表达免疫系统-刺激分子的溶瘤性单纯疱疹病毒载体的制作方法

本发明总体上涉及表达刺激免疫系统的分子的溶瘤性单纯疱疹病毒(ohsv)载体。

背景技术：

1、溶瘤病毒(ov)已经成为通过溶瘤效应特异性破坏癌细胞的一种治疗方案，其杀伤机制的特征在于，通过病毒裂解行复制的过程使癌细胞裂解。

2、本发明克服了目前的商业化溶瘤病毒的缺点，并且毒性低、表达水平高、稳定性好。

技术实现思路

1、简而言之，本文披露内容涉及保护针对il12、il15和/或il受体15α亚单位中的一种或多种的单纯疱疹病毒载体(hsv载体)。在一种实施方式中，单纯疱疹病毒hsv载体包含il12、il15和il15受体α亚单位的表达盒，表达盒的侧翼具有经修饰的icp47启动子。

2、在一种实施方式中，所述经修饰的icp47启动子的序列至少包含seq id no.584。

3、在一种实施方式中，所述经修饰的icp47启动子的序列为seq id no.584。

4、在一种实施方式中，il12、il15和il15受体α亚单位的编码序列之间的框内具有编码自剪切肽2a的核酸序列。

5、在一种实施方式中，所述自剪切肽2a的氨基酸序列为：

6、vkqtlnfdllklagdvesnpgp、qctnyallklagdvesnpgp、atnf-sllkqagdveenpgp、hyagyfadllihdietnpgp、gifnahyagyfadllihdietnpgp、kavrgyhadyykqrlihdvemnpgp、gatnfsllklagdvelnpgp、egrgslltcgdveenpgp、aarqmllllsgdvetnpgp、flrkrtqllmsgdvesnpgp、gswtdillllsgdvetnpgp、traeuedeliragiesnpgp、akfqidkilisgdvelnpgp、skfqidkilisgdielnpgp、ssiirtkmlvsgdveenpgp或cdaqrqklllsgdieqnpgp。

7、在一种实施方式中，一个或多个ires序列位于il12、il15和il15受体α亚单位的编码序列之间。

8、在一种实施方式中，il15和il15受体α亚单位通过双向启动子表达。

9、在一种实施方式中，il15和il15受体α亚单位各自跟随一个编码lys5或glu5的核酸序列。

10、在一种实施方式中，hil15受体α亚单位选自由变体1(seq id no:3)、变体2(seqid no:4)、变体3(seq id no:5)、变体4(seq id no:6)组成的组。

11、在一种实施方式中，包含il12、il15和il15受体α亚单位的表达盒被插入到hsv的内部重复区或hsv基因组的末端重复区中。

12、在一种实施方式中，单纯疱疹病毒hsv载体进一步包含一种或多种pd-l1阻断肽的表达盒。

13、在一种实施方式中，pd-l1阻断肽的表达盒被插入hsv病毒基因的ul3和ul4之间。

14、在一种实施方式中，单纯疱疹病毒hsv载体进一步包含编码连接至所述pd-l1阻断肽的3’-端的fc区的序列。

15、在一种实施方式中，连接至所述pd-l1阻断肽的3’-端的fc区的序列为编码igg4fc区域的序列。

16、在一种实施方式中，在单纯疱疹病毒hsv载体的icp4或icp27调控区中进一步包含nfkb和oct4/sox2增强元件。

17、在一种实施方式中，单纯疱疹病毒hsv载体的icp34.5基因部分缺失，或无功能。

18、本文披露的内容还涉及一种制剂，该制剂由下列组分组成：

19、利用根据权利要求1至15任一项所述的单纯疱疹病毒hsv载体所表达的病毒的悬液，甘油，水；

20、其中，制剂中甘油的浓度为5+3％。

21、本文披露的内容还涉及一种药物组合物，所述药物组合物包含本发明的单纯疱疹病毒hsv载体，和可药用载体。

22、本文披露的内容还涉及本文所述的单纯疱疹病毒hsv载体，或本文所述的制剂，或本文所述的药物组合物在制备治疗癌症的药物中的应用。

23、在一种实施方式中，所述癌症选自肝癌，胃癌，肠癌，肺癌，乳腺癌，鼻咽癌，头颈部肿瘤，膀胱癌、结肠癌、直肠癌、肾癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、子宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌、皮肤癌、急性淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、b细胞淋巴瘤、t细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、急性或慢性骨髓性白血病、黑色素瘤、子宫内膜癌、头颈癌、成胶质细胞瘤、骨肉瘤白血病、淋巴瘤、骨髓瘤和肉瘤。

24、在一种实施方式中，所述的治疗癌症通过皮下注射、瘤内注射或静脉注射的方式来给药

25、
技术实现要素：
部分已经简要地介绍了某些构思，在具体实施方式部分中将对其进行进一步详细描述。除非另外记载，否则发明内容部分既不是意在确定本文要求保护主题的关键或必要特征，也不是意在限制本文保护主题的范围。

26、发明的效果

27、本发明克服了目前的商业化溶瘤病毒的缺点，并且毒性低、表达水平高、稳定性好。

28、本发明通过对病毒结构的改造，例如对病毒某些基因启动子区域的改造，使得经过改造的病毒在感染细胞后能够在更长时间存在于被感染的细胞中躲避免疫细胞攻击，从而可以更好地复制与表达外源基因。

29、本发明还对载体所携带的外源基因进行了改进，例如构建外源多肽与适当的末端结构形成的融合蛋白，使表达的蛋白具有良好的稳定性，适于实际应用。

30、本发明还提供了保存病毒的优化的介质，在利用本发明的载体表达出病毒后，优化的介质可在较长时间内保持病毒活性，便于载体及病毒的工业应用。

31、下文中将详细描述一种或多种实施方式。与一种示例性实施方式结合示出或者描述的特征可以与其他实施方式的特征组合。因此，能够将本文所述的各种实施方式中的任一种进行组合以提供进一步的实施方式。当有必要采用本文中所确定的各专利、申请或公开的构思时，能够改变这些实施方式的方面以提供更进一步的实施方式。根据说明书、附图和权利要求书将能够了解其他的特征、目的和优势。

技术特征：

1.一种单纯疱疹病毒hsv载体制剂在制备治疗癌症的药物中的应用，其中所述的制剂由下列组分组成：

2.权利要求1所述的单纯疱疹病毒hsv载体制剂的应用，其中，所述经修饰的icp47启动子的序列包含seq id no.584。

3.权利要求1所述的单纯疱疹病毒hsv载体制剂的应用，其中，il12、il15和il15受体α亚单位的编码序列之间的框内具有编码自剪切肽2a的核酸序列。

4.权利要求3所述的单纯疱疹病毒hsv载体制剂的应用，其中，所述自剪切肽2a的氨基酸序列为：atnf-sllkqagdveenpgp。

5.权利要求1所述的单纯疱疹病毒hsv载体制剂的应用，其中，一个或多个ires序列位于il12、il15和il15受体α亚单位的编码序列之间。

6.权利要求1所述的单纯疱疹病毒hsv载体制剂的应用，其中，所述il15和il15受体α亚单位通过双向启动子表达。

7.权利要求1所述的单纯疱疹病毒hsv载体制剂的应用，其中，所述il15和il15受体α亚单位各自跟随一个编码lys5或glu5的核酸序列。

8.权利要求1所述的单纯疱疹病毒hsv载体制剂的应用，其中，所述包含il12、il15和il15受体α亚单位的表达盒被插入到hsv的内部重复区或hsv基因组的末端重复区中。

9.权利要求1所述的单纯疱疹病毒hsv载体制剂的应用，其中，所述pd-l1阻断肽的表达盒被插入hsv病毒基因的ul3和ul4之间。

10.权利要求1-9任一项所述的单纯疱疹病毒hsv载体制剂的应用，其中，在所述单纯疱疹病毒hsv载体的icp4或icp27调控区中进一步包含nfkb和oct4/sox2增强元件。

11.权利要求1-9任一项所述的单纯疱疹病毒hsv载体制剂的应用，其中，所述单纯疱疹病毒hsv载体的icp34.5基因部分缺失或无功能。

12.根据权利要求1-11任意一项所述的载体制剂的应用，其中所述的治疗癌症通过皮下注射、瘤内注射或静脉注射的方式来给药。

技术总结
本发明提供了一种表达免疫系统‑刺激分子的溶瘤性单纯疱疹病毒载体，其包含IL12、IL15和IL15受体α亚单位的表达盒，表达盒的侧翼具有经修饰的ICP47启动子。本发明的单纯疱疹病毒载体经过结构改造，可以更好地复制与表达外源基因，表达的蛋白具有良好的稳定性，适于实际应用。

技术研发人员：贾为国,刘国宇,艾瑞卡·李,迪米特里·邱捷科,丁隽
受保护的技术使用者：上海复诺健生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13