：1所示的蛋白，而意欲涵盖所有已知的天然的gpr37蛋白。因此，在本技术中，术语“天然的gpr37蛋白”应包括各种天然存在的、具有生物学功能的gpr37蛋白，包括例如seq id no：1所示的gpr37蛋白以及其天然存在的变体。并且，当描述gpr37蛋白的氨基酸位置时，其不仅包括seq id no：1中的特定氨基酸位置，还包括其天然变体中与所述特定氨基酸位置对应的氨基酸位置。例如，表述“gpr37蛋白的第101位至第265位氨基酸”包括，seq id no：1的第101位至第265位氨基酸，以及其天然变体中的相应氨基酸位置。根据本技术，表述“相应氨基酸位置”是指，当对序列进行最优比对时，即当序列进行比对以获得最高百分数同一性时，进行比较的序列中位于等同位置的氨基酸位置。在某些实施方案中，gpr37蛋白具有如seq id no:1所示的序列，当表述“对应于gpr37蛋白的第101位至第265位氨基酸”是指，当对某一序列与seq id no:1进行最优比对时，即当某一序列与seq id no:1进行比对以获得最高百分数同一性时，进行比较的该序列中位于与seq id no:1的第101位至第265位等同位置的氨基酸位置。86、如本文中所使用的，术语“同一性”用于指两个多肽之间或两个核酸之间序列的匹配情况。当两个进行比较的序列中的某个位置都被相同的碱基或氨基酸单体亚单元占据时(例如，两个dna分子的每一个中的某个位置都被腺嘌呤占据，或两个多肽的每一个中的某个位置都被赖氨酸占据)，那么各分子在该位置上是同一的。两个序列之间的“百分数同一性”是由这两个序列共有的匹配位置数目除以进行比较的位置数目×100的函数。例如，如果两个序列的10个位置中有6个匹配，那么这两个序列具有60％的同一性。例如，dna序列ctgact和caggtt共有50％的同一性(总共6个位置中有3个位置匹配)。通常，在将两个序列比对以产生最大同一性时进行比较。这样的比对可通过使用，例如，可通过计算机程序例如align程序(dnastar,inc.)方便地进行的needleman等人(1970)j.mol.biol.48：443-453的方法来实现。还可使用已整合入align程序(版本2.0)的e.meyers和w.miller(comput.applbiosci.，4:11-17(1988))的算法，使用pam120权重残基表(weight residue table)、12的缺口长度罚分和4的缺口罚分来测定两个氨基酸序列之间的百分数同一性。此外，可使用已整合入gcg软件包(可在www.gcg.com上获得)的gap程序中的needleman和wunsch(j moibiol.48:444-453(1970))算法，使用blossum 62矩阵或pam250矩阵以及16、14、12、10、8、6或4的缺口权重(gap weight)和1、2、3、4、5或6的长度权重来测定两个氨基酸序列之间的百分数同一性。87、如本文中所使用的，术语“抗体”是指，通常由两对多肽链(每对具有一条轻链(lc)和一条重链(hc))组成的免疫球蛋白分子。抗体轻链可分类为κ(kappa)和λ(lambda)轻链。重链可分类为μ、δ、γ、α或ε，并且分别将抗体的同种型定义为igm、igd、igg、iga和ige。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过大约12或更多个氨基酸的“j”区连接，重链还包含大约3个或更多个氨基酸的“d”区。各重链由重链可变区(vh)和重链恒定区(ch)组成。重链恒定区由3个结构域(ch1、ch2和ch3)组成。各轻链由轻链可变区(vl)和轻链恒定区(cl)组成。轻链恒定区由一个结构域cl组成。恒定结构域不直接参与抗体与抗原的结合，但展现出多种效应子功能，如可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子，包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(c1q)的结合。vh和vl区还可被细分为具有高变性的区域(称为互补决定区(cdr))，其间散布有较保守的称为构架区(fr)的区域。各vh和vl由按下列顺序：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4从氨基末端至羧基末端排列的3个cdr和4个fr组成。各重链/轻链对的可变区(vh和vl)分别形成抗原结合部位。氨基酸在各区域或结构域的分配可遵循kabat,sequences of proteins of immunological interest(nationalinstitutes of health,bethesda,md.(1987and 1991))，或chothia&lesk(1987)j.mol.biol.196:901-917；chothia等人(1989)nature 342:878-883的定义。88、如本文中所使用的，术语“互补决定区”或“cdr”是指抗体可变区中负责抗原结合的氨基酸残基。在重链和轻链的可变区中各含有三个cdr，命名为cdr1、cdr2和cdr3。这些cdr的精确边界可根据本领域已知的各种编号系统进行定义，例如可按照kabat编号系统(kabat et al.,sequences of proteins of immunological interest,5th ed.publichealth service,national institutes of health,bethesda,md.,1991)、chothia编号系统(chothia&lesk(1987)j.mol.biol.196:901-917；chothia等人(1989)nature 342:878-883)或imgt编号系统(lefranc et al.,dev.comparat.immunol.27:55-77,2003)中的定义。对于给定的抗体，本领域技术人员将容易地鉴别各编号系统所定义的cdr。并且，不同编号系统之间的对应关系是本领域技术人员熟知的(例如，可参见lefranc et al.,dev.comparat.immunol.27:55-77,2003)。89、如本文中所使用的，术语“单克隆抗体”、“单抗”、“mab”具有相同的含义且可互换使用可互换，其是指，来自一群高度同源的抗体分子中的一个抗体或抗体的一个片段，也即，除可能自发出现的自然突变外，一群完全相同的抗体分子。单抗对抗原上的单一表位具有高特异性。多克隆抗体是相对于单克隆抗体而言的，其通常包含至少2种或更多种的不同抗体，这些不同的抗体通常识别抗原上的不同表位。此外，修饰语“单克隆”仅表明该抗体的特征为从高度同源的抗体群中获得，不能理解为需要通过任何特定方法来制备所述抗体。90、本发明的单克隆抗体可以通过多种技术进行制备，例如杂交瘤技术(参见，例如kohler等人.nature,256:495,1975)，重组dna技术(参见，例如美国专利申请4,816,567)，或噬菌体抗体库技术(参见，例如clackson等.nature352：624-628,1991，或marks等.j.mol.biol.222：581-597,1991)。91、如本文中使用的，术语“受试者”是指哺乳动物，例如灵长类哺乳动物，例如人。在某些实施方案中，所述哺乳动物选自人，鼠，猪，兔，羊，猴。92、发明的有益效果93、本技术提供了一种用于检测受试者是否患有ms和/或甄别nmosd和ms的试剂盒，所述试剂盒包含用于确定生物样品中生物标志物水平的试剂或试剂组合(例如，包含抗体5a2和/或6d2)，所述生物标志物为gpr37或其片段。所述抗体或抗体配对检测灵敏度高，可以极大减少样本用量。目前脱髓鞘类疾病(例如，ms，nmosd)在国内确诊率低，样本例数少。样本少极大的限制了临床研究的开展，而高灵敏度试剂能节约样本用量，方便进行多次、重复验证等研究工作，为临床工作者提供便利。94、并且，申请人提供了上述生物标志物的关键区段(即，gpr37的第1-265位氨基酸、第101-265位氨基酸)在检测中的用途。并通过实验证实了，靶向该关键区段的抗体或配对抗体(例如，抗体5a2和/或6d2)具有突出的检测和区分效果(即，能够有效检测和区分不同受试者的gpr37的水平；能够区分ms患者及正常人；还能够区分具体的脱髓鞘疾病患者，例如，nmosd和ms患者)。95、下面将结合附图和实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将理解，下列附图和实施例仅用于说明本发明，而不是对本发明的范围的限定。根据附图和优选实施方案的下列详细描述，本发明的各种目的和有利方面对于本领域技术人员来说将变得显然。当前第1页12当前第1页12