一种六肽-9环肽及其应用的制作方法

本发明属于护肤品原料，涉及一种六肽-9环肽及其应用。

背景技术：

1、多肽是多次荣获诺贝尔奖的核心抗衰成分，基本组成单元是氨基酸，氨基酸按照特定序列脱水缩合形成，本质与蛋白质相同。常见美容肽一般都是2～10个氨基酸组成的短肽，其机理明确一般作用于皮肤某个微观受体(通常称为靶点)，具有抗皱、美白、保湿、抗氧化、修复等不同功效，多肽有比较高的生物活性，一般只需要添加几到几百个ppm即可有显著效果。然而，多肽的直链结构决定了其亲水性更强，不易在皮肤上透皮吸收。同时，多肽类分子是许多蛋白酶水解的底物，大部分多肽类会在血液以及组织中被蛋白酶降解失活，失去功效性，因此多肽类原料的生物利用度很低，以至于其在实际应用中受到很大限制。

2、为了减弱或避免蛋白酶对多肽类分子的降解，必须要利用化学方法或其他方法对多肽分子进行修饰改造，以提高多肽的代谢稳定性。目前，增强多肽分子代谢稳定性的主要方法包括非天然氨基酸修饰、伪肽化策略、逆肽策略、环化策略以及高级脂肪酸修饰、蛋白融合策略、聚乙二醇修饰等。其中，由于环状结构导致的构象变化限制，环肽类化合物一般具有较大的表面积，从而使其与靶点蛋白间具有高度亲和力及识别特异性。大环结构构象灵活性的限制也降低了药物与靶点结合的熵值，提高了结合的稳定性。其次，氨基酸组成特点决定了环肽类化合物往往具有极低的、甚至没有细胞毒性。环肽类化合物很容易通过自动化的化学合成流程实现生产，并且便于进行各项修饰、处理及监控，这些特点都非常有利于药物开发过程。

3、同时，目前市场常见的美容肽功效上的多肽一般比较单一，如六肽-9是一种由六个氨基酸组成的胶原蛋白肽，在人体的胶原蛋白ⅳ和ⅹⅶ(两种关键基膜胶原蛋白)的结构中同时存在，具有显著的抗皱修复功效。目前研究得出其主要机理通路是促进促进真皮层成纤维细胞合成胶原蛋白，补充胶原蛋白ⅰ、ⅳ和ⅹⅶ型的含量等。另一方面，六肽-9作为小分子直链肽，也存在稳定性低、易降解、失活、透皮吸收率差等问题。

4、通过环化改性可提升多肽的空间结构复杂性、增加比表面积，提供更多与靶点接触可能性，以期得到功效更加多样性、多肽原料更高的利用率，扩大六肽-9在美容护肤领域应用前景。

技术实现思路

1、为解决上述问题，本发明的目的在于提供一种六肽-9环肽及其应用，通过对六肽-9直链肽进行环化，合成一种全新结构的六肽-9环肽(chp-9)，并对其进行结构鉴定和功效研究，发现在皮肤抗皱和紧致方面都具有比六肽-9直链肽更加杰出的功效，比如六肽-9环肽能显著促进collagenⅲ和integrinβ4的表达，而六肽-9直链肽(hex-9)对collagenⅲ和integrinβ4却没有促进作用；同时六肽-9环肽具有更低的细胞毒性，更好的皮肤渗透性，在护肤方面也具有很好的功效，在化妆品领域具有巨大的应用前景。

2、一方面，本发明提供了一种六肽-9环肽(chp-9)，所述六肽-9环肽具有如式(1)所示的结构式：

3、

4、中文名称：3,3'-(5,8,11,16,19,22-六氧代乙酰水杨酸-1h,5h-二吡咯[1,2-a:1'，2'-j][1,4,7,10,13,16]六氮杂环十八烯-9,20-二酰基)二丙酰胺；

5、英文名称：

6、3,3'-(5,8,11,16,19,22-hexaoxoicosahydro-1h,5h-dipyrrolo[1,2-a:1',2'

7、j][1,4,7,10,13,16]hexaazacyclooctadecine-9,20-diyl)dipropanamide

8、分子式：c24h36n8o8

9、所述六肽-9环肽(chp-9)通过在六肽-9上形成酰胺键环化而制得，所述六肽-9直链肽(hex-9)的结构式如式(2)所示：

10、

11、所述六肽-9环肽(chp-9)的制备方法为：先合成链状的六肽-9直链肽(hex-9)，再通过成环反应制得六肽-9环肽。

12、本发明经大量研究证明，环化后的六肽-9环肽，与原直链结构的六肽-9直链肽相比，更具稳定性，亲和性，更高的安全耐受性，而且不仅没有丢失原有功效，还新增了很多新的功效，在抗衰领域具有更强的应用潜能，在皮肤抗皱和紧致方面都具有比六肽-9直链肽更加杰出的功效，可以更好地应用于化妆品领域，可用于制备护肤的爽肤水、面膜、精华、乳液、膏霜、冻干粉等，前景广阔。

13、另外，本发明提供的六肽-9环肽还可以与其他具有护肤功效的活性成分(如抗衰老、抗皱、保湿等等)进行复配，凡是采用本发明提供的六肽-9环肽与其他活性成分进行复配的产品，也都在本发明的保护范围内。

14、另一方面，本发明提供了如上所述的六肽-9环肽用于制备促进皮肤紧致的制剂的用途。

15、进一步地，所述六肽-9环肽通过促进integrinβ4基因表达来促进皮肤紧致。

16、integrinα6、integrinβ4是整合素，是由α(120～185kd)和β(90～110kd)两个亚单位形成的异二聚体，α6β4是与半桥粒蛋白相联系的一种基底细胞特异性整合素，α6β4将基底细胞与其下方的基底膜带连接起来。层粘连蛋白332(laminin 332)，也叫做层连蛋白5(laminin 5)，是基底膜的主要组成蛋白，对上皮细胞与基底膜之间的稳定结合起重要作用，其通过受体介导，具有促进上皮细胞粘附，细胞迁移和扩散的功能。层粘连蛋白332是由3个α链、3个β链和2个γ链构成。活性物作用后，检测层粘连蛋白332的含量有助于评价待测活性物的紧致抗皱作用。因此，可以通过给药后检测成integrinα6、integrinβ4和laminin5基因表达的变化，评估待测样品的紧致功效。

17、本发明经研究证明，环化后的六肽-9环肽(chp-9)具有明显的促进基因integrinβ4表达的作用，而原直链肽hex-9则无相应作用，证明环化后的chp-9对促进皮肤紧致具有更好的效果。

18、进一步地，所述六肽-9环肽的用量为0.01％～20.0％。

19、再一方面，本发明提供了如上所述的六肽-9环肽用于制备促进integrinβ4基因表达的制剂的用途。

20、进一步地，所述六肽-9环肽的用量为0.01％～20.0％。

21、再一方面，本发明提供了如上所述的六肽-9环肽用于制备促进collagenⅲ表达的制剂的用途。

22、胶原蛋白主要是由存在于皮肤真皮层的成纤维细胞产生的，是支撑皮肤的重要元素，其中collagenⅰ为胶原ⅰ，胶原蛋白约占皮肤真皮层80％的比重，使得皮肤饱满充盈，促进collagenⅰ含量的增加，可以达到一定抵抗皱纹产生的作用。ⅲ型胶原(collagenⅲ)也是真皮细胞外基质的一种主要成分，占真皮胶原的10％，与胶原ⅰ共同组装成胶原纤维，胶原纤维在皮肤的韧性方面发挥重要作用，在皮肤抗衰抗皱领域已逐渐成为关键性靶点。

23、本发明经研究证明，环化后chp-9在collagenⅲ上有显著性，而原直链hex-9无相关作用，证明环化后的chp-9对促进皮肤抗皱具有更好的效果。

24、同时还发现，chp-9在collagenι、collagenⅲ、collagenⅳ、collagenⅶ、collagenxⅶ基因表达上具有浓度依赖性，chp-9在高浓度下促进collagenι、collagenⅲ、collagenⅳ、collagenⅶ、collagen xⅶ基因表达效果更强。因此，在关注细胞毒性的前提下，护肤品中采用高浓度的chp-9是有需求的。

25、进一步地，所述六肽-9环肽的用量为0.01％～20.0％。

26、再一方面，本发明提供了如上所述的六肽-9环肽用于制备具有低细胞毒性、高皮肤渗透率的护肤制剂的用途。

27、相比直链肽hex-9，六肽-9环肽的细胞毒性更低，因此可以在护肤品中采用更高浓度的六肽-9环肽来提高护肤效果。

28、相比直链肽hex-9，六肽-9环肽还具有更好的皮肤渗透率，研究证明，六肽-9环肽(chp-9)使用24h后渗透效果是原直链hex-9的3.11倍，证明环化是有益的，可达到增强透皮吸收效果。

29、进一步地，所述的护肤制剂为促进皮肤紧致的制剂，或促进皮肤抗皱的制剂。

30、进一步地，所述六肽-9环肽通过促进collagenι、collagenⅲ、collagenⅳ、collagenⅶ、collagen xⅶ中的任意一种或多种的表达来促进皮肤抗皱。

31、本发明的有益效果为：

32、1)成功合成一种全新结构的六肽-9环肽(chp-9)，该环肽不仅没有丢失原直链肽功效，反而还新增了更多的护肤功效；

33、2)发现六肽-9环肽(chp-9)具有明显的促进基因integrinβ4表达的作用，而原直链肽hex-9则无相应作用，证明环化后的chp-9对促进皮肤紧致具有更好的效果；

34、3)发现六肽-9环肽(chp-9)具有明显的促进collagenⅲ表达的作用，而原直链hex-9则无相应作用，证明环化后的chp-9对促进皮肤抗皱具有更好的效果；

35、4)发现相比直链肽hex-9，六肽-9环肽的细胞毒性更低，可以在护肤品中采用更高浓度的六肽-9环肽来提高护肤效果；

36、5)发现相比直链肽hex-9，六肽-9环肽还具有更好的皮肤渗透率，使用24h后渗透效果是原直链hex-9的3.11倍。