一种Taq酶的单克隆抗体F7H6及其应用的制作方法

本发明涉及一种taq酶的单克隆抗体f7h6及其应用。

背景技术：

1、聚合酶链式反应(pcr)是一种用于放大扩增特定的dna片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊dna复制。pcr是利用dna在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温(经常是60℃左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至dna聚合酶最适反应温度(72℃左右)，dna聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。

2、但是，dna聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得加入新的dna聚合酶，不仅操作烦琐，而且价格昂贵，制约了pcr技术的应用和发展。耐热dna聚合酶-taq酶的发现对于pcr的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使pcr技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，pcr技术得以大量应用，并逐步应用于临床。

3、然而，在pcr预变性前，taq酶5’-3’外切活性能够引起引物、探针或模板的降解；而其5’-3’聚合活性在pcr预变性前阶段即可引起模板或引物错配而产生非特异性的扩增；非特异性产物在后续的扩增循环中将进一步被放大，从而造成目的产物扩增产量降低，甚至扩增失败。

4、抗体法是一种有效解决上述问题的方法。抗体法是在热启动pcr中，taq酶抗体与taq酶可逆性结合，与taq酶维持动态平衡；高温变性前，taq酶抗体结合在taq酶活性位点上，封闭其酶活性；变性阶段，taq酶抗体失活，taq酶快速释放；退火阶段，taq酶抗体恢复活性，封闭taq酶活性；延伸阶段，taq酶抗体再次失活，taq酶以目的基因为模板、引物为出发点合成完整双链dna。

5、然而，现有的taq酶抗体大多仅有较佳的聚合酶的聚合活性的封闭效果或外切酶活性的封闭效果，很少同时具有较佳的聚合活性的封闭效果和外切酶活性的封闭效果，这也将影响到聚合酶的热启动效果。因此，本领域亟需一种能够同时具有较佳的聚合活性的封闭效果和外切酶活性的封闭效果的taq酶的抗体。

技术实现思路

1、本发明提供了一种taq酶的单克隆抗体f7h6及其应用，可以有效解决上述问题。

2、本发明是这样实现的：

3、一种taq酶的单克隆抗体f7h6，其重链可变区的氨基酸序列的cdr1序列如seq idno:1所示，cdr2序列如seq id no:2所示，cdr3序列如seq id no:3所示；其轻链可变区的氨基酸序列的cdr1序列如seq idno:4所示，cdr2序列如seq id no:5所示，cdr3序列如seq idno:6所示。

4、优选的，其重链可变区的氨基酸序列如seq id no:7所示；其轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:8所示。

5、优选的，其重链的氨基酸序列如seq id no:9所示。

6、优选的，其轻链的氨基酸序列如seq id no:10所示。

7、一种上述的单克隆抗体f7h6在构建热启动taq酶扩增中的应用。

8、一种生产上述的单克隆抗体f7h6的细胞。

9、本发明的有益效果是：本发明提供的单克隆抗体f7h6，同时具有较佳的封闭taq酶5’-3’聚合活性和5’-3’外切酶活性的效果，在0～60℃温度范围内，其taq酶5’-3’聚合活性封闭效果达83％以上，其taq酶5’-3’外切酶活性封闭效果达60％以上，能有效降低非特异性扩增和引物二聚体产生。随着温度升高至75℃，单克隆抗体开始与taq酶解离，恢复taq酶聚合活性。与未封闭的taq酶相比，特异性扩增效率显著提高。

10、本发明的单克隆抗体f7h6，用于聚合酶的热启动，相比野生taq酶，其扩增灵敏度显著提升，能很好的扩增出低浓度15copies/反应的样本；其次，其扩增ct值较现有的抗体酶提前1个ct值，说明其能更早完成核酸，其扩增的效率也更高。

技术特征：

1.一种taq酶的单克隆抗体f7h6，其特征在于，其重链可变区的氨基酸序列的cdr1序列如seq id no:1所示，cdr2序列如seq id no:2所示，cdr3序列如seq id no:3所示；其轻链可变区的氨基酸序列的cdr1序列如seq id no:4所示，cdr2序列如seq id no:5所示，cdr3序列如seq id no:6所示。

2.根据权利要求1所述的taq酶的单克隆抗体f7h6，其特征在于，其重链可变区的氨基酸序列如seq id no:7所示；其轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:8所示。

3.根据权利要求1所述的taq酶的单克隆抗体f7h6，其特征在于，其重链的氨基酸序列如seq id no:9所示。

4.根据权利要求1所述的taq酶的单克隆抗体f7h6，其特征在于，其轻链的氨基酸序列如seq id no:10所示。

5.一种权利要求1至4任一项所述的单克隆抗体f7h6在构建热启动taq酶扩增中的应用。

6.一种生产权利要求1至4任一项所述的单克隆抗体f7h6的细胞。

技术总结
本发明提供一种Taq酶的单克隆抗体F7H6，其重链可变区的氨基酸序列的CDR1序列如SEQ ID NO:1所示，CDR2序列如SEQ ID NO:2所示，CDR3序列如SEQ ID NO:3所示；其轻链可变区的氨基酸序列的CDR1序列如SEQ ID NO:4所示，CDR2序列如SEQ ID NO:5所示，CDR3序列如SEQ ID NO:6所示。所述单克隆抗体F7H6同时具有较佳的聚合活性的封闭效果和外切酶活性的封闭效果。

技术研发人员：张明辉,陈守峰,李萌萌,周斌,江溪成,陈易超,章永垒
受保护的技术使用者：厦门康基生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13