新型抗IFNAR1抗体的制作方法

发明领域本公开大体上涉及新型抗ifnar1抗体。

背景技术：

1、i型干扰素(ifn-i)包括具有抗病毒、免疫调节和抗增殖活性的一大类细胞因子。ifn-i家族由5个密切相关的成员组成，包含ifnα、ifnβ、ifnε、ifnκ和ifnω。ifnβ在抑制单核细胞分化、抑制病毒复制、诱导人肿瘤细胞的凋亡等方面展现出比ifnα或ifnω高得多的效力(schreiber g等人(2015)《免疫学趋势(trends immunol)》36:139-49)。另一方面，ifnβ极少涉及一些ifn-i相关疾病发病机理，并且这将ifnβ与ifnα和ifnω区分开来(slavikova m等人(2003)《干扰素和细胞因子研究(j interferon cytokine res)》23:143-147,hua j,等人(2006)《关节炎与风湿病学(arthritis rheum)》54:1906-16。)。

2、所有ifn-i都通过被称为ifn-α受体(ifnar)的异二聚体受体进行信号传导，所述受体由ifnar1和ifnar2链组成。ifnar1对于ifnar复合物的高亲和力结合和差异特异性至关重要(cutrone ec等人(2001)《生物化学杂志(j.biol.chem.)》276:17140)。

3、仍需要新型抗ifnar1抗体。

技术实现思路

1、在整个本公开中，冠词“一(a/an)”和“所述”在本文中用于指一个(种)或超过一个(种)(即，至少一个(种))所述冠词的语法对象。举例来说，“一抗体”意指一种抗体或多于一种抗体。

2、本公开提供抗ifnar1抗体(例如抗人ifnar1)或其抗原结合片段、编码其的分离的多核苷酸、包含其的药物组合物和其用途。

3、在一个方面中，本公开提供一种抗体或其抗原结合片段，其包括重链hcdr1、hcdr2和hcdr3和/或轻链lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中hcdr1包括sx1wx19n(seq id no:1)或其至少75％(例如至少75％、至少80％、至少85％)序列一致性的同源序列，hcdr2包括kidpsdsex2x20x21nqkfx22d(seq id no:2)或其至少75％(例如至少75％、至少80％、至少85％)序列一致性的同源序列，hcdr3包括ggx3ix4x5dydx6ax7dy(seq id no:3)或其至少60％(例如至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少93％)序列一致性的同源序列，lcdr1包括kx23seviynrla(seq id no:4)或其至少80％(例如至少80％、至少84％)序列一致性的同源序列，lcdr2包括gatx24lex25(seq id no:5)或其至少65％序列一致性的同源序列，lcdr3包括qqywx8x9pft(seq id no:6)或其至少65％(例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％)序列一致性的同源序列，其中x1是y或f，x2是t或i，x3是r或g，x4是s或y，x5是f或y，x6是a或g，x7是l或m，x8是n或s，x9是k或s，x19是m或l，x20是h或r，x21是f或y，x22是r或k，x23是s或a，x24是t或s，x25是s或t，并且其中所述抗体或其抗原结合片段能够特异性结合于ifnar1，例如人ifnar1。

4、在某些实施方式中，本文所提供的抗体或其抗原结合片段包括在seq id no:1中具有不超过3、2或1个氨基酸取代的hcdr1，在seq id no:2中具有不超过6、5、4、3、2或1个氨基酸取代的hcdr2，在seq id no:3中具有不超过6、5、4、3、2或1个氨基酸取代的hcdr3，在seq id no:4中具有不超过2或1个氨基酸取代的lcdr1，在seq id no:5中具有不超过3、2或1个氨基酸取代的lcdr2和/或在seq id no:6中具有不超过3、2或1个氨基酸取代的lcdr3。

5、在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包括重链hcdr1，其包括选自seqid no:21和25的序列；重链hcdr2，其包括选自seq id no:22和26的序列；和重链hcdr3，其包括选自seq id no:23、27和65的序列。

6、在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包括轻链lcdr1，其包括选自seqid no:70和72的序列；轻链lcdr2，其包括选自seq id no:71和66的序列；和轻链lcdr3，其包括选自seq id no:24和28的序列。

7、在某些实施方式中，重链hcdr1、hcdr2和hcdr3选自：a)包括seq id no:21序列的hcdr1、包括seq id no:22序列的hcdr2和包括seq id no:23序列的hcdr3；b)包括seq idno:25序列的hcdr1、包括seq id no:26序列的hcdr2和包括seq id no:27序列的hcdr3；及c)包括seq id no:21序列的hcdr1、包括seq id no:22序列的hcdr2和包括seq id no:65序列的hcdr3。

8、在某些实施方式中，轻链lcdr1、lcdr2和lcdr3选自：a)包括seq id no:70序列的lcdr1、包括seq id no:71序列的lcdr2和包括seq id no:24序列的lcdr3；b)包括seq idno:72序列的lcdr1、包括seq id no:66序列的lcdr2和包括seq id no:28序列的lcdr3；及c)包括seq id no:70序列的lcdr1、包括seq id no:66序列的lcdr2和包括seq id no:24序列的lcdr3。

9、在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包括：a)包括seq id no:21序列的hcdr1、包括seq id no:22序列的hcdr2、包括seq id no:23序列的hcdr3、包括seq idno:70序列的lcdr1、包括seq id no:71序列的lcdr2和包括seq id no:24序列的lcdr3；b)包括seq id no:25序列的hcdr1、包括seq id no:26序列的hcdr2、包括seq id no:27序列的hcdr3、包括seq id no:72序列的lcdr1、包括seq id no:66序列的lcdr2和包括seq idno:28序列的lcdr3；c)包括seq id no:21序列的hcdr1、包括seq id no:22序列的hcdr2、包括seq id no:65序列的hcdr3、包括seq id no:70序列的lcdr1、包括seq id no:71序列的lcdr2和包括seq id no:24序列的lcdr3；d)包括seq id no:21序列的hcdr1、包括seq idno:22序列的hcdr2、包括seq id no:23序列的hcdr3、包括seq id no:70序列的lcdr1、包括seq id no:66序列的lcdr2和包括seq id no:24序列的lcdr3；或e)包括seq id no:21序列的hcdr1、包括seq id no:22序列的hcdr2、包括seq id no:65序列的hcdr3、包括seq idno:70序列的lcdr1、包括seq id no:66序列的lcdr2和包括seq id no:24序列的lcdr3。

10、在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段进一步包括重链hfr1、hfr2、hfr3和hfr4中的一个或多个和/或轻链lfr1、lfr2、lfr3和lfr4中的一个或多个，其中：a)hfr1包括qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytft(seq id no:33)或其至少80％(例如至少85％、至少88％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的同源序列，b)hfr2包括wvrqx10pgqglewx11g(seq idno:34)或其至少80％(例如至少85％、至少88％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％)序列一致性的同源序列，c)hfr3序列包括rvtx12tx13dx14ststvymelsslrsedtavyycar(seq id no:35)或其至少80％(例如至少85％、至少88％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％)序列一致性的同源序列，d)hfr4包括wgqgtlvtvss(seq id no:36)或其至少80％(例如至少85％、至少88％、至少90％)序列一致性的同源序列，e)lfr1包括diqmtqspsslsasvgdrvtitc(seq id no:37)或其至少80％(例如至少85％、至少88％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％)序列一致性的同源序列，f)lfr2包括wyqqkpgx15apkllix16(seq idno:38)或其至少80％(例如至少85％、至少88％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％)序列一致性的同源序列，g)lfr3包括gvpsrfsgsgsgx17dx18tltisslqpedfatyyc(seq id no:39)或其至少80％(例如至少85％、至少88％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％)序列一致性的同源序列和h)lfr4包括fgqgtkleik(seq id no:40)或其至少80％(例如至少85％、至少88％、至少90％)序列一致性的同源序列，其中x10是a或r，x11是m或i，x12是m或l，x13是r或v，x14是t或k，x15是k或n，x16是y或s，x17是t或k，x18是f或y。

11、在某些实施方式中，本文所提供的抗体或其抗原结合片段包括在seq id no:33序列中具有不超过3、2或1个氨基酸取代的hfr1，在seq id no:34序列的序列中具有不超过3、2或1个氨基酸取代的hfr2，在seq id no:35序列中具有不超过6、5、4、3、2或1个氨基酸取代的hfr3，在seq id no:36序列中具有不超过4、3、2或1个氨基酸取代的hfr4，在seq id no:37序列中具有不超过6、5、4、3、2或1个氨基酸取代的lfr1，在seq id no:38序列中具有不超过4、3、2或1个氨基酸取代的lfr2，在seq id no:39序列中具有不超过6、5、4、3、2或1个氨基酸取代的lfr3和/或在seq id no:40序列中具有不超过3、2或1个氨基酸取代的lfr4。

12、在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段进一步包括重链hfr1，其包括seqid no:33的序列；重链hfr2，其包括选自seq id no:41、42和43的序列；重链hfr3，其包括选自seq id no:44和45的序列；和重链hfr4，其包括seq id no:36的序列。

13、在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段进一步包括轻链lfr1，其包括seq idno:37的序列；轻链lfr2，其包括选自seq id no:46、47和48的序列；轻链lfr3，其包括选自seq id no:49和50的序列；和轻链lfr4，其包括seq id no:40的序列。

14、在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段进一步包括选自以下的重链hfr1、hfr2、hfr3和hfr4的组合：a)包括seq id no:33序列的hfr1、包括seq id no:41序列的hfr2、包括seq id no:44序列的hfr3和包括seq id no:36序列的hfr4；b)包括seq idno:33序列的hfr1、包括seq id no:41序列的hfr2、包括seq id no:45序列的hfr3和包括seq id no:36序列的hfr4；c)包括seq id no:33序列的hfr1、包括seq id no:42序列的hfr2、包括seq id no:45序列的hfr3和包括seq id no:36序列的hfr4；及d)包括seq idno:33序列的hfr1、包括seq id no:43序列的hfr2、包括seq id no:45序列的hfr3和包括seq id no:36序列的hfr4。

15、在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段进一步包括选自以下的轻链lfr1、lfr2、lfr3和lfr4的组合：a)包括seq id no:37序列的lfr1、包括seq id no:46序列的lfr2、包括seq id no:49序列的lfr3和包括seq id no:40序列的lfr4；b)包括seq idno:37序列的lfr1、包括seq id no:46序列的lfr2、包括seq id no:50序列的lfr3和包括seq id no:40序列的lfr4；c)包括seq id no:37序列的lfr1、包括seq id no:47序列的lfr2、包括seq id no:50序列的lfr3和包括seq id no:40序列的lfr4；和d)包括seq idno:37序列的lfr1、包括seq id no:48序列的lfr2、包括seq id no:50序列的lfr3和包括seq id no:40序列的lfr4。

16、在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区(vh)，其包括seqid no:7、9、67或51-54的序列或具有其至少80％(例如至少85％、至少88％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的同源序列。

17、在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包括轻链可变区(vl)，其包括seqid no:8、10、68或55-58的序列或具有其至少80％(例如至少85％、至少88％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的同源序列。

18、在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包括a)包括seq id no:7序列的重链可变区和包括seq id no:8序列的轻链可变区；b)包括seq id no:9序列的重链可变区和包括seq id no:10序列的轻链可变区；c)包括seq id no:51序列的重链可变区和包括seq id no:55序列的轻链可变区；d)包括seq id no:52序列的重链可变区和包括seq idno:55序列的轻链可变区；e)包括seq id no:53序列的重链可变区和包括seq id no:55序列的轻链可变区；f)包括seq id no:54序列的重链可变区和包括seq id no:55序列的轻链可变区；g)包括seq id no:51序列的重链可变区和包括seq id no:56序列的轻链可变区；h)包括seq id no:52序列的重链可变区和包括seq id no:56序列的轻链可变区；i)包括seq id no:53序列的重链可变区和包括seq id no:56序列的轻链可变区；j)包括seq idno:54序列的重链可变区和包括seq id no:56序列的轻链可变区；k)包括seq id no:51序列的重链可变区和包括seq id no:57序列的轻链可变区；l)包括seq id no:52序列的重链可变区和包括seq id no:57序列的轻链可变区；m)包括seq id no:53序列的重链可变区和包括seq id no:57序列的轻链可变区；n)包括seq id no:54序列的重链可变区和包括seqid no:57序列的轻链可变区；o)包括seq id no:51序列的重链可变区和包括seq id no:58序列的轻链可变区；p)包括seq id no:52序列的重链可变区和包括seq id no:58序列的轻链可变区；q)包括seq id no:53序列的重链可变区和包括seq id no:58序列的轻链可变区；r)包括seq id no:54序列的重链可变区和包括seq id no:58序列的轻链可变区；s)包括seq id no:67序列的重链可变区和包括seq id no:56序列的轻链可变区；t)包括seq idno:52序列的重链可变区和包括seq id no:68序列的轻链可变区；或u)包括seq id no:67序列的重链可变区和包括seq id no:68序列的轻链可变区。

19、在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段进一步包括免疫球蛋白恒定区、任选地人免疫球蛋白恒定区或任选地人igg恒定区(例如igg1、igg2、igg3或igg4的恒定区)。在某些实施方式中，恒定区包括一种或多种修饰。在某些实施方式中，所述修饰引入或去除糖基化位点。在某些实施方式中，所述修饰引入游离半胱氨酸残基。在某些实施方式中，所述修饰改变fc介导的效应功能，例如增加或减少的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)、补体依赖性细胞毒性(cdc)或fc受体结合。

20、在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段是人源化单克隆抗体。在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段是嵌合抗体或其抗原结合片段。在某些实施方式中，其抗原结合片段是骆驼化单结构域抗体、双功能抗体、scfv(单链fv)、scfv二聚体、bsfv(双特异性fv)、dsfv、(dsfv)2、dsfv-dsfv'、fv片段、fab、fab'、f(ab')2、ds双功能抗体、纳米抗体、结构域抗体或二价结构域抗体。

21、在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段抑制ifnα介导和/或ifnω介导的人ifnar1活化。

22、在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段不抑制ifnβ介导的人ifnar1活化。

23、在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段不抑制ifnβ介导的抗病毒活性。

24、在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段对ifnα介导或对ifnω介导的人ifnar1活化或抗病毒活性的抑制作用比其对ifnβ介导的人ifnar1活化或抗病毒活性的抑制作用高至少四倍、五倍、六倍、七倍、八倍、九倍、十倍、十一倍、十二倍、十三倍、十四倍、十五倍。

25、在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段从其天然来源分离。

26、在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段与一个或多个结合部分连接。

27、在另一方面中，本公开提供一种抗人ifnar1抗体或其抗原结合片段，其与本文所提供的抗体或其抗原结合片段竞争结合于人ifnar1，并且其中所述抗体或其抗原结合片段不抑制ifnβ介导的人ifnar1活化。

28、在某些实施方式中，如通过biacore所测量，所述抗体或其抗原结合片段能够以不超过8×10-8m(例如不超过5×10-8m、不超过2×10-8m、不超过8×10-9m、不超过5×10-9m、不超过2×10-9m、不超过10-9m、不超过8×10-10m、不超过7×10-10m或不超过6×10-10m)的kd值特异性结合于人ifnar1。

29、在某些实施方式中，如通过elisa所测量，所述抗体或其抗原结合片段能够以不超过0.1μg/ml(例如不超过0.09μg/ml、不超过0.08μg/ml、不超过0.07μg/ml、不超过0.06μg/ml、不超过0.05μg/ml、不超过0.04μg/ml、不超过0.03μg/ml、不超过0.02μg/ml、不超过0.01μg/ml、不超过0.009μg/ml、不超过0.008μg/ml、不超过0.007μg/ml、不超过0.006μg/ml或不超过0.005μg/ml)的ec50值特异性结合于人ifnar1。

30、在另一方面中，本公开提供一种抗人ifnar1抗体或其抗原结合片段，其结合于在ifnar1的氨基酸残基127-227内的第一片段和在ifnar1的氨基酸残基231-329内的第二片段两者，并且不抑制ifnβ介导的ifnar1活化。在某些实施方式中，本文所提供的抗体和抗原结合片段可以特异性结合于人/小鼠嵌合ifnar1(即seq id no:69)。

31、在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段不结合于截短的人ifnar1，所述截短的人ifnar1中不存在a)氨基酸残基127-227或b)氨基酸残基231-329。

32、在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段能够特异性结合于截短的人ifnar1，所述截短的人ifnar1中不存在：a)氨基酸残基32-126，b)氨基酸残基331-432，或a)和b)两者。

33、在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段以与全长的人ifnar1的结合能力相当的结合能力结合于截短的人ifnar1。

34、在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区，所述重链可变区为小鼠ighv1-69基因、小鼠ighd2-4基因和小鼠ighj4基因的产物或衍生于所述基因；和/或轻链可变区，所述轻链可变区为小鼠igkv13-84基因和小鼠igkj4基因的产物或衍生于所述基因。在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段是人源化的。

35、在另一方面中，本公开提供一种由杂交瘤细胞产生的抗体，所述杂交瘤细胞的保藏号为cgmcc保藏号16286或cgmcc保藏号16287；或提供其抗原结合片段。

36、在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段是双特异性的。

37、在另一方面中，本公开提供了一种分离的多核苷酸，其编码本文提供的抗体或其抗原结合片段。在某些实施方式中，分离的多核苷酸包括选自由以下组成的群组的核苷酸序列：seq id no:11和13，和其与seq id no:11或13具有至少80％(例如至少85％、至少88％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的同源序列。在某些实施方式中，分离的多核苷酸进一步包括选自由以下组成的群组的核苷酸序列：seq id no:12和14，和其与seq id no:12或14具有至少80％(例如至少85％、至少88％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的同源序列。在某些实施方式中，同源序列编码与由seq id no:11、12、13或14编码的氨基酸序列一致的氨基酸序列。

38、在另一方面中，本公开提供一种表达载体，该表达载体包括本文所提供的分离的多核苷酸。

39、在另一方面中，本公开提供了一种宿主细胞，其包含本文所提供的表达载体。在某些实施方式中，宿主细胞能够产生本文所提供的抗体或其抗原结合片段。

40、在另一方面中，本公开提供一种杂交瘤细胞，其保藏号为cgmcc保藏号16286或cgmcc保藏号16287。

41、在另一方面中，本公开提供一种产生本文所提供的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括在表达本文所提供的表达载体的条件下培养本文所提供的宿主细胞。在某些实施方式中，所述方法进一步包括纯化由宿主细胞产生的抗体或其抗原结合片段。

42、在另一方面中，本公开提供一种药物组合物，其包括本文所提供的抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载体。

43、在另一方面中，本公开提供一种治疗受试者的i型ifn相关疾病或病况的方法，其包括施用治疗有效量的本文所提供的抗体或其抗原结合片段或本文所提供的药物组合物。在某些实施方式中，i型ifn为ifnα和/或ifnω。在某些实施方式中，所述疾病或病况的特征在于表达或过度表达i型干扰素(ifn)和/或i型ifn标签基因。在某些实施方式中，所述疾病是hiv感染或aids、胰岛素依赖型糖尿病(iddm)、炎性肠病(ibd)、克罗恩氏病(crohn'sdisease)、溃疡性结肠炎、乳糜泻、慢性阻塞性肺病(copd)、牛皮癣、自体免疫性甲状腺炎、自体免疫性原发性甲状腺功能减退、格雷夫斯氏病(graves'disease)、桥本氏甲状腺炎(hashimoto's thyroiditis)、破坏性甲状腺炎伴有甲状腺功能减退、肾小球肾炎、iga肾病、igm多发性神经病、重症肌无力、雷诺氏综合征(reynaud's syndrome)、掌跖脓疱病(ppp)、糜烂型扁平苔癣、大疱性天疱疮、大疱性表皮松懈、接触性皮炎和特应性皮炎、多发性神经根炎、全身性红斑狼疮(sle)、肌炎、干燥综合征(syndrome)、类风湿性关节炎、全身性硬化症、硬皮病、多发性硬化症(ms)、特发性炎性肌病(iim)、类风湿性关节炎(ra)、移植排斥反应和移植物抗宿主疾病(gvhd)以及艾卡迪-古特里斯综合征(aicardi-goutières syndrome)(ags)。在某些实施方式中，ifnβ介导的人ifnar1活化未受到抑制。在某些实施方式中，所述方法进一步包括施用治疗有效量的ifnβ。

44、在另一方面中，本公开提供一种抑制表达或过度表达ifnα和/或ifnω的细胞的生物活性的方法，其包括使所述细胞与本文所提供的抗体或其抗原结合片段接触。

45、在另一方面中，本公开提供一种检测样品中人ifnar1的存在或水平的方法，其包括使所述样品与本文所提供的抗体或其抗原结合片段接触。

46、在另一方面中，本公开提供一种检测或治疗性试剂盒，其包括本文所提供的抗体或其抗原结合片段和使用说明书。

47、在另一方面中，本公开提供本文所提供的抗体或其抗原结合片段的用途，其用于制备用于治疗有需要的受试者的i型ifn相关疾病或病况的药剂。