一种猪丹毒rSpaA-Fc融合蛋白及其在疫苗中的应用的制作方法

本发明属于生物，具体涉及一种猪丹毒rspaa-fc融合蛋白及其在疫苗制备中的应用。

背景技术：

1、猪源红斑丹毒丝菌(erysipelothrix rhusiopathiae)，俗称猪丹毒杆菌，是丹毒丝菌科丹毒丝菌属的一种兼性厌氧的革兰氏阳性的纤细小杆菌，可引起猪及其他动物的丹毒病。猪丹毒是一种急性、热性传染病，其临诊特征主要为高热、急性败血症、皮肤疹块、慢性疣状心内膜炎及皮肤坏死与多发性非化脓性关节炎。猪丹毒杆菌有多种血清型，大多数由其中的血清1a型和2型引起。

2、目前，该病在世界上大多数国家都有分布，呈散发或流行性发生，给养猪业造成了很大的经济损失，也给人体健康带来威胁。猪丹毒与猪瘟、猪肺疫并称为中国养猪业的三大传染病，造成严重的经济损失。预防猪丹毒最有效的方法是进行疫苗接种，目前市场上使用的疫苗主要是猪丹毒灭活菌苗和弱毒活菌苗，但在这两种疫苗中，弱毒菌株存在毒力返强的问题，而灭活疫苗存在灭活不彻底及免疫力低的问题。因此，研制新型亚单位疫苗是猪丹毒疫苗研究的主要方向，基因工程亚单位疫苗虽具有生物安全性高，操作简单，成本低等特点，但是其不能诱导细胞免疫是其制约因素，同时目前针对猪丹毒的新型亚单位疫苗设计主要是针对某一个基因型的spaa蛋白(如申请号201910442887.2、申请号202011366261.7专利所示)，因此亟待对现有技术进行升级，提高抗体水平、免疫覆盖率和保护率。

技术实现思路

1、为解决现有技术中存在的问题，本发明专利设计了一种猪丹毒rspaa-fc融合蛋白，同时制备含有该融合蛋白的亚单位疫苗产品，弥补现有技术的不足。

2、首先本发明公开了一种猪丹毒rspaa-fc融合蛋白，所述猪丹毒rspaa-fc融合蛋白的氨基酸序列如seq id no:2所示。

3、所述猪丹毒rspaa-fc蛋白氨基酸序列由如seq id no:3所示的信号肽序列、如seqid no:4所示的t helper序列、如seq id no:5所示的猪丹毒血清1a spaa保护性抗原第一序列、如seq id no:6所示的linker1第一序列、如seq id no:7所示的猪丹毒血清2spaa保护性抗原第一序列、如seq id no:8所述的猪丹毒血清1a spaa保护性抗原第二序列、如seqid no:6所示的linker1第二序列、如seq id no:9所示的猪丹毒血清2spaa保护性抗原第二序列、如seq id no:10所示的猪丹毒血清1a spaa保护性抗原第三序列、如seq id no:11所示的linker2序列、如seq id no:12所示的fc序列以及如seq id no:13所示的6his标签序列首尾连接而成。

4、编码该猪丹毒rspaa-fc融合蛋白的碱基序列如seq id no:1所示；该基因按照大肠杆菌密码子偏好性进行了基因优化。

5、本发明的猪丹毒rspaa-fc融合蛋白用于制备猪丹毒亚单位疫苗和诊断试剂。

6、相比于现有技术，本发明设计的猪丹毒rspaa-fc融合蛋白制备的亚单位疫苗具有能够同时诱导体液免疫和细胞免疫，抗体水平高，对猪丹毒基因1a和2型攻毒保护率高等特点，为生产上制备猪丹毒亚单位疫苗奠定了坚实的基础。

技术特征：

1.一种猪丹毒rspaa-fc融合蛋白，其特征在于，所述的rspaa-fc蛋白氨基酸序列如seqid no:2所示。

2.根据权利要求1所述的猪丹毒rspaa-fc融合蛋白，其特征在于，所述猪丹毒rspaa-fc蛋白氨基酸序列由如seq id no:3所示的信号肽序列、如seq id no:4所示的thelper序列、如seq id no:5所示的猪丹毒血清1aspaa保护性抗原第一序列、如seq id no:6所示的linker1第一序列、如seq id no:7所示的猪丹毒血清2spaa保护性抗原第一序列、如seq idno:8所述的猪丹毒血清1aspaa保护性抗原第二序列、如seq id no:6所示的linker1第二序列、如seq id no:9所示的猪丹毒血清2spaa保护性抗原第二序列、如seq id no:10所示的猪丹毒血清1aspaa保护性抗原第三序列、如seq id no:11所示的linker2序列、如seq idno:12所示的fc序列以及如seq id no:13所示的6his标签序列首尾连接而成。

3.一种表达如权利要求1所述的猪丹毒rspaa-fc融合蛋白的基因，其特征在于，其碱基序列如seq id no:1所示。

4.根据权利要求3所述的表达猪丹毒rspaa-fc融合蛋白的基因，其特征在于，所述表达猪丹毒rspaa-fc融合蛋白的基因按照大肠杆菌密码子偏好性进行基因优化。

5.权利要求1所述的猪丹毒猪丹毒rspaa-fc融合蛋白在制备疫苗或诊断试剂中的应用。

6.一种亚单位疫苗，其特征在于，所述的亚单位疫苗是使用权利要求1所述的猪丹毒猪丹毒rspaa-fc融合蛋白作为抗原制备的。

技术总结
本发明涉及一种猪丹毒rSpaA‑Fc融合蛋白及其在疫苗中的应用。通过对猪丹毒保护性抗原蛋白SpaA进行设计，得到一个融合蛋白序列，该蛋白序列兼具猪丹毒血清1a型与猪丹毒血清2型抗原蛋白，同时融合有Thelper和IgGFc序列。将该序列按照大肠杆菌密码子进行优化，得到猪丹毒rSpaA‑Fc融合蛋白序列；经载体构建、转化、诱导表达、包涵体纯化获得rSpaA‑Fc融合蛋白；用该融合蛋白与佐剂Gel‑02制成疫苗免疫仔猪能够更早诱导高水平的体液免疫和细胞免疫，提高对猪丹毒血清1a和2型强毒攻击的保护。

技术研发人员：刘喜凤,周佳彬,张菁怡,仲鑫,黄金安,马宁宁
受保护的技术使用者：浙江鼎持生物制品有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13